克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的研究克拉霉素对铜绿假单胞生物被膜生物特性的影响.方法采用平板法建立生物被膜模型,银染法快速鉴定;结晶紫染色法测定生物被膜中细菌的粘附性;浓度梯度渗透法测定生物被膜的渗透性;采用卡唑/乙醇法测定克拉霉素对藻酸盐的合成抑制作用.结果采用平板法7天可建立稳定的生物被膜,1/4MIC克拉霉素与8×MIC加替沙星联合应用后光密度值由0.126±0.011显著的降低至0.114±0.012,4μg/ml组、8μg/ml组、16μg/ml组加替沙星的渗透浓度(μg/ml)可由1.210±0.091、2.911±0.112、5.911±0.213显著的增加至1.730±0.132、3.911±0.111、7.902±0.354;80μg/ml、40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml克拉霉素组中藻酸盐的含量(μg/108CFU)由10.07±0.55显著的降低至2.34±0.21、4.91±0.16、7.22±0.36、8.82±0.50.结论克拉霉素可降低铜绿假单胞菌生物被膜中细菌的粘附性,增强加替沙星在生物被膜中的渗透能力,抑制铜绿假单胞菌藻酸盐的合成.     

克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的 :研究克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜生物特性的影响。方法 :采用结晶紫染色法测定生物被膜中细菌的粘附性 ;浓度梯度渗透法测定生物被膜的渗透性 :采用卡唑 /乙醇法测定克拉霉素对藻酸盐的合成抑制作用。结果 :采用平板法 7d可建立稳定的生物被膜 ,1/4MIC克拉霉素与 8×MIC加替沙星联合应用后光密度值由 ( 0 .12 6± 0 .0 11)显著的降低至 ( 0 .114± 0 .0 12 ) ,4μg/ml组、8μg/ml组、16 μg/ml组加替沙星的渗透浓度 ( μg/ml)可由 ( 1.2 10± 0 .0 91)、( 2 .911± 0 .112 )、( 5 .911± 0 .2 13)显著的增加至 ( 1.730± 0 .132 )、( 3.911±0 .111)、( 7.90 2± 0 .35 4) ;80 μg/ml、40 μg/ml、2 0 μg/ml、10 μg/ml克拉霉素组生物被膜中藻酸盐的含量 ( μg/108CFU)由 ( 10 .0 7± 0 .5 5 )显著的降低至 ( 2 .34± 0 .2 1)、( 4 .91± 0 .16 )、( 7.2 2± 0 .36 )、( 8.82± 0 .5 0 )。结论 :克拉霉素可降低铜绿假单胞菌生物被膜中细菌的粘附性 ,增强加替沙星在生物被膜中的渗透能力 ,抑制铜绿假单胞菌藻酸盐的合成。     

克拉霉素/氟罗沙星对铜绿假单胞菌生物被膜体外作用研究

目的 :探讨克拉霉素和氟罗沙星对铜绿假单胞菌 (PA)生物被膜的影响。方法 :选取临床分离的呼吸道PA7株 ,用平板法培养细菌生物被膜 ,银染色法鉴定 ;微量稀释法检测克拉霉素和氟罗沙星对PA的最低抑菌浓度(MIC) ;噻唑兰法测定活菌数 ;结晶紫染色法观察不同浓度药物对PA粘附性的影响。结果 :1/16MIC、1/4MIC克拉霉素可减少细菌对硅胶膜粘附(P<0 05) ,且可显著增强1/4MIC、1/2MIC的氟罗沙星对铜绿假单胞菌生物被膜的抑菌活性 (F=20 193 ,P<0 01)。结论 :克拉霉素与氟罗沙星联合应用对生物被膜铜绿假单胞菌呈抗菌协同作用     

克拉霉素和环丙沙星合用对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的：研究克拉霉素与环丙沙星联合应用对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。方法：采用平板法培养细菌生物被膜，微量稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度，银染法快速鉴定细菌生物被膜，噻唑蓝(MTT)比色法测定生物被膜中的活菌数。结果：1／16、1／4MIC克拉霉素可显著增加1／4、1／2MIC环丙沙星对铜绿假单胞菌生物被膜的抑菌活性。结论：克拉霉素与环丙沙星合用对铜绿假单胞菌生物被膜具有明显的协同抑制作用。     

电流增加抗生素对铜绿假单胞菌生物被膜的作用

疗铜绿假单胞菌感染最常用的抗菌剂是氨基糖苷类,主要有妥布霉素及庆大霉素;抗假单胞菌的青霉素类有美洛西林、哌拉西林、替卡西林、阿洛西林及广谱头孢菌素类、亚胺培南和氟喹诺酮类.多粘菌素类则用来治疗对氨基糖苷类及青霉素类耐药细菌的严重感染.在这四类药物中,氟喹诺酮类、氨基糖苷类及青霉素类对代谢活跃及生长中的细胞作用更强,而多粘菌素类的作用则不涉及细菌的代谢情况.因此,除多粘菌素外,大多数这类抗生素的作用都受靶微生物生理状态的影响.1991年Eng等发现,环丙沙星和庆大霉素对铜绿假单胞菌这类生长缓慢的革兰阴性微生物的杀菌率几乎比哌拉西林大5倍.在这样的情况下,只有氟喹诺酮类对处于非生长期的革兰阴性菌有杀灭作用,但不能杀死金葡球菌.1986年Tuamanen等及Cozens等发现,β-内酰胺类的杀菌活性主要取决于细菌的生长速率,而不是限制生长的营养条件的性质.一些较少依赖生长速率的抗生素,呈现优良的体内抗菌活性.1986年Cozens等、1988年Brown等的研究结果都说明细菌感染是受生长速率限制的.1991年Wivomer等也证实了生长速率与抗生素药效间的类似关系,并研究了与联接装置有关的一些感染,发现β-内酞胺类对这种类型的感染效果较差,而环丙沙星效果最佳.     

铜绿假单胞菌生物被膜研究进展

铜绿假单胞菌是临床上常见的机会致病菌和耐药菌之一,它的感染常伴随着生物被膜的产生,进而造成严重的慢性感染和持续性感染。由于铜绿假单胞菌生物被膜的产生使其产生耐药性,并能够逃避宿主免疫系统的攻击,因此传统治疗方法很难将其去除。以生物被膜为靶标开发新型抗感染药物可以降低病原菌的耐药性,有望发展成1种新的治疗方法。本文总结了铜绿假单胞菌生物被膜的形成过程、主要成分的结构、生物合成过程及其功能,并对已经报道的靶向生物被膜的新型药物进行了总结。     

铜绿假单胞菌生物被膜耐药研究进展

铜绿假单胞菌(Pseuclomonas aerubqinosa,PA)是最严重的医院内获得性感染的病原菌之一,生物被膜(Biofilm,BF)多黏附在生物材料和植入的各种导管,以及牙龈、支气管、尿道等人体组织表面,它的形成使得铜绿假单胞菌生物被膜相关感染不断上升,致使慢性感染性疾病反复发作且难以控制,给治疗增加更大的难度.生物被膜通过营养限制、抗生素渗透障碍和免疫逃逸等机制对多种抗生素耐药.密度感应系统(quorum-sensing systems,QS)作为一种细胞信号传递方式,在基因水平上参与到生物被膜内细菌基因的表达,调节生物被膜内细菌的分化成熟,从而影响抗菌药物的敏感性.大环内酯类因作用于生物被膜,使得失去被膜保护的细菌易被抗生素杀灭.临床上被用于治疗铜绿假单胞菌生物被膜感染的主要药物,此外,中药有效成分联用抗生素,干扰密度感应系统也为治疗生物被膜病提供了新思路.     

铁离子在铜绿假单胞菌生物被膜形成中的作用

铜绿假单胞菌由于形成生物被膜引发的难治性感染已成为医院亟待解决的问题之一。本文综述了近期关于铁离子与生物被膜形成的相关性的研究报道,从细菌吸附、小集落的形成、集落发育成熟,到最后解吸附四个过程阐述了铁离子可能产生的影响。并探讨了对临床应用抗生物被膜局部铁喷雾或者螯合剂治疗的前景。     

铜绿假单胞菌临床菌株生物被膜的定量分析

目的 定量分析铜绿假单胞菌临床分离株生物被膜形成能力.方法 采用平板培养结合结晶紫染色法建立生物被膜定量检测法,用该法对56株铜绿假单胞菌临床分离株的生物被膜形成能力进行分析.结果 平板培养结合结晶紫染色法可对铜绿假单胞菌生物被膜形成能力进行定量检测.在所检测的56株铜绿假单胞菌中,46株(82.1%)具有生物被膜形成能力,其中生物被膜形成能力弱者为16株(28.6%),生物被膜形成能力强者为30株(53.6%);10株菌(17.9%)不能形成生物被膜.结论 绝大多数铜绿假单胞菌临床分离株具有生物被膜形成能力,半数以上菌株具有较强的生物被膜形成能力.     

克拉霉素和乙酰螺旋霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的 :研究克拉霉素 (CAM)、乙酰螺旋霉素 (ASM)对铜绿假单胞菌生物被膜 (BF)合成的影响及其与环丙沙星 (CIP)的相互作用。方法 :色氨酸法测定BF中的多糖蛋白复合物 (GLX) ;高氯酸 蒽酮反应物法定量测定BF的己糖成分 ;噻唑兰法测定活菌数。结果 :1/ 16最低抑菌浓度 (MIC)、1/ 4MIC的CAM可抑制BF中GLX、己糖的合成 ,且可显著增强 1/ 4MIC、1/ 2MIC的CIP对有BF的铜绿假单胞菌的杀菌作用 (P <0 0 5 ) ,而ASM则无以上作用。结论 :CAM可抑制铜绿假单胞菌BF的形成 ,并可增强CIP对有BF的铜绿假单胞菌的杀菌作用 ;而ASM则无抑制铜绿假单胞菌BF的作用     

铜绿假单胞菌生物膜的研究进展

铜绿假单胞菌引起的感染性疾病中,常常因为生物膜的形成造成疾病的反复和难以治愈,患者在遭受巨大痛苦的同时,引起了众多研究者的注意。通过对铜绿假单胞菌生物膜结构、致病机制等方面进一步研究,可能发现有效清除铜绿假单胞菌生物膜的方法,从而为临床治疗铜绿假单胞菌引起的感染性疾病提供科学的依据。     

碳青霉烯类药物对铜绿假单胞菌生物膜形成及其基因表达的影响

目的 研究碳青霉烯类药物对铜绿假单胞菌生物膜形成和基因表达的影响,为治疗铜绿假单胞菌引起的感染提供分子基础和理论依据。方法 选取3株临床分离的对碳青霉烯类药物敏感,但对其他常用抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌(TL1552、TL1728和TL947),采用琼脂稀释法检测3株菌对临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度(mininal inhibotory concentration, MIC);结晶紫染色法及扫描电子显微镜观察不同浓度碳青霉烯类药物对铜绿假单胞菌生物膜形成能力和形态的影响;通过转录组测序分析生物膜相关的差异表达基因,并用qRT-PCR进行确认。结果 亚胺培南和美罗培南均能有效抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成,但对已经形成的生物膜影响较小;扫描电子显微镜显示美罗培南处理后的生物膜细胞数量、大小和形态均发生了显著改变,继续在不含抗菌药物的培养基上孵育6h后发现生物膜细胞的整体形态基本恢复正常;转录组测序分析及qRT-PCR表明碳青霉烯类药物可导致涉及蛋白质运输、代谢、生物膜形成等相关基因的改变,并能触发生物膜细胞的应激反应。结论 碳青霉烯类药物对铜绿假单胞菌的生物膜形成有抑制作用,但对已经形成的生物膜影响甚微,去除药物后生物膜细胞的形态基本得到恢复,说明铜绿假单胞菌感染后早期治疗和足疗程治疗的重要性。     

Effects of iron depletion on antimicrobial activities against planktonic and biofilm Pseudomonas aeruginosa

Objectives Iron plays an important role in the development of Pseudomonas aeruginosa biofilm. Here we evaluated effects of iron depletion on the antimicrobial activity of ceftazidime, tobramycin and ciprofloxacin against planktonic and biofilm Pseudomonas aeruginosa. Methods We tested the sensitivities of wild‐type PAO1, type‐IV pilus mutant PAO‐ΔpilHIJK and the quorum‐sensing mutant PAO‐JP2 P. aeruginosa planktonic cultures and biofilms to antibiotics under iron‐depleted conditions. Key findings In planktonic bacteria, the minimum concentration that inhibited visible growth (MIC) of ciprofloxacin was increased slightly in an iron‐depleted environment in all three strains, whereas the MIC of tobramycin was similar in iron‐depleted and control environments. The MIC of ceftazidime increased in the PAO‐JP2 strain when iron was depleted. Tobramycin achieved the best bactericidal effect in biofilms. Viable counts were reduced by one log under iron‐depleted conditions in all three strains when tobramycin reached 4 MIC and when ceftazidime and ciprofloxacin reached 8 MIC. Conclusions This study suggests that once the biofilm is formed, iron depletion may only slightly promote the bactericidal effect of antibiotics on PAO1, PAO‐ΔpilHIJK and PAO‐JP2. Although these changes were relatively small, iron as one of the environmental factors should not be ignored when evaluating bactericidal effect of antibiotics. The combination of an iron chelator and antibiotics may have therapeutic value under certain bacterial growth conditions.     

铜绿假单胞菌群体感应系统与生物膜形成

群体感应（quorum-sensing，QS）系统是细菌依赖于群体密度的信号交流机制，细菌依靠该机制对外界环境变化作出协调统一的应答。目前对铜绿假单胞菌的QS系统已有较深入的研究，该菌的QS系统由两种相互作用的酰化高丝氨酸内酯（AHL）及非-AHL分子调节系统组成，在转录或转录后水平上对细菌的群体行为作出调节。针对QS系统的抗生素将为治疗细菌生物膜感染带来广阔前景。     

In vitro activity of antibiotic combinations against Pseudomonas aeruginosa biofilm and planktonic cultures

In order to investigate the hypothesis that the combination of clarithromycin with other antibacterial agents offers a successful treatment in the eradication of Pseudomonas aeruginosa biofilm, we first determined the activity of eight antimicrobial agents against planktonic cultures of P. aeruginosa isolates by the microdilution technique. Second, we determined the in vitro effects of these antimicrobial agents individually and in combination against planktonic cultures and pre-formed biofilms of P. aeruginosa PA01. Drug combinations with marked activity were tested on biofilms of clinical isolates. The percentages of planktonic culture survival and biofilm persistence were determined using spectrophotometry and scanning electron microscopy, respectively. Bacterial enumeration was used as a more quantitative method to assess the viability of bacteria in the biofilm. Among the antibacterial agents tested, tobramycin and polymyxin B had the strongest activity against planktonic cultures when tested alone. Synergistic activity was observed for the combination chitosan/tobramycin against planktonic cultures but not biofilms, and for the combination tobramycin/clarithromycin against biofilms but not planktonic cultures. The results suggest that the combination clarithromycin/tobramycin may be successful for eradicating infections involving bacterial biofilms such as in cystic fibrosis patients chronically infected by P. aeruginosa. Further studies on representative isolates in vivo are warranted to support these results.     

铜绿假单胞菌生物被膜基因表达生物信息学研究

目的 通过生物信息学探究铜绿假单胞菌生物被膜形成的差异表达基因及可能作用机制。方法 通过GEO数据库筛选获得铜绿假单胞菌生物被膜数据芯片GSE120760, GEO2R工具筛选出铜绿假单胞菌浮游状态和生物被膜状态的差异表达基因;差异表达基因通过String数据库和Cytoscape3.7.1软件中构建靶点PPI网络图,并在DAVID和KOBAS数据库中对差异表达基因进行GO生物富集和KEGG通路分析。用铜绿假单胞菌体外生物被膜模型测定5种氨基酸(D/L型)的抗生物被膜作用效果。结果由芯片GSE120760筛选得到556个差异表达基因,其中上调基因143个,下调基因413个;从差异表达基因中筛选到62个关键基因,这些基因主要与30S和50S核糖体蛋白相关;GO功能富集得到40个条目;KEGG富集到44条通路,主要涉及代谢途径、次生代谢产物的生物合成、氨基酸生物合成通路、多种氨基酸代谢、群体感应、氨酰tRNA生物合成通路等;体外验证试验中,D-氨基酸对铜绿假单胞菌生物被膜有抑制作用,而L-氨基酸对其形成无影响。结论 通过生物信息学挖掘出铜绿假单胞菌生物被膜形成的关键基因与靶点,并与代谢途径...