用SCGE法观察砷、氟单独及联合染毒致SGC-7901细胞基因组DNA的损伤作用

目的观察砷、氟及砷氟联合染毒对SGC-7901细胞基因组DNA的损伤作用及特点.方法染毒剂量分别为10、5和1μmol/L,染毒后4 h应用单细胞凝胶电泳技术结合"彗星图像分析系统"检测DNA损伤.结果①剂量为10μmol/L和5 μmol/L时NaAsO2没有增加受累细胞的数量,增加了已受损细胞DNA的损伤程度;NaF染毒只是增加了受累细胞的数量,并没有增加受累细胞DNA的损伤程度;②氟砷联合染毒组拖尾率、尾DNA百分含量、尾长和尾动量与对照组均有显著差异,但氟与砷引起的DNA损伤作用之间没有观察到交互作用.结论 NaAsO2与NaF均可引起DNA损伤,但它们的损伤机制可能是不同的;氟与砷联合染毒仅表现为简单相加作用.     

用SCGE法观察砷、氟、黄绿青霉素和T-2毒素引起的SGC-7901细胞基因组DNA损伤

目的观察砷、氟、黄绿青霉素和T-2毒素对SGC-790l细胞基因组DNA的损伤作用及特点。方法染毒剂量lOμmol／L，染毒后4h应用单细胞凝胶电泳技术结合“彗星图像分析系统”检测DNA损伤。结果NaAsO2组尾长明显大于对照组；NaF组拖尾率显著高于对照组；CIT组总拖尾率、尾长和尾动量均高于对照组；而T-2毒素组各指标均高于对照组。结论NaAsO2、NaF、CIT和T-2毒素均可引起DNA损伤，但各有特点，说明它们引起DNA损伤的机制可能是不同的。     

砷与5-氮胞苷对人淋巴细胞DNA损伤的联合作用

为探讨砷和5－氮胞苷对人淋巴细胞DNA损伤及修复的联合作用，应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术比较研究了5－氮胞苷与砷同时和前后作用于人类淋巴细胞产生的联合毒性，结果显示10μmol/L5-氮胞苷和10μmol/L砷单独处理人淋巴细胞2h引起明显的DNA泳动（彗星尾），但两试剂引起的DNA泳动（彗星尾）间无显差异，5－氮胞苷前处理与砷后处理2h引起的彗星尾与其单独处理组比较非常显，砷前处理与5－氮胞苷后处理引起的彗星尾与其单独处理组比较无显性差异，但较对照组差异显，10μmol/L5-氮胞苷和10μmol/L砷分别单独处理2h引起了人淋巴细胞显的DNA损伤（链断裂），5－氮胞苷与砷在对淋巴细胞DNA的损伤上表现为单纯相加作用。5－氮胞苷前处理显增加了细胞对砷的基因毒性的敏感性，或砷后处理显增加了5－氮胞苷引起的DNA损伤，5－氮胞苷后处理2h显抑制了细胞对砷所致DNA损伤的修复。     

低剂量T-2毒素与脱氧雪腐镰刀菌烯醇单独及联合染毒对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的观察

目的 观察低剂量T-2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的特点及其程度,探索亚临床剂量下的毒性作用.方法 3周龄雌性Balb/c小鼠80只,体质量(14.0±1.5)g.将小鼠按体质量随机分为对照组、T-2毒素组、DON组、T-2+DON联合组,每组20只.经腹腔注射感染毒素,染毒剂量:T-2毒素5 μg·kg-1·d-1,DON 20 μg·kg-1·d-1;对照组给予等量生理盐水.染毒至16周和21周,分别取小鼠尾血,用单细胞凝胶电泳法(SCGE)观察小鼠末梢血有核细胞拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量变化.结果 ①T-2毒素组,尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:(27.71±15.85)%、(13.67±5.56)μm、4.26±3.83;21周:(28.38±15.57)%、(13.83±5.47)μm、4.37±3.82]均增加,与对照组[16周:(11.87±4.61)%、(10.59±6.70)μm、1.34±0.98;21周:(11.31±3.94)%、(10.83±7.05)μm、1.29±1.01]比较,差异有统计学意义(P均<0.05);②DON组拖尾率、尾DNA含量、尾动量[16周:5.62%、(28.13±13.31)%、3.39±2.35;21周:7.71%、(29.17±15.12)%、5.70±4.17]均增加,其中仅拖尾率与对照组(16周:4.34%;21周:4.38%)比较,差异有统计学意义(P均<0.05);③T-2+DON联合组拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:6.21%、(30.14±15.48)%、(16.93±6.58)μm、5.54±4.22;21周:8.17%、(30.85±15.76)%、(17.21±6.45)μm、5.70±4.17]均增加,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05);与T-2毒素或DON组比较,尾DNA含量和尾长均增加(P均<0.05).结论 低剂量T-2毒素和DON均可对小鼠未梢血有核细胞DNA产生明确损伤;T-2和DON联合染毒较单独染毒的损伤作用更明显.     

用单细胞凝胶电泳观察氟砷单独及联合对淋巴细胞DNA损伤

目的 观察氟、砷单独及联合作用对正常人淋巴细胞DNA的损伤作用及特点。方法 采用单细胞凝胶电泳（SCGE）实验，观察不同剂量氟、砷单独及联合应用对正常人淋巴细胞DNA的损伤。结果 人淋巴细胞在浓度为0．1、0．5μmol／L的NaAsO2及浓度为10、50μmol／L的NaF染毒24h后，均引起明显的DNA泳动（彗星尾）并呈现明显的剂量-效应关系；氟砷联合作用淋巴细胞，在0．5μmol／L NaAsO2＋50μmol／L NaF的剂量下，细胞DNA的损伤呈现出协同作用（P〈0．01）。结论 NaAsO2与NaF均可引起DNA损伤；低剂量NaAsO2与NaF联合作用时，则呈现协同作用。     

砷致昆明种小鼠基因组DNA损伤的量效关系

目的　探索砷剂量对机体DNA损伤的效应规律。方法　将体重 (2 0± 2 )g的 2 4只健康雄性昆明种小鼠随机均分为 4组 ,即Group 0 .2NaAsO2 (0 .2mg/kg体重 )、Group 0 .8NaAsO2 (0 .8mg/kg体重 )、Group 4.0NaAsO2(4mg/kg体重 )和GroupC(生理盐水对照 )。于腹腔注射药剂处理前及处理后 4,8,2 4,48h分别采集各组小鼠微量尾动脉全血进行彗星实验 ,观测指标有拖尾细胞比率、尾DNA百分含量和尾长。结果　①从细胞拖尾率指标看 ,DNA断裂损伤的程度随NaAsO2 剂量的增加而显著下降 ;②从拖尾细胞的尾部DNA碎片数量和平均尾长看 ,NaAsO2 剂量主要影响DNA分子碎片的多少而不是其长短。结论　 3价砷剂量的大小诱导不同的DNA损伤效应 ,低剂量可能以断裂为主 ,高剂量可能以交联为主。而且 ,砷致DNA分子断裂的碎片大小较恒定     

硒和维生素C对氟致大鼠肝细胞DNA损伤的影响

目的研究氟对大鼠肝细胞DNA的损伤作用以及硒和维生素C对氟致大鼠肝细胞DNA损伤的影响。方法氟(F)组、氟 硒(F Se)组、氟 维生素C(F VC)组分别用NaF 150mg／L、NaF 150mg／L Na2SeO2 5mg／L、NaF 150mg／L VC 1000mg／L喂养雄性SD大鼠4周，应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测肝细胞DNA的损伤率。结果F组肝细胞DNA损伤率(44．80％)明显高于对照组(9．40％)；而F Se组(12．60％)和F VC组(14．60％)的DNA损伤率明显低于F组，与对照组差异无显著意义。结论过量氟摄入可导致大鼠肝细胞DNA损伤，而适量的硒和维生素C对氟致DNA损伤有一定的拮抗作用。     

DNA damage, apoptosis and cell cycle changes induced by fluoride in rat oral mucosal cells and hepatocytes

AIM:To study the effect of fluoride on oxidative stress,DNA damage and apoptosis as well as cell cycle of ratoral mucosal cells and hepatocytes.METHODS:Ten male SD rats weighing 80～120 g wererandomly divided into control group and fluoride group,5 animals each group.The animals in fluoride group hadfree access to deionized water containing 150 mg/L so-dium fluoride(NaF).The animals in control group weregiven distilled water.Four weeks later,the animals werekilled.Reactive oxygen species(ROS)in oral mucosa andliver were measured by Fenton reaction,lipid peroxida-tion product,malondialdehyde(MDA),was detected bythiobarbituric acid(TBA)reaction,reduced glutathione(GSH)was assayed by dithionitrobenzoic acid(DTNB)reaction.DNA damage in oral mucosal cells and hepa-tocytes was determined by single cell gel(SCG)electro-phoresis or comet assay.Apoptosis and cell cycle in oralmucosal cells and hepatocytes were detected by flowcytometry.RESULTS:The contents of ROS and MDA in oral mucosaand liver tissue of fluoride group were significantly high-er than those of control group(P<0.01),but the level ofGSH was markedly decreased(P<0.01).The contents ofROS,MDA and GSH were(134.73±12.63) U/mg protein,(1.48±0.13)mmol/mg protein and(76.38±6.71)mmol/mg protein in oral mucosa respectively,and(143.45±11.76)U/mg protein,(1.444-0.12)mmol/mg protein and(78.83±7.72)mmol/mg protein in liver tissue respective-ly.The DNA damage rate in fluoride group was 50.20%in oral mucosal cells and 44.80% in hepatocytes,higherthan those in the control group(P<0.01).The apop-tosis rate in oral mucosal cells was(13.63±1.81)% influoride group,and(12.76±1.67)% in hepatocytes,higher than those in control group.Excess fluoride coulddifferently lower the number of oral mucosal cells andhepatocytes at G_0/G_1 and S G_2/M phases(P<0.05).CONCLUSION:Excess fluoride can induce oxidative stress and DNA damage and lead to apoptosis and cellcycle change in rat oral mucosal cells and hepatocytes.     

用SCGE法检测燃煤污染型砷中毒患者血细胞DNA的损伤作用

目的 探讨砷中毒的致癌机理及寻找灵敏、实用的ＤＮＡ损伤监测指标,方法 应用单细胞凝胶电泳法（ＳＣＧＥ）对贵州省兴仁县燃煤型砷中毒重病区１７５名砷接触者的血细胞ＤＮＡ损伤进行了检测,并分析了相关因素的影响。结果 砷能引起人体血细胞ＤＮＡ单逻断裂,其损伤发生早于临床表现,并与尿砷,发砷呈正相关关系,与皮肤损害进展一致,吸烟和氟的影响可加重睦ＤＮＡ的损伤作用,结论 ＳＣＧＥ具有灵敏、快速、简便等优点,可     

H_2O_2致小鼠淋巴细胞DNA的损伤及修复

目的　应用单细胞电泳检测 (SCGE)过氧化氢 (H2 O2 )致小鼠淋巴细胞 DNA损伤及其修复。方法　标准 SCGE条件下荧光显微镜观察。结果　 H2 O2 不同浓度 80、16 0和 32 0μmol/ L ,3个组 H2 O2 浓度均可致小鼠淋巴细胞 DNA损伤 ,较低剂量即可造成细胞拖尾 ,可逆性损伤在 6 0 m in内可获得明显修复。结论　单细胞电泳可快速灵敏地检测氧化损伤 ,也可能用于流行病学研究。     

单细胞凝胶电泳技术分析过氧化氢对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤作用

目的观察不同浓度过氧化氢（２５－２００μｍｏｌ／Ｌ）分别作用于正常大鼠外周血淋巴细胞不同时间（５ｍｉｎ和２０ｍｉｎ）后细胞ＤＮＡ的损伤情况。方法利用快速、灵敏的检测细胞ＤＮＡ损伤的单细胞凝胶电泳（ＳＣＧ）技术结合激光扫描共聚焦显微镜,以“彗星样”淋巴细胞出现率（计数一定量细胞其中彗星样细胞所占的比例）、总彗星长度（“彗星”电泳方向上的最大长度,即尾长）和尾距（尾部ＤＮＡ占总ＤＮＡ的百分比与头尾部中     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇致Vero细胞核基因组DNA损伤与修复的彗星实验观察

目的　应用彗星实验技术观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)对Vero细胞DNA损伤与修复特征 ,探讨DON的遗传毒性。方法　① 1μmol、5 μmol、10 μmolDON对指数生长期的Vero细胞分别染毒 4、16h后 ,观察DNA的损伤。② 10μmolDON处理的细胞重新孵育 15、3 0、60、12 0min ,观察DNA损伤修复。③以彗星实验技术结合“彗星图像分析软件(KIAS)”获得彗星细胞主要参数 ,并进行统计分析。结果　①随染毒剂量增加 ,染毒时间延长 ,受损伤细胞的数量逐渐增加 ,细胞DNA损伤程度逐渐加重 ;短时间染毒 ( 4h) ,损伤以DNA碎片的数量增加为主 ;较长时间染毒 ( 16h) ,损伤以DNA碎片变小为主。②去除DON ,重新孵育若干时间 ,随修复时间延长 ,受损伤细胞数量逐渐减少 ,细胞DNA损伤程度逐渐减轻 ,提示受损细胞在进行自我修复 ;短时间染毒 ( 4h)修复启动时间较短 ( <15min) ,而长时间染毒 ( 16h)修复启动时间也相应延长 ( >15min) ;孵育 12 0min后 ,修复完成。结论　DON毒素可致Vero细胞DNA损伤 ,重新孵育若干时间后损伤可修复。