糖尿病大鼠肾脏α-辅肌动蛋白-4表达变化及作用机制

目的：动态观察肾小球足细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白-4（α-actinin-4）在糖尿病大鼠模型肾组织中表达的变化,探讨α-actinin-4与蛋白尿发生的关系及导致其出现变化的可能机制。方法：将SD大鼠随机分为两组：对照组及糖尿病组,腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病大鼠模型,分别于2、4、6、8周末检测每组大鼠24h尿蛋白定量并处死大鼠留取肾标本。电镜观察足细胞超微结构的变化;应用酶免法检测肾组织糖基化终产物（AGEs）的含量;应用免疫组化及Western-blot检测α-actinin-4蛋白的表达;RT-PCR检测α-actinin-4mRNA表达量的变化。结果：6周糖尿病组大鼠24h尿蛋白明显高于对照组（P〈0.01）,增高持续到8周（P〈0.01）;透射电镜显示8周糖尿病组大鼠足突出现节段性融合;从4周时糖尿病组大鼠肾组织AGEs含量明显升高（P〈0.05）,并持续到8周（P〈0.01）;与对照组相比,从4周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达明显降低（P〈0.05）,并持续到8周（P〈0.05）;与对照组相比,从2周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4mRNA表达明显降低（P〈0.05）,并持续到8周（P〈0.01）。结论：α-actinin-4表达降低参与了糖尿病大鼠蛋白尿的发生,而AGEs可能是导致α-actinin-4表达下调的原因之一。     

α-辅肌动蛋白4在糖尿病肾病大鼠蛋白尿产生中的作用

糖尿病肾病蛋白尿的形成有多种因素，足细胞病变在其中起着重要的作用。α-辅肌动蛋白（actinin）．4是足细胞上一种辅肌动蛋白，对于维持足细胞的正常结构及功能起关键作用。本研究利用糖尿病肾病大鼠模型在蛋白尿的发生、发展过程中动态观察α-actinin．4表达的变化，并初步探讨导致其变化的可能机制。     

足细胞分子高表达致阿霉素肾病大鼠发生蛋白尿

目的 动态观察足细胞裂孔隔膜复合体分子nephrin、podocin、CD2AP及α-actinin-4在阿霉素肾病大鼠蛋白尿发生发展中的表达变化，探讨其在蛋白尿发生发展中的分子行为及其机制。方法 尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型，3、7、14、28 d每组处死6只大鼠留取肾脏标本。应用间接免疫荧光染色、实时定量PCR、Western 印迹分别检测各个时间点nephrin、podocin、CD2AP、α-actinin-4的分布、mRNA和蛋白表达量的变化。结果 (1)14 d肾病组大鼠24 h尿蛋白显著高于对照组(P < 0.01)，增高持续到28 d。(2)透射电镜显示14 d肾病组足突不同程度变宽，28 d足突弥漫性融合。(3)与对照组相比，从第7天开始肾病组nephrin和podocin染色从沿肾小球毛细血管袢线样分布向不连续粗颗粒样的分布模式转变；CD2AP节段染色增强区逐渐扩大，有的区域呈斑片状和连续线状增强；α-actinin-4从沿肾小球毛细血管袢均匀的点线样分布向不均匀粗颗粒的分布转变，而且随时间进展这种转变逐渐加重。(4)与对照组相比，肾病组于7 d时nephrin mRNA表达显著增高(P < 0.01)；podocin mRNA表达14 d时显著增高(P < 0.05)，直至28 d(P < 0.05)；CD2AP mRNA表达28 d时显著增高(P < 0.05)。(5)与对照组相比，肾病组nephrin蛋白表达28 d时显著增高(P < 0.05)；podocin蛋白表达于7 d时显著增高(P < 0.05)，而28 d时又显著降低(P < 0.05)；CD2AP蛋白表达于14 d时显著增高(P < 0.05)，直至28 d (P < 0.05)。(6)α-actinin-4 mRNA与蛋白表达在实验过程中未出现明显变化。结论 nephrin、podocin和CD2AP的表达增加及分布异常是导致阿霉素肾病大鼠蛋白尿发生发展的分子机制，而分子表达的增加是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应。     

地塞米松影响足细胞活动力的相关分子研究

Objective To investigate the potential roles of dexamethasone (Dex) in podocyte motility, and to explore the mechanism of modulating α-actinin-4, nephrin. Methods Podocytes were divided into three groups: Dex group [1 ?滋mol/L Dex+50 mg/L puromycin aminonucleoside (PAN)], PAN group (50 mg/L) and normal control group. Scrape wound assay and Transwell migration assay were used to detect cell motility. Filtering ratio of podocytes was measured by FITC labeled BSA. Real-time PCR and Western blotting were used to examine the expressions of α-actinin-4 and nephrin. Results From the scrape wound assays, the ability of wound repair in podocytes of PAN group was significantly increased (P＜0.01), and the number of migrating cells in this group also rose (P＜0.01). Compared to PAN group, podocytes in Dex group did not enhance the motility after treatment with the same dose PAN (P＜0.01). Real-time PCR and Western blotting showed that Dex could significantly inhibit the up-regulated expression of α-actinin-4 and nephrin induced by PAN. Conclusions Dex can relieve the enhanced motility induced by PAN. Its mechanism may be associated with the modulation of the expressions of α-actinin-4 and nephrin.     

通过基因敲低探讨多个足细胞分子作用及分子间反应

目的 研究足细胞裂孔隔膜(SD)复合体分子nephrin&#65380;podocin和CD2AP,以及足细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白(actinin)-4的作用及分子间反应&#65377;方法 针对nephrin&#65380; podocin&#65380;CD2AP和α-actinin-4 mRNA序列分别设计并构建2个特异RNA干扰质粒-psiRNA-hH1GFPzeo,分别导入小鼠足细胞系MPC5以 “敲低”其表达&#65377;免疫荧光染色观察其分布方式&#65377;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测其mRNA和蛋白表达&#65377; 结果 (1) podocin敲低组(siPod966和siPod54):未检测到podocin及nephrin mRNA,其蛋白分别下降了92%&#65380;79%及82%&#65380;67%&#65377;而CD2AP mRNA和蛋白分别增加了62%&#65380;42%及71%&#65380;46%&#65377;α-actinin-4无变化&#65377;(2)nephrin敲低组(siNep492):未检测到nephrin mRNA和蛋白&#65377;而CD2AP mRNA和蛋白分别增加了35%&#65380;48%&#65377;Podocin和α-actinin-4无变化&#65377;(3)CD2AP敲低组(siCda744和siCda21):未检测到CD2AP mRNA,其蛋白分别下降了92%和83%&#65377;Nephrin mRNA和蛋白分别下降了60%&#65380;48%及76%&#65380;72%;而podocin mRNA和蛋白分别增加了38%&#65380;22%及56%&#65380;44%&#65377;Α-actinin-4无变化&#65377;(4)α-actinin-4敲低组(siAct1790和siAct319):α-actinin-4和nephrin 的mRNA分别下降了69%&#65380;58%及64%&#65380;49%;蛋白分别下降了81%和55%以及71%&#65380;64%&#65377;而podocin以及CD2AP mRNA分别增加了50%&#65380;34%及45%&#65380;28%;蛋白分别增加了64%&#65380;46%及65%&#65380;42%&#65377;(5)敲低nephrin&#65380;podocin和CD2AP后,这些表达量降低的分子的分布发生了明显改变,即以核周为主;而相应分子敲低后引起的podocin和CD2AP表达增加,其分布亦主要以核周染色增强为主&#65377;α-actinin-4即使表达降低,分布亦无变化,仍呈细丝状分布于胞质及足细胞伸出的突起中&#65377;结论 (1)在SD复合体分子中,nephrin可能具有相对独立的作用&#65377;(2) α-actinin-4对nephrin&#65380;podocin和CD2AP有直接或间接的作用&#65377;(3)足细胞分子间的作用和联系不总是“一致的”,可能是“单向的”&#65380;也可能是“双向的”&#65377;(4)nephrin&#65380;podocin&#65380;CD2AP和α-actinin-4在足细胞的分布有赖于其表达量的正常及正常的分子间反应&#65377;     

足细胞细胞骨架改变与肾小球疾病的研究进展

足细胞位于肾小球基底膜外侧,其足突对维持正常肾小球滤过屏障的结构和功能起重要作用。足细胞细胞骨架包括中间丝、微管以及肌动蛋白。足细胞的肌动蛋白骨架紊乱在多种肾脏疾病中被广泛报道。本文就足细胞骨架蛋白的分类、功能、足细胞骨架调控通路及其潜在治疗靶点的研究进展进行综述。     

足细胞上皮-间充质转分化与肾小球疾病

目的足细胞对于维持肾小球滤过屏障的稳定性极为重要。足细胞的损伤可导致肾小球滤过功能障碍和相关肾脏疾病的发生。上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是足细胞损伤的一种表现形式,也是多种肾小球疾病的始动因素之一。本文主要针对足细胞EMT的定义、具体表现、诱导因素、发生机制及相关肾小球疾病及其防治进行综述,以期阐明足细胞EMT最近研究进展,为相关肾脏疾病的治疗提供参考。     

α-平滑肌肌动蛋白N-末端肽对伤口收缩的影响

目的：探讨α－平滑肌肌动蛋白（α－smooth muscle actin, α－SMA）的特异性抗体－α－SMANH2＿末端序列Ac-EED多肽（α－SMA－AcEEED）对伤口收缩的影响。方法L（1）Wistar大鼠背部制作去全厚皮伤口，硬塑料框固定创缘。伤后8－10d，实验 同外用N末端含AcEEED的α－SMA融合(α－SMA-FP,1mg/ml），对照组1、2分别外用胶原凝胶（0.5mg/ml）、N末端含AcDEDE的α－SMA融合蛋白（α－SKA－FP,1mg/ml）。伤后10d，测量各组去掉外固定框1、6、24h时的伤口面积，以取框后伤口面积与伤口原面积的百分比表示伤口收缩率。（2）分离伤后9d肉芽组织中的成纤维，在可变形性硅胶培养皿中培养。观察α－SMA－FP（10μ g/ml）处理成纤维细胞前、后及洗去α－SMA－FP后收缩状态的改变。结果：（1）去除外固定框后1、6、24h时，对照组1、2伤口收缩率相比较差异均无显性意义（P＞0．05）；实验组收缩率与两对照组比较匀有显性意义（P＜0．05）。（2）用α－SMA－FP处理前，镜下可见成纤维细胞有众多粗大皱折。α－SMA－FP处理后5min皱折明显减少，变浅；30min后，皱折完全消失。去除α－SMA－FP后，皱折逐渐恢复。以胶原凝胶和α－SMA－FP处理该细胞无此现象。结论：提示α-SMA-AcEEED在体内可特异性地抑制肉芽组织收缩，在体外能可塑性地抑制成纤维细胞的收缩。     

肾小球肾炎中系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型变化的关系

目的探讨系膜细胞α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）表达与细胞表型变化的关系。方法应用免疫组化技术并结合计算机图像分析，检测人类系膜增殖性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）及局灶节段硬化性肾炎（ＦＳＧＮ）时系膜细胞内α－ＳＭＡ的表达程度、系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的情况。结果在系膜增殖性肾炎，随着系膜细胞增殖程度的加重，细胞外基质积聚增多，α－ＳＭＡ的表达程度也增加，三者呈平行变化并具有高度相关性。在出现硬化病变后，系膜细胞增殖下降，α－ＳＭＡ表达也降低，但细胞外基质未见减少。结论α－ＳＭＡ可作为人类肾小球疾病状态下系膜细胞表型转化的稳定标志，它的出现标志着系膜细胞被激活并处于增殖／分泌表型     

足细胞标志蛋白及足细胞疾病

肾小球内有三种固有细胞：系膜细胞、内皮细胞、足细胞。不同的病因可导致不同固有细胞的损伤，在临床上表现为不同类型的肾小球疾病。其中足细胞受损后，临床主要表现为蛋白尿，典型的表现为大量蛋白尿。蛋白漏出是肾小球疾病的常见表现，反过来也是加速肾小球硬化的一个重要因素。随着近年来对足细胞生物学研究的深入，尤其是在发现足细胞表达的一些特异性蛋白分子之后，足细胞现已被认为是参与各种原发或继发性肾小球疾病进展的关键细胞。     

α-肌动蛋白在肾系膜细胞重塑过程中的变化及其意义

细胞重塑是细胞在生理、病理情况下发生的形态、结构与功能改变，又称为表型转化。肾小球系膜细胞在肾小球发育过程中及疾病状态下即发生表型改变，其标志为α－肌动蛋白表达的改变。本文就α－肌动蛋白在肾小球系膜细胞表型转化时的表达规律，调控因素及初步意义作一综述。     

肾小球肾炎中系膜细胞α—平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型变化？…

探讨系膜α－平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型变化的关系。方法应用免疫组化技术并结合计算机图像分析，检测人类系膜增殖性肾小球肾炎及局灶节段硬化性肾炎时系膜细胞内α－ＳＭＡ的表达程度，系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的情况。     

循环因子与足细胞病

足细胞病是一类以足细胞结构改变和功能损伤为主要特点的肾小球疾病.足细胞病发生机制研究已往主要集中于免疫介导的损伤机制,但该机制无法解释激素及免疫抑制剂治疗无效的肾小球疾病.循环因子假说能部分解释这一现象.循环因子作为足细胞的损伤因子,在足细胞病的诊断、监测及治疗中可能发挥作用.     

足细胞与肾小球损伤

随着体外培养技术的发展，已认识到肾小球足突细胞具有其特殊的结构和性质。它参加了初期及进行性肾上球损伤过程，其具有的多种表面抗原及受体结构成份亦可能涉及肾小球免疫损伤的病理过程，已获得的信息资料从根本上改变了人们对它的看法。     

足细胞与肾小球损伤

随着体外培养技术的发展，已认识到肾小球足突细胞具有其特殊的结构和性质。它参加了初期及进行性肾小球损伤过程，其具有的多种表面抗原及受体结构成份亦可能涉及肾小球免疫损伤的病理过程，已获得的信息资料从根本上改变了人们对它的看法。     

整合素α5和肌动蛋白在周期性压力下椎间盘细胞中的表达

目的 探讨整合素α5和肌动蛋白在周期性压力下椎间盘细胞中的表达。方法对猪椎间盘组织进行体外细胞的分离和培养,对细胞施加周期性液压,通过对细胞的形态学观察、Western免疫印迹和免疫组化染色,分别检测整合素α5和肌动蛋白在周期性压力下椎间盘细胞中的表达。结果经加压后,纤维环细胞和髓核细胞均可见体积缩小,由多角形转变为细长形,整合素α5和肌动蛋白在纤维环细胞和髓核细胞中的表达均明显减少。结论体外培养的单层椎间盘细胞在受力状态下,整合素α5的表达减少,整合素α5将力信号转换到细胞内时,进一步影响到与其关系密切的肌动蛋白。这可能是椎间盘细胞力学传导的重要机制。     

雌激素与足细胞损伤研究进展

近年来研究发现雌激素作用于雌激素受体可延缓肾脏疾病的进展,具有保护肾脏作用,足细胞是其重要的作用靶点之一.本文从雌激素与雌激素受体相互作用的机制,足细胞生物学特征及雌激素对足细胞作用与内在机制进行阐述.     

α—肌动蛋白在肾系膜细胞重塑过程中的变化及其意义

细胞重塑是细胞在生理、病理情况下发生的形态、结构与功能改变，又称为表型转化。本文就α－肌动蛋白在肾小球系膜细胞表型转化时的表达规律，调控因素及初步意义作一综述。     

足细胞表型的改变与肾脏疾病

足细胞是一种高度分化的上皮细胞，它的作用包括支持血管球，参与基底膜的合成，调控肾小球的选择通透性，这些都依赖于足细胞的分化成熟并获得表面特殊蛋白分子的表达；研究证实，对足细胞正常结构的维持起重要作用的蛋白分子，它们的突变或缺失，导致足细胞结构的改变，引起蛋白尿和肾小球硬化的发生。本文重点对足细胞表型改变与肾脏疾病相互关系做一综述。     

树突状细胞β-中心体肌动蛋白表达与肝癌侵袭转移能力相关

目的研究β-中心体肌动蛋白（β-centractin）与肝细胞癌病人侵袭、转移能力之间的关系。方法分离26例肝细胞癌病人外周血单个核细胞，体外培养加入细胞因子诱导生成树突状细胞（DC）。收集同一病人肝癌切除标本，制备肿瘤细胞裂解物负载自体DC。Western Blot检测DC中β-centractin的表达，分析其与肝癌临床病理特性之间的关系。结果负载自体肿瘤细胞裂解物DC β-centractin表达水平，在肿瘤包膜完整和无癌栓组分别高于包膜不完整和有癌栓组，与有无子灶、AFP水平及肿瘤大小无关。结论负载自体肿瘤细胞裂解物DC β-centractin表达水平与肿瘤侵袭转移能力呈负相关。