TEC酪氨酸激酶上下游作用分子研究进展

Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)最早是从肝癌组织中筛选出的一种重要的非受体型蛋白酪氨酸激酶,它存在于胞质内,主要在T细胞、B细胞、造血细胞及肝脏中表达.Tec是多种细胞因子、辅助分子及受体型蛋白酪氨酸激酶信号转导途径中的重要靶分子,被上游分子激活后,作用于下游底物使之磷酸化,进行信号分子的逐级传递,同时能够参与并调节多种生物学效应.现对其上下游主要作用分子作一简要综述.     

Syk与消化道恶性肿瘤关系的研究近况

Syk（Spleen tyrosine kinase）是一种B细胞激活信号转导中最重要的激酶。近来对Syk与肿瘤相关性研究证实,Syk可以抑制多种恶性肿瘤的生长,从而引发了对非受体酪氨酸激酶在肿瘤发生发展和转移过程中作用的研究。许多学者认为Syk在多种恶性肿瘤的发病病理过程中起着极为重要的作用。本文就Syk的理化特点及其在消化道恶性肿瘤中的研究现状作一综述。     

电离辐射的信号传递与细胞反应

不同的细胞外刺激因素通过细胞内的信号传递途径作用到靶分子产生相应的细胞效应.电离辐射作为一种特殊的物理因子,它的信号传递有其特殊性.已经证实,哺乳动物细胞在很大剂量范围内的电离辐射作用下可激活细胞反应通路,其通路分别介导细胞存活和死亡的保护和毒性反应.细胞保护性反应涉及有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3-磷酸激酶(phosphatidyl inositol-3-phosphate kinase,PI3 kinase)级联反应的通路,可刺激辐射损伤后修复的细胞增殖.细胞毒性或应激反应的最直接后果涉及Jun N-末端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK,现称为MAPK8),产生细胞凋亡和(或)其他形式的死亡.一般认为,剂量超过5 Gy,照射的细胞存活是很低的,明显的死亡信号被激活.但是,在许多研究中这种认识是不够的,因为信号传递事件与细胞增殖和克隆存活或增殖死亡和凋亡的细胞反应终点无关.后者细胞死亡的形式也可能不同,主要取决于研究的细胞类型.目前的资料提示,造血细胞、成纤维细胞或其他正常细胞较癌细胞更倾向于辐射诱导的细胞凋亡.本文作者从下面4个方面内容简要阐述电离辐射的信号传递与细胞反应.     

p130Cas信号转导与肿瘤

细胞信号转导即细胞信息代谢,已成为目前普遍关注和发展迅速的细胞生物学问题,通过信号分子所携信息在细胞内传递,对细胞代谢、生长、增殖、凋亡、伸展、迁移及癌变等进行全方位、多层次调控[1]。信号分子p130Cas(p130 Crk-associated substance)是细胞内普遍存在的、与v-Crk和     

天花粉蛋白诱导Syk(L)基因去甲基化抑制喉癌Hep-2细胞生长研究

目的 探讨天花粉蛋白通过全长型脾络氨酸激酶[full-length form of spleen tyrosine kinase,Syk（L）]基因去甲基化途径恢复Syk（L）表达对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭迁移的的抑制作用。方法 采用CCK-8法及Transwell实验检测不同浓度天花粉在不同时间点对Hep-2细胞增殖及处理72h后细胞侵袭迁移能力的影响;采用MS-HRM法、Q-RT-PCR及Western blot法检测不同浓度天花粉蛋白对Hep-2细胞Syk（L）基因甲基化水平及其表达的影响。结果 CCK-8结果显示,天花粉蛋白对喉癌Hep-2细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度、结果时间依赖性;Transwell结果显示,天花粉蛋白能显著抑制Hep-2细胞的侵袭迁移能力;MS-HRM结果显示,天花粉蛋白可以逆转Hep-2细胞Sky（L）基因的高甲基化状态,恢复Syk（L）mRNA及蛋白的表达。结论 天花粉蛋白通过逆转Syk（L）基因启动子CpG岛的甲基化状态,使喉癌Hep-2细胞中Syk（L）基因表达活化,恢复Syk mRNA及蛋白的表达,最终发挥抑癌基因的作用抑制Hep-2细胞恶性生物学行为,具有开发并成为抗肿瘤药物的潜在价值。     

酪氨酸激酶Syk在胰腺癌中的表达检测及其临床意义

目的:探索酪氨酸激酶Syk(spleen tyrosine kinase,Syk)基因的表达与胰腺癌生长、转移的影响,以及与病理特点的关系。方法:用RT-PCR检测25例胰腺癌瘤体标本、癌旁正常胰腺组织中Syk mRNA的表达,并同时作免疫组化检测上述P53蛋白的表达。结果:癌旁正常胰腺组织都有Syk基因的表达,而25例胰腺癌组织中只有7例表达,正常胰腺组织与胰腺癌组织中Syk基因表达差异有显著性(P<0.05)。有淋巴结转移的14例胰腺癌标本中,2例有Syk基因表达,无淋巴结转移的11例胰腺癌患者中有5例检测到Syk mRNA的表达,有淋巴结转移的胰腺癌Syk mRNA的表达率低(P<0.05),Syk mRNA表达与P53蛋白的表达呈正相关。结论:Syk基因的表达缺失与胰腺癌的生长及转移相关。     

外泌体通过PI3K/Akt信号通路调控细胞的作用

外泌体是由细胞所产生的小体,在近年来的研究中发现外泌体能够传递信号分子,调控靶细胞的生理功能,在细胞的生长发展中起着重要作用.磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,也称Akt)信号通路是一条经典的细胞信号通路,在...     

神经营养因子受体P75NTR与癫痫

神经营养因子(neurotrophic factors,NTs)是一类调节神经元发育、分化及功能的因子.它可激活两种不同类型的受体--酪氨酸激酶的Trk(tyrosine kinase receptor)家族和肿瘤坏死因子受体超家族中的神经营养因子受体P75(p75neurotrophin receptor,P75NTR).二者均为跨膜蛋白受体,参与调节以神经元为主的某些细胞的生长、分化、存活、修复以及凋亡等多种生物学效应.     

中医药对细胞外信号调节激酶通路的影响

细胞外信号调节激酶(extracellular signal-reg-ulated kinase,ERK)通路是20世纪80年代末期发现的一类丝/苏氨酸蛋白激酶,是传递丝裂原信号的信号转导蛋白,属于丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)信号传导通路[1]。     

Chronic Hyperinsulinism Induced Down—regulation of Insulin Post—Receptor Signaling Transduction in Hep G2 Cells

Insulin initiates its biological effects first bybinding to its cellular receptor,thereby activatingthe tyrosine kinase in theβ- subunit of the insulinreceptor ( IRβ) .This leads to tyrosine phosphory-lation of several insulin receptor protein substrates( IRS) ,especially IRS- 1 [1,2 ] .Phosphorylated IRS-1 plays a critical role in divergence of the insulinsignal.Phosphorylated IRS- 1 associates with SH2domain proteins,such as the p85 subunit of phos-phatidylinositol 3- kinase ( PI 3-…     

Dectin-2受体介导宿主抵抗烟曲霉菌感染的研究

目的探讨C型凝集素受体Dectin-2在烟曲霉菌感染中的作用及机制。方法用紫外线灭活的烟曲霉菌膨胀态分生孢子刺激野生型(wild type, WT)和Dectin-2缺失(Clec4n-/-)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow derived macrophages, BMDMs)。刺激20min及40min后，利用Western印迹法检测BMDMs中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase, Syk)和核转录因子κB抑制因子(inhibitor-κB, IκBα)的磷酸化水平。刺激16h后，利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测BMDMs细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL-12p40的水平。另一方面，利用压舌感染的方法在WT和Clec4n-/-小鼠中构建烟曲霉菌肺部感染模型。感染2d后，统计小鼠整个肺脏荷菌量，并检测肺脏匀浆液中IL-6和IL-12p40水平。结果体外试验提示，烟曲霉菌刺激后，Dectin-2缺失的BMDMs中Syk和IκBα的磷酸化水平及IL-6、TNF-α和IL-12p40水平显著下降(P＜0.05)。体内试验发现，烟曲霉菌感染后，Dectin-2缺失小鼠中肺脏荷菌量显著升高(P＜0.05)，肺脏匀浆液内IL-6、IL-12p40水平显著降低(P＜0.05)。结论C型凝集素受体Dectin-2激活烟曲霉菌诱导的NF-κB信号通路并介导促炎细胞因子的产生，可在小鼠肺烟曲霉菌病动物模型中发挥保护性作用。     

TGF-β1体外诱导肝星形细胞活化中自噬和mTOR通路的变化

［摘要］目的: 观察体外转化生长因子 β1(transforming growth factor-beta1,TGF β1)诱导的肝星形细胞活化中自噬水平和哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路相关分子表达的变化。方法: 体外TGF β1诱导人肝星形细胞株LX 2,分为对照组、诱导48 h和72 h组,分别常规培养,加入2 ng/mL TGF β1培养48 h和72 h。观察细胞形态改变,应用荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测TGF β1、α 平滑肌肌动蛋白(α smooth muscle actin,α-SMA)和LC3BⅡ以及mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)和核糖体蛋白S6激酶(p70 ribosomal protein S6 kinase,p70S6K)的表达。结果： TGF β1诱导48 h后,部分LX-2细胞变长呈纺锤形或梭形,诱导72 h后,90%以上LX 2细胞呈多突纺锤形,形态向成纤维细胞样细胞转变明显。与对照组相比,诱导48 h组细胞中α-SMA、TGF-β1和LC3BⅡ mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),诱导72 h组升高更明显(P<0.01);诱导48 h组细胞中p mTOR/mTOR比值和p70S6K蛋白表达降低,诱导72 h组降低更明显(P<0.05) 。结论： TGF-β1体外诱导肝星形细胞活化中自噬蛋白表达增加,而mTOR表达受到抑制。     

三七总皂苷抑制K562细胞mTOR信号通路活性的实验研究

目的 探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对体外培养K562细胞mTOR信号通路相关分子表达及活性的影响.方法 不同浓度的PNS(50～800 μ,g/mL)干预体外培养K562细胞24 ～ 72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO/EB双荧光染色法观察细胞死亡及凋亡状况;RT-PCR检测mTOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达变化;Western blot检测mTOR、p70S6K、4E-BP1及p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白表达量的变化.结果 与对照组相比,浓度为100～ 800 μg/mL的PNS能够抑制K562细胞增殖(P＜0.05),促进K562细胞凋亡及死亡(P＜0.05),PNS对K562细胞72 h的IC50为(229.07±2.36) μg/mL;100、200、400 μg/mL PNS作用于K562细胞72 h后mTOR蛋白表达量及mRNA表达量降低(P＜0.05),且磷酸化蛋白p-mTOR (Ser2448)、p-p70S6K (Thr229/389)及p-4E-BP1(Thr37/46)表达水平也随着药物浓度的增加而降低(P＜0.05).结论 PNS能够抑制K562细胞mTOR信号通路的活性,这可能是PNS抑制K562细胞增殖的机制之一.     

Syk或ZAP-70信号途径诱导脐带血CD4~+T细胞极化

目的:探讨IL-2或IL-4和基质细胞源因子(SDF)-1α协同刺激下,脐带血CD4+T细胞极化的作用及其与非受体型蛋白质酪氨酸激酶的关系。方法:流式细胞术、实时定量RT-PCR检测IL-2或IL-4和SDF-1α协同刺激下,CD4+T细胞中胞内Th1型和Th2型细胞因子的表达;免疫复合物激酶分析法和免疫印迹法检测Th细胞极化过程中非受体型蛋白酪氨酸激酶Syk和ZAP-70的磷酸化;反义肽核酸(PNA)技术探讨Syk和ZAP-70在协同刺激Th细胞极化过程中的作用。结果:L-2或IL-4和SDF-1α协同作用可通过Syk或ZAP-70磷酸化诱导CD4+T细胞极化;Syk或ZAP-70 PNA可明显阻断Syk或ZAP-70磷酸化以及CD4+T细胞极化。结论:Syk和ZAP-70磷酸化对于IL-2或IL-4和SDF-1α协同诱导CD4+T细胞极化十分重要。     

RNA干扰靶向抑制酪氨酸蛋白激酶对哮喘小鼠树突状细胞功能的影响

目的 通过特异性微小干扰RNA(siRNA)靶向抑制小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的酪氨酸蛋白激酶(Syk)的基因表达,阻断树突状细胞的成熟,从而阻断Syk所介导的细胞内及细胞间的信号传导通路,研究Syk与DC之间的关系.方法 化学法合成21-23 bp的小鼠树突状细胞Syk基因siRNA片段A、B、C、D,用Lipofectamine 2000作为转染试剂,将siRNA片段转染哮喘小鼠骨髓来源DC,作用48 h后再与正常小鼠脾脏来源T淋巴细胞混合反应48 h,之后用ELISA法检测T淋巴细胞分泌细胞因子(IL-4、lL-13、IL-2和INF-γ)的水平.用Western Blot检测DC表达Syk蛋白的量,判断Syk基因是否被沉默,剔除无效片段.结果 siRNA片段A、C、D干扰组小鼠DC细胞Syk蛋白表达减少;B组没有明显变化,为无效片段.siRNA干扰组IL-4、IL-13的水平较未干扰组明显下降(P均<0.05),IL-2和INF-γ水平无显著差异(P>0.05).结论 Syk特异性SiRNA能够有效抑制Syk基因表达,可阻遏DC的抗原递呈作用以及活化、分化T淋巴细胞的功能.     

Flt3的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

Flt3(fms-like receptor tyrosine kinases)又称FLK-2(foetal liver kinase2)、STK-1(stem cell tyrosine kinase 1),为Ⅲ型受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTK)成员之一,在血细胞中表达仅限于造血干/祖细胞表面,与其配体在正常造血及免疫系统发育中起重要的调节作用.     

莱菔硫烷对ox-LDL诱导血小板活化的抑制作用

目的：探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）诱导血小板活化的影响及其可能的分子机制。方法：在体外实验中,将健康人纯化血小板与不同浓度的SFN(1.0、2.5、5.0μmol/L)共同孵育40 min,然后用ox-LDL激活血小板20 min,并检测血小板活化的指标,包括CD62P的表达、胞内血小板因子4(platelet factor4,PF4)和趋化因子配体5(chemokine ligand 5,CCL5)的释放水平。机制上,用Western blot蛋白免疫印迹法检测血小板肉瘤酪氨酸激酶（sarcoma tyrosine kinase,Src）及其下游的脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）磷酸化水平;用活性氧（reactive oxygen species,ROS）检测试剂盒测定胞内总ROS水平。结果：ox-LDL诱导的血小板CD62P的表达以及PF4和CCL5的释放水平均可被SFN显著抑制（P <0.05）;SFN显著下调ox-LD...     

Flt3l与肿瘤关系的研究进展

酪氨酸激酶受体3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3l)是新发现的一种细胞因子.该因子与fms样酪氨酸激酶受体3 (fms-like tyrosine kinase 3 receptor,Flt3R)特异性结合,可促进多种干细胞、血细胞及其前体细胞的生成与分化.     

miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 探讨miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究.方法 采用脂质体LipofectamineTM 3000将miR-455-3p mimics和miR-455-3p NC转入HCT116结肠癌细胞中,Real-time PCR检测细胞中miR-455-3p表达,MTT法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)、MMP9、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白的表达.结果 与miR-455-3p NC组比较,miR-455-3p mimics组miR-455-3p表达量显著提高(P＜0.01),细胞活力、迁移能力、侵袭能力均显著降低(P＜0.01),MMP2、MMP9、PI3K及p-AKT表达量均显著下调(P＜0.01).结论 miR-455-3p mimics可能通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制HCT116细胞的迁移及侵袭.     

应用GFP质粒构建及转染技术探讨Syk(L)核移位机制

【目的】通过研究Syk(L)在乳腺癌细胞亚细胞器中的分布和移位机制,探讨Syk(L)抑制乳腺癌的可能性机制。【方法】采用细胞胞核、胞浆分离技术和Westernblot的方法,检测乳腺癌细胞系BT474中两种Syk蛋白异构体在细胞内的分布。构建绿色荧光蛋白(GFP)和Syk(L)核移位相关功能域融合蛋白质粒,转染入Cos7细胞内,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的分布。【结果】BT474细胞的细胞浆中可检测到Syk(S)和Syk(L)的表达,细胞核中只检测到Syk(L)的表达。在Cos7细胞中,GFP与Syk(L)的缺失域(deletiondomain,DEL域)融合蛋白均匀分布于细胞内,GFP与Syk(L)的IDB域融合蛋白聚集于细胞核中;将DEL域上的294K、300K、及305K突变域非碱性氨基酸后构建成GFP-IDB(L)-M,突变的融合蛋白则失去核聚集现象。【结论】在乳腺癌细胞中,Syk(L)可从细胞胞浆移位到细胞核内。Syk(L)的IDB域具有完整的核移位功能,能将融合的胞浆蛋白GFP转移到细胞核内;DEL域的碱性氨基酸具有核定位信号功能。Syk(L)在乳腺癌细胞中的抑癌功能与其核移位有关。