瓜蒌-薤白对ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化过程中NLRP3炎症小体活化的影响

目的通过建立ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化(As)模型,探讨As病程不同时间点NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症小体表达水平的变化及瓜蒌-薤白的干预作用。方法将高脂饲养6、20、34周的ApoE^-/-小鼠均随机分为模型组(M1、M2、M3)和给药组[6 g/(kg·d)](GX1、GX2、GX3),每组10只;另设C57BL/6J小鼠为空白组(C1、C2、C3)。空白组及模型组小鼠给予生理盐水灌胃,给药组小鼠每日给予相应药物灌胃,共4周。实验结束后处死小鼠,油红O染色评估主动脉斑块面积及形态;HE染色观察主动脉病理形态学变化;免疫组织化学法检测主动脉NLRP3表达;ELISA法检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素18(IL-18)水平;Western blot法检测主动脉组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)的蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉组织中NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达。结果在As病程进展过程中,模型组小鼠主动脉脂质累积和斑块面积显著增加,血清中IL-1β和IL-18的表达不断升高,NLRP3和ASC的蛋白及mRNA的表达均不断上调。Caspase-1的蛋白表达也呈上升趋势,但M2与M3组间的比较无统计学差异。与模型组相比,给药组各时间点小鼠主动脉的脂质累积和斑块面积显著减少,血清中IL-1β和IL-18的水平降低;主动脉组织中N LRP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达显著下调。结论NLRP3炎症小体参与了主动脉As的病变过程,瓜蒌-薤白可能通过调节As模型小鼠主动脉不同阶段NLRP3炎症小体的表达,从而发挥抗As的作用。     

补阳还五汤对线栓大鼠模型脑损伤和血脑屏障通透性的影响

目的:观察补阳还五汤对线栓大鼠模型脑损伤和血脑屏障通透性的影响。方法:通过线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分为MCAO组(生理盐水)、补阳还五汤组(灌胃补阳还五汤)、血塞通组(尾静脉注射血塞通)及联合组(补阳还五汤+血塞通),另设假手术组(生理盐水)。评估大鼠行为学,检测血清中枢神经特异性蛋白(S-100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及脑组织伊文思蓝(EB)含量、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、水通道蛋白-4(AQP-4)、紧密连接相关蛋白(Claudin-5)mRNA和蛋白表达。结果:与MCAO组比较,补阳还五汤组、血塞通组及联合组神经功能评分、贴纸去除时间及S-100β、NSE、EB含量、AQP-4 mRNA和蛋白表达量均降低,且联合组最低,Wnt3a、β-catenin、Claudin-5 mRNA和蛋白表达量均升高,且联合组最高(P<0.05)。结论:补阳还五汤可减轻MCAO大鼠脑损伤,降低血脑屏障通透性,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

SGLT2抑制剂对糖尿病小鼠炎性因子表达的影响

目的 探讨糖尿病小鼠血管内皮炎性因子是否表达,SGLT2抑制剂对其作用的影响。方法将8周龄SPF级雄性CIR小鼠腹腔注射低剂量STZ(50 mg/kg),建模持续6 d,对照组皮下注射生理盐水,造模成功,随机分成对照组（普通饲料）,模型组（普通饲料）和治疗组（普通饲料+达格列净干预治疗）,动态观察4周、8周、12周末小鼠的体重、血糖变化,分别应用EILSA法检测血浆内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达变化和Western blot法测定血管壁各炎性因子蛋白的表达。结果 各组小鼠体重和血糖在不同时间段比较,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较4周模型组血浆内TNF-α显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）,而4周模型组血浆内IL-1β、MCP-1表达亦增多,差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较8周、12周模型组血浆内TNF-α、IL-1β、MCP-1表达变化明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较4周治疗组血浆内TNF-α、IL-1β、MCP-1表达变化不明显,...     

EGCG对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及潜在机制。方法30只雄性SD大鼠随机均分为假手术组,模型组和表没食子儿茶素没食子酸酯组。通过夹闭大鼠右侧肺门45分钟,再灌注6小时构建肺缺血再灌注损伤模型。PAS染色检测肺组织病理形态;物理法检测肺组织湿干之比(W/D),ELISA和RT-PCR分别检测血清和肺组织中白介素-6(IL-6),白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平;硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)的含量;黄嘌呤氧化酶法检测过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting检测肺组织Wnt和β-catenin表达水平。结果与假手术组相比,模型组Wnt、β-catenin、IL-6、IL-1β、TNF-α和MDA的表达水平以及肺组织W/D之比和肺组织病理损伤均明显增加,而CAT,GPX和SOD活性均明显下降;与模型组相比,表没食子儿茶素没食子酸酯组Wnt、β-catenin、IL-6、IL-1β、TNF-α和MDA的表达水平以及肺组织W/D之比和肺组织病理损伤均明显降低,而CAT,GPX和SOD活性均明显增高。结论表没食子儿茶素没食子酸酯可通过抑制炎症和脂质过氧化,清除氧自由基而减轻肺缺血再灌注损伤,其作用机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活相关。     

基于胆固醇逆转运探讨泽泻白术配伍改善ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化的作用

目的探讨泽泻白术配伍改善ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(As)及其与胆固醇逆转运的相关性。方法高脂饮食喂养ApoE~(-/-)小鼠构建As动物模型,随后以泽泻白术配伍干预。超声测量颈总动脉管壁厚度和管腔直径,HE染色检测动脉形态学改变,油红O染色观察肝脏内脂质沉积情况,ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平,Western blot检测肝脏内的胆固醇逆转运蛋白如沉默信息调节因子1(SIRT1)、肝X受体α(LXRα)、ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)的表达。结果泽泻白术配伍显著改善模型鼠的颈总主动脉管壁厚度和管腔直径,抑制模型鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β、MMP-2和MMP-9的表达,降低TC、TG和LDL水平,增加HDL表达,促进肝脏内的胆固醇逆转运相关蛋白SIRT1、LXRα、ABCA1和SR-BⅠ表达,减轻脂质在肝脏的沉积。结论泽泻白术配伍可能通过SIRT1-LXRα-ABCA1/SR-BⅠ通路促进胆固醇逆转运,减轻肝脏内脂质沉积,改善炎症反应,抑制血管壁增厚和血管狭窄,从而发挥抗As作用。     

Wnt/β-catenin基因对骨髓瘤患者间充质干细胞成骨潜能的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin基因和多发性骨髓瘤骨病的关系。方法:分离培养多发性骨髓瘤患者和正常人的骨髓间充质干细胞(MSCs),体外诱导分化成骨细胞,茜素红实验检测矿化物沉积、荧光定量RT-PCR方法检成骨指标(OPN、OC、ALP、Cbfal)和Wnt/β-catenin mRNA表达,分析MSCs细胞成骨能力变化及两组间Wnt/β-catenin mRNA表达差异。结果:骨髓MSCs体外成骨诱导后,茜素红染色阳性,呈现明显红色钙化结节;MSCs体外诱导成骨细胞,试验组与对照组比较,成骨指标OPN、OC、ALP、Cbfαl mRNA表达降低(P<0.05);骨髓MSCs体外成骨诱导后β-catenin mRNA表达降低(P<0.05)。结论:骨髓MSCs体外可成功诱导分化为成骨细胞;多发性骨髓瘤患者MSCs向成骨细胞分化潜能比正常人降低,Wnt/β-catenin可作为多发性骨髓瘤骨病潜在治疗靶点。     

在二甲基亚硝胺诱导小鼠肝损伤模型中肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1β的动态表达

[目的]探讨在二甲基亚硝胺(DMN)诱导小鼠肝损伤模型中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的动态表达。[方法]以DMN15 mg/kg腹腔注射小鼠,对照组小鼠腹腔注射0.85%氯化钠溶液,酶联免疫吸附法检测各时间点血清TNF-α、IL-1β水平;定量PCR法检测各时间点肝组织TNF-α、IL-1βmRNA的表达;免疫组化法检测各时间点肝组织TNF-α、IL-1β的蛋白表达。[结果]DMN造模后,TNF-α及IL-1β基因和蛋白表达在各个时间点都有一定程度的上升,而且均在造模后48h时达到高峰。[结论]在DMN诱导的小鼠肝损伤模型中TNF-α及IL-1β显著升高,提示炎症坏死可能是DMN诱导小鼠肝损伤的主要机制。     

白细胞介素35对ApoE－/－小鼠炎症及动脉粥样硬化的影响

目的研究白细胞介素35(IL-35)对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化进程及其相关炎症因子IL-10、转化生长因子β(TGF-β)及IL-17的影响,探讨IL-35对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的可能作用机制。方法 24只ApoE~(-/-)8周龄实验小鼠,普通饲料饲养1周后随机平均分为正常对照组、动脉粥样硬化组及IL-35干预组[每只小鼠腹腔内注射IL-35 1.2 mg/(kg·d)],正常对照组继续给予普通饲料,其他各组均以高脂饲养建立动脉粥样硬化模型,造模给药16周后采集血标本及胸主动脉,HE染色观察各组小鼠主动脉斑块形成并测定血管内膜中膜厚度,免疫组织化学染色法测定各组小鼠主动脉血管壁IL-10、TGF-β及IL-17的表达,ELISA检测各组小鼠血清中IL-10、TGF-β及IL-17的水平。结果与正常对照组相比,动脉粥样硬化组斑块形成明显,内膜中膜厚度显著增加(P0.01),IL-10在血管壁表达显著增加(P0.05),而TGF-β在血管壁表达无统计学差异(P0.05),IL-10和TGF-β在血清中水平显著降低(P0.05),IL-17在血管壁表达和血清中水平显著升高(P0.05);与动脉粥样硬化组比较,IL-35干预组斑块明显改善,内膜中膜厚度显著减低(P0.01),IL-10和TGF-β在血管壁表达和血清中水平显著升高(P0.05),IL-17在血管壁表达和血清中水平显著降低(P0.05)。结论 IL-35具有延缓动脉粥样硬化进程的作用,这可能与其抑制促炎因子IL-17、上调抗炎因子IL-10和TGF-β水平有关。     

miR-301a调节小鼠巨噬细胞中炎症因子的表达

目的探讨miR-301a对巨噬细胞炎症因子表达水平的影响,从microRNA角度阐明动脉粥样硬化的发病机制,为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。方法高脂喂养Apo E-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,收集小鼠主动脉血管,利用real-time PCR检测组织中miR-301a的表达水平;利用脂质体在RAW264.7细胞中转染miR-301a mimic和miR-301a inhibitor,用real-time PCR检测细胞中miR-301a水平,并检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平,用Western blot检测NF-κB抑制因子(NKRF)蛋白水平,用免疫荧光染色检测p65细胞定位。结果在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a的表达水平升高;在RAW264.7细胞中过表达miR-301a可抑制NKRF蛋白水平,促进p65细胞核定位,升高细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达;在RAW264.7细胞中低表达miR-301a可升高NKRF蛋白水平,促进p65细胞质定位,减少细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达。结论在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a表达水平升高;在RAW264.7细胞中miR-301a通过调节NKRF的表达影响p65活性进而调控TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达,提示microRNA在动脉粥样硬化发病的炎症机制中具有重要作用。     

宁心解毒汤、血塞通、瑞舒伐他汀对ApoE－/－小鼠炎症因子和As斑块的影响

目的通过建立ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(As)模型,探讨宁心解毒汤、血塞通、瑞舒伐他汀对小鼠血脂、炎性因子和斑块结构的影响。方法高脂喂养80只8周龄ApoE~(-/-)小鼠4周后,随机分为宁心解毒汤组、血塞通组、瑞舒伐他汀组和对照组。药物灌胃8周后处死。处死前测量体重、尾动脉血压,小鼠尾静脉取血,检测小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。分离主动脉,观察主动脉粥样硬化斑块特征。结果对照组ApoE~(-/-)小鼠血总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇较其他3组差异有显著性,且瑞舒伐他汀组与宁心解毒汤组、血塞通组差异也有显著性(P0.05)。对照组ApoE~(-/-)小鼠体重、血压较其他3组差异无显著性(P0.05)。对照组ApoE~(-/-)小鼠IL-6、IL-1β、TNF-α的血清浓度,明显高于较其他3组(P0.05);而宁心解毒汤组、血塞通组、瑞舒伐他汀组3组间差异无显著性(P0.05)。对照组动脉斑块分布弥漫,而其他3组的整个动脉也有斑块,明显轻于对照组(P0.05)。结论ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食能够理想构建动脉粥样硬化动物模型。宁心解毒汤、血塞通、瑞舒伐他汀可以通过调脂、减低炎性因子的表达来发挥抗As作用。瑞舒伐他汀控制斑块发展的效果更好,考虑与其调脂相关。     

过表达Krüppel样因子9对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响及机制

目的:探讨Krüppel样因子9(KLF9)对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞A549增殖、凋亡和炎症的影响及机制。方法:A549细胞随机分为四组:NC组、LPS组、LPS+pcDNA-con组和LPS+pcDNA-KLF9组。qRT-PCR检测KLF9、IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测KLF9、CyclinD1、Bax、Bcl-2、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达。结果:与NC组相比,LPS组的细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著增加,KLF9、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达显著降低,Bax蛋白和炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达显著升高;与LPS+pcDNA-con组相比,LPS+pcDNA-KLF9组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,KLF9、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达显著升高,Bax蛋白和炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达显著降低(P<0.05)。过表达KLF9可抑制LPS诱导的A549细胞中Wnt/β-catenin信号通路的激活。结论:过表达KLF9可减轻脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤,这可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

地龙提取液对结肠炎相关性结肠癌Wnt/β-catenin信号通路的影响

[目的]探讨地龙提取液对结肠炎相关性结肠癌疗效及其作用机制。[方法]小鼠随机分为空白组、模型组、地龙提取液(低、中、高剂量组)和美沙拉嗪组,并采用AOM/DSS法复制结肠炎相关性结肠癌癌前病变动物模型。治疗结束后分别测量各组小鼠胸腺、脾脏及结肠的质量,并光镜下观察结肠组织病理学改变,免疫印迹法检测结肠组织中Wnt/β-catenin信号通路中相关蛋白的表达。[结果]地龙提取液能够显著增加小鼠胸腺的质量和结肠长度(P0.05),减少脾脏和结肠质量(P0.05),降低AOM/DSS诱导小鼠的成瘤率(P0.05),改善CAC小鼠结肠组织的病理学形态;此外,地龙提取液能够显著减少CAC小鼠结肠组织中Wnt3a、phospho-GSK-3β、β-catenin、c-Myc、cyclin-D1蛋白表达(P0.05),增加APC、Axin1、GSK-3β、phospho-β-catenin、Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。[结论]地龙提取液能够预防结肠炎后结肠癌的发生与发展,其作用机制是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化实现的。     

C-X-C趋化因子受体4增强Toll样受体2在肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化病变形成中的作用

目的]探究C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)在肺炎衣原体(C.pn)感染促进动脉粥样硬化(As)病变形成中的作用。 [方法]以高脂饮食为基础,建立C.pn感染诱导ApoE－/－、ApoE－/－＋Toll样受体2(TLR2)－/－、ApoE－/－＋TLR2－/－＋AMD3100小鼠As模型,ELISA检测ApoE－/－小鼠血清C.pn IgG、IgM抗体水平,PCR检测肺组织C.pn特异性DNA,油红O染色和HE染色观察主动脉及主动脉根部脂质沉积和As病变面积,比色法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平,ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)含量。 [结果]ApoE－/－小鼠C.pn感染模型成功建立。与对照组相比,C.pn感染后ApoE－/－小鼠主动脉及主动脉根部脂质沉积量增加89.08%和71.83%,As病变面积增加34.12%(均P＜0.05);与C.pn感染组相比,TLR2－/－＋C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少46.16%和75.73%,As病变面积减少63.37%(均P＜0.05);与TLR2－/－＋C.pn感染组相比,TLR2－/－＋AMD3100＋C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少26.19%和56.94%,As病变面积则减少22.24%(均P＜0.05)。与对照组相比,C.pn感染后血清TC、TG和LDLC水平分别升高0.62倍、1.43倍和1.34倍,血清IL-1β和IL-6含量分别增加4.10倍和6.00倍(均P＜0.05);与C.pn感染组相比,TLR2－/－＋C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低56.96%、50.41%和66.64%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少66.72%和69.54%(均P＜0.05);与TLR2－/－＋C.pn感染组相比,TLR2－/－＋AMD3100＋C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低52.18%、58.56%和60.61%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少28.84%和43.18%(均P＜0.05)。 [结论]CXCR4可增强TLR2在升高血脂水平及炎症因子含量中的作用,进而参与C.pn感染诱导的As病变形成。     

荷叶碱对小鼠动脉粥样硬化血管炎症及基质金属蛋白酶的影响

目的:通过研究荷叶碱对小鼠动脉粥样硬化(AS)血管炎症及基质金属蛋白酶(MMPs)的影响来阐明其抗AS机制。方法:实验采用高脂饮食诱导构建AS小鼠模型,根据不同饮食分为对照组、AS组、低剂量荷叶碱组和高剂量荷叶碱组。12周后分析荷叶碱对血脂、血清炎性因子(TNF-α、MCP-1)、血管壁炎性因子(IL-1β、TNF-α、MCP-1、NF-κB)的影响,并检测血管壁中MMP-2、9及其抑制物(TIMP-2)的基因表达。结果:荷叶碱有效降低了体重、总胆固醇(TC)、高/低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C、LDL-C)及血清炎症(P0.05),且高剂量组尤为明显(P0.05),但对高TG血症改善不大(P0.05)。Real-Time PCR结果显示,AS组小鼠主动脉壁硬化段组织的炎性因子(IL-1β、TNF-α、MCP-1、NF-κB)表达均显著上调(P0.05),荷叶碱干预后明显回落(P0.05),且与剂量相关,但MCP-1mRNA除外(P0.05)。MMP-2,9mRNA亦呈相同变化趋势,而TIMP-2在荷叶碱干预后显著上调(P0.05),且在大剂量组表达尤为明显(P0.05)。结论:荷叶碱能够降低血脂异常及血清炎症,并减少血管壁炎症,这一作用可能与调控NF-κB有关;同时荷叶碱可能通过调控MMP-2、9及TIMP-2进一步影响动脉粥样硬化的发生发展。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨膝痹康方在兔膝骨性关节炎模型中的作用机制

目的 探讨膝痹康方治疗兔膝骨性关节炎(KOA)的作用机制。方法 将30只大白兔随机分成空白组、模型组、塞来昔布组、膝痹康方低剂量组和膝痹康方高剂量组，每组6只。除去空白组以外，其他4组采用膝关节内注射木瓜蛋白酶方法建立KOA兔模型，模型制备成功后各药物组分别进行干预，4 w后，取兔血清及膝关节软骨组织，使用苏木素-伊红(HE)染色法观察关节软骨，染色酶联免疫吸附试验(ELISA)检测兔血清中的白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量，Western印迹检测关节软骨中Wnt3a、β-连环蛋白(catenin)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果 与模型组比较，膝痹康方高、低剂量组、塞来昔布组明显改善膝关节软骨损伤，兔血清中IL-1β、IL-6和TNF-α表达、兔关节软骨组织中Wnt3a、β-catenin及Bax蛋白表达量显著降低，Bcl-2蛋白表达显著升高(均P<0.05)。结论 膝痹康方可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路及细胞凋亡延缓KOA炎性反应，减轻软骨破坏，从而缓解KOA兔模型的症状。     

和厚朴酚通过Wnt/β-连环蛋白通路抗动脉粥样硬化

目的 体内外观察和厚朴酚(HNK)对动脉粥样硬化(AS)模型Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及动脉硬化的影响;探讨和厚朴酚调控Wnt/β-catenin信号通路对AS形成过程影响的可能机制。方法 动物实验：8只SD大鼠作为正常对照组,24只高脂喂养SD大鼠随机分为AS组(高脂喂养+维生素D₂注射建立AS模型),AS+HNK组[建立模型后HNK腹腔注射5 mg/(kg·d),2次/d,连续8周]和AS+HNK-PNU组[AS+HNK组的基础上加用Wnt/β-catenin拮抗剂PNU-74654 100 mg/(kg·d),连续8周],每组8只。检测各组血脂水平,HE染色图像分析测定胸主动脉中膜面积及血管壁厚度,免疫印迹法检测大鼠胸主动脉组织Wnt/β-catenin的蛋白表达。细胞实验：培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)分为对照组、AS模型组[使用20 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)干预48 h诱导建立细胞AS模型],AS+HNK组(AS+HNK 32μmol/L干预48 h)、AS+HNK-PN...     

Exendin-4对高脂饮食载脂蛋白E基因敲除小鼠脂代谢及炎症因子的影响

目的观察Exendin-4对高脂饮食载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠脂代谢、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法将40只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为普通饮食组(10只)和高脂饮食组(30只),喂养8周后再将高脂饮食组分为非药物干预组、Exendin-4低剂量组、Exendin-4高剂量组,每组10只。Exendin-4低剂量组、Exendin-4高剂量组ApoE^-/-小鼠分别给予20μg/(kg·d)、100μg/(kg·d)Exendin-4腹腔内注射;普通饮食组、非药物干预组ApoE^-/-小鼠给予0.1 mL生理盐水腹腔内注射。第12周末处死小鼠,进行相关检测,采用全自动生化分析仪检测小鼠总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;RT-PCR及Western Blot法分别检测主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1 mRNA和蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中IL-6、MCP-1及VCAM-1水平。结果与普通饮食组相比,非药物干预组ApoE^-/-小鼠TC、LDL-C水平明显升高(P<0.01),应用Exendin-4干预后,Exendin-4高剂量组TC、LDL-C水平明显降低(P<0.05或P<0.01);各组小鼠血清中TG、HDL-C含量虽有变化,但差异无统计学意义(P>0.05)。与非药物干预组相比,Exendin-4处理可以降低主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1 mRNA及蛋白表达,同时下调血浆中IL-6、MCP-1及VCAM-1蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论Exendin-4可以改善高脂饮食ApoE^-/-小鼠脂代谢并降低主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1的表达。     

养心氏片对动脉粥样硬化模型小鼠的作用机制研究

目的探讨养心氏片治疗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法以高脂饲料喂养雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠12周,复制AS模型。将AS小鼠随机分成模型组,养心氏片高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性对照组,每组8只。另设雄性C57BL/6J小鼠8只作为正常对照组。养心氏片高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性对照组给药量分别相当于70 kg成人临床剂量的2倍、1倍、0.5倍及1倍。养心氏片高剂量组、中剂量组、低剂量组给予养心氏片,剂量分别为1.40 g/(kg·d)、0.70 g/(kg·d)、0.35 g/(kg·d)灌胃,阳性对照组给予阿托伐他汀剂量为2.57 mg/(kg·d)灌胃,共给药12周。采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠升主动脉病理学变化,Image J软件测定小鼠升主动脉斑块校正后斑块面积。采用实时定量PCR(qPCR)法检测各组小鼠主动脉组织核转录因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达。结果与模型组比较,养心氏片高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性对照组升主动脉斑块校正后斑块面积呈现不同程度的降低(P0.05),以养心氏片高剂量组小鼠升主动脉斑块校正后斑块面积最低,而养心氏片高剂量组小鼠升主动脉斑块校正后斑块面积与阳性对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。与正常对照组比较,模型组小鼠主动脉组织NF-κB、MCP-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA的表达水平明显升高(P0.05),各药物干预组小鼠主动脉组织NF-κB、MCP-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA表达水平较模型组均显著降低(P0.05),与养心氏片高剂量组相比,养心氏片中剂量组及低剂量组小鼠主动脉NF-κB、MCP-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA表达升高(P0.05),而养心氏片高剂量组小鼠主动脉NF-κB、MCP-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA表达与阳性对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论养心氏片可抗动脉粥样硬化,并具有剂量依赖性,养心氏片给药组以养心氏片高剂量组抗AS效果最佳,其机制可能与降低AS小鼠升主动脉斑块校正后斑块面积及下调主动脉NF-κB信号通路相关因子mRNA表达有关。     

沉默RORα通过活化Wnt/β-catenin通路靶基因促进人胃癌细胞增殖

目的 探讨人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体(ROR)α与Wnt/β-连环素(catenin)通路的相互作用。方法 噻唑蓝(MTT)实验验证沉默RORα对胃癌细胞系MGC803的增殖作用；实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹与免疫共沉淀检测敲低RORα对Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达；荧光素酶报告检测c-Myc基因启动子活性。结果 敲低RORα可显著促进胃癌细胞增殖(P<0.05)。当RORα被敲低时可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);但对β-catenin无明显影响(P>0.05)。免疫共沉淀提示敲低RORα可显著降低RORα与β-catenin的结合效率(P<0.05)。RORα敲低后，核内β-catenin与转录因子(TCF)-4表达水平明显升高(P<0.05)。Wnt通路下游基因Axin、c-Myc、c-Jun和基质金属蛋白酶(MMP)-9的mRNA和蛋白水平显著上调(P<0.05)。荧光素酶报告提示，敲低RORα可显著增强c-Myc启动子活性(P<0.05)。结论 敲低RORα可...     

消退素D1在小鼠主动脉夹层中的作用及机制研究

目的探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)在小鼠主动脉夹层中的作用及机制研究。方法 SPF级雄性小鼠40只,随机分成对照组、RvD1组、β氨基丙腈(BAPN)组和BAPN+RvD1组,每组10只,BAPN组和BAPN+RvD1组构建BAPN饮食诱导的小鼠主动脉夹层模型,对照组和RvD1组饲喂普通的小鼠维持饲料,RvD1组和BAPN+RvD1组腹腔注射RvD1 3μg/(kg·d),对照组和BAPN组注射等量生理盐水。用苏木精-伊红和血管弹力纤维染色(EVG)观察主动脉和弹力纤维的形态和结构,用ELISA法检测血清白细胞介素(IL)1、IL-17、TNF-α和γ干扰素水平,采用RT-PCR法检测主动脉组织IL-1、IL-17、TNF-α和γ干扰素mRNA表达。结果对照组和RvD1组均未出现主动脉夹层,而BAPN+RvD1组小鼠主动脉夹层发生率和病死率显著低于BAPN组,差异有统计学意义(20.0%vs 70.0%,10.0%vs 40.0%,P0.05);苏木精-伊红染色和EVG结果提示,BAPN组小鼠血管壁增厚,伴假腔形成,同时中膜弹力纤维出现明显的断裂或中断,而BAPN+RvD1组血管壁仅轻度增厚,未见假腔形成;与对照组比较,BAPN组小鼠血清IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素和主动脉IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素mRNA表达水平明显升高(P0.05,P0.01),而BAPN+RvD1组血清IL-1、IL-17、TNF-α、γ干扰素水平和主动脉IL-1、IL-17、TNF-α和γ干扰素mRNA表达明显低于BAPN组,差异有统计学意义(P0.05,P0.05)。结论RvD1可显著降低循环和主动脉炎症,防止中膜弹力纤维和主动脉的断裂,降低主动脉夹层的发生。