阿魏酸对Aβ25-35诱导PC12细胞的保护机制研究

目的:观察阿魏酸对β-淀粉样蛋白25-35(βamyloid peptide25-35,Aβ25-35)诱导的阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)模型细胞的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,以不同浓度阿魏酸对抗干预,以MTT比色法观测阿魏酸对AD模型细胞增殖的保护作用,以比色法检测阿魏酸对AD模型细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的影响。用RT-PCR法检测Apbb1,乙酰胆碱酯酶(Ache)基因的表达。结果:阿魏酸对损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,阿魏酸在2 mmol/L时可明显降低模型细胞培养液中MDA、LDH含量,提高SOD活力,差异有统计学意义(P<0.01)。阿魏酸可下调Apbb1和Ache的mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:阿魏酸对Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能与提高细胞抗氧化能力相关,与下调Apbb1、Ache的mRNA表达量相关。     

β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

复方益智颗粒对Aβ_(25-35)致PC12细胞损伤的神经保护作用研究

目的:探讨复方益智颗粒对Aβ_(25-35)导致PC12细胞损伤的保护作用,为进一步研究该产品改善阿尔茨海默症记忆功能障碍的作用机制奠定基础。方法:取经不同处理的PC12细胞分为正常对照组、Aβ_(25-35)模型组、Aβ_(25-35)+正常血清组、Aβ_(25-35)+CYZG含药血清组(不同浓度)。正常对照组:DMEM培养基培养48 h,Aβ_(25-35)模型组:DMEM培养基培养24 h后换含20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h,Aβ_(25-35)+正常血清组:正常血清预处理24 h后加入20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h,Aβ_(25-35)+CYZG含药血清组:不同浓度CYZG含药血清预处理24 h后,加入20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h。分别采用MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测PC12神经细胞凋亡情况。结果:Aβ_(25-35)时间依赖性地抑制PC12细胞的生长,不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞损伤有保护作用,随着含药血清剂量的增加,细胞的存活率增加,生长抑制率减少。Aβ_(25-35)能显著引起PC12细胞凋亡,不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞凋亡有抑制作用。结论:复方益智颗粒对Aβ_(25-35)引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其神经保护作用可能与抑制Aβ_(25-35)引起的PC12细胞凋亡有关。     

黄连解毒汤含药血清对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤的影响

目的探讨黄连解毒汤含药血清对Aβ_(25-35)诱导的HT22细胞损伤的影响。方法 HT22细胞随机分为空白组、模型组、多奈哌齐组(0.9 mg/kg)及黄连解毒汤低、高剂量组(2.7、8.1 g/kg),空白组、模型组加入空白血清,给药组加入含药血清1 h后,加入Aβ_(25-35)(40μmol/L)。24 h后,MTT法检测HT22细胞活性,比色法检测SOD、GSH-Px活性及MDA水平,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase-3蛋白表达。结果与模型组比较,黄连解毒汤组HT22细胞活性、Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),MDA水平及Cyt C、Caspase-3蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),并呈剂量依赖性,其中高剂量组SOD、GSH-Px活性也显著升高(P0.01)。结论黄连解毒汤含药血清可减轻Aβ_(25-35)诱导HT22细胞毒性作用,降低细胞凋亡,其作用机制可能与减少氧化应激和线粒体凋亡途径有关。     

开心散含药血清对Aβ诱发的PC12细胞损伤的改善作用

目的:观察开心散含药血清对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的影响。方法:用Aβ25-35诱导PC12细胞损伤制造体外AD细胞模型;采集开心散含药血清;MTT法检测开心散对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的影响。结果:开心散含药血清可显著改善Aβ25-35诱导PC12细胞生存活力的下降。结论:开心散含药血清通过提高PC12细胞生存活力而显示了神经保护作用。     

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

清心开窍方含药脑脊液对Aβ25-35所致PC12细胞损伤的保护作用

目的:从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据.方法:SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g·kg-1),每日2次,连续3.5d,制备清心开窍方含药脑脊液.采用PC12细胞和终浓度10 μmol·L-1的β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)共培养,造成神经细胞损伤模型.RT-PCR方法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达水平,MTT法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响.结果:清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax,Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P＜0.05,P＜0.01).结论:清心开窍方对Aβ25-35损伤的PC12细胞有明显的保护作用.     

活血荣络方对Aβ25-35诱导的星形胶质细胞阿尔兹海默病损伤的抑制作用及其机制研究

目的:本研究旨通过生物信息学和细胞实验研究,揭示活血荣络方治疗阿尔兹海默病的分子机制。方法:通过GeneCards、String、DAVID数据库预测AD疾病潜在靶点,并对潜在靶点进行"蛋白—蛋白"互作网络(PPI)、GO分析,绘制"靶点—GO"热图。同时采用体外Aβ_25-35损伤星形胶质细胞诱导AD细胞模型,并随机分为6组,分别为空白组、多奈哌齐组、sFRP、0.5倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、2倍活血荣络方组组,加相应刺激分别处理12 h、24 h、48 h、72 h。采用MTT法检测细胞活性、免疫组化法检测APP、Aβ蛋白定位、定量表达,以初步验证生物信息学预测结果。结果:收集筛选出AD共35个靶点,其中APP、APOE、PSEN1、PSEN2、SNCA相互作用明显,且APP、APOE在GO中显著富集。MTT结果显示各组OD值随着时间的延长而增高,各药物组细胞活性均高于空白组,其中2倍组细胞活性最高;sFRP组低于空白组。免疫组化结果显示药物组Aβ及APP的表达均低于空白组,2倍活血荣络方组均低于其它给药组,并且各组Aβ及APP表达随时间延长有逐渐减少趋...     

葛根素对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响

目的：应用Aβ25-35孵育PC12细胞株制作细胞损伤模型,以研究葛根素对模型细胞凋亡的影响。方法：用Aβ25-35和葛根素对PC12细胞进行处理,MTT法检测干预后不同时间点的细胞活性,电镜观察细胞形态的改变,异硫氰酸荧光素（FITC）标记的AnnexinⅤ及碘化丙锭（PI）双染流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,以确认药物的保护作用。结果：PC12细胞经过Aβ25-35处理后,细胞生存率下降,且呈现时间依赖性。电镜观察显示Aβ25-35可导致PC12细胞凋亡,使用葛根素后,模型细胞凋亡情况明显改善。流式细胞技术显示Aβ25-35损伤模型组凋亡率明显升高,使用葛根素后,细胞凋亡率下降,具有显著性差异（P〈0.05）。结论：葛根素可拮抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,具有一定的神经细胞保护功能。     

西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探究在以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默症(Alzheimer′s Disease,AD)体外细胞模型中,西洋参水提物(water extracts of American Ginseng,WEAG)对神经元的保护作用.方法:流式细胞仪(FCM)检测确定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的最佳浓度和时间,以及WEAG抗凋亡的浓度,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞形态的变化.结果:50 μmol/L Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆,聚集,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,FCM检测凋亡率达(37.30±0.69)%,与对照组(1.56±0.80)%比较,差异具有显著性意义(P<0.05).而Aβ25-35和不同浓度的WEAG(0.5、1、5 mg/ml)同时孵育后,细胞形态明显改善,MTT值显著高于Aβ25-35处理组(P<0.01),凋亡率分别降低到(16.71±1.08)%、(10.52±2.11)%和(3.39±1.65)%,与Aβ25-35损伤组(37.30±0.69)%相比,差异具有统计学意义(p<0.05),并呈现出剂量依赖关系.结论:西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.     

独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元的保护作用及机制研究

目的:研究独活香豆素对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及可能机制。方法:从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ25-35、不同浓度独活香豆素和丹酚酸B共同孵育24 h,用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)测定法检测细胞存活率与LDH释放量,用Hoechst 33258染色检测Aβ25-35诱导的神经元凋亡,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达量。结果:独活香豆素(10、50、100、150μg/ml)能明显提高Aβ25-35(30μM)损伤神经元的存活率,降低LDH释放量,抑制神经元凋亡,以浓度为100μg/ml时作用最显著,作用强度与丹酚酸B相当;独活香豆素能提高神经元Bcl-2 mR-NA、降低Caspase-3 mRNA的表达量。结论:独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制促凋亡基因Caspase-3、促进抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达有关。     

清心开窍方对Aβ25-35所致大鼠原代神经元细胞损伤的保护作用

目的：了解清心开窍方对Aβ25-35所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用及其机制。方法：制备17d胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,分为正常对照组、模型组、清心开窍方低、中、高剂量组（6.25、12.5、25 mg·mL-1）。支持培养7 d,除正常组、模型组外,用不同剂量清心开窍方预处理24 h后,连同模型组和终浓度10 umol·L-1的Aβ25-35共同培养,造成神经细胞损伤模型。作用24 h后,以MTT值、培养液乳酸脱氢酶（LDH）水平作为细胞的损伤指标,以线粒体膜电位改变作为凋亡早期指标。结果：清心开窍方可以明显减少LDH漏出,增加MTT值,使低线粒体膜电位细胞的比例减少,抑制细胞凋亡,与模型组比较差异显著（P〈0.05）。结论：清心开窍方对Aβ25-35损伤的大鼠原代神经细胞具有保护作用,其机制可能与清心开窍方干预Aβ25-35诱导的细胞线粒体膜电位下降有关。     

黄精地龙方对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤中的保护作用研究

目的探讨黄精地龙方(RPEWM)对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导分化,再经Aβ25-35造成细胞老年痴呆(AD)损伤,观察不同浓度RPEWM提取液对损伤后的细胞形态学、细胞增殖情况及培养液中MDA、LDH含量,细胞中SOD、GSH-Px活性和细胞内游离钙含量、Caspase-3酶活性的影响。结果 RPEWM提取液在10~125 mg/L浓度范围内能明显抗细胞AD损伤,促进细胞增殖;RPEWM提取液30,60,90 mg/L均能明显降低MDA、LDH含量及细胞内钙离子、Caspase-3酶活性,升高细胞内SOD、GSH-Px酶活性,且呈剂量依赖性。结论 RPEWM对分化的SHSY5Y细胞Aβ25-35损伤有良好的保护作用,对AD有一定治疗作用。     

脑还丹对大鼠Aβ_(25-35)抗体和PC12细胞的凋亡及其炎性因子的影响

目的:探讨脑还丹对由Aβ25-35诱导的实验大鼠Aβ25-35抗体和PC12细胞的凋亡及其炎性因子的影响。方法:将SD大鼠分为对照组、Aβ组、脑还丹高剂量组、脑还丹低剂量组,除对照组外,其余各组分别于实验第1天、第15天和第45天接种Aβ25-35,接种完毕后,中药组予相应药物治疗105d,各组分别在每次接种后第7天取血检测Aβ25-35抗体滴度。另外,培养PC12细胞,分组同上,除对照组外,各组分别加入Aβ25-35,同时中药组加入相对应含药血清,培养72h后检测bcl-x L mRNA和IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白含量。结果:各组抗体量均高于对照组(P0.01),脑还丹高剂量组产生抗体量高于Aβ组与脑还丹低剂量组(P0.05);Aβ组IL-1β、IL-6、TNF-α分泌量均显著高于对照组(P0.01),脑还丹低剂量组、Aβ组的IL-1β、IL-6、TNF-α分泌量均高于脑还丹高剂量组(P0.01);Aβ组与脑还丹低剂量组bcl-x L mRNA的表达较对照组和脑还丹高剂量组低(P0.01)。结论:脑还丹具有促进特异性Aβ25-35抗体产生的作用,同时其抗凋亡作用可能是通过降低IL-1β、IL-6、TNF-α炎性因子的水平实现的,并呈剂量依赖性。     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35诱导的BT325细胞株脑啡肽酶表达的影响

目的 :本研究拟探讨人参皂苷Rg1对Aβ2 5 - 35诱导的BT32 5细胞株脑啡肽酶表达的影响。方法 :应用MTT比色法检测一定剂量Aβ2 5 - 35 (2 5 μmol/L)和不同浓度人参皂苷Rg1(5、 10、 2 0 μmol/L)对BT32 5细胞存活率的影响 ,应用RT -PCR观察细胞中NEP基因表达的变化。结果 :2 5 μmol/L的Aβ2 5 - 35作用于BT32 5细胞株 ,BT32 5细胞存活率下降 ,细胞内NEP的表达降低。人参皂苷Rg1能提高Aβ2 5 - 35处理的BT32 5细胞存活率 ,使细胞内NEP表达增高。结论 :一定剂量的Aβ2 5 - 35能造成细胞损伤和细胞内NEP表达降低的模型 ,人参皂苷Rg1对Aβ2 5 - 35造成的细胞毒性具有拮抗作用 ,增高细胞内NEP的表达。     

β-细辛醚,丁香酚和远志皂苷对Aβ25-35神经细胞毒性的保护作用

目的:优选β-细辛醚,丁香酚和远志皂苷对Aβ25-35诱导的海马神经细胞的保护作用,确定三者最佳配比。方法:采用体外细胞培养的方法,通过NF染色鉴定,建立大鼠海马神经细胞Aβ25-35损伤模型。利用正交实验设计,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,确定最佳三种药物最佳配比;通过观察细胞形态,利用Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况。结果:L9(34)正交设计实验结果表明β-细辛醚(20,40,80μmol/L),丁香酚(2,4,8μmol/L),远志皂苷(10,20,40μmol/L)合用的最佳优化配比剂量分别为40μmol/L,2μmol/L,20μmol/L,可显著降低Aβ25-35(1μmol/L)诱导的神经细胞凋亡率(P<0.01)和LDH活性,提高细胞相对生存率。结论:三种药物联用可有效保护海马神经细胞免受β淀粉样蛋白的毒性损伤。     

TEA及其同源类似物TPeA拮抗β淀粉样蛋白25—35引起皮层神经元细胞活力降低

目的探讨TEA及其同源类似物TPeA对Aβ25-35所致的培养皮层神经元细胞毒性作用的影响。方法利用细胞毒性检测技术,如细胞活力检测cck-8、乳酸脱氢酶（LDH）释放检测和Calcein-AM染色,观察TEA及其同源类似物TPeA对Aβ025—35所致的培养皮层神经元细胞活力的影响。结果TEA及其同源类似物TPeA能够拮抗Aβ引起神经元死亡,包括Aβ引起细胞活力降低,LDH的释放增多,以及活细胞数目的减少。结论钾通道在Aβ引起神经元毒性作用中发挥重要作用,电压依赖性钾通道参与了Aβ引起的神经元死亡,钾通道可能成为防治神经退行性疾病的重要靶点。     

五味子超临界萃取物对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用

目的:研究五味子超临界萃取物对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,建立Aβ引起的细胞损伤的AD细胞模型,采用MTT法和LDH法检测细胞生存活力。结果:五味子超临界萃取物能降低LDH含量,升高细胞线粒体脱氢酶的活性,增加活细胞数。结论:五味子超临界萃取物能减轻Aβ25-35损伤后的PC12细胞的受损程度,保护细胞膜,提高细胞生存活力。     

三七总皂苷对Aβ25-35诱导的NG108-15细胞损伤的保护作用

目的:观察三七总皂苷(PNS)对由Aβ25-35片段神经毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型保护作用的影响.方法:利用MTT法、细胞计数法和细胞形态学检测法观察PNS对NG108-15细胞存活率和细胞突起的改变.结果:PNS能增加Aβ25-35片段神经毒性诱导的NG108-15细胞存活率、细胞突起率和细胞突起平均长度.结论:PNS具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应和促进细胞突起生长的作用,表明PNS能对老年性痴呆的病理发展有拮抗作用.