沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1抑制细胞凋亡机制初步研究

【摘要】 目的 探讨pORF5质粒蛋白抗凋亡分子机制,为进一步阐明沙眼衣原体致病机制提供实验依据。方法 将HeLa细胞分为两组,一组用凋亡诱导剂碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）刺激30 min,另一组经pORF5质粒蛋白预处理18 h后,再用CCCP刺激30 min。然后,Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3（caspase-3）的表达水平;JC-1荧光探针检测HeLa细胞线粒体膜电位变化;间接免疫荧光观察细胞色素c释放情况。为了分析高迁移率族蛋白1（HMGB1）是否参与pORF5质粒蛋白的抗凋亡作用,分别用HMGB1 shRNA和对照RNA稳定转染HeLa细胞,再用pORF5质粒蛋白与CCCP共刺激两种细胞后,测定Bcl-2、Bax和活化的caspase-3蛋白的表达以及细胞色素c的释放情况。两组间比较采用配对样本t检验。结果 pORF5质粒蛋白能拮抗CCCP 诱导的线粒体膜电位的下降,CCCP单独处理组Hela细胞红/绿荧光强度比率为0.4 ± 0.1,显著低于pORF5与CCCP共处理组（1.7 ± 0.3,t = 6.95,P < 0.01）。与对照组相比,pORF5与CCCP共处理组HeLa细胞Bcl-2蛋白表达水平增加（5.3 ± 0.6）倍（t = 8.62,P < 0.01）,而Bax和活化的caspase-3平均表达水平分别降低79% ± 10%（t = 9.23,P < 0.01）和75% ± 8%（t = 4.26,P < 0.05）。与对照RNA转染组相比,HMGB1 shRNA转染组HeLa细胞线粒体膜电位下降（t = 11.23,P < 0.01）,细胞色素c释放增加,Bcl-2的表达水平降低（t = 7.19,P < 0.05）,而Bax的表达水平增加（t = 13.06,P < 0.01）。结论 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1阻断线粒体凋亡途径发挥抗凋亡作用。     

pORF5质粒蛋白拮抗LL37抗菌肽增强沙眼衣原体感染的初步研究北大核心CSCD

目的 探讨pORF5质粒蛋白能否通过抑制LL37抗菌肽增强沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）感染,并初步探讨其分子机制.方法 表达并纯化GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经蛋白酶酶切制备不含GST标签的pORF5蛋白;pORF5蛋白和LL37单独或共孵育衣原体后再感染HeLa细胞,间接免疫荧光技术计数衣原体包涵体形成数量;荧光定量PCR检测TNF-α、LL37基因表达水平.结果 单独Ct感染组衣原体包涵体形成单位（IFU）为3.8×105/ml,LL37处理组IFU为2.0 × 105/ml,pORF5蛋白处理组IFU为3.0×105/ml,pORF5蛋白和LL37共处理组IFU为3.1×10/ml.pORF5蛋白处理组、LL37与pORF5蛋白共处理组和单独Ct感染组之间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但明显高于LL37单独处理组（P＜0.05）.pORF5蛋白和LL37共同处理组TNF-α表达水平明显高于LL37单独处理组（P＜ 0.01）;pORF5蛋白处理组较Ct处理组LL37基因转录水平下降了19％.结论 pORF5质粒蛋白能拮抗LL37抗菌肽增强Ct感染,其机制可能与上调肿瘤坏死因子α、下调LL37表达相关.     

重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 研究重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。方法 采用CCK8法测定0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞和A375细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;荧光染料（DCFH？DA）测定A375细胞内活性氧的变化;罗丹明123染色测定线粒体膜电位变化;利用分光光度法检测重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞内ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量;Western印迹法检测A375细胞内Bcl？2、Bcl？2相关X蛋白（Bax）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、细胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2（PKM2）表达。多组均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK？q检验。结果 在工作浓度内重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞增殖无明显影响,但能明显抑制 A375 细胞的增殖（P 〈 0.01）;荧光显微镜下发现,重楼皂苷Ⅰ处理后的 A375 细胞出现明显的凋亡形态。0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ分别处理A375细胞后,随重楼皂苷Ⅰ浓度增加,细胞凋亡率（分别为4.25% ± 1.27%、10.03% ± 1.49%、36.62% ± 1.97%、44.11% ± 2.47%）逐渐升高（F = 665.7,P 〈 0.01）,G0/G1期细胞比例（分别为54.13% ± 2.57%、67.35% ± 3.79%、74.39% ± 3.29%、82.29% ± 3.99%）亦渐增多（F = 71.81,P 〈 0.01）;细胞内活性氧呈明显上升趋势,细胞线粒体膜电位呈明显下降趋势（P 〈 0.01）;细胞内ATP含量下降（P 〈 0.01）,培养液中乳酸含量下降,葡萄糖含量上升（P 〈 0.01）;细胞Bax、cleaved？caspase？3蛋白表达增多,但Cyclin D1、Bcl？2和PKM2蛋白表达下降（P 〈 0.01）。结论 重楼皂苷Ⅰ可能通过激活细胞内活性氧的产生,引起线粒体膜电位下降,诱导A375细胞凋亡,并通过抑制PKM2、细胞周期蛋白D1表达,使细胞阻滞于G0/G1期。     

寻常型进行期白癜风患者白斑区角质形成细胞凋亡的检测

目的探讨进行期白癜风患者白斑区角质形成细胞是否出现凋亡及其凋亡相关蛋白的表达。方法标本分别取自15例进行期白癜风患者白斑中心区及15例正常人对照，均取材于胸腹部。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）检测角质形成细胞的凋亡状况，同时采用免疫组化法检测角质形成细胞表达凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase3的情况。结果TUNEL结果显示：15例白癜风患者白斑区均可见角质形成细胞存在不同程度凋亡，主要位于表皮中层及下层，密集或散在分布；15例正常人对照中仅有1例表皮可见10％极为散在的凋亡的角质形成细胞，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。免疫组化结果显示：7例白癜风患者白斑区可检测到部分角质形成细胞存在促凋亡相关蛋白Bax的弱表达，而对照组仅有1例TUNEL阳性者可检出Bax的弱表达，即白癜风皮损区角质形成细胞Bax表达较正常对照显著升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。所有标本中角质形成细胞均未检测到Bcl-2和Caspase3的表达。结论进行期白癜风白斑区角质形成细胞促凋亡蛋白Bax表达升高，其凋亡增加。     

抑癌基因DKK3对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨DKK3 在人皮肤恶性黑素瘤细胞及组织中的表达及其对黑素瘤细胞A375增殖与凋亡的影响。方法 通过反转录（RT）？PCR及实时定量PCR分析DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤细胞系HM、A375、WM451、WM35、SK？MEL？1、Hs？695T和MDA？MB？435s及38例原发性黑素瘤、4例转移性黑素瘤和20例色素痣组织中的相对表达。分别转染恶性黑素瘤A375细胞pcDNA3.1（＋）？Flag？DKK3 质粒（实验组）和pcDNA3.1（＋）？Flag？Vector 质粒（对照组），RT？PCR 验证 DKK3 的过表达；通过CCK8法和平板克隆实验分析 DKK3 对A375细胞增殖的影响，流式细胞仪分析 DKK3对A375细胞凋亡的影响，Western印迹检测A375细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果 DKK3 mRNA 在WM35细胞系表达下调，HM、A375、WM451、SK？MEL？1和Hs？695T细胞系表达缺失，MDA？MB？435s细胞高表达。与色素痣相比，DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤组织表达降低（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比 （100%），实验组A375细胞克隆形成效率明显受到抑制（23.22% ± 3.55%）；同时转染后24、48、72 h细胞活性受到明显抑制（均P 〈 0.05）。流式细胞仪检测发现，与对照组A375细胞（G1期，25.38% ± 2.92%）相比，实验组A375细胞明显阻滞于G1期（48.68% ± 3.92%，P 〈 0.001），细胞凋亡率明显升高（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比，实验组周期凋亡相关蛋白p21、Bax、活化的parp和 活化的Caspase？3表达升高，细胞周期蛋白D1和Bcl2表达降低（均P 〈 0.001）。结论 DKK3在人皮肤恶性黑素瘤组织中表达下调，可能作为潜在的抑癌基因参与皮肤恶性黑素瘤的进展。     

HPV16E6蛋白与hDaxx在HeLa细胞的定位及对凋亡的影响

目的 探讨外源人乳头瘤病毒16型E6蛋白(HPV16 E6)与人Daxx蛋白(hDaxx)在HeLa细胞内的亚细胞定位及诱导HeLa细胞凋亡的影响.方法 Western印迹法检测融合蛋白DsRed-HPV 16 E6和EGFP-hDaxx的表达.激光共聚焦显微镜观察HPV16 E6和hDaxx的亚细胞定位.将HeLa细胞分为对照组、TNF-α处理组、转染空载体组、转染HPV16 E6组、共转染HPV16 E6和hDaxx组.后4组均经TNF-α诱导.用流式细胞仪测定细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-8与Caspase-3的相对活性.结果 融合蛋白DsRed-HPV16E6和EGFP-hDaxx在细胞内表达并分布于胞质与胞核,出现共定位现象,且部分hDaxx从胞核转移至胞质.转染E6组凋亡率(21.4％±1.1％)低于转染空载体组(27.0％±0.9％,P＜ 0.01);与转染E6组相比较,共转染组凋亡率(32.5％±2.1％)显著升高(P＜0.01).转染E6组Caspase-8和Caspase-3相对活性分别为0.057±0.003、0.054±0.006,均低于空载体组(0.092±0.012、0.093±0.005,均P＜0.01);与转染E6组相比较,共转染组Caspase-8和Caspase-3相对活性(0.109±0.013、0.110±0.004)均显著升高(P值均＜ 0.01).结论 HPV16 E6使部分hDaxx从胞核转位至胞质,二者发生共定位.HPV16E6蛋白可抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡,bDaxx高表达可下调HPV16 E6蛋白这种作用.     

凋亡调控分子BclGL表达与系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞凋亡的研究

【摘要】 目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单一核细胞（PBMC）中凋亡调控分子BclGL的表达及其意义。 方法 流式细胞仪检测20例活动期SLE患者（A-SLE）、18例非活动期SLE患者（I-SLE）以及30例健康对照者PBMC的细胞绝对数;用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）细胞凋亡双染试剂盒检测各组PBMC早期凋亡率;荧光定量PCR技术检测各组PBMC中BclGL mRNA的表达量;Western 印迹检测BclGL蛋白表达量;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组血清中干扰素（IFN）-α水平;采用SPSS13.0统计软件进行组间非参数Mann-Whitney或Kruskal-Wallis检验,并使用Pearson相关分析法分析SLE患者PBMC中BclGL表达量与细胞凋亡率及临床指标间的相关性。 结果 A-SLE患者外周血中PBMC细胞绝对数［（0.16 ± 0.06） × 109/L］低于I-SLE［（0.27 ± 0.14） × 109/L］及健康对照［（0.34 ± 0.23） × 109/L］（均P < 0.01）;A-SLE患者PBMC凋亡率（22.6% ± 1.1%）较I-SLE（16.4% ± 0.9%）及健康对照（10.1% ± 0.4%）升高,I-SLE患者也高于健康对照（均P < 0.01）;A-SLE患者PBMC中BclGL表达量高于I-SLE及健康对照（均P < 0.01）;SLE患者外周血血清IFN-α含量［（32.5 ± 2.2） μg/L］较健康对照［（15.5 ± 1.3） μg/L］增高（均P < 0.01）;SLE患者PBMC中上调的BclGL表达与PBMC凋亡率（r = 0.486,P < 0.01）及SLE疾病活动指数（SLEDAI）、抗核抗体（ANA）滴度、IFN-α水平呈正相关（r = 0.496,0.516,0.535,均P < 0.01）,与患者补体C3水平呈负相关（r = －0.515,P < 0.01）。结论 SLE患者PBMC中BclGL分子表达上调可能参与SLE患者PBMC的凋亡异常,从而在SLE发病中起作用。 【关键词】 红斑狼疮,系统性; 外周血单一核细胞; BclGL; 细胞凋亡     

基底细胞癌Bcl—2、Bax、Bcl—xl蛋白免疫组化表达的定量研究

目的 通过对基底细胞癌Bcl-2、Bax、Bcl-xl蛋白表达的研究，探讨3种蛋白在基底细胞癌发生、发展中的作用。方法 按病理亚型将46例基底细胞癌分为非侵袭组（21例）侵袭组（25例），采用免疫组化SP法检测Bcl-2、Bax、Bcl-xl蛋白在石蜡切片上的表达，并对组化结果进行图像分析以获得平均光密度和Bcl-2／Bax的比值。结果 非侵袭性基底细胞癌组Bcl－2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax的比值高于侵袭性基底细胞癌组，P值分别为0．005和0．044；两组间Bcl-2、Bax蛋白表达水平的差异无显著性，P值分别为0．097和0．979。结论 Bcl-2、Bax、Bcl-xl蛋白可能参与了基底细胞癌的发生、发展。     

高表达αB-晶状体蛋白对HaCaT细胞存活和凋亡的影响

目的:探讨αB-晶状体蛋白(αB-crystallin)高表达对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)存活和凋亡的影响。方法:构建αB-crystallin的真核表达载体,转染至HaCaT细胞中并筛选出稳定高表达αB-crystallin的HaCaT细胞株,MTT法和流式细胞术分别检测高表达αB-crystallin对HaCaT细胞的细胞存活率和细胞凋亡率的影响。结果:成功筛选出高表达αB-crystallin的HaCaT/CRYAB-1、HaCaT/CRYAB-2,该两者的αB-crystallin表达水平均较亲代HaCaT明显升高。αB-crystallin高表达的HaCaT细胞在H_2O_2处理后细胞存活率明显升高(t=5.23,P0.05),细胞凋亡率明显下降(t=15.09,P0.05)。结论:αB-crystallin具有促人角质形成细胞存活和抗细胞凋亡的作用。     

siRNA干扰Gadd45α表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞侵袭和迁移的影响北大核心CSCD

目的探讨靶向沉默生长抑制和DNA损伤诱导45蛋白α（Gadd45α）对皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）细胞株A431侵袭和迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR、Western印迹检测A431和Colon16细胞Gadd45α基因和蛋白的表达,选取高表达Gadd45α的A431细胞株作为研究对象。将A431细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组：实验组转染Gadd45α-siRNA-1,阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组不做任何处理。采用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测干预后Gadd45αmRNA和蛋白的表达,Transwell小室法及细胞划痕法检测干预对A431细胞株侵袭及迁移能力的影响。结果A431细胞高表达Gadd45α基因和蛋白。干预后实验组A431细胞Gadd45αmRNA及蛋白相对表达量分别为0．286±0．013、0．33±0．007,明显低于阴性对照组组（1．028±0．183、0．87±0．002）以及空白对照组（1．001±0．057、0．86±0．004）,差异均有统计学意义（F值分别为5893．857、2763．000,均P〈0．001）。实验组A431细胞株穿过聚碳酸酯膜的细胞数为66．33±3．79,明显多于阴性对照组（26．00±4．36）和空白对照组（28．33±4．16）,3组间差异有统计学意义（F=20．084,P=0．002）。划痕实验中,实验组每高倍视野下细胞迁移数为315．33±6．66,明显多于阴性对照组（154．67±2．08）和空白对照组（130．67±3．51）,3组间差异有统计学意义（F=1676．255,P〈0．001）。结论A431细胞株高表达Gadd45α,靶向沉默Gadd45α表达能增强A431细胞株的侵袭和迁移能力。     

槲皮素对人黑素瘤A375细胞增生和凋亡的影响

目的探讨槲皮素对体外培养人黑素瘤A375细胞增生和凋亡的影响。方法 CCK8法检测0、20、40、80、160μmol/L浓度槲皮素作用于A375细胞24、48和72 h后细胞增生水平。用0、20、40、80、160μmol/L浓度槲皮素作用24 h后,以Annexin-V/PI法观察A375细胞凋亡,分别测定Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9的活性,并以蛋白印迹法(Western blot)检测p53,Bax及Bcl-2的基因蛋白水平。结果与空白对照组比较,20、40、80、160μmol/L槲皮素作用24、48和72 h后均对A375细胞的增生有抑制作用,且有时间、浓度依赖性。0、20、40、80、160μmol/L槲皮素在作用24 h时,A375细胞早期凋亡率由(3.02±0.49)%分别上升至(11.20±1.68)%、(12.44±1.68)%、(24.55±0.58)%和(47.68±0.79)%,各组与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05或0.01),80、160μmol/L作用组的Caspase 3,Caspase8,Caspase 9活性升高,且与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05或0.01)。p53及Bax的蛋白水平随药物浓度的增加而升高,Bcl-2的蛋白水平随药物浓度增加而降低。结论槲皮素对黑素瘤A375细胞具有抑制增生和诱导凋亡的作用,其作用机制可能与调节p53及Bcl-2/Bax基因有关。     

西罗莫司体外诱导Colo-16细胞凋亡的研究

目的 研究西罗莫司对体外培养的皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的西罗莫司处理Colo-16细胞,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖的影响;AnnexinV-FITC和PI双染检测Colo-16细胞凋亡率;Hoechst33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）测定Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果 不同浓度的西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖均具有抑制作用,这种抑制作用与西罗莫司的作用时间和剂量呈明显的依赖关系（P < 0.05）。西罗莫司显著增加Colo-16细胞的早期凋亡,西罗莫司（50,100,150, 200 nmol/L）作用48 h后诱导Colo-16细胞的早期凋亡率分别为7.26% ± 0.26%、8.34% ± 0.19%、9.86% ± 0.14%、11.92% ± 0.15%,与对照组1.53% ± 0.09%比较,差异有统计学意义（P < 0.05）,且Colo-16细胞早期凋亡率与西罗莫司浓度呈剂量依赖关系（r = 0.955,P = 0.000）。荧光染色可见细胞核染色质凝聚、边集、核裂解的形态学改变;Bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA的表达显著增强。结论 西罗莫司在体外能诱导Colo-16细胞凋亡,其发生机制可能与其调节Bcl-2、Bax等凋亡调控基因的表达有关。     

HINT1对人黑素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响

目的 探讨HINTl基因对人黑素瘤细胞A375增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 应用构建的peDNA.3.1/mye-His(-)A-HINTl真核表达载体,建立稳定转染且能高表达HINTI的A375细胞模型.用M1rr法检测细胞增殖活性变化,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡.分光光度法检测Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9的相对活性.Western印迹法检测bcl-2、bax、细胞色素C及p53的表达.结果 与空载体-A375及未转染A375细胞相比,HINT1-A375细胞生长速度明显减慢(P<0.05);Gl期细胞增多(73.17%±3.99%,F=25.65,P<0.05),S期细胞减少(16.75%±1.62%.F=75.48,P<0.01),细胞出现明显的晚期凋亡(23.57%±9.58%,F=11.71,P<0.01). TUNEL法显示凋亡阳性细胞百分比(12%±1%)显著增高(F=358.02,P<0.01);Caspase 9(0.45±0.03,F=135.62,P<0.01)和Caspase 3表达(0.46±0.04,F=90.28,P<0.01)升高.凋亡相关蛋白bax、细胞色素C及p53表达增加,bel-2表达降低.结论 高表达H1NT1可抑制A375细胞的增殖,促进其凋亡,细胞周期出现G_1期阻滞,提示HINT1可能是人黑素瘤的抑癌基因.     

表皮生长因子受体shRNA联合西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖、凋亡的研究

目的:探讨表皮生长因子受体（EGFR）shRNA联合西罗莫司对人皮肤鳞状细胞癌Colo-16细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:Colo-16细胞分为5组：正常细胞组（常规培养+磷酸盐缓冲液）、阴性对照组（转染shRNA-NC质粒+磷酸盐缓冲液）、西罗莫司组（常规培养+西罗莫司）、EGFR shRNA组（转染EGFR s...     

肿瘤坏死因子α介导银屑病脂肪酸去饱和酶2低表达

【摘要】 目的 探讨脂肪酸去饱和酶2（FADS2）在银屑病皮损中的表达变化及其影响因素。方法 通过Gene Expression Omnibus（GEO）数据集GDS4602统计分析银屑病患者皮损FADS2的表达变化。取5只咪喹莫特诱导的C57BL/6小鼠银屑病模型背部皮肤,并取收集于上海市皮肤病医院的人正常对照皮肤和银屑病患者英夫利西单抗治疗前及10周后的皮损组织标本各4份以及司库奇尤单抗治疗前及12周后的皮损组织标本各3份,免疫组化染色检测表皮中FADS2的表达。体外培养的人永生化角质形成细胞HaCaT用50 ng/ml肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激0、6、12或24 h,用200 ng/ml白细胞介素17A（IL-17A）刺激0、6、12 h;用TNF-α单独或联合NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082（5 μmol/L）刺激6 h。处理完成后,实时荧光定量PCR（qPCR）、Western印迹法分别检测FADS2 mRNA和蛋白的相对表达量。采用单因素方差分析法和t检验进行统计分析。结果 GDS4602统计结果显示,与人正常皮肤对照组FADS2基因表达水平（2.035 ± 1.226）相比,银屑病皮损（0.656 ± 0.475）及非皮损（1.503 ± 1.062）组织中显著降低,F值分别为55.17、3.07,P值分别＜0.001、 = 0.012,并且皮损处显著低于非皮损处（F = 26.27,P＜0.001）。Western印迹和免疫组化染色显示,与正常对照组小鼠皮肤FADS2蛋白表达（灰度值比值：1.000;荧光强度：30.720 ± 6.850）相比,咪喹莫特组小鼠皮损表达显著降低（灰度值比值：0.463 ± 0.172,t = 7.00,P = 0.002;荧光强度：21.840 ± 3.125,t = 3.15,P = 0.035）。银屑病患者使用英夫利西单抗治疗10周后,皮损中FADS2蛋白表达（43.775 ± 3.342）较未治疗时（27.950 ± 1.218）显著升高（t = -6.95,P = 0.006）;而使用司库奇尤单抗治疗12周后的银屑病患者皮损处FADS2 蛋白表达（28.667 ± 3.402）与治疗前（31.933 ± 2.987）比较没有显著升高（t = 2.72,P = 0.113）。qPCR显示,与HaCaT细胞TNF-α 0 h组相比,TNF-α 6 h组、12 h组FADS2 mRNA相对表达量显著降低（P值分别为0.002、0.003）;与IL-17A 0 h组相比,IL-17A 6 h组、12 h组相对表达量变化无统计学意义（P值分别为0.849、0.961）。与HaCaT细胞对照组（正常培养基培养,1.000）相比,TNF-α 6 h组FADS2 mRNA相对表达量显著降低（0.682 ± 0.132,t = 4.82,P = 0.017）;与TNF-α 6 h组相比,TNF-α + BAY 11-7082 6 h组显著升高（1.541 ± 0.525,t = -3.58,P = 0.037）。Western印迹显示,与HaCaT细胞TNF-α 0 h组相比,TNF-α 24 h组FADS2蛋白相对表达量降低（F = 6.24,P = 0.013）。结论 FADS2在银屑病皮损中表达下降,其表达下调可能与TNF-α有关。     

土贝母苷甲通过调控circ_0000376/miR-203轴影响皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞恶性表型

目的:探讨土贝母苷甲对皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞恶性表型的影响及可能机制.方法:将体外SCL-1细胞分为对照组、不同剂量(5、10、20μg/mL)土贝母苷甲组、si-NC组、si-circ_0000376组、土贝母苷甲+pcDNA组和土贝母苷甲+pcDNA-circ_0000376组,CCK-8法检测细胞增殖抑制率...     

节律基因隐花色素2在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及机制研究

【摘要】 目的 探讨节律基因隐花色素2（CRY2）在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及其机制。方法 咪喹莫特诱导小鼠模型实验：12只C57BL/6雌鼠随机均分为咪喹莫特组（连续外用咪喹莫特乳膏5 d诱导构建银屑病小鼠模型,6只）和对照组（不予任何处理,6只）,第6天处死小鼠,取其背部皮肤组织,免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达。HaCaT细胞转染实验：使用小干扰RNA（siRNA）技术在HaCaT细胞中敲减CRY2的表达（siRNA-CRY2组）,以siRNA-NC组作为对照,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色检测HaCaT细胞增殖活力,实时荧光定量PCR（qPCR）检测HaCaT细胞中趋化因子mRNA表达水平,Western印迹检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化水平。肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激动物和细胞实验：12只C57BL/6雌鼠随机均分为TNF-α组（小鼠耳部皮下连续注射TNF-α溶液6 d,6只）和磷酸盐缓冲液（PBS）组（注射等量的PBS,6只）,第7天处死小鼠,取其耳部皮肤组织,免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达;用50 ng/ml TNF-α刺激CRY2基因敲减的HaCaT细胞12 h（siRNA-CRY2 + TNF-α组）,以siRNA-NC + TNF-α组作为对照,qPCR检测各组细胞中趋化因子mRNA的表达。统计分析采用两独立样本t检验。结果 免疫荧光染色显示,咪喹莫特组小鼠背部表皮层中CRY2蛋白的表达（0.94 ± 0.23）显著低于对照组（2.30 ± 0.25,t = 3.99,P = 0.016）。HaCaT细胞转染实验：siRNA-CRY2组EdU阳性细胞比例（48.13% ± 10.97%）显著高于siRNA-NC组（38.23% ± 0.81%,t = 5.00,P = 0.007）,且siRNA-CRY2组趋化因子CXCL1、CXCL8 mRNA相对表达量及p-ERK1/2蛋白相对表达量均显著高于siRNA-NC组（均P < 0.05）,但两组间CCL20 mRNA表达量及ERK1/2蛋白表达量差异无统计学意义（均P > 0.05）。TNF-α刺激实验：免疫荧光染色显示,TNF-α组鼠耳表皮组织中CRY2蛋白表达水平（0.37 ± 0.34）显著低于PBS组（2.04 ± 0.17,t = 4.38,P = 0.012）;siRNA-CRY2 + TNF-α组HaCaT细胞趋化因子CXCL1、CXCL8、CCL20 mRNA相对表达量均显著高于siRNA-NC + TNF-α组（均P < 0.05）。结论 CRY2在银屑病小鼠模型中表达降低,促进了角质形成细胞的增殖以及趋化因子CXCL1、CXCL8和CCL20的表达,且TNF-α可能是下调CRY2表达的上游细胞因子。     

Platelet-rich plasma protects human keratinocytes from UVB-induced apoptosis by attenuating inflammatory responses and endoplasmic reticulum stress

Background

Although the role of platelet-rich plasma (PRP) in ultraviolet light B (UVB)-induced photoaging has been confirmed in many studies, the specific mechanism is still not clear. Therefore, we attempted to investigate the effect and mechanism of PRP on UVB-induced human keratinocyte (HaCaT cells) apoptosis.

Methods

HaCaT cells were collected to construct UVB-induced photoaging models. Then, the cells were divided into Sham group, 5% PRP group, UVB group, and UVB + 5% PRP group. Next, MTT assay was used to detect the level of cell proliferation; flow cytometry to check the level of apoptosis; ELISA to determine the TNF-α, IL-18, IL-6, and IL-1β levels in the supernatant; and Western blot to test Bax, Bcl-2, cytochrome c (Cyt.c), GRP78, CHOP, and ATF4 protein expression levels.

Results

Briefly, 5% PRP intervention could relieve the inhibition of UVB on HaCaT cell proliferation, inhibit the promotion of UVB to cell apoptosis, up-regulate UVB-induced Bcl-2 protein expression, and decrease Bax and Cyt.c protein level. In addition, 5% PRP significantly down-regulated the inflammatory factor levels of TNF-α, IL-18, IL-6, and IL-1βin UVB-induced cells and reduced the inflammatory response. Moreover, 5% PRP also greatly reduced the protein expression levels of GRP78, CHOP, and ATF4 in UVB-induced cells and alleviated endoplasmic reticulum (ER) stress.

Conclusion

PRP may protect HaCaT cells from UVB-induced apoptosis by alleviating inflammatory response and ER stress.