神经生长因子对小鼠海马突触体内[Ca2+]i的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平的影响。方法采用海马内微注射方法,使用荧光指示剂Fura-2／AM检测各组小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平。结果1．NGF对青年小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平没有显著影响;2．NGF能缓解衰老小鼠海马突触体内[Ca2+]i超载现象;3．NGF也能降底人为海马突触体内[Ca2+];水平。结论NGF通过调节海马突触体内[Ca2+]i的水平来改善衰老动物的学习记忆能力。     

神经生长因子对小鼠海马突触体内[Ca2+]i的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平的影响.方法采用海马内微注射方法,使用荧光指示剂Fura-2/AM检测各组小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平.结果1.NGF对青年小鼠海马突触体内[Ca2+]i水平没有显著影响;2.NGF能缓解衰老小鼠海马突触体内[Ca2+]i超载现象;3.NGF也能降底人为海马突触体内[Ca2+];水平.结论NGF通过调节海马突触体内[Ca2+]i的水平来改善衰老动物的学习记忆能力.     

吗啡对大鼠海马星形胶质细胞[Ca2+]i的影响

目的 研究吗啡对大鼠海马星形胶持细胞[Ca^2 ]i的影响，探索吗啡对星形胶质细胞的作用效应。方法 运用荧光探针Fluo-4，利用激光共聚焦显微镜研究培养纯化大鼠海马星形胶质细胞[Ca^2 ]i的变化。结果 经0.5,1,2,10μmol/L浓的吗啡短期处理3d后，细胞内[Ca^2 ]i浓度与正常细胞比较差异无显著性（P＞0．05）。吗啡急性作用于正常星形胶质细胞后，[Ca^2 ]i呈单峰样升高；而作用于吗啡处理后的细胞，作用浓度需高于处理浓度出现[Ca^2 ]i呈单峰样升高的现象，纳络酮可阻断上述效应，NMDA受体阻断剂MK－801则不能。结论 星形胶质细胞[Ca^2 ]i对吗啡的反应性变化可能参与吗啡耐受的形成。     

苦参碱对豚鼠心室肌细胞胞浆[Ca2+]i的影响

目的 研究中药苦参碱对豚鼠心室肌细胞浆钙的影响。方法 应用激光扫描共聚焦显微技术动态测量单个豚鼠心室肌细胞胞浆钙的浓度。结果 在细胞外钙浓度为１．８ｍｍｏｌ／Ｌ时,１～１００ｕｍｏｌ／Ｌ苦参碱可使细胞内钙离子浓度（「Ｃａ＾２＋」ｉ）吴剂量依赖性增高后下降;而在细胞外无钙的情况下细胞内钙不增高,且低于空白对照组的细胞内钙浓度（Ｐ〈０．０１）。结论 苦参碱剂量依赖性促进外钙内流,但不具有促进内钙释放的     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的 研究肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法，动态测定细胞[Ca2 ]i，MTT法测定细胞增殖。结果 血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的升高，并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时，对细胞游离钙却无影响。结论 肾小球系膜细胞[Ca2 ]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联，但[Ca2 ]i的升高并非细胞增殖的唯一途径。     

西红花酸对过氧化氢诱发心肌细胞[Ca2+]i改变的作用

目的 观察西红花酸对H2O2诱发培养心肌细胞[Ca^2 ]i改变的效应，并探讨其机制。方法 应用Fluo-3／AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同因素处理的单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i。结果 H2O2呈浓度依赖性地使单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i增加，并不受细胞外环境是否存在Ca^2 的影响，L-型Ca^2 通道阻滞剂维拉帕米也不能完全中止[Ca^2 ]i的增加；不同剂量的西红花酸则能减低H2O2引发的单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i增高的幅度。结论 西红花酸能明显抑制H2O2诱发培养心肌细胞[Ca^2 ]i增加的作用，可能与调整胞内钙库Ca^2 的释放和摄取、Ca^2 内流等机制有关。     

EGTA对SLET细胞TCR/CD3复合物介导的[Ca2+]i反应的影响

目的 :证实SLE患者T细胞功能异常是否与其生物化学信号传导异常有关以及EGTA对其影响 ,探讨SLE的发病机理。方法 :用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞并用EGTA干预后 ,分别粘附细胞仪连续观察 10minT细胞 [Ca2 + ]i的变化 ,并评价 [Ca2 + ]i反应与CD3分子的相关性。结果 :正常人和SLE患者T细胞 [Ca2 + ]i反应的基准值相似 (P =0 .10 5 ) ;SLE患者高峰值、平台值T细胞的 [Ca2 + ]i反应明显高于正常对照 (P <0 .0 0 1,P <0 .0 0 1) ;加入EGTA后二者 [Ca2 + ]i反应有显著差异 :二者的T细胞CD3阳性率无差异 (P =0 .6 6 5 )。结论 :SLE患者T细胞TCR/CD3介导的信号转导途径存在异常 ,且不受EGTA的影响 ,可能是贮存库 [Ca2 + ]i释放的增加所致。     

类缺血皮质神经元对小鼠外源性神经干细胞增殖作用的影响

目的：研究类缺血损伤的皮质神经元对外源性神经干细胞增殖的影响作用．方法：类缺血处理后的小鼠皮质神经细胞与同种异体神经干细胞共培养，通过MTT法观察干细胞增殖情况．结果：经与类缺血处理的神经细胞共培养的神经干细胞在2—3wk内的增殖速度明显高于各对照组．结论：类缺血处理后的皮质神经元对外源性神经干细胞的增殖有显促进作用．     

[Ca2+]i与阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞损伤的研究

目的 探讨阻塞性黄疸大鼠胞浆钙活性的变化及其致肾损伤的作用机制.方法 60只SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、实验组(再分为胆总管结扎后15 d和21 d两个亚组),每组15只.胆总管双重结扎法建立阻塞性黄疸大鼠模型,切取肾脏行肾小球系膜细胞原代培养,激光共聚焦显微镜法测定细胞胞浆钙离子浓度.结果 肾小球系膜细胞胞浆钙离子浓度明显升高(P＜0.05).结论 TNFa致阻塞性黄疸大鼠肾脏系膜细胞线粒体损伤中细胞浆内钙离子超载起着重要的作用.     

复方瑞康欣对吗啡依赖人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞[Ca2+]i的影响

目的观察复方瑞康欣对吗啡依赖人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞[Ca2 ]i的影响并探讨其机制。方法SK-N-SH细胞周期同步化后,用10μmol/L的吗啡作用48 h,建立吗啡依赖细胞模型;再用复方瑞康欣含药血清干预12 h,纳洛酮戒断,Fluo 3-AM标记后,流式细胞仪检测SK-N-SH细胞内游离Ca2 荧光强度。结果复方瑞康欣含药血清中、高剂量组细胞内游离Ca2 荧光强度均降低,与空白血清戒断组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论复方瑞康欣的戒毒作用可能与其下调细胞Ca2 水平有关。     

西比灵对缺血性神经元胞质内钙离子和细胞活性的影响

目的　研究类缺血状态下神经元胞质内游离钙离子及细胞活性变化 ,探讨缺血性神经元的损伤与细胞内钙离子的关系及西比灵的治疗意义 .方法　利用 Ca2 +指示剂 Flu- 3/AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的神经元 ,共聚焦技术检测细胞内荧光强度的变化 ,利用四唑蓝 (MTT)比色试验检测缺血性神经元的损伤程度 .结果　给予神经元类缺血处理 10 min后 ,缺血组神经元胞质内钙离子浓度和细胞损伤程度明显高于西比灵预处理组 (P<0 .0 1) .结论　西比灵可明显抑制神经元胞质内钙离子的升高 ,减轻由此引发的缺血性神经元的损伤程度     

模拟缺血预适应对原代培养乳鼠窦房结细胞内钙及L-型钙电流的影响

目的　观察模拟缺血预适应(IP)对培养乳鼠窦房结细胞内Ca2 及I -LCa的影响,探讨IP对窦房结细胞的保 护机制。方法　取培养2d的乳鼠窦房结细胞,随机分为:①对照组;②模拟缺血 再灌注(I R)组;③模拟IP组。以免疫荧 光技术标记细胞内Ca2 ,通过激光共聚焦显微镜检测荧光强度变化;以全细胞膜片钳技术检测I -LCa。结果　模拟IP能显 著降低I R后窦房结细胞内Ca2 荧光强度,增加相应电压下的I- LCa峰值,使电流 电压曲线相对下移。结论　模拟IP能 减轻I R引起的窦房结细胞内Ca2 超载及I -LCa抑制。     

五味子酮对β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元内游离钙离子浓度变化的影响

目的观察中药五味子酮对β-淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导的大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法采用大鼠海马神经元原代培养技术,运用双激发波荧光指示剂Fura-2/AM标记胞内相对[Ca2+]i的变化并进行比较。结果1μmol/L Aβ25~35作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.5951±0.0311,明显高于空白对照组的0.3617±0.0197(P<0.05);1μmol/L Aβ25~35和100μmol/L五味子酮共同作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.4168±0.0468,仍明显高于空白对照组(P<0.05),但较单纯Aβ25~35作用后明显下降(P<0.05)。结论中药五味子酮可以通过抑制Aβ诱导的神经元[Ca2+]i增加,维持细胞内钙稳态,对神经元有一定的保护作用。     

早期惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元细胞内游离钙的远期影响

目的探讨早期惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元功能及NMDA激发后细胞内[Ca2 ]i的远期影响。方法以原代培养的大鼠大脑皮层神经元无镁诱导的反复惊厥样放电为模型。根据对培养6d皮层神经元的不同处理分为三组正常DMEM培养液组(CONT1)、正常细胞外液组(CONT2)和无镁细胞外液组(MGF)。神经元分别在上述三种液体中孵育3h,然后恢复正常DMEM培养基继续培养,在培养7,12及17d时测定皮层神经元噻唑蓝(MTT)代谢率及荧光数码扫描显微镜测定[Ca2 ]i信号的变化,100μmol/LNMDA刺激神经元。[Ca2 ]i反应通过静息钙、峰值和上升时间表示。结果与CONT2和CONT1组相比,MGF组MTT代谢率在培养7和12d皮层神经元均明显降低(P<0.05);不同培养时间各组静息钙和峰值钙水平均升高(P<0.05);上升时间在培养7和17d较短(P<0.05),而12d较长(P<0.05)。CONT2组与CONT1组相比无统计学差异(P>0.05)。结论发育中皮层神经元早期无镁诱导惊厥样放电对细胞内钙具有远期影响,提供了神经元早期惊厥样放电引起远期功能损伤的可能机制。     

睫状神经营养因子对毒胡萝卜素所致大鼠海马神经元[Ca2+]i升高的抑制作用

目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对内质网钙泵特异性抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)引起海马神经元内胞质游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)升高的抑制作用.方法:出生24 h以内SD大鼠海马神经元原代培养10～14 d备用,以活细胞内荧光探针Frua2/AM 实时检测[Ca2 ]i.实验分3组:A组(n=20),EGTA(3 mmol/L);B组(n=40),EGTA(3 mmol/L) Tg(10 μmol/L);C组(n=12),EGTA(3 mmol/L) Tg(10 μmol/L) CNTF(500 U/μl).结果:用足量EGTA螯合细胞外Ca2 后,测得[Ca2 ]i≤(30.73±7.25) nmol/L;加入EGTA Tg后,[Ca2 ]i显著升高([Ca2 ]i≥[91.55±12.24] nmol/L);加入EGTA Tg CNTF后,升高的[Ca2 ]i明显降低([Ca2 ]i≤[26.09±7.16] nmol/L,P<0.01).结论:CNTF可明显减弱Tg的钙库质膜钙泵抑制作用,使胞质[Ca2 ]i降低.提示CNTF通过增加胞内钙库对细胞内游离Ca2 的吸收作用来降低海马神经元的Ca2 负荷.     

α-黑素细胞刺激素对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度的影响

目的：探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i)的影响。方法：从正常人包皮分离并纯培养黑素细胞，用α-MSH处理纯培养的人表皮黑素细胞，用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移，激光共聚焦扫描显微镜检测[Ca^2 ]i。结果：α-MSH可诱导黑素细胞迁移，并使[Ca^2 ]i浓度升高。结论：α-MSH可能通过诱导黑素细胞内的Ca^2 浓度升高，从而促进黑素细胞的迁移。     

高浓度苯丙氨酸对胚鼠皮层神经元Ca~(2+)水平和ERK活性的影响

目的 探讨高浓度苯丙氨酸(Phe)对体外培养的胚鼠皮层神经元突起生长、胞内Ca2+水平和细胞外信号调节激酶(ERK)活性的影响.方法 根据加入Phe的浓度,将体外培养的原代胚鼠皮层神经元随机分为5组:0.45、0.9、3.6、5.0mmol/L Phe组和对照组(加PBS).采用细胞免疫化学方法 检测各组神经元最长突起长度;激光共聚焦显微镜下观察在5.0mmol/L Phe作用下,神经细胞内Ca2+水平的变化;采用Western blotting检测5.0mmol/L Phe作用下的ERK磷酸化水平.结果 0.9、3.6和5.0mmol/L Phe组神经元最长突起长度较对照组明显缩短(P<0.05),且呈浓度依赖性.5.0mmol/L Phe作用于神经元后,胞内Ca2+水平迅速降低,1min达到最低水平,随后缓慢回升.5.0mmol/LPhe作用5、10和30min时能降低皮层神经元ERK磷酸化水平,p-ERK与ERK的比值分别为对照组的(73.7±3.0)%、(35.9±2.0)%和(80.2±8.5)%(P<0.05).结论 高浓度Phe能够降低皮层神经元细胞质内Ca2+和ERK磷酸化水平,从而干扰大脑皮层神经元的正常生长发育.     

高浓度苯丙氨酸对胚鼠皮层神经元Ca2+水平和ERK活性的影响

目的 探讨高浓度苯丙氨酸(Phe)对体外培养的胚鼠皮层神经元突起生长、胞内Ca2+水平和细胞外信号调节激酶(ERK)活性的影响.方法 根据加入Phe的浓度,将体外培养的原代胚鼠皮层神经元随机分为5组:0.45、0.9、3.6、5.0mmol/L Phe组和对照组(加PBS).采用细胞免疫化学方法 检测各组神经元最长突起长度;激光共聚焦显微镜下观察在5.0mmol/L Phe作用下,神经细胞内Ca2+水平的变化;采用Western blotting检测5.0mmol/L Phe作用下的ERK磷酸化水平.结果 0.9、3.6和5.0mmol/L Phe组神经元最长突起长度较对照组明显缩短(P<0.05),且呈浓度依赖性.5.0mmol/L Phe作用于神经元后,胞内Ca2+水平迅速降低,1min达到最低水平,随后缓慢回升.5.0mmol/LPhe作用5、10和30min时能降低皮层神经元ERK磷酸化水平,p-ERK与ERK的比值分别为对照组的(73.7±3.0)%、(35.9±2.0)%和(80.2±8.5)%(P<0.05).结论 高浓度Phe能够降低皮层神经元细胞质内Ca2+和ERK磷酸化水平,从而干扰大脑皮层神经元的正常生长发育.     

柴胡皂苷元D对C6大鼠神经胶质瘤细胞内游离Ca2+浓度的影响

目的探讨柴胡皂苷元D (Saikogenin D, SGD)对C6大鼠神经胶质瘤细胞内游离Ca2 浓度[Ca2 ]i的影响.方法采用 Fura-2/AM荧光指示剂测定SGD引起的C6大鼠神经胶质瘤细胞[Ca2 ]i变化.结果 SGD(1×10-5～1×10-4 mol/L)剂量依赖性地升高[Ca2 ]i,其EC50为3.5×10-5 mol/L.SGD的升高[Ca2 ]i作用被Thapsigargin显著降低.2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB, 1×10-4 mol/L) 和 U73122 (2×10-6 mol/L)显著降低组胺的升高[Ca2 ]i作用,但对SGD的升高[Ca2 ]i作用无影响.咖啡因和阿诺碱不影响SGD升高[Ca2 ]i.结论 SGD通过独立于肌醇三磷酸(IP3)受体系统和阿诺碱受体系统的机制,引起细胞内钙释放,导致[Ca2 ]i升高.     

维拉帕米对海洛因诱发的乳鼠心肌细胞钙活动异常的作用

【目的】 研究海洛因对乳鼠心肌细胞钙活动的影响以及维拉帕米对海洛因作用下的乳鼠心肌细胞钙活动的影响作用.【方法】 使用体外培养5 d的SD乳鼠心肌细胞,标记细胞内游离钙,应用激光共聚焦显微镜下检测细胞内荧光强度变化可指示细胞内游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]i)变化;并应用碘化丙啶进行活性细胞检测.【结果】 0.01 mol/L海洛因可增加培养心肌细胞平均细胞内钙浓度和钙瞬变的幅度,对自发性收缩节律无明显影响;20 μmol/L维拉帕米可明显抑制海洛因诱导的钙超载,并可降低收缩节律,减少细胞死亡.【结论】 海洛因可导致心肌细胞钙超载和钙活动异常,导致细胞死亡,维拉帕米可抑制细胞内钙活动,保护心肌细胞.