RAPD法构建黑水缬草基因组DNA指纹图谱

目的采用RAPD技术对黑水缬草、缬草、毛节缬草及黄花败酱等4种药用植物进行分子水平的鉴定,并获得清晰可靠的DNA指纹图谱。方法采用植物基因组DNA快速提取试剂盒提取4种供试材料基因组DNA,以随机引物进行随机扩增。结果 4种供试材料DNA指纹图谱具有共同的位点,但又有各自的特征性位点。结论 RAPD法能有效的将4种药用植物区分开。     

甘肃产秦艽的DNA指纹图谱鉴别

目的 对产于我国甘肃省的中药秦艽的3种基源植物秦艽、麻花秦艽与小秦艽进行RAPD分析,建立具有鉴别意义的DNA指纹图谱.方法 采用RAPD分子标记对秦艽的基因组DNA进行PCR扩增,利用NTSYSpc 2.1和Popgene 3.2软件分析3种秦艽间的亲缘关系,构建树系图.结果 从80条RAPD引物中筛选出4条具有鉴别意义的多态性引物,在3种秦艽中共得到39个DNA条带,其中共有条带2条,多态条带37条.据此获得了能有效区别3种秦艽的多态性RAPD指纹谱.结论 甘肃产秦艽的3种基源植物遗传分化明显,RAPD方法能有效地将它们区分鉴别.     

内蒙古产丹参的随机扩增多态性DNA研究

目的 用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术对内蒙古产丹参进行多态性分析. 方法 通过CTAB 法提取内蒙古产丹参干品DNA,用10个条随机引物进行RAPD分析. 结果 有2个随机引物扩增出了清晰的多态性图谱. 结论 该RAPD体系可用于评价内蒙古产丹参的质量.     

RAPD标记在药用菊花种质鉴定中的应用

目的：探讨药用菊花类型间的遗传关系,为药用菊花资源合理保护利用和新品种选育提供理论依据,也为药用菊花DNA指纹图谱的构建奠定基础。方法：利用改良SDS方法提取药用菊花的基因组DNA,以RAPD分子标记技术,对6种药用菊花进行了遗传多样性和亲缘关系分析。结果：从8个随机引物中筛选出多态性频率高的2个引物。2个引物共扩增出17个DNA条带,其中多态性条带16个,多态性达94%,显示菊花品种内丰富的遗传多样性。扩增的多态性片段在300~1300bp之间。结论：聚类分析结果表明,利用RAPD标记可将全部供试材料区分开,得出了药用菊花种质资源在分子水平上确实存在较大差异。     

发菜基因组DNA提取方法比较与分子鉴定研究

目的 以发菜为研究对象比较不同的提取DNA方法,筛选出了一种适合快速提取发菜DNA的方法。方法 分别利用自主研发的硅珠DNA纯化技术、细菌试DNA提取试剂盒和植物DNA提取试剂盒提取发菜基因组DNA。结果 本实验室开发的硅珠DNA提取纯化技术具有快速、无毒以及获得的发菜DNA纯度高等优势。通过PCR扩增和测序得到16S rRNA基因,利用Blast软件进行序列比对,与发菜同源性为99%。结论 本研究研制的发菜基因组DNA提取方法可用于发菜源性的分子鉴定。     

不同产地白及遗传多态性的RAPD分析

目的 研究国内不同产地白及的遗传多样性和亲缘关系。方法 利用随机扩增多态DNA （random amplified polymorphic DNA,RAPD）引物,RAPD分子标记技术分析国内50个不同产地的白及。结果 RAPD技术扩增产物经琼脂凝胶电泳检测,从50条引物中筛选出10条（S8,S9,S14,S19,S23,S25,S28,S29,S30,S31）条带清晰的引物,10条引物共扩增出88条DNA条带,其中多态性的DNA条带数目为81条,占总数的92.05%。每个引物能扩增出5~11条DNA条带,平均可扩增出8.8条;扩增最少的引物为S19,扩增出5条DNA条带;扩增最多的引物为S29,扩增出11条DNA条带。而每个引物能扩增的多态性DNA条带数为3~11条,平均可扩增出8.6条。结论 不同产地的白及具有较丰富的遗传多样性,RAPD可有效应用于白及的遗传多样性研究。     

不同产地红曲基原菌的RAPD分析

目的：建立中药红曲基原菌的RAPD分析方法,方法：CTAB法提取不同产地红曲基真菌的基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物。PHYLIP3．5c进行聚类分析,结果：S282等10个随机引物的扩增产物谱带多,特征好,产地间指纹图谱呈现出明显的DNA扩增产物多态性,结论：RAPD分析技术可作为红曲鉴定的有用手段。     

重组酶介导扩增技术与传统聚合酶链反应技术在甲状腺癌DNA甲基化检测中的应用比较

目的 建立重组酶介导的核酸扩增(RAA)技术特异性检测DNA甲基化的新方法并与传统的DNA甲基化特异性PCR(MSP)方法进行比较.方法 选取OXTR基因作为目的基因,提取样品外周血基因组DNA,经亚硫酸氢盐修饰后分别以MSP和RAA技术进行特异性检测DNA甲基化实验.结果 2种技术皆能扩增出OXTR非甲基化条带,而RAA技术成功扩增OXTR甲基化条带.结论 RAA是一种新型的等温体外核酸扩增技术,实现了在37℃恒温下的核酸快速扩增,可成为替代MSP乃至其他PCR实验的新方法.     

三种分子标记技术对有毒植物鉴定效能的评价

目的 评价3种不同的分子标记技术对植物属级的鉴定能力以选出最适合在中毒现场快速鉴定有毒植物的分子技术. 方法 选取毛茛科、大戟科共18种19份有毒植物叶片样品,用改良十六烷基三甲基溴化铵法提取基因组DNA,分别使用随机扩增多态性DNA标记（RAPD）、简单重复序列间标记（ISSR）和DNA条形码技术进行物种鉴定（属级）,使用NYSTS、SPSS、PAUP、MEGA软件进行聚类分析,比较3种DNA分子标记技术的准确性、可靠性、时效性和可操作性. 结果 准确性：RAPD技术未能鉴定样品的属级,ISSR技术和DNA条形码技术的鉴定准确率分别为68％和100％.可靠性：RAPD技术与ISSR技术主观影响率分别为44％、26％,条带重复率分别为47％、45％;DNA条形码技术trnH-psbA片段扩增成功率与测序成功率均为100％.时效性：从总DNA提取开始至得到最终鉴定结果,RAPD、ISSR、DNA条形码技术耗时分别为8.5、9.0、42.2 h.可操作性：RAPD与ISSR技术的鉴定工作可在普通实验室完成,DNA条形码技术的鉴定工作则需要特殊的测序设备. 结论 初步认为DNA条形码技术是比较适用于突发有毒植物中毒事件中快速病因判定的分子鉴定技术.     

植物类药材基因组DNA提取与纯化的方法学研究

本文探讨了菊科9种植物和地胆草的4种对口商品药材基因组DNA提取与纯化的原理、方法，通过对3种常用植物基因组DNA提取方法（CsC1梯度超速离心法、CTAB／CsC1梯度超速离心法和DTAB微量提取法）的条件摸索，在DNA产率、纯度以及提取纯化过程中影响PCR扩增因子方面进行比较，认为CTAB微量提取法是植物类药材基因组DNA一种比较省时、有效、经济的提取方法。     

心脉通胶囊中大黄、红参、三七的薄层色谱鉴别

目的建立心脉通胶囊中主要药材的薄层色谱（TLC）鉴别方法。方法采用TLC法对处方中的大黄、红参和三七进行定性鉴别。结果在选定的色谱条件下，可分别检出处方中大黄、红参和三七对应的斑点，斑点显色清晰，分离效果好，阴性对照无干扰。结论所建立的方法简便，专属性强，重现性好，可作为心脉通胶囊的质量控制方法。     

黄芩及其炮制品黄芩片的HPLC指纹图谱研究

目的对黄芩药材及其炮制品黄芩片进行HPLC指纹图谱研究。方法选择HPLC-UV指纹图谱。色谱条件：Hypersil C18柱（200mm×5.0mm,5μm）;流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液-乙腈线性梯度洗脱;流速：1.0mL·min^-1;柱温28℃;检测波长277nm。结果10批不同产地正品黄芩进行规范炮制加工后得到的黄芩片指纹图谱无明显差异,14个不同产地黄芩药材的指纹图谱也具有极高的相似度。结论该方法重复性好,可为黄芩药材及其饮片的质量控制提供科学依据。     

西洋参、人参、三七的鉴别

目的：寻找一种实用、有效的鉴别西洋参、人参、三七的方法。方法：通过性状鉴别、显微鉴别等多种方法比较,最终选用TLC法,拟以图谱方式直观地反映出西洋参、人参、三七三者之间的差异。从而达到鉴别三者的目的。结果：找到一种实用,而且能有效区别西洋参、人参、三七的方法。结论：本文提供的方法,不仅适用于西洋参、人参、三七药材（整货、饮片、粉末）的鉴别,而且亦适用于单味及成方制剂中西洋参、人参、三七的鉴别。     

Evaluation of quality of Radix Puerariae herbal medicine by isoflavonoids

Objectives A high‐performance liquid chromatography (HPLC) method was developed to examine five isoflavonoids present in Chinese herbal medicinal products containing Radix Puerariae. Methods Five isoflavonids, puerarin, daidzin, genistin, daidzein and genistein, were measured by HPLC. The HPLC system was equipped with an ODS‐AM‐303 column (250 mm × 4.6 mm i.d., 5 μm) and established gradient system comprising glacial acetic acid/water and glacial acetic acid/acetonitrile. Key findings The developed HPLC system yielded good separation of the five isoflavonoids. Relative coefficients of intraday and interday analysis of variation were less than 5%. The isoflavonoid recovery from Radix Puerariae was 90–113%. Most of the Radix Puerariae products studied contained five isoflavonoids in their HPLC fingerprint. The major component was purarine, then daidzin and daidzein; genistin and genistein were the least abundant. Five Radix Puerariae herbal medicines contained various concentrations of isoflavonoids. Of the 11 scientific extracted formulas of Radix Puerariae tested, ST brands had a greater isoflavonoid content than KA and SC brands. Conclusions Separation and quantification of the five isoflavonoids by this HPLC method was suitable to assess the quality of Radix Puerariae herbal medicine products.     

全国地黄饮片评价性抽验结果分析

目的:开展地黄饮片的全国评价性抽验,不断完善和修订标准方法,保障公众的用药安全和有效。方法:依据法定标准进行检验,并开展探索性研究。结果:共收到187批地黄饮片,不合格率22.5%。建立了地黄饮片中7种糖类成分的含量测定方法,探索不同炮制时间对地黄糖类成分的影响。增加熟地黄中甘露三糖的含量测定,完善熟地黄的质量标准。结论:通过本次抽验,发现地黄饮片仍存在质量问题,建议加强监管;地黄、熟地黄的标准仍需完善,建议修订标准。     

黄芪药材加工工艺的改进

目的:研究不同加工饮片的方法对黄芪中黄芪甲苷含量的影响,改进药材加工工艺。方法:对黄芪采用改进工艺——鲜切法和传统干切法制备饮片,用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定2种饮片中黄芪甲苷含量并进行比较。结果:鲜切法所得饮片中黄芪甲苷含量为0.072%,高于传统干切法所得饮片中黄芪甲苷含量(0.046%)。结论:鲜切法优于传统干切法;该含量测定方法简便、准确,重复性好,适用于黄芪中黄芪甲苷含量的测定。     

高效液相色谱法测定续断饮片中马钱苷的含量

目的建立中药饮片续断中马钱苷的含量测定方法。方法液相色谱法。色谱柱:InertsilRODS(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90);流速1.0 mL·min-1;柱温:35℃;检测波长:240 nm。结果马钱苷在0.421 2～4.212μg范围内呈线性关系(r=1.000 0,n=6),平均加样回收率为98.9%,RSD为1.6%(n=6)。结论该方法操作简便,结果可靠,可用于中药饮片续断中马钱苷的含量测定。     

玄参HPLC指纹图谱的比较研究

目的:建立HPLC指纹图谱测定方法,分析测定玄参商品饮片和不同加工方法制成的玄参饮片的指纹图谱。方法:色谱条件为Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,0.025%磷酸水溶液和乙腈梯度洗脱,检测波长210 nm,流速1 mL.min-1,柱温25℃。结果:发现16个色谱峰为玄参商品饮片的共有峰,确定了其相对保留时间和相对峰面积的范围。指纹图谱的数据表明,20批玄参饮片相似度为0.488～0.929,质量差异较大;不同加工方法制成的玄参饮片化学成分差异较大,提示先润后切和先蒸后切加工的玄参质量有差异。结论:玄参HPLC指纹图谱测定是评价玄参药材及饮片质量的较好方法。     

复方洋参归地丸的质量控制研究

目的 建立复方洋参归地丸的质量标准.方法 采用薄层色谱法对制剂中当归、川芎、何首乌、石菖蒲、黄芪进行定性鉴别;采用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法测定人参皂苷Rb1.结果 薄层色谱鉴别的色谱斑点清晰,阴性对照无干扰.人参皂苷Rb1在1.832～18.320 μg呈良好的线性关系,平均回收率为100.06％,RSD为1.69％(n=6).结论 所建立的方法简便可行,专属性强,重现性好,可用于复方洋参归地丸的质量控制.     

土木香薄层色谱鉴别方法的探讨

土木香为常用中药材,在薄层色谱鉴别中用硝酸银板,效果不十分清晰。实验用硝酸铵板和喷以硫酸乙醇溶液加热显色,分离效果比较好。