肝癌细胞系中Oct4与Wnt/β-catenin 和TGF-β信号通路的相互影响

 目的 探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-catenin 及TGF-β信号通路在肝癌细胞系中的相互作用。方法 应用RT PCR法检测Oct4、Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路相关基因β-catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中的表达;使用siRNA 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4和TCF3的表达,实时荧光定量RT PCR法检测Wnt10b、β-catenin、 TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4等基因的表达变化。结果 Oct4和β catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中同时表达; siRNA-Oct4 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4后,Oct4表达明显下调,β-catenin、Wnt10b随之下调达40%~50%左右,而TCF3表达升高到3倍左右;同时ELF、Smad3和 Smad4均下降到原来的1%以下;而siRNA-TCF3 沉默TCF3后,Oct4的表达也升高2~3倍;ELF升高亦达2~3倍,Smad3和 Smad4也略有升高。结论 Oct4和β-catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中同时表达提示彼此之间有相互作用。RNAi实验证明Oct4对Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路的成员有调控作用;Oct4 与TCF3之间的负反馈作用值得深入研究。     

HBx对肝细胞中β-catenin表达的影响

目的:乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是一种反式作用因子,它通过增强各种转录和调控因子的表达影响肝细胞的增殖和凋亡.在原发性肝癌(HCC)的发生发展中发挥重要的作用.Wnt/β-catenin信号转导通路在胚胎发育和肿瘤发生中也发挥了重要的作用.本实验利用腺病毒表达系统,研究HBx与Wnt信号转导通路中主要信号分子β-catenin的相互作用及对它的影响,探讨HBV相关性肝癌的发生机制.方法:通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-GFP和Ad-GFP-HBx,采用表达有绿色荧光蛋白的腺病毒高表达载体系统将HBx基因有效转入人正常肝细胞L02细胞系.通过Western blot证实HBx在L02细胞中有效表达.RT-PCR、Western blot检测转染Ad-GFP-HBx的L02细胞中β-catenin表达的变化.结果:HEK293扩增腺病毒获得的Ad-GFP滴度为:1.5×109 pfu/ml,Ad-GFP-HBx的滴度为:1.0×108pfu/ml.Ad-GFP-HBx腺病毒感染细胞后能使HBx在L02细胞中有效表达,且感染Ad-GFP-HBx后HBx的表达显著增加L02细胞中β-catenin mRNA的表达量(P<0.05)和β-catenin蛋白的表达量(P<0.05).结论:HBx可以上调人正常肝细胞系L02细胞中β-catenin的表达,提示HBx可能通过调控β-catenin的异常表达激活Wnt信号通路.促进原发性肝癌的发生.Wnt信号传导主要取决于β-catenin在细胞内的水平,当β-catenin水平低下,Wnt途径关闭;当β-catellin水平升高时,Wnt途径开启,而Wnt信号的激活与肿瘤的发生密切相关.可见,HBx能增强β-catenin的表达,提示HBx可能是调控β-catenin的关键因子,而β-catenin的异常表达又能激活Wnt信号通路,最终导致肝癌的发生.这也间接证明了HBx在肝癌的发生发展中具有重要的作用,且该作用与Wnt信号中的关键分子β-catenin密切相关.     

Wnt10a及Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖及其机制研究

目的:探讨Wnt10a及其Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌中的作用及其机制。方法:qPCR检测Wnt10a在正常宫颈细胞和不同宫颈癌细胞系中的表达,选取Wnt10a高表达细胞进行后续实验。构建Wnt10a过表达质粒,将细胞分为对照组、Wnt10a过表达组、LGK-974(Wnt抑制剂)组和Wnt10a过表达+LGK-974组。qPCR和Western blot检测细胞中Wnt10a mRNA和蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达。结果:Wnt10a在C-33 A、Ca Ski、HeLa、HeLa 229宫颈癌细胞中的表达均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05),且在C-33 A细胞中的表达水平最高。与对照组相比,Wnt10a过表达组细胞增殖能力、细胞中Wnt10a mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c...     

Wnt/β-catenin信号通路在食管癌变中的作用

Wnt家族基因编码一组糖蛋白信号分子,这些分子激活的信号通路在人类不同肿瘤细胞中的作用相互交织,β-catenin是Wnt信号通路正向调节的重要效应分子,该分子在细胞质内降解的失调可于细胞核内累积激活一系列靶基因的转录,导致肿瘤发生.近来,Wnt信号通路及其关键组分β-catenin在食管癌形成过程中的作用越来越受到重视,阻断Wnt途径,在食管癌治疗中可能是一个新的靶点.     

Wnt/β-catenin信号通路相关长链非编码RNA在肿瘤进展中的功能与机制

长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200 nt、且不编码的RNA。lncRNA 已被证明与人类疾病紧密相关,尤其是肿瘤发生发展。研究表明,肿瘤中一些异常表达的lncRNA 可以通过不同的信号通路,如Wnt/β-catenin 信号通路,促进肿瘤进展过程。在不同肿瘤组织中具有特异性表达特征的lncRNA与Wnt/β-catenin 信号通路之间的相互作用显示出其作为新的生物标志物和治疗靶点的潜能。本文就Wnt/β-catenin 信号通路相关lncRNA 通过调控Wnt/β-catenin 信号转导,影响不同肿瘤类型发生发展的作用进行综述。本文结果或可为临床肿瘤诊断和治疗提供新的思路。     

Wnt/β-catenin信号途径与食管腺癌发生的关系

Wnt/β-catenin（Wnt/β-连环蛋白）信号途径是由多种蛋白组成的复杂信号通路,与多种人类肿瘤形成关系密切。Wnt/β-catenin信号途径异常活化是通过不同因素阻止β-catenin胞内降解实现的,而β-catenin在胞浆内异常积聚是Wnt/β-catenin信号途径活化的关键环节。全文就Wnt/β-catenin信号途径组成、β-catenin结构功能及与食管腺癌发生的关系作一综述。     

食管鳞状细胞癌中Wnt2、β-catenin、c-myc 和cyclinD1的表达及临床意义

 目的研究Wnt2、β-catenin及其下游的靶基因c-myc、cyclinD1在食管鳞癌中的表达情况,以期探讨其在食管鳞癌发生发展中的作用及意义。方法用免疫组织化学SP法检测40例食管鳞癌患者石蜡包埋的癌组织、癌旁组织及正常组织中Wnt2、β-catenin、c-myc、cyclinD1表达情况,分析Wnt2、β-catenin和c-myc、cyclinD1表达之间的相关性及与临床病理特征的关系。结果Wnt2、β-catenin和c-myc、cyclinD1在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中表达阳性率逐渐降低,差异有统计学意义（P<0.01）,β-catenin和c-myc与肿瘤浸润和有无淋巴结转移相关（P<0.05）。结论Wnt2β-catenin Tcf4通路在食管鳞状细胞癌发生发展中起重要作用,该通路有可能成为基因治疗的潜在靶点。     

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的 探讨miRNA-101（miR-101）通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabe-CDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果 与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。     

Wnt/β-catenin信号通路及其抑制剂在消化道肿瘤中作用的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路在胚胎发育、细胞周期、炎症反应和肿瘤形成等过程中具有不可或缺的作用。在消化道肿瘤 中,存在Wnt/β-catenin信号通路的显著异常激活。随着对Wnt/β-catenin信号通路的深入了解,Wnt/β-catenin信号通路抑制剂的 研发也取得了显著的成效,已有部分Wnt/β-catenin信号通路抑制剂在临床试验中显示出良好的抗肿瘤效果。并且,一些最初用 于治疗其他疾病的药物最近被发现可阻断Wnt/β-catenin信号通路,提示它们在治疗Wnt/β-catenin依赖性癌症中的潜力。本文对 Wnt/β-catenin信号通路抑制剂在消化道肿瘤中作用的研究现状进行简要概述。     

miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:体外培养人胶质瘤细胞U251,将miR-1471模拟物或阴性对照分别转染至细胞中,记为miR-1471组和阴性对照（NC组）,同时设置对照组。qRT-PCR检测转染效果。CCK8检测各组细胞增殖能力。Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。划痕实验检测各组细胞迁移能力。qRT-PCR和Western blot检测转移黏附基因（metadherin, MTDH）及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组和NC组比较,miR-1471组细胞增殖活性均显著降低（P＜0.05）,侵袭细胞数均显著减少（P＜0.05）,划痕间距明显较大,细胞中MTDH、Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论:miR-1471能抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MTDH表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

Wnt-β链接素通道阻断在肿瘤治疗中的意义

Wnt是由Wnt基因编码的糖蛋白,通过与细胞膜上卷曲蛋白(frizzled)受体相互作用,并与下游一系列如β链接素(β-catenin)等蛋白的磷酸化与去磷酸化过程来完成Wnt信号的转导.由于β链接素是Wnt通道中一种关键转导子,因此,Wnt-β链接素通道的功能正常与否,在肿瘤等多种疾病的发生与治疗中起着非常重要的作用.现综述该领域的研究现状.     

FGF3和FGF10对人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭的影响及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系

目的 探讨FGF3和FGF10对人卵巢癌SKOV3细胞株迁移和侵袭的影响及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,采用人工合成siRNA干扰细胞的FGF3和FGF10基因,运用Real-time PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测干扰效果。Transwell检测FGF3和FGF10蛋白表达下调后细胞迁移和侵袭能力的变化。采用LiCl激活Wnt/β-catenin信号通路,运用Real-time PCR检测FGF3和FGF10基因的变化。结果 FGF3和FGF10基因沉默组细胞迁移和侵袭能力与阴性对照（NC）组细胞、未处理组SKOV3细胞相比明显减弱（P<0.05）,NC组与未处理组SKOV3细胞迁移和侵袭能力差异无统计学意义（P>0.05）。 激活Wnt/β-catenin信号通路后,FGF3和FGF10基因水平增高。结论 FGF3和FGF10基因受Wnt/β-catenin信号通路的调控,促进人卵巢癌SKOV3细胞的迁移和侵袭。     

Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤耐药中的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路参与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,并且诱导肿瘤的耐药,是介导组织癌变的关键通路.体外实验表明,靶向抑制Wnt/β-catenin能够增强化疗药物的敏感性.因此对Wnt/β-catenin介导肿瘤耐药的深入研究将为肿瘤的治疗提供可能途径和潜在靶点.     

HECA通过Wnt通路抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:拟在通过影响肝细胞癌HepG2细胞株中HECA基因表达变化,观察与HECA基因相关联的Wnt通路上重要调节分子的变化,讨论此通路影响肝癌细胞增殖能力状况及其相关作用机理。方法:HECA慢病毒感染肝癌细胞株HepG2,细胞株中稳定上调HECA,用HECA siRNA转染HepG2细胞株下调HECA,在HECA表达上调的细胞株中用qPCR检测Wnt通路中β-catenin、TCF4、CDK2、CDK9、Cyclin A和Cyclin K的mRNA表达水平的变化,用Western blot检测qPCR结果中差异明显的β-catenin、TCF4蛋白表达水平的变化,应用FH535抑制剂处理HECA过表达的HepG2细胞,进一步验证HECA基因与Wnt通路的关系,利用Western blot检测HECA的表达水平,用MTT、划痕、克隆形成以及Transwell实验检测对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响。结果:qPCR法以及Western blot法对其相关基因表达水平进行测定,结果显示在HepG2细胞株内HECA过表达后,与HECA相关联的Wnt通路重要调节分子中β-catenin、TCF4的表达水平显著降低;FH535抑制剂处理HECA过表达的HepG2细胞,Western blot实验结果显示FH535处理过的过表达组HECA水平更高,细胞功能实验也表明FH535处理过的过表达HECA组,其细胞增殖及侵袭能力下降最明显。结论:HECA基因抑制肝细胞癌增殖及侵袭的分子机制可能为:HECA通过Wnt/β-catenin这一经典通路内β-catenin与TCF4的结合活性降低而发挥作用。     

Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌细胞VEGF表达的调控作用

背景与目的:血管新生是导致大肠癌向其他脏器组织侵袭、转移的重要原因。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生成因子之一,但其过表达机制尚不清楚。Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌发生中存在过度激活,故与大肠癌的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌VEGF表达的调控作用,揭示大肠癌血管新生的部分机制。方法:分别采用GSK-3β抑制剂SB-216763激活人肠癌HCT-116细胞Wnt/β-catenin信号通路和β-catenin/tcf抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin信号通路,蛋白质印迹法(Western blot)法检测β-catenin蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达。结果:GSK-3β抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞后,β-catenin在细胞总蛋白、细胞质蛋白和核蛋白中的表达均明显升高,12 h达到最大值,分别是对照组的4.3、3.6和3.7倍(P<0.01);同时,激活Wnt/β-catenin信号通路能够上调人肠癌HCT-116细胞VEGF表达水平,并在24 h时差异最显著,是对照组的1.85倍(P<0.01);而抑制Wnt/β-catenin信号通路能够显著下调VEGF表达,是对照组的0.68倍(P<0.01)。结论:Wnt/β-catenin信号通路能够调控人肠癌细胞VEGF表达。     

Sox2在肝癌中的表达及其对细胞生长增殖的作用

[目的]明确Sox2蛋白在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达,探讨Sox2分子对肝癌细胞生长增殖的作用及机制。[方法]选取临床肝癌组织标本、正常肝细胞系和多种肝癌细胞系为实验对象,从蛋白水平比较Sox2的表达水平;选取高表达Sox2的肝癌细胞系,利用RNA干涉技术降低Sox2表达,运用BrdU掺入实验、MTT实验等技术检测Sox2分子对肝癌细胞生长、增殖的影响,并检测肿瘤相关分子Wnt/β-catenin的表达水平。[结果]Sox2在肝癌组织及几种肝癌细胞中表达明显升高,以HepG2细胞系最多;MTT实验显示,与正常对照组和阴性对照组比较,从第3天开始Sox2干涉组A。值明显降低（P〈0．05）;BrdU掺人实验显示,Sox2干涉组细胞BrdU掺入率明显减少（P〈0．05）;降低Sox2表达后,Wnt/β-catenin水平明显降低。[结论]Sox2在肝癌组织及肝癌细胞中表达升高,并通过Wnt/β-catenin促进肝癌细胞生长及增殖。     

沉默YAP通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌BGC823细胞的凋亡

目的 本研究探讨Yes相关蛋白（YAP）对胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法 BGC823细胞中转染YAP小干扰RNA（YAP siRNA1、YAP siRNA2）,用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别测定细胞中YAP表达,筛选干扰效果较好的YAP siRNA1做后续实验。MTT测定细胞增殖,平板克隆实验测定克隆形成能力,流式细胞术测定凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9活性,蛋白质印迹法检测β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白水平。用Wnt/β-catenin的激活剂处理下调YAP后的BGC823细胞,按照上述方法测定细胞增殖凋亡和克隆形成能力。结果 YAP siRNA1、YAP siRNA2下调BGC823细胞中YAP的转录和表达,YAP siRNA1对YAP表达的干扰效率较好。敲低YAP后的细胞增殖能力、克隆形成能力降低,细胞凋亡率由（6.32±0.58）%升高至（32.71±2.64）%,Caspase-3、Caspase-9活性升高,β-catenin、c-myc、cyclinD1蛋白表达减少,与正常培养的BGC823细胞相比,差异有统计学意义（P<0.05）。Wnt/β-catenin的激活剂处理可以部分逆转敲低YAP对BGC823细胞的凋亡、增殖、克隆形成能力和细胞中Caspase-3、Caspase-9活性的影响。结论 YAP敲低诱导胃癌细胞凋亡,且作用机制与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

Wnt/β-catenin信号转导通路与肿瘤关系的研究进展

Wnt/β-catenin信号转导通路在生物发育、细胞转运及细胞凋亡等生命过程中发挥重要作用,其异常活化与肿瘤的发生、发展有关.本文对Wnt/β-catenin信号转导通路及其新的研究进展、与肿瘤的关系和在抗肿瘤治疗中的应用前景作一综述.     

长链非编码RNA CARMN对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨长链非编码RNA心脏中胚层增强子相关非编码RNA(CARMN)在乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭过程中的作用及其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法 通过UALCAN分析CARMN在乳腺癌组织的表达，实时荧光定量PCR(qPCR)检测CARMN在正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)和乳腺癌细胞(MCF-7)的表达。将MCF-7细胞分为NC组(无转染处理)、OE-CARMN组(转染pcDNA3.1-CARMN以过表达CARMN)和si-CARMN组(转染si-CARMN以干扰CARMN表达)。利用CCK-8法、细胞集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell小室实验检测MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭情况；qPCR和Western blot检测无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、β-catenin和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达。结果 CARMN在乳腺癌组织和MCF-10A细胞中均表达下调(P<0.05)。OE-CARMN组MCF-7细胞活力、细胞集落数、划痕愈合率和侵袭细胞数量均低于NC组(P<0.05),而si-CARMN组MC...     

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞上皮间质转化

[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。[方法]通过MTS检测姜黄素对HCT116细胞活性的影响;运用Western-blot、Real-time q PCR检测不同浓度姜黄素对HCT116细胞Wnt相关基因(β-catenin、TCF4)及EMT相关基因(E-cadherin和Vimentin)的表达情况。[结果 ]姜黄素能明显抑制HCT116细胞的增殖活性,在12h、24h和48h的IC50分别是61.98±2.68μmol/L,19.64±1.29μmol/L和17.84±1.25μmol/L。姜黄素能下调HCT116细胞内β-catenin和TCF4的表达水平;同时显著性上调E-cadherin及下调Vimentin表达水平,且呈剂量依赖性。Wnt信号通路活化剂能上调姜黄素处理后细胞内的β-catenin表达和下调E-cadherin表达水平。[结论]姜黄素通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肿瘤细胞上皮间质转化。