Vero细胞在人用狂犬病疫苗中的研究和应用进展

Vero细胞是WHO认可的疫苗生产用细胞,已成为全世界疫苗生产推荐的细胞基质.因其易于生长、可在微载体的发酵罐中大规模扩增、可模式化培养且在限定代次内细胞性状比较稳定的特点,受到疫苗研发与生产工作者的青睐.Vero细胞正式用于人用狂犬病疫苗的生产也有40多年的时间,对狂犬病疫苗的推广使用和狂犬病的预防发挥了重要的作用....     

表皮生长因子在食蟹猴睾丸不同发育阶段表达的研究

目的观察表皮生长因子（EGF）在出生后食蟹猴睾丸发育成熟过程中的表达特征,探讨其在睾丸发育成熟中的作用。方法用免疫组化技术检测食蟹猴从新生猴期至成年猴期不同发育阶段睾丸EGF的表达情况。结果 32只食蟹猴睾丸均表达EGF。EGF主要表达于食蟹猴曲细精管内的精原细胞及一些间质细胞的胞质中,偶见表达于支持细胞胞质。各发育阶段睾丸精原细胞EGF阳性率存在差异（P〈0.01）,以新生猴期最低,童猴后期最高。结论 EGF在食蟹猴睾丸不同发育阶段的表达差异,提示EGF对睾丸的形态发育及功能起调节作用。     

HSP70在食蟹猴睾丸不同发育阶段的表达研究

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)在食蟹猴睾丸发育成熟过程中的表达特征,探讨其在睾丸发育成熟中的作用.方法 用Eli VisionTM免疫组织化学技术检测食蟹猴从新生猴期至成年猴期不同发育阶段睾丸HSP70的表达.结果 30只食蟹猴睾丸均表达HSP70.在新生猴期、童猴前期、童猴后期的睾丸中,HSP70主要表达于精原细胞的胞质;在青春猴期,HSP70主要表达于精母细胞的胞质中,精原细胞只有少量表达;在成年猴期,HSP70主要表达于精母细胞和精子细胞的胞质中,精原细胞则无明显表达.各个发育阶段中,支持细胞和间质细胞未见明显HSP70表达.结论 HSP70在食蟹猴睾丸不同发育阶段的表达差异,提示HSP70对睾丸的形态发育及精子发生起调节作用.     

人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗纯化工艺中上样量的选择

经过Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ 4ＦＦ凝胶柱层析法〔1〕纯化的人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗 ,其杂蛋白去除率可达99 %以上 ,副反应率较现行的 3- 5倍浓缩疫苗明显降低 ,且免疫效价可达 3.7ＩＵ /ｍｌ以上 ,值得大力推广并最终取代浓缩疫苗。在深入研究纯化工艺最佳条件时 ,发现待纯化的浓缩疫苗上样量的多少直接影响纯化后疫苗的质量 ,研究结果表明 ,上样量为柱床体积的 10 %以下时 ,纯化效果最佳。1　材料和方法1.1　细胞与病毒培养　使用 12～ 14ｇ健康金黄地鼠 ,无菌取肾 ,按常规方法制备单层细胞 ,用 3Ｌ转瓶 37℃及 33℃常规培养 ,于接种后第 4…     

人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞)临床观察及免疫学效果研究

目的　研究人用狂犬病纯化疫苗的安全性和保护性。方法　采用狂犬病疫苗暴露后免疫程序接种受试人群 ,I期临床接种 2 0人 ,II、III期临床接种 30 4人 ,观察注射后反应 ,采用小鼠脑内中和试验法测定其中 6 2人中和抗体水平。结果　全部受试者有 13.2 7%出现轻度副反应 ,无中强度副反应 ,中和抗体阳转率为 10 0 % ,中和抗体GMT为 11.89IU/ml。结论　该疫苗对人体安全且具有较好的免疫原性     

人用无佐剂狂犬病疫苗全程免疫后抗体水平动态研究

狂犬病是由狂犬病病毒感染温血动物和人的中枢神经系统后引发急性致死性脑脊髓炎的一种人兽共患传染病,狂犬病是迄今为止人类病死率最高的急性传染病之一,无特效的治疗药物,一旦发病死亡率几近100％。我国是狂犬病的高发地区,在狂犬病的预防工作中,能使用安全有效的人用狂犬病疫苗,有着十分重要的意义。     

人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗中硫酸鱼精蛋白残留量的测定

用硫酸鱼精蛋白可去除 vero细胞狂犬病疫苗中残存的细胞基质 DNA,使其残余量小于 10 0 pg/剂量 ,但经一系列处理后的疫苗中硫酸鱼精蛋白应无残留 ,方认为安全可靠。我们采用毛细管电泳法 ,检测该种疫苗中硫酸鱼精蛋白残留量 ,在待检样品中硫酸鱼精蛋白未检出 ,该方法最小检出量为 3ppm。     

狂犬病疫苗免疫人B细胞受体库的高通量测序分析北大核心CSCD

目的对志愿者接种商业化狂犬病病毒疫苗前后的B细胞受体库进行高通量测序,探讨志愿者接种前后B细胞受体库互补决定区3表达谱的变化情况,为了解B细胞生物学作用、评估疫苗作用等提供参考。方法以商业化狂犬病病毒疫苗分别注射4个志愿者,分离外周血单核细胞,提取PBMC总RNA,对总RNA进行逆转录获得cDNA,以cDNA为模板进行多重PCR,后通过Illumina HiseqtmXten(novaseq)平台进行高通量测序和生物信息学分析。结果通过接种RABV疫苗,志愿者BCR的多样性改变但变化无统计学意义。V/J区基因片段的序列使用频率以及V-J基因组合改变,其中IGHJ1基因与IGHV1-3、IGHV3-20、IGVH3-7和IGHV2-26使用频率升高,免疫前后差异有统计学意义;8个V-J组合在免疫前后差异有统计学意义。鉴定了疫苗免疫诱导B细胞克隆后高频扩增(>0.4%)的CDR3氨基酸克隆序列与核苷酸克隆序列,发现同一志愿者中,接种疫苗后与接种疫苗前相比高频克隆序列的大部分频率发生变化,并且不同志愿者之间的序列不同;此外还了解高频序列和对应多肽的性质,如等电点和平均亲水性。结论通过高通量测序对狂犬病病毒疫苗免疫后的人BCR进行了定量分析,发现了狂犬病疫苗免疫人后BCR表达谱的变化情况,为了解B细胞在保护宿主免受RABV感染和改善疫苗反应的生物学作用提供实验性数据。