人程序化死亡分子5(PDCD5)核酸和蛋白质序列的数据发掘

目的：以程序化死亡分子5(PDCD5)为靶分子,对其核酸与蛋白质序列进行生物信息学分析,为PDCD5功能的实验研究提供基础,同时也为人类功能基因的生物信息学分析提供新的技术路线。方法：利用数据库相似性搜索、同源物结构比较、表达谱分析和查询基因“邻居”等技术进行数据发掘和数据综合分析。结果：发现人PDCD5在12号和5号染色体上分别存在返座假基因(retropseudogene),小鼠1号染色体也存在小鼠PDCD5 cDNA的返座假基因。热自养甲烷杆菌的PDCD5同源物、泛素及核糖体蛋白S13具有与人PDCD5相似的折叠方式。线虫的PDCD5同源物、泛素及正IAP(inhibitor of apoptosis proteins)分子等在表达谱拓扑图上属于同一基因簇成员,该基因簇与生物合成和蛋白质合成相关。PDCD5同源物在多个基因组中与多种核糖体蛋白相邻。结论：PDCD5存在2个拷贝的假基因。PDCD5除参与细胞凋亡外,预测还与泛素有功能相关性,并可能参与蛋白质的翻译调控。     

PDCD5和Livin在子宫内膜癌中的表达及意义

子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,近20年来发病率呈上升趋势。肿瘤的发生发展是一个复杂的、多步骤的过程,现研究细胞增殖和细胞凋亡两个过程共同作用导致肿瘤。凋亡抑制因子Livin和促凋亡因子人程序化死亡因子5(PDCD5)共同作用,促进细胞增殖和抑制细胞凋亡,可能在子宫内膜癌的发生和发展中起重要作用。因此,研究Livin和PDCD5的关系,能为子宫内膜癌的诊断和治疗提供理论依据。     

PDCD5在退变椎间盘组织中的表达及临床意义

目的测定PDCD5在椎间盘髓核和纤维环中的表达,深入研究腰椎间盘退变的发生机制,为临床进一步预防及治疗腰椎间盘突出症提供实验依据。方法通过免疫组织化学以及RT-PCR方法检测26例腰椎间盘突出症患者及10例腰椎骨折患者髓核和纤维环标本中PDCD5的表达,进行比较分析。结果椎间盘突出组髓核和纤维环中PDCD5表达阳性率分别达73.1%、80.8%与对照组(30%、40.0%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。PDCD5 mRNA在椎间盘突出组髓核和纤维环中的表达分别为0.5609±0.0495和0.5740±0.0447,与对照组(0.4895±0.0259和0.5065±0.0129)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDCD5在不同椎间盘髓核和纤维环中均有表达,椎间盘突出组髓核和纤维环中PDCD5表达高于对照组,提示PDCD5参与了椎间盘退变过程,在椎间盘退变的过程中发挥了一定的作用。     

促凋亡基因程序化死亡因子5在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：研究程序化死亡因子5（programmed cell death 5,PDCD5）基因在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达,探讨其在NSCLC中发生、发展中的作用。方法：随机选取2011年7月至12月南昌大学第一附属医院胸外科手术切除并经病理证实为NSCLC的56例患者的癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组化及real-time PCR方法研究在NSCLC及癌旁组织中PDCD5蛋白和mRNA的表达。结果：免疫组化结果显示,癌旁肺组织中PDCD5阳性表达率高于NSCLC组织（χ2=16.406,P=0.000）。与抽烟情况、肿瘤分化程度、肿瘤TNM分期及有无淋巴结转移密切相关,差异均有统计学意义,并随抽烟、分化程度的下降、TNM分期的升高及淋巴结转移,其表达随之下降,同时染色强度也减弱。Real-time PCR结果,PDCD5 mRNA相对表达量在肺癌组织为0.397±0.266,癌旁组织为0.807±0.124,差异有统计学意义（t=10.795,P=0.000）。结论：在NSCLC中PDCD5蛋白及mRNA表达均下调,在肺癌的发生、发展中可能起抑制作用。     

促凋亡基因PDCD5在新疆维吾尔族与汉族宫颈癌中的表达及临床意义

目的：探讨新疆维吾尔族与汉族宫颈癌组织中PDCD5的表达及其意义。方法：采用免疫组化法检测42例（18例维吾尔族、24例汉族）宫颈癌患者癌组织、正常组织中PDCD5的表达。结果：42例宫颈癌患者癌组织、正常组织中PDCD5表达阳性率为35.7%（15/42）、92.85%（39/42）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：⑴PDCD5的表达在不同民族之间无显著性差异,表明在新疆汉族和维吾尔族宫颈癌的发生、发展中PDCD5的表达具有共同性,无民族间差异;⑵PDCD5在宫颈癌患者癌组织中的表达低于正常组织,如进一步研究可能对宫颈癌的治疗提供理论依据。     

构建PDCD5基因真核表达载体及电转染BGC823细胞的研究

目的构建PDCD5基因真核表达载体,并电转染BGC823细胞,获得稳定转染细胞。方法设计合成PDCD5基因片段,将其插入经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切的pcDNA3.1~+表达载体,菌落PCR和基因测序进行鉴定。重组质粒电转染BGC823细胞,G418筛选数周后PCR鉴定稳定转染细胞。结果重组质粒经菌落PCR测序分析表明,PDCD5基因序列准确插入预期位置,且序列正确。重组质粒成功电转染BGC823细胞,并整合入细胞基因组DNA。结论成功构建了PDCD5基因真核表达载体,并整合进BGC823细胞基因组,为研究PDCD5基因的功能及胃癌的基因治疗提供实验基础。     

PDCD5在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的：检测程序性细胞死亡因子5（programmed cell death 5,PDCD5）在子宫内膜癌（Endometrial carcinoma ,EC）组织中的表达水平,结合临床资料,并分析其意义,初步探讨PDCD5的表达与子宫内膜癌发生的相关性。方法分别采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测PDCD5 mRNA和蛋白的表达水平。结果子宫内膜癌中PDCD5 mRNA的表达明显低于对照组,且差异有统计学意义,P＜0.05。结果显示PDCD5的表达水平和EC患者的临床分期、组织学分级、肌层浸润以及有无淋巴结转移有相关性（P均＜0.05）,而与子宫内膜癌患者的年龄未发现明显的关联性（P＞0.05）。结论 PDCD5;可能成为一种潜在的子宫内膜癌的早期诊断分子标记物。     

凋亡相关基因PDCD5与妇科肿瘤研究进展

PDCD5是重要的凋亡正调控因子,其异常表达与肿瘤及自身免疫疾病等相关,可能参与这些疾病的异常凋亡过程。     

PDCD5在多发性骨髓瘤中的表达及其与BCL-2相关性

目的:研究凋亡促进基因PDCD5在多发性骨髓瘤(MM)中的表达,分析其与抑凋亡基因BCL-2的相关性,初步探讨PDCD5在MM发病机制中的作用.方法:采用免疫组织化学染色、流式细胞检测术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MM患者组和对照组骨髓单个核细胞PDCD5和BCL-2蛋白和mRNA的表达,同时对两者进行相关性分析.结果:免疫组织化学结果显示,PDCD5蛋白阳性细胞率MM组为(34.75±6.49)%,对照组为(52.98±5.84)%;PDCD.5染色强度指数(SⅡ)MM组为281.16±75.33,对照组为462.84±39.77;BCL-2蛋白阳性细胞率MM组(29.97±5.57)%,对照组(5.56±1.95)%;BCL-2蛋白SII在MM组为224.94±57.72,对照组为27.84±9.75;以上指标两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).流式细胞技术检测,骨髓浆细胞中PDCD5蛋白阳性率MM组(78.11±21.63)%,对照组(89.46±9.98)%;蛋白平均荧光强度MM组为61.73±11.04,对照组为353.04±123.26;以上两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).RT-PCR检测,PDCD5 mRNA的相对表达水平MM组为0.33±0.07,对照组为0.53±0.05;BCL-2 mRNA的相对表达水平MM组为0.33±0.08,对照组为0.12±0.02;以上两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).PDCD5与BCL-2表达相关性研究结果,PDCD5与BCL-2蛋白阳性细胞率表达呈负相关(r=-0.86,P<0.05);PDCD5与BCL-2mRNA相对表达水平呈负相关(r=-0.90,P<0.05).结论:MM患者骨髓单个核细胞PDCD5蛋白和mRNA表达下调;BCL-2蛋白和mRNA表达上调;PDCD5与BCL-2蛋白阳性细胞率和mRNA表达均呈负相关.     

抗人PDCD10单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人程序性细胞死亡分子10(programmed cell death 10, PDCD10)的单克隆抗体,探讨PDCD10蛋白的结构和功能.方法:利用重组PDCD10蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合, 通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗PDCD10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫荧光实验等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了3株稳定分泌抗PDCD10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5G1, 4F7和3H5.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1(4F7和5G1)和IgG2b(3H5).ELISA检测的单克隆抗体腹水效价可达1:10⁷.3株单克隆抗体与重组PDCD10蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌细胞裂解液以及谷胱苷肽-S转移酶(glutathione S-transferase,GST)没有交叉反应.同时,5G1单克隆抗体也能特异性地结合真核细胞内源性和超表达的PDCD10蛋白,免疫荧光竞争结合实验以及Western blot的结果证明3株PDCD10的单克隆抗体能够识别不同的抗原表位,内源性以及超表达的PDCD10蛋白主要定位在细胞核.结论:获得了效价高、特异性好的PDCD10蛋白的单克隆抗体,为PDCD10的生物学功能研究奠定了基础.     

程序性死亡4基因在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:通过测定食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)患者肿瘤组织中程序性死亡4基因(Pdcd4)的表达,探讨Pdcd4与食管鳞癌发生、发展的关系。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应检测60例食管鳞癌组织中Pdcd4 mRNA的表达情况,同时应用免疫组织化学法检测石蜡包埋的178例食管鳞癌组织中Pdcd4的表达水平,相应的癌旁正常组织作为对照。结果:Pdcd4 mRNA在食管鳞癌组织中的表达量显著低于癌旁正常组织(P<0.01)。Pdcd4在癌旁正常组织中的阳性表达率为100.0%,明显高于食管鳞癌组织中的47.2%(P<0.01)。Pdcd4的表达与肿瘤的分化程度有关,在高分化食管鳞癌的阳性率为71.4%,中分化食管鳞癌的阳性率为43.4%,低分化食管鳞癌的阳性率为30.2%,高分化鳞癌中Pdcd4阳性率高于中分化及低分化癌(P<0.01);中、低分化食管鳞癌中Pdcd4阳性率差异均无统计学意义(P >0.05);Pdcd4阳性率在患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期和N分期间差异均无统计学意义(P >0.05)。结论:Pdcd4异常表达与食管鳞癌的组织病理分级有关。     

程序性细胞死亡因子4在胰腺癌组织中的表达及临床病理学意义

目的探讨胰腺癌组织中程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达及临床病理学意义.方法采用免疫组织化学方法检测69例胰腺癌石蜡标本中PDCD4表达,同时采用Western印迹杂交方法检测其中8例冷冻保存的新鲜胰腺癌及癌旁正常胰腺组织中PDCD4蛋白的表达情况,观察其与胰腺癌患者临床病理学参数之间的关系.结果Western印迹分析结果显示,同癌旁正常胰腺组织相比,8例胰腺癌组织中PDCD4蛋白表达均明显减弱或缺失.69例胰腺癌中,PDCD4低表达(阳性细胞数＜30%)者占52.2%.其中,在中、低分化腺癌中,PDCD4低表达者分别为67.4%(15/23)和70%(14/20),而高分化腺癌仅有26.9%(7/26)为低表达.相关分析显示,PDCD4表达减弱或缺失与胰腺癌的不良分化相关(P＜0.01),而与患者的性别、年龄、肿瘤部位和TNM分期无关.结论PDCD4蛋白在胰腺癌中多呈低表达,并与胰腺癌的分化程度相关,其在胰腺癌的发生、发展过程中可能起重要作用.     

Expression and its clinical significance of PDCD5 in degenerative human lumbar intervertebral discs

目的 测定PDCD5在椎间盘髓核和纤维环中的表达,深入研究腰椎间盘退变的发生机制,为临床进一步预防及治疗腰椎间盘突出症提供实验依据.方法 通过免疫组织化学以及RT-PCR方法检测26例腰椎间盘突出症患者及10例腰椎骨折患者髓核和纤维环标本中PDCD5的表达,进行比较分析.结果 椎间盘突出组髓核和纤维环中PDCD5表达阳性率分别达73.1%、80.8%与对照组(30%、40.0%)比较差异有统计学意义(P＜0.05).PDCD5 mRNA在椎间盘突出组髓核和纤维环中的表达分别为0.5609±0.0495和0.5740±0.0447,与对照组(0.4895±0.0259和0.5065±0.0129)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PDCD5在不同椎间盘髓核和纤维环中均有表达,椎间盘突出组髓核和纤维环中PDCD5表达高于对照组,提示PDCD5参与了椎间盘退变过程,在椎间盘退变的过程中发挥了一定的作用.     

程序性细胞死亡因子10在胃癌组织中的表达及其临床病理学意义

目的  探讨在胃癌发生过程中凋亡相关基因程序性细胞死亡因子10 (programmed cell death factor 10, PDCD10)的表达及其临床病理学意义。  方法 采用SP免疫组织化学方法检测26例正常胃粘膜,22例慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生及66例胃癌组织标本中PDCD10基因的表达,分析其与临床病理学参数之间的关系 结果  正常胃粘膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生及胃癌组织中 PDCD10表达阳性率分别为11.5%、31.8%和63.6%,呈现上调趋势。相关分析表明,PDCD10的表达上调与肿瘤分化程度及转移密切相关(P＜0.05),而与性别、年龄及肿瘤生长部位无关(P＞0.05)。  结论 胃癌组织中PDCD10表达较正常胃粘膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生明显上调,其表达程度与胃癌的分化程度及侵袭转移相关。     

细胞死亡调节因子GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中的表达及意义

目的：探讨细胞死亡调节因子（GRIM-19）蛋白在肾脏透明细胞癌组织和正常肾组织中的表达及意义,阐明GRIM-19在肾脏透明细胞癌发生发展中的抑癌作用。方法： 采用免疫组织化学染色方法检测21例肾脏透明细胞癌组织和7例正常肾组织GRIM-19蛋白的表达;RT-PCR方法检测4例正常肾组织和8例肾脏透明细胞癌组织中GRIM-19基因mRNA的表达。结果： 免疫组化检测GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中阳性表达率为52.3%（11/21）,在正常肾脏组织的阳性表达率为100%（7/7）,两者比较差异有显著性（P<0.05）。病理分级Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的肾脏透明癌组织中的表达率分别为100%（6/6）、40%（4/10）和20%（1/5）,三种病理分级GRIM-19表达率比较差异有显著性（P<0.01）。RT-PCR检测GRIM-19基因在肾脏透明细胞癌组织中阳性表达率为62.5%（5/8）,在正常肾脏组织的阳性表达率为100%（4/4）,两者比较差异有显著性（P<0.01）。结论：GRIM-19在肾脏透明细胞癌基因和蛋白水平表达明显下降,并与其病理分级存在明显的关联性,提示GRIM-19蛋白可能在肾脏透明细胞癌发生发展中发挥抑癌作用。