青藤碱诱导人红白血病细胞株K562凋亡的实验研究

目的:通过青藤碱(Sinomeine,SIN)诱导K562细胞凋亡实验,研究SIN诱导K562细胞凋亡机制。方法:CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术(FMC)检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色细胞凋亡形态学改变,Real-time PCR检测bcl-2和bax基因表达,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:CCK-8和FCM结果显示,SIN可抑制K562细胞增殖并诱导其早期凋亡;Hoechst 33258染色结果显示,经SIN诱导48h后表现出细胞凋亡的典型变化;Real-time PCR结果显示,SIN组bax基因表达升高,bcl-2基因表达降低;Western blot结果显示,SIN组中Caspase-3、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论:SIN可诱导K562病细胞凋亡从而抑制细胞增殖。     

白头翁总皂苷碱水解产物通过线粒体通路促进肝癌细胞凋亡研究

目的研究白头翁总皂苷碱水解产物(PAHS)抗肝癌作用及其相关机制。方法采用MTT法检测PAHS对于人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响,并用Giemsa染色法观察细胞形态;采用Hoechst 33258染色法以及流式细胞术检测PAHS对细胞凋亡、细胞周期及线粒体膜电位的影响;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白Cytochrome C、Caspase-3、cleaved Caspase-3和Bcl-2的表达。采用ICR小鼠腋下sc肝癌细胞H22建立体内肝癌模型,测定肿瘤生长抑制率,并通过HE染色和透射电镜观察组织形态。结果体外结果显示,PAHS能够以剂量和时间依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的增殖,能够将肿瘤细胞的生长周期阻滞在S期,降低线粒体膜电位。PAHS可以上调Cytochrome C、cleaved Caspase-3的表达和下调Bcl-2、Caspase-3的表达。体内实验结果显示,PAHS(50、100、200 mg/kg)可以抑制小鼠肝癌细胞的生长,具有剂量依赖性。组织学观察显示PAHS组的小鼠肿瘤组织均有大面积坏死及凋亡细胞的出现。结论 PAHS可通过诱导细胞凋亡发挥抗肝癌作用,其作用机制与线粒体凋亡途径有关。     

Piscidinol A诱导人白血病K562细胞凋亡及其作用机制

目的:初步研究Piscidinol A对人慢性髓系白血病K562细胞的增殖抑制作用及抗肿瘤分子作用机制。方法:MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡形态;AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Piscidinol A对细胞中凋亡相关蛋白表达的影响。结果:Piscidinol A对K562细胞具有增殖抑制作用且呈浓度和时间依赖关系,24 h时IC_(50)为27.36 mg/L;细胞凋亡染色示有典型的细胞凋亡形态出现;流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测发现Piscidinol A可诱导K562细胞凋亡,其凋亡率呈浓度依赖性;Western blot法检测到Piscidinol A能上调Bax和Caspase-3的表达,同时下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:Piscidinol A能抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白表达量变化有关。     

长春新碱对人胃癌BGC细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的通过体内外水平研究长春新碱对人胃癌BGC细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法采用MTS法检测人胃癌BGC细胞的增殖情况;采用Hoechst荧光染色法、流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期的情况;通过Western blotting法检测BGC细胞内增殖、周期和凋亡相关蛋白表达情况;荷瘤裸鼠实验检测长春新碱抑制胃癌生长情况。结果长春新碱明显抑制BGC细胞的生长,其抑制率与药物浓度呈剂量和时间相关性,将细胞周期阻滞于G1期,并促进其凋亡,下调了细胞增殖和周期相关蛋白p-FAK、FAK、E2F1、Cylin E2、Cyclin D2、CDK2、CDK6的表达,并激活了凋亡相关蛋白Caspase-3。荷瘤裸鼠实验显示长春新碱能明显抑制胃癌生长。结论长春新碱通过下调细胞增殖与周期相关蛋白的表达,使细胞周期在G1期阻滞,同时激活Caspase-3诱导细胞的凋亡。     

木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。     

蒲公英-丝瓜络提取物对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖与凋亡作用的影响的体外试验研究※

目的 研究蒲公英-丝瓜络（PS）提取物对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和凋亡作用的影响。方法 将不同浓度的PS提取物作用于乳腺癌4T1细胞,通过CCK8法和集落形成实验检测PS提取物对细胞增殖的影响;通过Hoechst 33258细胞核染色法和Annexin V-FITC/PI染色法观察细胞凋亡情况;通过Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、CDK2、Cyclin A2蛋白表达,评估PS提取物对乳腺癌4T1细胞周期与凋亡相关蛋白表达的影响。结果 CCK8结果显示PS提取物各剂量组作用24、48、72 h后细胞存活率下降;不同浓度PS提取物处理4T1细胞后,细胞集落形成能力减弱;细胞周期检测结果表明PS提取物能阻滞细胞周期于S期;Hoechst 33258染色实验观察到细胞核固缩和出现明显的凋亡小体,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测发现细胞凋亡率增加;Western blot结果显示PS提取物可使Bcl-2、周期蛋白Cyclin A2及CDK2表达降低,Bax、Cleaved caspase-3表达增加。结论 PS提取物具有抑制乳腺癌4T1细胞增殖的作用,该作用可能与诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关。     

参麦注射液体外诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的机制研究

目的:研究参麦注射液体外对骨肉瘤MG-63细胞生长的影响及作用机制。方法:体外培养MG-63细胞,以不同浓度的参麦注射液作用于细胞,MTT法检测肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术测细胞凋亡率和细胞周期;ELISA法测凋亡基因Caspase-3、Caspase-9的含量;Bradford法测SOD、MDA含量。结果:参麦注射液能显著抑制MG-63细胞的增殖,呈剂量依赖性;增加MG-63细胞的凋亡率,并诱导出现S细胞周期阻滞;作用MG-63细胞后,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达量增加;升高细胞内SOD的活性,降低MDA的含量。结论:参麦注射液抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖的作用机制与诱导细胞凋亡和将细胞周期阻滞于S期有关,其诱导凋亡的机制与Caspase家族,以及增加机体的抗氧化功能有关。     

桔梗皂苷-D诱导肺腺癌A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞

目的:探究桔梗皂苷-D(Platycodin-D,PD)诱导肺腺癌细胞(A549)和A549顺铂耐药细胞(A549/DDP)凋亡和周期抑制的作用机制,为PD治疗非小细胞肺癌和产生顺铂耐药的非小细胞肺癌提供实验基础。方法:采用MTT法检测细胞的增殖抑制率和耐药指数;流式细胞术检测细胞周期阻滞和凋亡作用;Hoechst-33258荧光染色观察细胞核形态的变化;Western-blot蛋白印迹法分析凋亡通路和细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:MTT检测结果显示,PD对A549和A549/DDP细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性。Hoechst 33258荧光染色发现,随着PD浓度增加,两种细胞核形态都有明显的改变。进一步流式细胞术结果表明,PD诱导A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞。Westernblot检测结果表明,PD通过上调Bax、Caspase-9、cleaved-Caspase-3和PARP的表达,下调Bcl-2和Caspase-3的表达诱导A549和A549/DDP细胞凋亡。此外,PD通过下调Cyclin-D1、Cyclin-D3、CDK4、CDK6、E2F1和p-Rb及上调P18的蛋白水平诱导A549细胞周期G0/G1阻滞。同时,PD通过下调Cyclin-B1、p-Cdc2、E2F1和p-Rb及上调P27的蛋白表达诱导A549/DDP细胞周期G2/M阻滞。结论:PD通过线粒体途径诱导A549和A549/DDP细胞凋亡诱导,并且引发A549细胞G0/G1周期阻滞和A549/DDP细胞G2/M阻滞周期阻滞。     

白藜芦醇对MGC803细胞凋亡因子Bad,p-Bad,Caspase-3的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人胃癌细胞MGC803细胞凋亡因子及其磷酸化的影响,研究白藜芦醇抗胃癌的作用机制。方法:采用0,50,100,200μmol·L~(-1)Res处理MGC803细胞后,采用台盼蓝法测定MGC803细胞生长抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫组化法检测促凋亡蛋白(Bad),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Bad,磷酸化Bcl-x1/Bcl-2相关死亡启动子(p-Bad),Caspase-3蛋白的表达。结果:随着浓度增加Res抑制胃癌MGC803细胞生长作用明显增强(P0.01);Res(100μmol·L~(-1))能明显下调MGC803细胞中Bad,p-Bad蛋白表达,同时可上调Caspase-3蛋白表达。结论:Res可以诱导MGC803细胞凋亡,其凋亡与浓度、时间有一定的依赖性;Res诱导MGC803细胞凋亡可能与其下调Bad,p-Bad蛋白和上调Caspase-3蛋白表达有关。     

白藜芦醇抑制胆囊癌细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(Res)对胆囊癌细胞(GBC)和正常成纤维细胞(3T3)体外增殖的影响,进而观察Res对GBC和3T3细胞凋亡的影响.方法:MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期,检测细胞凋亡;SABC法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:Res呈浓度依赖性抑制GBC细胞的生长与增殖(P＜0.01),抑制率最高可达54%.Res能明显诱导GBC细胞凋亡,凋亡率最高为30.52%;处理组较对照组G1期细胞由34.88%上升至55.47±3.95%,S期细胞减少8.41%～17.54%,呈明显的G0/G1期阻滞现象.GBC细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.结论:Res能通过诱导GBC细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用.     

马钱子生物碱成分的体外抗肿瘤活性筛选

目的从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法应用人鼻咽癌细胞株KB、人白血病细胞株HL-60、人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选6种马钱子生物碱类成分对其生长的抑制作用。结果士的宁对人鼻咽癌细胞株KB、人白血病细胞株HL-60和人胃癌细胞株BGC等细胞的生长有一定的抑制作用;伪士的宁对人鼻咽癌细胞株KB、人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402等细胞的生长有一定的抑制作用;依卡金对人鼻咽癌细胞株KB和人胃癌细胞株BGC等细胞的生长有一定的抑制作用。结论士的宁、伪士的宁和依卡金对人鼻咽癌细胞株KB和人胃癌细胞株BGC等细胞的生长皆有抑制作用,呈现浓度-效应关系。     

40种香豆素类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞生长抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有一定程度的抑制作用。结论:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有抑制作用;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有抑制作用。     

白头翁素诱导KB细胞凋亡的机制研究

目的：研究棉团铁线莲中的单体成分白头翁素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法：细胞生长抑制试验测定白头翁素对KB细胞的IC50值;以DIOC6（3）为荧光探针,流式细胞术测定KB细胞的线粒体膜电位;以Caspse-9、-3酶活性检测试剂盒测定KB细胞中Caspse-9、-3的活性。结果：白头翁素对KB细胞生长抑制的IC50值为41.63±5.84μM,白头翁素可浓度依赖性地降低KB细胞的线粒体膜电位,白头翁素可时间依赖性地增强KB细胞的Caspse-9、-3活性。结论：白头翁素可诱导KB细胞发生线粒体途径的凋亡,这可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

黄芩苷对人口腔上皮癌KB细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的:研究黄芩苷(bacailin)对KB细胞生长抑制作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用MTT法检测bacailin对体外培养的KB细胞增殖的抑制作用,TRAP-PCR-ELISA方法检测KB细胞在bacailin作用后端粒酶活性的变化,用流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果:bacailin在0.5～2.0mmol/L剂量范围内对KB细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05),同时bacailin作用后,KB细胞端粒酶活性明显抑制(P<0.05),KB细胞的G2/M期细胞含量明显增高(P<0.01)。结论:bacailin对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用。     

海龙体外抗肿瘤活性研究

目的 :筛选不同品种海龙的体外抗肿瘤活性部位。方法 :采用MTT法观察海龙的各种提取物对多种人癌细胞株生长的影响。结果 :尖海龙的 95%乙醇提取物对KB细胞的生长具有抑制作用 ,并呈量效关系 ;粗吻海龙的脂溶性非皂化物具有不同程度的抑制人癌细胞株KB ,Hela ,Bcap37,K562 ,PAA细胞的作用 ,并有明显的量效关系 ;拟海龙的各提取物未见有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用。结论 :海龙是一种有开发前景的抗肿瘤中药。     

44种生物碱类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制活性的筛选

目的：从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法：应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果：西萝芙木碱、伊波加因、骆驼蓬碱、哈尔明碱、黄连碱、延胡索碱、白屈菜碱、小檗胺、吐根碱、4-甲氧基-1-甲基-2-喹诺酮、贝母碱N-氧化物、去氢贝母碱N-氧化物、倒千里光碱、9-去甲基小檗碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱、金鸡宁、罂粟碱、喜树碱和酒石酸麦角胺对人鼻咽癌细胞株KB细胞的增殖有一定程度的抑制作用，且呈浓度-效应关系；最强者为吐根碱、番茄碱苷和喜树碱，其次为黄连碱、白屈菜碱、哈尔明碱、澳洲茄次碱和延胡索碱。西萝芙木碱、白屈菜碱、哈尔明碱、小檗胺、吐根碱、贝母碱N-氧化物、番茄碱苷、罂粟碱、利血胺和喜树碱对人白血病细胞株HL-60细胞的增殖亦有一定程度的抑制作用，且呈浓度-效应关系；最强者为吐根碱，其次为西萝芙木碱、小檗胺、番茄碱苷和喜树碱。结论：上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱的、有抗肿瘤活性中药的有效成分，亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。     

两种不同剂型紫杉醇对KB细胞的体外杀伤作用

 目的 探讨白蛋白结合型紫杉醇与紫杉醇溶液对人口腔上皮癌KB细胞的体外杀伤作用。方法 以不同浓度含白蛋白结合型紫杉醇和紫杉醇注射液的培养基分别作用于KB细胞,并设对照(普通培养基),通过显微镜观察细胞增殖状况及形态,MTT法检测药物在体外对细胞株的作用,流式细胞分析技术检测药物对细胞生长的影响。结果 经不同浓度白蛋白结合型紫杉醇和紫杉醇注射液作用36及72 h后,细胞存活率显著下降。镜下观察显示部分细胞皱缩变形,崩解坏死,细胞脱壁悬浮;MTT法结果显示两药均对KB 细胞有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性,但在相同浓度及时间下,两药IC₅₀的差异无统计学意义;流式细胞术结果显示,相较对照组,各组细胞凋亡率显著增加,细胞周期各时相中,S期比例逐渐减少,0.1、1和10 μmol·L^-1组G₂/M期比例显著增加,且高于100 μmol·L^-1组。但两药在相同浓度时,细胞凋亡率与周期变化无显著性差异(P>0.05)。结论 白蛋白结合型紫杉醇具有和紫杉醇相似的抑制KB细胞增殖和促进凋亡的能力。
     

龙葵总碱对骨髓瘤细胞凋亡及NF-KB表达的影响

目的：探讨龙葵总碱对人骨髓瘤RPMI-8226细胞的凋亡作用以及对NF-KB表达的影响。方法：选用人骨髓瘤RPMI-8226细胞株为研究对象,以龙葵总碱为被试对象,采用MTT法检测细胞增殖活性,AnnexinV-FITC/PI双标记法分析细胞凋亡的改变;免疫荧光细胞化学染色分析NF-KB的表达情况。结果：在25mg/L龙葵总碱处理RPMI-8226细胞48h后,RPMI-8226细胞的生长出现明显的抑制作用,且随着浓度加大及时间延长,其抑制作用逐步增强;药物浓度〈25mg/L时,诱导凋亡作用不明显,当药物浓度达到25mg/L时,早期凋亡明显增多;当药物浓度达25mg/L（此时细胞凋亡明显）时,NF-KB表达水平的降低具有统计学意义。结论：龙葵总碱可抑制骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖,促进骨髓瘤细胞凋亡,并且表现为剂量和时间依赖性;NF-KB表迭量在人多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞株随龙葵总碱的药物浓度增大而降低。     

中国皖南尖吻蝮蛇毒细胞毒素的体外抗癌活性

目的：探讨从中国皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒中提取的细胞毒素的体外抗癌活性。方法：DEAE-Sepharose FF，Source30s柱层析分离纯化细胞毒素组分，溴化二苯四偶氮盐(MTT)比色法测定该组分对体外培养的人癌细胞的细胞毒作用。结果：从中国皖南尖吻蝮蛇毒中分离出两种单一组分(ACTX-6，ACTX-8)对体外培养的人鼻咽癌细胞株(KB)，胃癌细胞株(BGC)，结肠癌细胞株(CACO-2)，卵巢癌细胞株(HO8910)，肺癌细胞株(A549)均有很强的抑制作用，ACFX-6的体外抗癌活性较ACTX-8强，对A549的抑制作用最强，呈剂量依赖关系。结论：ACTX-6对体外培养的人癌细胞有明显的抑制和杀伤作用。     

紫甘蓝提取液对人乳腺癌细胞生长和迁移的抑制作用

目的:探讨紫甘蓝提取物对乳腺癌细胞MCF7生长和迁移的抑制作用。方法:应用MTT法检测不同浓度紫甘蓝提取物对MCF7增殖的抑制作用,并用倒置相差显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI染色细胞后用流式细胞术检测不同浓度紫甘蓝提取物对MCF7凋亡的影响,采用Transwell法检测不同浓度紫甘蓝提取物对MCF7迁移的影响。采用SPSS16.0软件对实验结果进行统计学处理。结果:紫甘蓝提取物可抑制MCF7的增殖,并呈浓度依赖性和时间依赖性(P0.05),也使MCF7形态发生了异常变化,紫甘蓝提取物可诱导MCF7凋亡、抑制其迁移,且呈浓度-效应关系(P0.05)。结论:紫甘蓝提取物可抑制乳腺癌细胞MCF7生长和迁移。