大鼠脊髓损伤早期Survivivn表达规律与细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠脊髓损伤早期不同时间段内脊髓组织中生存素（Survivin）表达变化规律和细胞凋亡的关系.方法：56只Wistar大鼠随机分两组：①假损伤组（对照组,n=8）与②损伤组（实验组,48只）;假损伤组仅打开T10及部分T,、Tn椎板,实验组均采用改良Allens法建立大鼠T10脊髓损伤模型,分别于伤后不同时间点（12h、24h、3d、5d、7d、10d）随机处死8只取材;分别用HE染色观察组织病理变化、免疫组织化学法观察脊髓组织中Survivin表达并对其进行定性定量分析和脱氧核糖末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL法）测定细胞凋亡指数,并进行相关性分析.结果：对照组大鼠在损伤及周边脊髓灰、白质中偶有Survivin蛋白表达、实验组12h有极少表达、3d时可见较多Survivin蛋白表达,然后开始下降;10d时与对熙组比较仍有统计意义（P＜0.05）.在脊髓损伤后对照组有少量细胞凋亡;而试验组12h就出现大量凋亡细胞,3d达高峰,5d和7d明显减少,10d仍有少量表达;实验组24h、3d、5d、7d、10d细胞凋亡和对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论：脊髓损伤后Survivin表达呈上升趋势并有一定的规律性,与细胞凋亡成正相关,脊髓损伤后Survivin的表达升高参与了押制神经细胞的凋亡,从而起到减轻脊髓损伤的作用.     

人脐带沃顿胶干细胞对急性大鼠脊髓损伤的作用及脊髓组织中TNF-α和BDNF表达的影响

目的：探讨人脐带沃顿胶干细胞（ WJCs ）移植对急性脊髓损伤大鼠的治疗作用及其可能机制。方法：81只大鼠分为假手术组、模型组和WJCs移植组,每组27只。每组取6只,采用BBB评分法评估脊髓损伤后1、3、7、14、21和28 d各组大鼠的运动功能,采用透射电镜检测损伤局部超微结构并检测损伤后28 d脑源性神经营养因子（ BDNF）的表达,其余大鼠采用实时荧光定量PCR和Western blot检测损伤后0、3、6、12、24、72、168 h损伤脊髓组织中肿瘤坏死因子（ TNF-α）的表达。结果：脊髓损伤后模型组与WJCs移植组大鼠的运动功能均有不同程度的恢复,其中WJCs移植组较模型组恢复更明显。与模型组相比,WJCs移植组损伤区脊髓组织结构相对完整。模型组和WJCs移植组损伤脊髓组织中TNF-αmRNA和蛋白以及BDNF蛋白的表达较假手术组增加（P＜0．05）;与模型组相比,WJCs移植组中TNF-α的表达降低,而BDNF的表达增加（ P＜0．05）。结论：WJCs移植可改变脊髓损伤区的微环境,抑制损伤脊髓组织中TNF-α的表达,同时增加BDNF的表达,促进大鼠神经功能恢复,减少脊髓继发性损伤。     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织 Caspase －3表达的影响

目的：观察补阳还五汤对脊髓损伤（SCI）后大鼠脊髓神经细胞凋亡相关蛋白 Caspase －3及 mRNA表达的影响,初步探讨补阳还五汤抑制脊髓神经细胞凋亡的作用机制。方法Wistar 大鼠40只,随机分为正常对照组、SCI 模型组、补阳还五汤组和阳性药物对照（MP）组,每组10只。各组分别于建立 SCI 模型后1、7、14、21、28 d 观察大鼠后肢运动功能恢复情况并进行 BBB 功能评分,观察大鼠 SCI 模型建立及恢复情况,并于第28天处死各组大鼠,采用 real －time PCR 法检测脊髓组织 Caspase －3 mRNA 的表达情况,Western blot 法检测脊髓组织 Caspase－3蛋白的表达情况。结果大鼠麻醉清醒后,SCI 模型组大鼠损伤平面以下完全瘫痪。 BBB 评分结果显示：术后第1～28天,与正常对照组比较,SCI 模型组 BBB 评分明显降低（P ＜0．05）;术后第7～28天,与 SCI 模型组比较,补阳还五汤组和 MP 组大鼠 BBB 评分明显增高（P ＜0．05）;补阳还五汤组和 MP 组大鼠 BBB 评分差异无统计学意义。 Real －time PCR 和 Western blot 结果显示：与正常对照组比较,SCI 模型组 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达明显升高（P ＜0．05）;与 SCI 模型组比较,补阳还五汤组和 MP 组大鼠脊髓组织 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达明显降低（P ＜0．05）。补阳还五汤组和 MP 组大鼠脊髓 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达差异无统计学意义。结论补阳还五汤可改善 SCI 大鼠后肢运动功能,通过下调 Caspase －3的表达,从而抑制 SCI 大鼠脊髓神经细胞的凋亡,对脊髓神经细胞有保护作用。     

环孢素A对大鼠急性脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨急性脊髓损伤后应用环孢素A（CsA）对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达及细胞凋亡的影响。方法108只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和CsA治疗组。使用免疫组织化学EnVision法检测急性脊髓损伤大鼠损失节段iNOS表达,原位末端标记法（TUNEL法）标记细胞凋亡并计算凋亡指数。结果损伤组、CsA治疗组及对照组iNOS表达及凋亡指数经单因素方差分析,差异有统计学意义。结论CsA能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS的表达及细胞凋亡,减轻脊髓继发性损伤。     

过氧化物酶增殖激活型受体γ在大鼠脊髓组织中的表达

目的探讨大鼠脊髓组织损伤后过氧化物酶增殖激活型受体γ（PPARγ）的表达。方法将60只SD大鼠以改良Allen法制作大鼠急性脊髓损伤（SCI）模型,分为假手术组和SCI组。在损伤后1、3、7、14d取材,采用RT-PCR和Western blot法对脊髓损伤区进行PPARγ mRNA和蛋白表达变化的检测。结果假手术组和SCI组均见PPARγ mRNA和蛋白表达。与假手术组相比,SCI组PPARγ mRNA和蛋白的表达明显增多,在第3天达到高峰（P〈0.05）。结论 PPARγ在脊髓损伤后表达增高,可以成为治疗SCI的一个靶点。     

褪黑素对大鼠急性脊髓损伤保护作用的实验研究

目的 评估褪黑素对SD大鼠急性脊髓损伤的保护作用,通过分析胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)及诱导型一氧化氮合酶-1(iNOS-1)在损伤脊髓组织中的表达情况来说明褪黑素保护作用的部分机制.方法 将72只大鼠随机分为褪黑素组、甲强龙组、打击对照组和无水乙醇组,以T9为中心,采用改良Allen's脊髓打击技术,制作急性脊髓损伤模型;损伤后分别注射褪黑素、甲强龙、生理盐水及无水乙醇,分别在2、24和72 h处死取材,应用HE染色、免疫组织化学对脊髓组织进行标记.结果 在损伤后,GFAP及iNOS-1的表达在各组均呈逐渐增高趋势,褪黑素组与甲强龙组均较打击对照组表达降低,无水乙醇组与打击对照组无明显差别.结论 褪黑素对脊髓损伤具有明显的保护性治疗作用,其保护作用可能是通过抑制GFAP和iNOS-1的表达来实现的,且与甲强龙比较差异无统计学意义.     

米诺环素对大鼠脊髓损伤早期TNF-α表达的影响

目的：探讨米诺环素（minocycline）对大鼠脊髓损伤（SCI）早期的保护作用和机制.方法：108只SD大鼠随机分为3组：对照组（A组=36只）、损伤组（B组=36只）和损伤后米诺环素治疗组（C组=36只）,采用改良Allen＇s打击法致伤B组和C组大鼠T8～T11脊髓,对照组不损伤脊髓.治疗组于术后1h腹腔注射米诺环素（90mg/kg）,之后每隔12h给药1次,对照组和损伤组在相同时点腹腔注射相同体积生理盐水.B组和C组于术后2h、6h、12h、24h、48h、72h处死大鼠取损伤段脊髓标本,A组在相应时间点取相应节段脊髓标本,切片后行HE染色组织病理学检查和免疫组织化学检测TNF-α表达.结果：脊髓损伤早期损伤脊髓取材免疫组化镜检后发现A组大鼠脊髓TNF-α呈弱阳性表达;B组和C组伤后2h即有TNF-α表达,12h达到高峰,之后逐渐下降;B组伤后72h TNF-α表达仍较A组高（P＜0.05）,而C组在伤后72h即恢复到对照组水平（P＞0.05）,C组各时间点TNF-α表达均较损伤组低（P＜0.05）.结论：米诺环素可显著降低脊髓损伤早期组织中TNF-α的表达,为其应用于临床治疗急性脊髓损伤提供实验依据.     

脂肪间充质干细胞来源外泌体对脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化及胶质瘢痕形成的影响

目的 探讨脂肪间充质干细胞（ADMSC）来源外泌体对脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化及胶质瘢痕形成的影响。方法 提取ADMSC来源外泌体并鉴定。选取36只大鼠,分为假手术组（仅切除T9椎板+注射等量生理盐水）、脊髓损伤组（建模+注射等量生理盐水）、外泌体组（建模+注射100μg/kg外泌体）,每组各12只,采用钳夹脊髓法建立脊髓损伤大鼠模型。使用BBB评分评估大鼠后肢运动功能,酶联免疫（ELISA）法检测血清白细胞介素（IL）-1β、IL-4、IL-6、IL-10水平,对脊髓组织行尼氏染色,Western Blot法检测脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1(Arg-1)、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、波形蛋白（vimentin）蛋白表达。结果 经透射电镜观察及CD63、Alix蛋白检测鉴定,成功提取到ADMSC来源外泌体。与假手术组相比,脊髓损伤组大鼠BBB评分显著降低（P <0.05）,血清IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10水平及脊髓组织中iNOS、Arg-1、GFAP、vimentin蛋白水平均显著升高（P <0.05）,脊髓组织中神经细胞严重损伤,可见大量胶质瘢痕组织堆积;与脊髓损伤组相比,外泌体组大鼠BBB评分、血清IL-4、IL-10水平及脊髓组织中Arg-1蛋白水平显著升高（P <0.05）,血清IL-1β、IL-6水平及脊髓组织中iNOS、GFAP、vimentin蛋白水平显著降低（P <0.05）,脊髓组织中神经细胞损伤及胶质瘢痕组织堆积减轻。结论 ADMSC来源外泌体可改变脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化方向,并抑制胶质瘢痕形成。     

羟基红花黄色素A对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：观察羟基红花黄色素A（HSYA）对急性脊髓损伤（ASCI）模型大鼠神经细胞凋亡的影响。方法30只SD大鼠随机分为空白对照组、损伤对照组和HSYA治疗组,每组10只。采用Allens’s打击法建立急性脊髓损伤大鼠模型,分别于术后1、7、14天观察各组大鼠行为学评分,术后14天通过免疫组化方法观察脊髓损伤部位神经细胞caspase-3 p20、Bcl-2和Bax表达。结果HSYA治疗组与损伤对照组大鼠下肢功能均有恢复（P〈0.05）,且HSYA治疗组恢复更明显（P〈0.05）;与损伤对照组比较,HSYA治疗组caspsase-3p20阳性细胞数表达明显减少（P〈0.05）,Bcl-2阳性细胞显著增加（P〈0.05）,Bax阳性细胞明显减少（P〈0.05）。结论 HSYA对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡有明显抑制作用,从而减少脊髓损伤部位继发性损伤,促进功能恢复。     

脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的：探讨大鼠脊髓损伤后诱导型NOS（iNOS)基因表达变化规律。方法：参考Nystrom方法建立的大鼠脊髓压迫伤模型,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定伤段脊髓组织iNOS mRNA的表达情况。结果：正常脊髓组织内未见iNOS mRNA表达,脊髓压迫伤后iNOS mRNA开始表达并逐渐增强,伤后24h达到高峰。结论：iNOS未参与脊髓组织正常生理调节,脊髓损伤后iNOS mRNA开始表达并逐渐增强,提示iNOS参与了继发性脊髓损伤过程。     

地塞米松对脊髓损伤后TNF-α和IL-6表达的影响

目的：探讨实验性大鼠脊髓挫伤后,急性期炎症因子：肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）在脊髓内的表达变化以及地塞米松对其表达的影响。方法：采用改良Allen’s法建立大鼠脊髓（T12）损伤模型,90只SD大鼠随机分成正常组（n=6）、SCI组（n=42）和DEX组（n=42,于SCI后15min尾静脉注射DEX30mg/kg）,分别于损伤后1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h取材,做常规HE染色和用抗TNF-α和抗IL-6行免疫组织化学方法染色。结果：TNF-α和IL-6在正常大鼠脊髓组织不表达;TNF-α、IL-6在脊髓损伤后1h均有表达,于48小时回落到正常。TNF-α在24h达高峰;IL-6在12h达高峰。地塞米松干预后二者均受到明显抑制。结论：大剂量地塞米松对TNF-α、IL-6有明显的抑制作用。     

糖尿病大鼠脊髓损伤后血小板衍化生长因子的表达研究

目的观察糖尿病大鼠脊髓机械性损伤后损伤处脊髓血小板衍化生长因-7-（PDGF）在星型胶质细胞中的表达量,以探讨脊髓损伤过程中PDGF的作用。方法将36只大鼠随机分为假手术对照组、脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组并制作相关模型,观察脊髓损伤24h和7d后大鼠运动功能的改变、损伤脊髓的病理变化及PDGF在星型胶质细胞中的表达情况。采用UTHSCSA Image Tools 3．0图像分析处理系统进行分析,统计各张切片单位面积（mm^2）内PDGF阳性细胞的数量和光密度：BIO-RAD软件Quantityone测定并用相对灰度值表示PDGF蛋白的表达量：然后对所得数据进行分析。结果脊髓损伤24h后,两组大鼠均出现严重运动功能障碍,BBB功能评分分别为（0.7±0．4）、（0．7±0.5）分：损伤7d后,脊髓损伤组大鼠恢复为（6．7±1.2）分,而糖尿病脊髓损伤组仅恢复为（3．9±0.7）分,两组差异有统计学意义（P〈0．01）：而假手术对照组大鼠运动自如,术后24h和7d评分均为（21．0±0．0）分,与另两组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。术后24h脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组脊髓损伤部位白质中可见肿胀的轴突和大量空泡。灰质中存在极少量的神经元和胶质细胞;7d后损伤范围确定,损伤段变细,脊髓内有空洞形成,其中糖尿病脊髓损伤组的空洞大于脊髓损伤组,并且周围有炎性细胞浸润。PDGF阳性表达部位为星形胶质细胞,术后24h、7d假手术对照组PDGF表达少,没有太大的变化：24h后脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组损伤部位的PDGF表达增多,且脊髓损伤组明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）：7d后脊髓损伤组PDGF持续高表达,仍明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）。在Western blot检测中,假手术对照组在两个时段均仅有少量PDGF蛋白表达,24h后脊髓损伤组PDGF表达明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）,损伤7d后脊髓损伤组PDGF持续高表达,仍明显高于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）。结论糖尿病脊髓损伤大鼠脊髓损伤后BBB评分明显低于脊髓损伤组大鼠,PDGF表达量亦明显减少,可能与高血糖状态加重脊髓的损伤以及抑制其损伤后恢复有关。     

MCI-186对脊髓损伤大鼠炎症因子释放及神经营养因子表达的影响

目的：研究MCI-186对脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）大鼠炎症因子的释放及神经营养因子表达的影响。方法：建立大鼠脊髓半切SCI模型,随机分成两组,分别予MCI-186或磷酸盐缓冲液（PBS）治疗,在术后1、3、7 d和14 d动态测定受损伤脊髓组织丙二醛（MDA）超氧化物歧化酶（SOD）的含量以及脑原性神经生长因子（BDNF）mRNA的表达,ELISA法测定血清及受损伤脊髓局部组织白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）;神经营养因子-3（NT-3）、BDNF蛋白表达。并同时与假手术组对比。结果：与模型组比较,MCI-186能显著降低SCI大鼠血清炎性因子IL-6、IL-8的浓度,促进脊髓组织NT-3、BDNF表达。结论：MCI-186可抑制炎症因子释放,增加内源性神经营养因子表达。     

大剂量甲基强的松龙治疗脊髓损伤鼠的实验研究

目的 探讨大剂量泼尼松（MP）治疗脊髓损伤的可行性。方法 SD成年雌性大鼠78只，随机分成13组：即假损伤组；脊髓挫伤组（SCI组）及大剂量甲基强的松龙治疗组（MP组），再分为：1d组、3d组、7d组、14d组、21d组、28d组；用改良的Allen装置造成T12脊髓节段挫裂伤。在手术前及术后进行BBB（Basso，Beattie and Bresnahan）评分。术后立即采用大剂量冲击疗法，腹腔注射MP30mg／kg，伤后1h开始，按5．4mg／（k·h）计算23h总量，分4次腹腔注射，在不同时间点处死大鼠。取损伤节段上、下长约0．5cm脊髓连续冰冻切片，间隔取片后分别以抗神经丝蛋白、突触素抗体行免疫组化ABC染色。在光学显微镜下观察各组NF、SYP在SD大鼠脊髓的表达分布情况。结果 MP明显改善损伤脊髓的病理形态。7，14，21，28d时MP组NF染色轴突数目均明显高于SCI组。而灰度值均明显低于SCI组。MP治疗组较SCI组相同时间点神经学功能均有明显提高。结论 大剂量MP在脊髓损伤中后期明显促进其损伤后的再生，具有中远期疗效。     

干细胞移植联合电针治疗对脊髓损伤修复的影响

目的研究人脐血干细胞移植联合电针刺激治疗脊髓损伤过程中对于类胰岛素样生长因子-1（IGF-1）表达的影响。方法将SD大鼠利用随机数字表法随机分成3组,所有大鼠均为脊髓横断损伤。脊髓损伤（SCI）组,干细胞移植（UCBSC）组,干细胞移植＋电针刺激（UCBSC＋EA）组,每组均为12只。UCBSC、UCBSC＋EA组在损伤处注射脐血干细胞,SCI组以等量PBS缓冲液代替,UCBSC＋EA组每天固定时间取损伤处上、下部位的＂大椎＂＂命门＂进行电针刺激。各组均在损伤后的7天、14天和28天于损伤处取材,观察神经元细胞的形态、数量及IGF-1表达。结果常规HE组织学检查发现横断处灰质内神经元细胞变性、减少,并伴星形胶质细胞增生,细胞体肥大。免疫组化显示,损伤后IGF-1表达均上调,UCBSC、UCBSC＋EA两组表达进一步上调,IGF-1的表达在前14天显著上调,14天后表达放缓。Western Blot结果显示,与单纯的人脐带血移植（UCBSC）相比较,UCBSC＋EA更能促进IGF-1的表达,且有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR电泳结果显示UCBSC＋EA组,IGF-1mRNA的表达明显高于其他两组,有显著性差异（P〈0.05）。结论 UCBSC＋EA在大鼠脊髓损伤处可更有效分泌神经营养因子IGF-1,弥补脊髓损伤后维持神经元细胞生存所匮乏的营养因子,促进神经元细胞存活。     

胰岛素对大鼠脊髓损伤细胞凋亡及iNOS、COX-2表达的影响

目的 观察胰岛素对急性脊髓损伤后细胞凋亡及相关炎症因子表达的影响,探讨胰岛素对脊髓损伤保护作用的分子机制.方法 60只SD大鼠随机分为损伤对照组和胰岛素治疗组,建立SCI模型;术后8 h、1d、3 d、7 d、14 d处死动物取材,采用原位末端标记(TUNEL)和免疫组织化学观察脊髓细胞凋亡及iNOS、COX-2表达变化,并进行比较分析.结果 术后各时相胰岛素治疗组TUNEL阳性细胞的数目明显少于损伤对照组;胰岛素治疗组iNOS、COX-2的表达率明显比对照组降低,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论 初步研究表明胰岛素对急性脊髓损伤有保护作用,抑制炎症因子iNOS、COX-2的表达是其可能作用机制之一.     

高压氧治疗对脊髓损伤大鼠脾脏组织病理的影响

目的：探讨高压氧治疗对脊髓损伤大鼠脾脏组织病理的影响。方法：40只SD大鼠随机数字表法分为4组：空白对照组（n=10）、脊髓损伤对照组（n=10）、高压氧处理对照组（n=10）和脊髓损伤高压氧治疗组（n=10）。脊髓损伤对照组和脊髓损伤高压氧治疗组采用改良Allen’s法制作T8～T9急性脊髓损伤大鼠模型。空白对照组和脊髓损伤对照组大鼠正常饲养。不进行高压氧处理;高压氧处理对照组和脊髓损伤高压氧治疗组大鼠每间隔24h进行1次高压氧处理,每天1次,连续14d。实验结束后,取各组大鼠脾脏标本电子显微镜下进行观察。结果：空白对照组大鼠脾细胞排列整齐、规则,结构清晰,细胞核居中,呈椭圆形。脊髓损伤对照组较空白对照组大鼠脾脏淋巴细胞、网状细胞等实质细胞弥漫性减少,胞质密度不均匀。血管内红细胞淤积,脾细胞凋亡后被胶质细胞等替代。高压氧处理对照组大鼠脾细胞间隙增宽,胞浆、胞质均匀,细胞排列相对整齐、规则,结构清晰,细胞核居中,呈椭圆形。脊髓损伤高压氧治疗组大鼠脾细胞及淋巴细胞增殖旺盛．细胞核染色深,细胞排列致密且较规则,细胞间隙小。结论：高压氧治疗对大鼠脊髓损伤后脾细胞损伤具有保护作用。     

大剂量甲基强的松龙联合胶质细胞源神经生长因子治疗急性脊髓损伤对细胞凋亡的影响

目的观察甲基强的松龙（MP）和胶质细胞源神经生长因子（GDNF）联合对大鼠急性脊髓损伤（SCI）后的治疗作用,探讨治疗脊髓损伤的有效方案。方法将大鼠脊髓损伤后,分为单纯脊髓损伤组（A组）、大剂量甲基强的松龙治疗组（B组）、胶质细胞源神经生长因子组（C组）、甲基强的松龙（MP）和胶质细胞源神经生长因子（GDNF）组（D组）,损伤后1、4、7、14、21d对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）（免疫组化法）以及活性氧表达的测定（流式细胞仪）,采用计算机图像分析技术进行定量分析。结果与对照组相比,MP和GDNF联合治疗显著减轻炎症细胞的浸润和继发损伤的发生。促进了脊髓运动神经轴索的再生和下肢运动功能的恢复（P〈0．05）。结论MP联合GDNF治疗脊髓损伤,对损伤后脊髓结构和功能恢复有明显的促进作用,是治疗脊髓损伤的有效的治疗方案。