复发性生殖器疱疹患者血清IL-2/IFN-γ水平和NK/LAK细胞活性的变化

目的探讨RGH患者血清细胞免疫功能的变化.方法采用PHA诱导淋巴细胞增殖,观测淋巴细胞诱导后的增殖能力,并测定细胞因子IL-2和IFN-γ血清浓度的变化;用LDH释放法测定NK和LAK细胞的杀伤活性,对结果进行统计学处理.结果与对照组比较,RGH患者对PHA诱导的淋巴细胞增殖能力显著下降(P＜0.05);血清IL-2和IFN-γ水平也显著降低(P＜0.01);NK和LAK细胞的杀伤活性亦明显降低(P＜0.01).结论RGH患者细胞免疫功能紊乱是其易复发的免疫学发病机制.     

EBV—LCLs内Bcl—2水平与其对NK胞毒作用敏感性的相关性研究

目的：探讨EB病毒感染细胞内Bcl-2水平与其对NK胸毒活性及对调亡诱导因素敏感性之间的关系。方法：应用反义寡聚脱氧核苷酸，抑制EB病毒转化B淋巴母细胞样细胞系（EBV－LCLs）胞内Bcl-2基因表达，然后观察NK细胞对其杀伤活性的改变以及其对致凋亡因素（地塞米松、撤除生长因子）敏感性的变化。结果：EVV－LCLs胞内Bcl-2表达水平与其对NK细胞杀伤的敏感性呈负相关（P＜0.01）；与无血清培养条件下EBV－LCLs细胞存活率呈正相关（P＜0.01）；与EBV－LCLs对地塞米松致凋亡作用的敏感性呈负相关（P＜0.01）。结论：胞内Bcl-2水平可能是决定靶细胞对NK细胞杀伤活性敏感性的关键因素之一，NK细胞对EBV－LCLs的杀伤机制之一可能是诱导细胞调亡。     

肺癌DC融合细胞诱导的抗肿瘤免疫应答

目的 研究肺癌DC融合细胞FLD－A11体内外诱导免疫应答的能力,方法 用MTT法测定FLD－A11细胞诱导淋巴细胞增殖的能力;ELISA法检测其诱导淋巴细胞分泌IL－2的水平;LDH释放法测定FLD－A11细胞免疫后小鼠脾淋巴细胞的特异性CTL活性。结果 FLD－A11有有效刺激淋巴细胞的增殖反应（SC：RC＝1：50时,SI＝2.38）,诱导淋巴细胞分泌IL－2。FLD－A11细胞免疫后,小鼠的胸腺和脾脏重量均高于对照组（P＜0.05）,脾淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的杀伤活性显著高于对照组。结论 FLD－A11细胞具有诱导初次抗肿瘤免疫应答的能力,不仅能在体外诱导淋巴细胞的增殖和IL－2的分泌,而且体内免疫接种也能引起小鼠免疫器官的增生反应,产生针对Lewis肺癌的特异性CTL杀伤作用。     

双歧杆菌、大肠杆菌菌体外多糖对iIEL激活作用的对比研究

目的：对比研究双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖对iIEL的激活作用。方法：采用Percoll非连续密度梯度离心法从小鼠小肠提取小肠上皮间淋巴细胞（iIEL）;应用有机溶剂提取扔双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖与iIEL细胞共同孵育作用后,检测iIEL细胞的自然杀伤活性、IFNγ和IL－2产生能力。结果：大肠杆菌、双歧杆菌菌体外多糖均能显著增强iIEL细胞的自然杀伤活性、IFNγ和IL－2的产生能力（P＜0．01）,双歧杆菌组的作用显著高于大肠杆菌组（P＜0．01）。结论：双歧杆菌和大肠杆菌菌体外多糖均对iIEL细胞具有免疫激活作用,但双歧杆菌菌体多糖的作用强。     

干扰素对受照射机体NK细胞活性的调节作用

采用4h51Cr释放法,分别以小鼠脾脏淋巴细胞对YAC-1细胞和肿瘤患者外周血淋巴细胞对K562细胞的体外自然杀伤（NK）活性为指标,研究受电离辐射后小鼠脾脏NK细胞活性的变化以及干扰素（IFN－α）对NK细胞活性的影响;并观察肿瘤患者及其放疗后NK细胞活性的变化以及IFN－α的调节作用。结果表明NK细胞具有较强的辐射耐受性,经16Gy照射后24hNK细胞活性显著降低;肿瘤患者的NK细胞活性明显低于正常对照组（P＜0．01）,放疗后NK细胞活性进一步降低（P＜0．05）。IFN－α处理NK细胞可以显著增强NK细胞活性,这提示IFN-α有可能作为一种生物应答调节剂用于肿瘤患者、肿瘤放、化疗或手术患者。     

INF—γ／IL—4对早孕期期蜕膜细胞和绒毛滋养层细胞的体外影响

探讨Th1/Th2型细胞因子对人孕早期毛滋养层细胞和蜕膜细胞活性及其内分泌功能的影响。绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞活性采用MTT法进行检测。绒毛组织分泌的人绒毛膜促性腺激素（hCG)和蜕膜组织分泌的催乳素（PRL）均采用放免法（RIA）进行分析测定。结果：（1）一定浓范围的Th1型细胞因子TNF－γ（10－1000ng/ml）和Th2型细胞因子IL－4（1－10ng/ml）对绒毛滋养层细胞活性及其hCG分泌分别有不同程度的抑制作用（P＜0．01）和促进作用（P＜0．01）；（2）Th1型细胞因子INF-γ低浓度时（1－10ng/ml）对蜕膜细胞活性及PRL分泌有刺激作用（P＜0．05），高浓度时（100－1000ng/ml）则有抑制作用（P＜0．01），Th2型细胞因子IL-4对蜕膜上述功能的调节作用与对绒毛膜滋养层的调节作用相似。Th1/Th2型细胞因子可能是通过影响绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞活性及其内分泌功能而在早期妊娠中起重要的免疫调节作用。     

慢性乙型肝炎病毒感染者干扰素治疗无应答与HLA-DRB1*07的相关性

目的：探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者干扰素治疗6个月无应答与HLA－DRB1*07的相关性。方法：以接受α－干扰素正规治疗慢性乙型肝患者69名作为研究对象，通过序列特异性引物套式PCR－SSP检测HLA－DRB1*07，并同时用双抗体夹心法检测患者治疗前后外周血CD4^ T细胞分泌IFN－γ、IL-2、IL-10和IL－4的水平.结果：无应答组的HLA－DRB1*07的携带率高于部分、完全应答组（P＜0．05，OR＝18．55）；干扰素治疗6个月每位患者IFN－γ、IL－2水平均较治疗前升高，而IL－10、IL－4均较治疗前低治疗前后HLH－DRBq*07阳性患者IL－4、IL－10浓度差异平均水平明显低于阴性患者（P＜0．01），而治疗前后IFN－γ、IL-2浓度差异平均水平低于阴性患者（P＜0．01）；无应答且IFN－γ、IL－2浓度差异平均水平低于部分、完全应答组（P＜0．01），IL－4、IL－10浓度差异平均水平低于部分、完全应答组（P＜0．01）。结论：HLA－DRB1＊07与干扰素治疗无应答相关。     

不同Th1/Th2细胞免疫应答支气管肺泡灌洗液中细胞学的变化

目的 探讨不同Th细胞优势应答下支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞学变化，了解Th1/Th2细胞免疫应答的细胞和分子机制。方法 用鸡卵清蛋白（OVA）致敏Wistar大鼠（每组10只），制作致敏大鼠哮喘模型；用“冻干BCG”皮内注射制作BCG免疫大鼠模型。收集BALF并做HE染色，进行细胞分类计数。采用流式细胞术，测定BALF中，CD2^ ,CD28^ 及γδTCR^ T细胞占总淋巴细胞的百分率及平均荧光密度（MIF）。用原位杂交法，检测肺组织中IL－4mRNA的IFN－γmRNA的表达。用ELISA法检测血清IL－4和IFN－γ的浓度。结果 哮喘组BALF中淋巴细胞，嗜酸性粒细胞（EOS），浆细胞和中性粒细胞的总数，均显著多于正常组（P＜0．01）；BCG免疫组BALF中，淋巴细胞和巨噬细胞的总数也显著高于正常组（P＜0．001）。哮喘组BALF中，CD2^ T 细胞的明显增加。但哮喘组CD2^ T细胞的F1显著高于正常组及BCG组（P＜0．05）；BCG组BALF中，CD^2 T细胞的百分率与正常组相比产无显著差异（P＞0．05），其CD2^ T细胞的MFI显著高于正常组(P＜0．05）。哮喘组和BCG组BALF中，CD28^ 细胞占淋巴细胞的百分率显著多于正常组（P＜0．01）；BCG组CD28^ 细胞的MFI高于哮喘组（P＜0．01）。两组的CD28^ 细胞的MF1均显著多于正常组（P＜0．05）。哮喘组和BCG组BALF中，γδTCR^ 细胞占淋巴细胞的百分率显著高于正常组（P＜0．01）。结论 支气管哮喘患者Th2细胞的优势应答，与BALF中的B细胞，EOS，浆细胞和中性粒细胞等APC数的增加及T细胞上CD2的高表达有关；而BCG免疫组中的Th1细胞的优势应答与BALF中巨噬细胞，T细胞增加及T细胞上CD28的高表达有关。γδT细胞可能存在Th1/Th2细胞免疫模式，既参与哮喘免疫也参与BCG免疫过程，可能是调节Th0细胞分化的重要始动细胞。     

胃癌患者红细胞C3b受体与淋巴细胞免疫功能的相关性研究

目的：研究胃癌患者红细胞C3b受体（RBC-C3bR）与淋巴细胞免疫功之间的关系。方法：利用酵母菌花环试验、MTT法及克隆抗体致敏花环法对51例胃癌患者及30例正常人的RBC-C3bR、自然杀伤细胞（NK）活性及T淋巴细胞（TC）亚群进行测定。结果：胃癌患者RBC-C3bR阳性率、NK细胞杀伤活性、CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋比值均比正常对照组显著低下（P〈0．05、P〈0．01）。经统计学相关性分析显示，RBC-C3bR阳性率与CD4^＋／CD8^＋比值、NK细胞杀伤活性间呈正相关（P〈0．05，P〈0．01）。结论：胃癌患者红细胞免疫功能与淋巴细胞免疫功能一样受到抑制，二者免疫功能密切联系、相互影响。     

粘附性NK细胞的制备及免疫学特性初探

目的：初步探讨粘附NK细胞的制备方法及免疫学特性。方法：首先经淋巴细胞分离液，贴壁粘附及尼龙毛柱粘附对外周血NK细胞进行初步分离，然后联合使用Percoll不连续密度梯度离心法和T细胞Panning法进一步纯化NK细胞，应用流式细胞仪鉴定NK细胞并检测其纯度，rhIL-2(6000IU/ml)诱导纯化的NK细胞（R－NK）转变为粘附NK（A－NK）细胞，然后利用细胞计数法，MTT法和RT－PCR方法检测A－NK细胞的增殖和杀伤等免疫学特性。结果：经过纯化，诱导获得较高纯度，较高活性的A－NK细胞。结论：初步建立了利用人外周血NK细胞制备A－NK细胞的方法。     

癌基因p21^ras、raf和细胞外信号调节蛋白激酶参与刺激Jurkat细胞产生TNF—β和IL—2

目的 明确p21^ras－细胞外信号调节蛋白激酶（the extracellular signal-regulated protein ki-nase,ERK）系列是否参与调节Jurkat细胞产生TNF－β和IL－2。方法 用负向突变基因p21^ras(ras17N或ras15A),raf-1(raf1-130)及ERK1（erk1K71R)或活性结构p21^ras(H-ras6IL)和raf（raf22W）转染细胞,以PMA／PHA刺激细胞,ELISA法检测细胞因子。结果 PMA／PHA刺激细胞产生较正常对照细胞约2倍PMA／PHA刺激细胞,ELISA法检测细胞因子。结果 PMA／PHA刺激细胞产生较正常对照细胞的2倍的TNF－β和IL－2（P＜0．001）。负向突变基因去除了PMA／PHA增加细胞因子分泌的作用。活性突变基因本身不影响TNF－β和IL－2产生,但明显增强细胞对PMA／PHA的应答（P＜0．05）。结论 p21^ras-ERK系列在调节Uurkat细胞在PMA／PHA刺激下产生TNF－β和IL－2中起重要的作用。     

IL-2和IL-15协同调节T细胞的增殖和LAK细胞的杀伤活性

目的 探讨IL-2和IL-15在免疫调控和应答中的协同作用。方法 IL-2、IL-15和IL-2 IL-l5组刺激CTLL细胞的增殖，^3H—TdR掺入法测cpm值；IL-2、IL-15和IL-2 IL-l5组诱导PBMC中NK和LAK细胞的发育，4h^51Cr释放实验检测对K562和LiBr细胞的杀伤活性。结果 IL-2和IL-15都能诱导CTLL认细胞的增殖和NK、LAK细胞的杀伤活性，IL-2和IL-15可明显协同上调CTLL认的增殖和LAK细胞的杀伤活性。结论 IL-2和IL-15在免疫调控和应答中有一定的协同作用，为细胞因子联合应用于临床治疗肿瘤等疾病提供了实验依据。     

自然流产患者外周血与蜕膜NK细胞亚群数量变化的研究

目的：研究自然流产患者外周血与蜕膜组织自然杀伤细胞亚群数量的变化。方法：对36例自然流产患者及30例正常健康早孕者（对照）外周血及蜕膜组织中淋巴细胞进行单克隆抗体标记,应用流式细胞仪定性、定量分析技术对NK细胞（natural killer)亚群进行分析。结果：（1）流产组外周血及蜕膜组织NK细胞CD56＋CD16＋百分比较对照组明显升高。（P＜0．01）,而蜕膜组织中NK细胞CD56＋CD16－百分比明显低于对照组（P＜0．001）。（2）外周血与蜕膜组织NK细胞CD56＋CD16＋亚群存在相关性（γ＝0．516,P＜0．05）。结论：NK细胞亚群的数量变化可以引起蜕膜免疫微环境的失调,导致自然流产。外周血与蜕膜NK细胞CD56＋CD16＋亚群存在正相关关系。     

乙肝病毒核酸疫苗诱导H-2b小鼠特异性免疫反应的初步研究

目的：观察并证实adr和adw亚型NHBs核酸疫苗单独应用，或与HBc核酸疫苗联合免疫诱导H－2^b小鼠的特异性体液和细胞免疫反应，方法：C57BL／6（H－2^b)小鼠随机分为4组：pJW4303组（P组，5只），pJW4303/MHBs/adw组（W组，6只）；pJW4303/MHBs/adr组（R组，6只）;pJW4303/MHBs/adr pJW4303/HBc组（R＋C组，6只），免疫方法为各组小鼠每只每次注射相应的质粒DNA疫苗100μg(100μl)，免疫程序为0，2，4w，小鼠血清抗HBs和抗HBc水平以及小鼠脾淋巴细胞培养上清中的IFN－γ和IL－4浓度用ELISA法检测，小鼠淋巴细胞抗原特异性增殖试验采用3H－TdR掺入法，计算刺激指数（SI），结果：W，R，R＋C各免疫组在末次免疫后4w所有小鼠均产生抗－HBs，但各免疫组间无明显差异，抗－HBs以R＋C组最早出现，R＋C组小鼠在第1次免疫后2w抗－HBc即全部阳性，P组免疫后始终末出现抗－HBs和抗－HBc，核酸疫苗免疫的W，R，R＋C各组免疫小鼠HBsAg特异性脾淋巴细胞增殖指数（SI）均高于P组（P＜0．01－P＜0．001），R＋C（n=6)组小鼠脾淋巴细胞HBsAg特异性SI比R组显著升高（P＜0．05），R＋C免疫小鼠HBcAg特异性脾淋巴细胞增殖指数（SI）均≥2，与P组（其SI均＜2）相比差异非常显著（P＜0．001），W，R，R＋C各免疫组小鼠脾淋巴细胞与HBsAg共培养的上清中IFN－γ的浓度比P组显著升高（P＜0．001），而它们的IL－4 浓度比P组明显下降（P＜0．001），R＋C免疫组小鼠脾淋巴细胞与HBcAg共培养的上清中IFN－γ浓度也较P组明显升高（P＜0．05），但其IL－4浓度与P组无差别（P＞0．05），结论：adr亚型和adw亚型HBV外膜中蛋白（MHBs)核酸疫苗和HBcAg核酸疫苗能诱导H－2b小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答，具有良好的体液和细胞免疫原性，MHBs核酸疫苗与HBcAg核酸疫苗联合免疫能加强MHBs核酸疫苗诱导的体液和细胞免疫反应，所诱导出的辅助性T细胞免疫反应为Th1型。     

CIK细胞对胃癌OCUM-2MD3细胞体内外杀瘤活性的实验研究

目的：研究正常人细胞因子激活的杀伤细胞（Cytokine-induced killer,CIK)对人胃癌细胞株OCUM－2MD3的体外细胞毒活性以及对胃癌腹膜移植模型的体内抗肿瘤作用。方法：取正常人外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)，加入γ－IFN、IL－2、抗－CD3单抗和IL－1，体外诱导成CIK细胞，用流式细胞仪对细胞作动态表型分析，用MTT法测定CIK细胞体外对OCUM－2MD3的细胞毒活性，并与CD3AK作对比。在Balb/c裸小鼠腹腔内接种OCUM－2MD3细胞，观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。结果：CIK细胞在培养2周左右获得大量增殖，CD3^ CD56^ 双阳性细胞大量增殖达1000倍以上；体外实验证明，CIK细胞对OCUM－2MD3有明显的细胞毒活性，对比CD3AK其抑瘤率与85％与62．8％（P＜0．05）。体内实验表明，CIK细胞能够显著抑制癌性腹水的生长，其抑瘤率可达100％；肿瘤标志物CEA含量明显降低。结论：CIK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞，具有较强的体内外抗胃癌细胞活性，具有明显的抑制癌性腹水的生长的作用，有可能用于临床上晚期胃癌的过继性免疫治疗。     

皮肤病患者IL—2R、T细胞亚群及红细胞免疫功能的测定及分析

目的：研究某些皮肤病中细胞免疫功能改变情况,方法,采用双抗体夹心ELISA法检测血清可溶性白细胞介素2受体（SIL－2R）,流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群（D3^ ,CD4^ ,CD8^ ),及红细胞C3b受体花环（RBC－C3bRR)和红细胞免疫复合物花环（RBC－ICR）,T淋巴细胞亚群CD3^ , CD4^ ,CD8^ 与正常组比较明显降低（P＜0．01）,CD4 ＋/CD8^ 与正常组比较降低（P＜0．05）,RBC－C3bRR较正常组明显降低（P＜0．01）,RBC－ICR与正常组比较明显增高（P＜0．01）。结论某些皮肤病中存在细胞免疫功能改变。     

肺癌患者外周血单个核细胞Th2／Th2反应状态及黄芪的调节作用

目的：探讨肺癌患者外周血单个核细胞（PBMC）Th1/Th2免疫反应状态，观察中药黄芪（AG）对其作用。方法：采用并分离肺癌患者和健康志愿者的PBMCs，各分为4组：其中1组即刻冻存待测，其余3组分别为不加药对照组、加10％AG、20％AG组，培养48h，收集细胞。以IL－2、IFN－γ代表Th1型细胞因子，IL－4、IL－6、IL－10代表Th2型细胞因子，用RT-PCR 患者PBMC中Th1/Th2型细胞因子mRNA的表达。结果：肺癌患者PBMC中，IL－4、IL－6和IL－10表达阳性率显著高于正常对照（P＜0.05），而IL－2无1例表达（0／23），IFN－γ仅1例表达；经与黄芪培养后（2种浓度），肺癌患者Th2型因子与未加AG培养组相比，IL－4、IL－6和IL－10的表达率下降（P＜0.05）；而IL－2的表达率显著提高（P＜0.05）。结论：肺癌患者外周血的免疫细胞呈现Th2型免疫反应优势状态；黄芪对于肺癌宿主PBMCs Th1/Th2的状态有良好的调节作用，可使肺癌患者PBMCs的Th2型优势免疫反应向Th1方向逆转。     

非小细胞肺癌患者高温射频治疗前、后免疫功能的变化

目的 研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者高温射频（RFA）治疗前、后机体免疫功能的变化。方法 CT引导下经皮肺穿刺可伸展锚状电极配合RF－2000射频治疗仪高温射频消融，治疗NSLC患者30例。采用流式细胞术及双抗体夹心法，检测治疗前、后外周血T细胞亚群（CD3^ 、CD4^ 、CD8^ )、NK细胞的百分率及sIL-2R含量的变化。采用LDH释放法检测NK细胞的杀伤活性。结果 治疗前NSCLC患者外周血中CD3^ 、CD4^ 细胞的百分率及CD4^ /CD8^ 细胞的比值降低，NK细胞的百分率和NK细胞杀伤活性亦降低，与对照组相比较差异显著（P＜0．01）。CD8^ 细胞的百分率及sIL-2R含量明显高于正常对照组（P＜0．01），提示患者处于免疫抑制状态。治疗后免疫抑制减轻，CD3^ 、CD4^ 、NK细胞的百分率及CD4^ /CD8^ 细胞的比值明显升高，NK细胞杀伤活性也升高，而CD8^ 细胞的百分率及sIL-2R的含量明显降低，治疗前、后相比较差别明显（P＜0．01）。结论 锚状电极高温射频消融具有免疫激活作用，可使机体的免疫功能得到一定程度的改善。     

食管癌患者五项细胞免疫学指标的测定及其意义

对３５例食管癌（ＥＣ）患者和３０例正常人（ＮＣ）的外周血自然杀伤（ＮＫ）细胞活性、Ｔ细胞亚群、血浆可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）以及外周血诱生γ干扰素（ＩＦＮ－γ）的水平进行了检测。结果显示，ＥＣ患者ＮＫ细胞活性明显降低（Ｐ＜０．０１）；ＣＤ８＋细胞增多（Ｐ＜０．０６），ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞比值降低（Ｐ＜０．０５）；ｓＩＬ－２Ｒ明显增高（Ｐ＜０．０１）；外周血诱生ＩＦＮ－γ降低（Ｐ＜０．０５）；血浆ＴＮＦ－α升高。表明，上述指标对判断、分析ＥＣ患者细胞免疫功能状况及病变程度有较大的意义。     

IL—12以及IL—12P40对子宫内异症患者NK细胞功能的免疫调节

目的通过观察正常人及子宫内膜异位症(EM)患者外周血及腹腔液中IL-12、IL-12P40含量变化,分析其分子诱导NK细胞对子宫内膜细胞的细胞毒效应的影响,探讨IL-12、IL-12P40分子与EM患者NK细胞功能低下的相关性.方法ELISA酶联免疫检测IL-12、IL-12P40含量以及MTT释放法检测NK细胞毒活性.结果①EM患者腹腔上清液可使正常人外周血NK细胞杀伤活性(16.80%±3.6%)明显下降(8.37%±4.5% )(P＜0.05).② EM患者IL-12含量血清为66.38±12.6 pg/ml,低于对照组84.97±13.7 pg/ml(P＜0.05);腹腔液中为77.76±14.6 pg/ml,低于对照组106.92±10.7 pg/ml(P＜0.05).③EM患者IL-12P40含量血清为35.64±10.6 pg/ml, 与对照组无明显差异;腹腔液含量为79.76±12.6 pg/ml, 高于对照组40.54±10.0 pg/ml(P＜0.05), 并与疾病的程度呈负相关.④IL-12能增强NK细胞对子宫内膜细胞的杀伤,并呈剂量依赖.在10 ng/ml浓度诱导后杀伤率为31.90%,高于对照组的16.80%.⑤IL-12P40能拮抗IL-12对NK细胞活性的诱导,当加入IL-12P40后,使IL-12诱导的活性(29.3%)下降为19.36%.结论子宫内膜异位症患者腹腔液中IL-12P40含量的增高可能与NK细胞功能下降有关.