体外压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞周期和增殖指数影响的研究

目的 通过体外实验探讨压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞周期和增殖指数(PI)的影响,为推拿基本力学刺激"舒筋散结"的治疗作用提供细胞生物学方面的实验依据.方法 体外培养大鼠筋膜组织成纤维细胞,对细胞实施压力刺激后,检测细胞周期与PI变化.结果 筋膜组织成纤维细胞接受压力作用后,细胞周期发生阻滞,休止期和DNA合成前期(G0/G1期)细胞增多,分裂前期(S期)细胞减少,PI降低,差异有统计学意义.结论 压力刺激对筋膜组织成纤维细胞周期与PI的抑制性调节,可能是推拿"舒筋散结"的细胞生物力学原理之一.     

体外压力刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织细胞合成释放肿瘤坏死因子-α和干扰素-β影响的研究

目的通过体外实验探讨压力刺激对大鼠"足三里"穴筋膜组织细胞合成释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-β(INF-β)的影响,为腧穴"扶助正气"的治疗作用提供细胞生物力学方面的实验依据。方法体外培养大鼠"足三里"穴筋膜组织细胞,对细胞实施免疫组织化学鉴定后,实施100 kPa和200 kPa压力刺激,检测细胞外培养液INF-β和TNF-α含量的变化。结果 "足三里"穴筋膜组织细胞Keratin染色阴性,Vimnetin染色阳性,200 kPa压力刺激后,培养液中TNF-α含量增加,INF-β含量降低,差异均有统计学意义。结论 "足三里"穴筋膜组织细胞主要是成纤维细胞,压力刺激对筋膜组织成纤维细胞TNF-α和INF-β合成释放的调节,可能是腧穴接受针灸推拿治疗后特异性发挥"扶助正气"作用的细胞生物力学原理之一。     

静态压力刺激对大鼠"足三里"穴区及穴旁区域成纤维细胞PGE2和IL-6释放影响的比较研究

目的：通过探讨机械刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织成纤维细胞的压力信号生物转换作用,为腧穴“感受刺激,防治疾病”的现代医学生物学机制提供理论与实验依据。方法：体外培养大鼠“足三里”穴及穴旁区域的筋膜组织细胞,对细胞进行形态学鉴定后,实施压力刺激并检测细胞外培养液中前列腺素E2（PGE2）争白细胞介素-6（IL-6）含量的变化。结果：“足三里”穴及穴旁区域的筋膜组织细胞主要都是成纤维细胞,压力刺激均能够促进细胞PGE。和IL-6合成释放的增加,差异有统计学意义。结论：腧穴与非穴的筋膜组织成纤维细胞皆能直接感受刺激,从而将机械信号转换为生物信号。     

体外压力刺激对大鼠筋膜组织细胞合成释放NO和IL-1β影响的研究

目的:通过探讨压力刺激对大鼠筋膜组织细胞合成释放一氧化氮(NO)和白细胞介素-1 β(IL-1 β)的影响,为按摩治病机制提供细胞生物力学方面的实验依据。方法:体外培养大鼠筋膜组织细胞,对细胞进行形态学鉴定后,实施50kPa压力刺激,检测细胞外培养液中NO和IL-1 β含量的变化。结果:筋膜组织细胞主要是成纤维细胞,压力作用后,细胞外培养液中NO和IL-1 β的含量都增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:筋膜组织细胞可以感受机械刺激,并将物理性质的力学信号转换为生物性质的化学信号;其在力学刺激作用下的反应,可能是按摩发挥治病作用的细胞生物力学原理之一。     

鹿仙散结汤调控LRH-1/MMP-2通路抑制人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及迁移

目的：研究鹿仙散结汤通过调控LRH-1/MMP-2信号通路对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法：培养人乳腺癌细胞株MCF-7,以1.2×10⁶/孔接种在6孔板中。将细胞分为5组,每组设置3个重复孔,分别为空白对照组、顺铂(1μg/mL)组及鹿仙散结汤高(1 mg/mL)、中(0.5 mg/mL)、低(0.25 mg/mL)浓度组。在光镜下观察各组细胞形态变化;Transwell小室检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL检测细胞凋亡水平;RT-qPCR检测细胞中LRH-1、MMP-2 mRNA表达;Western Blot检测细胞中LRH-1、MMP-2蛋白表达。结果：空白对照组细胞为梭形或多角形,贴壁正常生长,顺铂组及鹿仙散结汤中、高浓度组均出现细胞皱缩稀疏和死亡。与空白对照组比较,各给药组穿膜细胞数和细胞迁移率显著降低,凋亡率显著升高,细胞中LRH-1、MMP-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),其中高浓度鹿仙散结汤的作用最强。结论：鹿仙散结汤可抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的侵袭和迁移能力,促进其凋亡,其机制...     

电针干预佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞凋亡的MMP-3、MMP-9分子调节机制

目的观察电针干预对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞凋亡和相关蛋白基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法32只雄性SD大鼠被随机分为生理盐水组、模型组、电针干预组和假电针干预组,每组8只。生理盐水组大鼠在双侧足垫部注射模拟造模,其余大鼠用弗氏完全佐剂在双侧足垫部注射造模。电针干预组大鼠予以电针干预。假电针干预组予以假电针刺激处理。HE染色观察模型大鼠踝关节炎症进展情况,Tunnel法检测模型大鼠踝关节滑膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测踝关节滑膜的MMP-3、MMP-9的mRNA表达,Western blot检测踝关节滑膜的MMP-3、MMP-9的蛋白表达。结果HE染色显示,电针干预组大鼠的关节炎症显著轻于模型组。Tunnel法检测,电针干预可以促进关节炎大鼠的滑膜细胞凋亡。RT-PCR和Western blot检测结果显示,电针干预可以显著降低关节炎大鼠踝关节滑膜组织中的MMP-3、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论电针干预可以显著减轻佐剂性关节炎大鼠的关节炎症和增殖的滑膜细胞数量,其分子机制可能和电针降低局部的MMP-3、MMP-9蛋白的表达有关。     

补阳还五汤对缺氧心脏成纤维细胞旁分泌MMP-2/9、TIMP-1、TNF-α的影响

[目的]探讨补阳还五汤对缺氧诱导心脏成纤维细胞旁分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,并从基因和蛋白水平探讨其保护心肌细胞、预防心肌纤维化的机制。[方法]培养小鼠乳鼠心脏成纤维细胞,将其分为对照组、模型组、补阳还五汤组。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测各组成纤维细胞和细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TNF-αm RNA表达和蛋白分泌。[结果]与对照组比较,模型组MMP-2、MMP-9及TNF-αm RNA表达上调,蛋白旁分泌增加,TIMP-1表达下调(P0.05);与模型组比较,补阳还五汤组MMP-2、MMP-9 m RNA表达下调,蛋白旁分泌减少,TIMP-1则上调(P0.05),而TNF-α仅有下调趋势,无统计学差异(P0.05)。[结论]补阳还五汤可保护缺氧心肌,预防心肌纤维化。其机制可能与抑制缺氧成纤维细胞的旁分泌,调节MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达平衡有关。     

COPD患者与血清中MMP-9及TGF-β1的相关性研究

MMP-9是一种含锌的蛋白水解酶,主要参与炎症反应和组织重建。转化生长因子(TGF-β1)可促进气道平滑肌细胞增殖、迁移,成纤维细胞及向肌成纤维细胞转化,并具有促进细胞外基质合成、抑制其降解的作用。MMP-9和TGF-β1是细胞外基质合成和降解的重要调节因子,共同参与了慢性阻塞性肺疾病的气道重塑。目前MMP-9、TGF-β1的研究日趋受到人们的重视,本文就MMP-9、TGF-β1与慢性阻塞性肺疾病关系的研究情况作一综述。     

抑瘤一号方对HO-8910人卵巢癌细胞细胞活力及MMP-2、MMP-9mRNA表达的影响

目的:观察抑瘤一号方对HO-8910人卵巢癌细胞增殖及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9mRNA表达的影响,从而为其抑制卵巢癌进展提供依据。方法:在体外用不同浓度(0%、5%、15%、20%)抑瘤一号方含药血清处理HO-8910人卵巢癌细胞后,检测细胞活力及细胞内MMP-2、MMP-9m RNA表达。结果:空白组HO-8910人卵巢癌细胞胞体相对光滑,核膜尚完整,细胞器正常,染色质呈现均匀;抑瘤一号方含药血清处理后的HO-8910人卵巢癌细胞胞体发生皱缩,胞质可见多发空泡形成,核染色质出现固缩,形成多个团块状,或边界较分明的类似新月形小体,凋亡特征明显。作用12、24h后,5%、10%组细胞活力与同期空白组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05);作用48h后,5%组与空白组、5%组与10%组细胞活力比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力均低于同期空白组,且15%、20%组均低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05);作用72h后,5%组与空白组细胞活力比较,差异无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组细胞活力均低于同期空白组、5%组,且15%、20%组细胞活力均低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05)。5%组、空白组MMP-2mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%、20%组MMP-2mRNA表达水平均低于空白组,且15%、20%组均低于5%组,20%组低于10%组,差异均有统计学意义(P<0.05);空白组、5%组、10%组MMP-9mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);15%、20%组MMP-9mRNA表达水平均低于空白组和5%组,20%组低于10%、15%组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:抑瘤一号方在体外能明显降低HO-8910人卵巢癌细胞活力,抑制肿瘤细胞基质金属蛋白酶的表达。     

姜黄素对EAE大鼠脊髓中MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:探讨姜黄素对EAE大鼠脊髓中MMP-2、MMP-9活性的影响。方法:采用豚鼠脊髓匀浆诱导EAE模型,治疗组给予姜黄素进行干预,观察行为学变化,HE染色观察脑组织病理改变,real—time PCR检测颈髓组织MMP-2、MMP-9mRNA表达。结果:与EAE组相比,姜黄素治疗组临床评分明显下降,病程缩短,而且恢复较快;中枢炎性细胞浸润明显减少;MMP-9的转录水平明显下降,两组之间差异具有显著性,而MMP-2的水平两者无明显差异。结论:姜黄素对EAE具有一定的治疗作用,可能与抑制炎症细胞浸润及降低MMP-9的水平有关。     

实验性骨关节炎MMP-3与软骨细胞凋亡

目的:为观察实验性骨关节炎中MMP-3和软骨细胞凋亡情况,并对二者表达作相关分析。方法:采用改良Hulth’s法制造兔骨关节炎模型,分别在8周、16周抽取关节液测定MMP-3的含量,切取关节软骨。采用TUNEL法标记凋亡软骨细胞计数,并对软骨进行HE染色和透视电镜观察。结果:HE染色中,正常组软骨细胞排列规则,关节炎组中软骨细胞排列紊乱。透视电镜观察各组均可见凋亡细胞,但在关节炎组中可见胶原纤维失去正常的结构,排列紊乱,可见钙盐沉积。在MMP-3测定中,早期骨关节炎(20.91±2.48)ng.mL-1和晚期骨关节炎(41.68±5.71)ng.mL-1均高于正常对照组(4.34±2.13)ng·mL-1,差异有统计学意义P0.01;晚期骨关节炎和早期关节炎组比较(P0.01);早期骨关节炎(10.18±1.90)和晚期骨关节炎(35.47±3.46)软骨细胞凋亡指数都高于正常对照组(3.93±1.91),P0.01;晚期骨关节炎早期关节炎组比较,(P0.01)。MMP-3变化和软骨细胞的凋亡在各个时期均存在相关性(r=0.82,P=0.03;r=0.64,P=0.049;r=0.69,P0.029)。结论:实验性骨关节炎中,关节滑液中MMP-3含量在模型组中明显升高,晚期含量升高更明显;软骨细胞的凋亡指数和MMP-3的变化密切相关,MMP-3的升高可能是导致软骨基质破坏,软骨细胞凋亡的重要因素。     

中风病急性期痰热证与MMP-1和MMP-3表达的影响＊

目的 研究缺血性中风病急性期痰热证与MMP-1和MMP-3表达的相关性，其相关性研究能否形成微观辨证的依据。方法 筛选发病7天内就诊于中国中医科学院西苑医院的缺血性中风痰热证患者45名，非痰热证44名，对每例患者分别作出痰湿证、气虚证、血瘀证、内风证、阴虚证和内火证的量化诊断，并用ELISA法检测血清中MMP1和MMP-3的含量。结果 痰热证组和非痰热证组MMP-1和MMP-3的表达均无明显差异。结论 MMP-1和MMP-3不能作为痰热证的微观指标，需进一步寻找微观指标对中风病痰热证证候诊断及疗效评价提供更加客观支持。     

肺纤方对博莱霉素大鼠肺纤维化模型基质金属蛋白酶1、2及组织金属蛋白酶抑制剂1、2的影响

目的:观察肺纤方抗大鼠肺纤维化肺基质重建的作用。方法:气管内注入博莱霉素制造大鼠肺纤维化模型,观察造模后14、28、45d模型组、假手术组、肺纤方组、泼尼松组血清基质金属蛋白酶1、2及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1、2的变化。结果:肺纤方可以显著降低血清基质金属蛋白酶1、2及组织金属蛋白酶抑制剂1、2。结论:肺纤方具有抗大鼠肺纤维化基质重建作用。     

三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9),MMP-9 mRNA表达的影响.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、三化汤低、高剂量组(7.2,14.4 g·kg-1) ig、尼莫地平组(8.1 mg·kg-1)ig.大鼠常规饲养3d后ig给药,每日1次,连续给药7d后采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型.采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织MMP-9的表达,采用逆转录聚式酶链反应法(RT-PCR)检测脑组织MMP-9 mRNA的表达.结果:模型组脑组织MMP-9,MMP-9mRNA表达显著升高(P＜0.01);三化汤高剂量组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达显著降低(P＜0.01),尼莫地平组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达也明显降低(JP＜0.05),三化汤低剂量组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达降低不明显;三化汤高剂量组降低脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达较尼莫地平组明显.结论:三化汤对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

大豆异黄酮对C6胶质瘤细胞侵袭力的影响

目的:观察大豆异黄酮(soybean isoflavones,SI)对大鼠C6胶质瘤细胞侵袭力的影响。方法:C6胶质瘤细胞分为对照组和大豆异黄酮(20、40、80mg/kg)4组,分别采用Boyden小室法检测细胞侵袭力,realtime PCR、免疫组织化学方法检C6胶质瘤细胞中MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白含量。结果:大豆异黄酮低剂量组即能明显降低大鼠C6细胞侵袭力,MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白含量。结论:大豆异黄酮能降低大鼠C6细胞侵袭力。     

中西医结合对脑梗死血清CRP、MMP-3及MMP-9水平影响研究

目的：探讨中西医结合对脑梗死患者血清CRP、MMP-3及MMP。9水平影响。方法：选取2009年9月～2010年10月于南方医科大学附属珠江医院神经内科进行治疗的60例脑梗死患者为研究对象,将其随机分为对照组（西医组）30例和观察组（中西医结合组）30例,后将两组患者治疗前后的血清CRP、MMP-3及MMP．9水平进行检测及比较。结果：经研究发现,治疗前两组患者血清CRP、MMP-3及MMP-9水平无显著性差异（P均〉0．05）,而治疗后观察组的血清CRP、MMP-3及MMP-9水平均低于对照组,经比较,P均〈0．05,均有显著性差异。结论：中西医结合对脑梗死患者血清CRP、MMP-3及MMP-9水平影响较大,对于改善患者的病情有着积极的意义,值得临床推广应用。     

通心络对大鼠心梗后心肌MMP-9及TIMP-1表达作用的研究

目的：研究通心络对大鼠心梗后心肌MMP-9及TIMP-1表达作用的影响。方法：应用结扎冠脉前降支的方法制备大鼠心梗模型，将SD大鼠随机分为5组：假手术组、心梗组、通心络干预组（2．0g／kg／day）、卡维地洛干预组（1mg／kg／d）、福辛普利干预组（10mg／kg／d）。干预3个月后，苦味酸天狼猩红染色观察心肌间质胶原重塑的改变，以蛋白免疫印迹法（western blot）的方法检测MMP-9及TIMP-1的表达情况。结果：福辛普利、卡维地洛及通心络干预组大鼠血流动力学指标较心梗组都有不同程度地改善，苦味酸天狼猩红染色见：心梗组心肌间质胶原沉积显著，卡维地洛、福辛普利及通心络干预组胶原沉积的情况减轻。与假手术组相比，心梗组MMP-9的表达显著升高，药物干预后表达下调，以卡维地洛组最为明显。TIMP-1的表达心梗组最低，通心络、福辛普利及卡维地洛干预后表达有不同程度的增高。结论：中药通心络可以减轻大鼠心肌梗死后心肌间质胶原沉积，下调MMP-9的表达，促进TIMp-1的表达。     

三七凝胶对硬膜外黏连TIMP-1、MMP-1的影响

目的 探讨三七凝胶对椎板切除术后硬膜外黏连基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响.方法 建立椎板切除术模型,将72只大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、黏连平组、凝胶组和三七凝胶组,各18只,分别在术后第7、14、21天采用免疫组化进行动态观察,分析愈合过程中TIMP-1和M...     

痛痹方血清对体外培养乳兔关节软骨细胞增殖和MMP-3与TIMP-1的影响

目的观察痛痹方含药血清对体外培养的乳兔关节软骨细胞和MMP-3与TIMP-1的影响。方法采用体外培养的乳兔软骨细胞为干预对象,并加入10μg/LIL-1建立变性软骨细胞损伤模型,制备痛痹方含药血清作为干预措施,培养48h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖,ELISA法测定分离的上清培养液中MMP-3和TIMP-1含量。结果不同浓度的痛痹方含药血清均能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖,降低MMP-3/TIMP-1,与空白血清对照均有显著性差异(P<0.01)。结论痛痹方血清能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖,下调软骨细胞MMP-3/TIMP-1。