种植修复患者唾液与龈下菌斑微生物群落结构关联及其影响因素研究

目的 利用高通量测序技术研究种植修复患者唾液与龈下菌斑微生物群落结构的关联及其影响因素,为种植体周微生物研究的样本选择提供参考。方法 选取于2014年6月至2015年9月在第四军医大学口腔医院口腔修复科完成种植修复的10例患者（12颗种植体）,于2021年11月至2022年1月随访复诊时采集其唾液和种植体周龈下菌斑样本,行16S rRNA V3～V4区双端测序,通过Alpha多样性分析和LEfSe多级物种差异判别分析其微生物群落丰富度、多样性及物种丰度的差异性。结果 在Alpha多样性分析中,Sobs指数和Chao指数显示,唾液中微生物群落丰富度大于龈下菌斑,差异均有统计学意义（均P <0.05）;而Shannon指数和Simpson指数显示,唾液与龈下菌斑微生物群落多样性差异无统计学意义（P> 0.05）。进一步分析发现,种植体周围黏膜炎患者和吸烟患者的唾液与龈下菌斑微生物群落丰富度差异无统计学意义（均P> 0.05）;男性、不饮酒、种植体周最大探诊深度≥5 mm的患者唾液与龈下菌斑微生物群落多样性差异有统计学意义（均P <0.05）;其他因素如不同年龄、软垢...     

基因检测技术在龈下微生物鉴定中的新进展

近年来,非放射性载体分子标记在龈下菌斑微生物鉴定中被广泛应用,它是一种快速的、具有高度敏感性和特异性的检测手段。本文对DNA的提取和纯化,DNA探针的标记作了介绍。反向杂交是将未知菌作探针,与纯化的参考菌株DNAs杂交技术;rRNA基因探针可检测同源性很高的细菌;多聚酶链反应是在体外用寡核苷酸引物及Taq酶合成特异核苷酸序列的方法,也广泛用于各个领域。     

0.5%PVP-I龈下冲洗对龈下微生物的作用

目的　观察０．５ ％ 聚维酮碘（ＰＶＰ－Ｉ）龈下冲洗后龈下微生物组成的变化,并与０．５％ 洗必太进行对比研究。方法　选取临床诊断为中、重度牙周炎的患者１１ 例,共计４５ 颗患牙,牙周袋深≥４ｍ ｍ 。将含有患牙的不同象限随机分组,分别采用：（１）０．５ ％ ＰＶＰ－Ｉ;（２）０．５％ 洗必太（ＣＨ） ;（３）０．９ ％ 生理盐水５ｍｌ 进行一次性龈下冲洗。冲洗前及冲冼后２４ 小时分别采集龈下菌斑行刚果红染色涂片,高倍视野下（×１００） 观察龈下微生物组成的变化。结果　０ ．５％ ＰＶＰ－Ｉ龈下冲洗２４ 小时后龈下菌细胞密度降低,球菌比率升高,杆菌比率降低（ Ｐ＜ ０．０１）,螺旋体比率未见明显改变,与ＣＨ 组间比较无统计学上差异。效果均明显优于生理盐水组。结论　０．５％ ＰＶＰ－Ｉ龈下冲洗短期即可减少龈下微生物的量,并使微生物组成发生有益的转化,与０．５ ％ 洗必太可达到相同的效果。     

慢性牙周炎龈下菌斑和唾液微生物群落分析

目的:运用DGGE技术检测慢性牙周炎龈下菌斑和唾液微生物群落结构,分析其菌群之间的关系。方法:选取34名慢性牙周炎志愿者,分别采集龈下菌斑和唾液样本,采用PCR扩增细菌16Sr RNA V3区后,运用DGGE技术分析各组样本微生物群落结构。通过数字化软件Im age J将DGGE凝胶图谱转成数字信息,对所得矩阵进行主成分分析(Princ ipal ComponentAnalysis,PCA)、聚类分析(C luster Analysis)和偏最小二乘法(Partial Least Squares,PLS)分析。结果:DGGE图谱显示:龈下菌斑DGGE条带数目为11～28,,平均19;唾液DGGE条带数目为11～24,平均17;PCA结果显示:龈下菌斑与唾液比较有明显的差异;聚类分析显示:龈下菌斑、唾液形成5个明显聚类群,在同一聚类群中相似度高,在不同聚类群中相似度低,表示龈下菌斑与唾液菌群之间有显著差异;PLS结果显示:慢性牙周炎龈下菌斑与唾液菌群有显著差异。结论:DGGE是一种能直观显示微生物群落的指纹技术。通过该技术能检测牙周、唾液微生物群落的结构和组成,本结果显示,慢性牙周炎龈下菌斑与唾液微生物群落结构有明显差异。     

慢性牙周炎患者的龈下微生物与吸烟状况

目的　评价慢性牙周炎患者的吸烟状况与龈下牙周致病微生物的百分比。方法　 112例慢性牙周炎患者 ,根据吸烟状况分为 :①重度吸烟组 >10支 /天 (n =32 ) ;②轻度吸烟组≤ 10支 /天 (n =18) ;③戒烟者组 (n =2 4 ) ;④非吸烟组 (n =38)。观察者口内每个象限 ,选取探诊最深的 1或 2个位点 ,纸捻法取龈下菌斑 ,厌氧培养 ;并测量该位点的探诊深度 (ProbeDepth ,PD)、附着丧失 (AttachmentLoss,AL)和探诊后出血 (Bleedingofprobe ,BOP)。结果　①取样位点临床指标的均值为PD :6 .3mm、AL :6 .5mm及BOP :89% ,各组间无显著性差异。②组间菌落形成单位和龈下微生物伴放线放线杆菌 (Actinobacillusactinomycetemcomitans,A .a)、牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromanasgingivalis,P .g)、中间普氏菌 (Prevotellaintermedia ,P .i)、核梭杆菌 (Fusobacteriumnucleatum ,F .n)和微消化球菌(Peptostreptococcusmicros,P .m)的百分比均无差异。③方差分析显示仅轻度吸烟组福赛类杆菌 (Bacteroidesforsythus,B .f)的百分比略高于其它组 (P <0 .0 4 )。结论　慢性牙周炎患者 ,探诊深度和附着丧失相似的位点 ,吸烟组、戒烟组和非吸烟组的龈下牙周致病微生物百分比 (B .f除外 )无显著差异。     

0.5%PVP—Ⅰ龄下冲洗对龈下微生物的作用

目的 观察０．５％聚维酮碘龈下冲洗后龈下微生物组成的变化,并与０．５％洗 民太进行对比研究。方法 选取临床诊断为中,重度牙周炎的患者１１例,共计４５颗患牙,牙周袋深≥４ｍｍ。将含有患牙的下不同象限随机分组,分别采用：（１）０．５％ＰＶＰ－Ｉ;（２）０．５％洗必太（ＣＨ）;（３）０．９％生理盐水５ｍｌ进行一次性龈下冲洗。冲洗前及冲洗后２４小时分别采集龈下菌斑行刚果红染色涂片,高倍视野下观察龈下微生物     

超声和手工龈下刮治对龈下微生物影响的研究

目的 :比较Perioproline超声龈下刮治和手工龈下刮治对龈下微生物的影响 ,评价Periopro line超声龈下刮治系统的临床疗效和工作效率。方法 :选取慢性成人牙周炎患者 7名 ,共 2 0个左右基本对称牙被纳入研究 ,随机分入实验组 (超声组 )和对照组 (手工组 )。记录治疗时间和治疗前、治疗后 0d、7d和 14d的PD ,BOP值 ,及采集龈下菌斑样本培养鉴定 ,观察比较总菌落形成单位 (CFU)和牙周可疑致病菌检出率及检出量的变化。结果 :两组在治疗后PD、BOP值及龈下菌斑总量 (CFU)和牙周可疑致病菌数量及检出率均显著下降 (P <0 .0 5) ;治疗前后各时段组间均无明显差别 ;超声组的治疗时间明显少于手工组 (P <0 .0 5)。结论 :Perioproline超声龈下刮治和手工龈下刮治均可有效减少龈下微生物的量 ,改善患牙的牙周临床状况 ,且两者间无差异 ,但Perioproline超声龈下刮治明显较手工刮治节省时间     

龈下牙周微生物检测技术的进展状况

牙周炎的发生、发展及预后均与微生物活动息息相关。通过龈下微生物的检测，有利于牙周炎病因的研究、针对特定病原菌选择有效的药物、评价牙周炎的进展状态和预后等。随着相关学科的发展，微生物检测方法不断推陈出新，由最初的显微镜检查发展至细菌基因芯片等技术。本文将对各种技术的基本原理、检测结果的有效性以及优缺点进行综述。     

人中性粒细胞防御素对龈下微生物的影响

对１８例中，、重度成年型牙周病患者的４０颗患牙，在牙周探诊５ｍｍ以上的牙周袋内放置民御素药线一根（含人中性粒细胞防御素８μｇ），４ｄ后取出，实验为期１１ｄ，观察用药前后龈下微生物及指标的变化。结果表明，防御素在牙周袋内保持３ｄ一，牙龈指数及出血指数明显改善，龈下菌斑的菌细胞密度降低；同时，球菌的相地比例升高，螺旋体和杆菌打对比例降低（Ｐ〈０．０５），并能维持到实验结束，本实验结果提示防御素在牙周袋     

弯制卡环与铸造卡环对龈下微生物的影响

目的了解卡环戴入前后基牙龈下微生物变化,考察弯制卡环与铸造卡环对龈下微生物影响的差异.方法检查戴牙前、戴牙后1周、1月和3月,弯制卡环和铸造卡环所在基牙龈下可培养细菌总量及革兰氏阴性菌构成比的变化.结果与戴牙前相比,戴牙后1周、1月和3月龈下可培养细菌总量及革兰氏阴性菌构成比均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),戴牙后1月,弯制卡环与铸造卡环所在基牙龈下革兰氏阴性菌构成比有统计学差异(P＜0.05).结论在本文观察期(3个月)内,卡环的戴入造成龈下微生物中革兰氏阴性菌构成比显著增加,弯制卡环与铸造卡环对龈下微生物中革兰氏阴性菌构成比的影响没有显著差异.     

未获培养的微生物与牙周病关系初探

目的:研判未获培养微生物与牙周病的相关性。方法:针对16S rRNA基因设计未获培养微生物D084、I025特异探针,通过检测临床菌斑判断其与牙周病的关系。结果:引物特异性通过PCR产物测序获得验证,在慢性牙周炎组和单纯性龈炎组的D084检出率分别为62.9%和84.6%,I025为71.4%和42.3%,与正常组均有显著性差异(P<0.01)。I025在慢性牙周炎组和单纯性龈炎组间的检出率也存在显著性差异(P<0.05)。结论:未获培养微生物D084、I025与单纯性龈炎、慢性牙周炎患病相关,I025还与牙周炎进展相关。     

单纯机械治疗对慢性牙周炎患者龈下菌群微生态的影响

目的 采用16S rRNA高通量测序技术,探讨单纯机械治疗对慢性牙周炎龈下菌群微生态的影响.方法 纳入广泛型中重度慢性牙周炎患者,接受口腔卫生宣教,并同时进行龈上洁治.一周后进行超声结合手工龈下刮治及根面平整,在基线、治疗后3个月和治疗后6个月,记录临床指标并采集龈下菌斑.利用Illu-mina MiSeq平台进行16...     

龈上菌斑微生物与宿主血脂水平的相关性分析

目的: 分析龈上菌斑微生物与宿主血脂水平的相关性。方法: 采集68名45~60岁志愿者的龈上菌斑样本,提取总DNA并对其16S rDNA V3-V4区进行PCR扩增。扩增所得产物经Illumina MiSeq PE300平台测序后,进行OTU聚类、物种注释,并将注释到的物种(属水平)与宿主血脂水平作Spearman相关分析。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 68名志愿者的龈上菌斑样本测序所得平均序列数为41 929条,聚类所得OTU数为1 037,共注释到 25个门,45个纲,92个目,155个科和330个属。物种聚类热图显示68个样本具有相似的物种组成丰度模式。Spearman相关分析显示：在龈上菌斑微生物中,拟普雷沃菌属、小类杆菌属、消化链球菌属和普雷沃菌属7与宿主血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平呈负相关;宿主血清高密度脂蛋白胆固醇水平与奈瑟菌属的丰度呈正相关,但与普雷沃菌属2的丰度呈负相关。结论: 人群中龈上菌斑微生物的组成结构具有稳定性,与宿主血脂水平相关,可进一步探究龈上菌斑微生物作为宿主脂代谢状态的生物标志物。     

中度和重度牙周炎患者龈下细菌多样性和群落结构分析

目的:通过16S rDNA测序探索和比较重度牙周炎和中度牙周炎患者龈下细菌多样性及群落结构。方法:选取17例中度或重度牙周炎患者作为研究对象,根据症状将其分为重度牙周炎组9例与中度牙周炎组8例。收集提取其牙周袋内龈下细菌进行16S rDNA测序,然后对每个样品的可操作分类单元(operational taxonomy unit,OTU)丰度和每个水平的分类(域、界、门、纲、目、科、属、种)进行统计并进行α多样性与β多样性分析,最后对每个样品的16S rDNA组成数据分析并预测细菌功能。结果:从龈下样本中获得的高质量的序列(555028)分为373个OTUs,代表303个独立的种,隶属于138属75科,47目,28类,12门。两组共332个OTUs,表明核心龈下微生物的存在。龈下微生物的优势菌门包括拟杆菌门、厚壁菌门、梭杆菌门、变形菌门和螺旋菌门,优势菌属包括梭形杆菌属、链球菌属、卟啉单胞菌属、普氏菌属、奈瑟氏菌属和密螺旋体属。α多样性分析结果表明,重度牙周炎患者的微生物多样性高于中度牙周炎组。β多样性分析表明两组微生物群落结构相似。所有样品中共预测到39种代谢功能,主要集中于膜转运(10.9%)、复制和修复(9.9%)、糖代谢(9.3%)、氨基酸代谢(9.1%)、翻译(6.9%)、能量代谢(5.8%)和不良性征(5.1%)。结论:牙周炎患者龈下细菌具有丰富的多样性与稳定的群落结构,龈下细菌的功能与口腔其他部位的细菌相同。牙周炎疾病的严重程度与龈下细菌的多样性有关,但与细菌的群落结构尚未发现相关性。鉴于牙周炎的微生物多样性和共生性,调控微生物相互作用及其功能发挥的治疗策略应得到进一步发展。     

种植体周围黏膜炎龈下微生物群落多样性研究

目的:检测种植体周围黏膜炎龈下微生物群落的多样性,研究种植体周围黏膜炎龈下微生物种类、数量以及群落分布,找出特异性微生物,为临床上选择适当的维护与干预方法提供依据。方法:采集10例患黏膜炎的种植体龈沟液样本(A组)及14例健康种植体的龈沟液样本(B组),提取样本龈沟液中的微生物总DNA作为模板,采用细菌的16S rDNA V3区通用引物进行扩增,扩增产物进行DGGE电泳分析及克隆测序分析。结果:A组较B组龈沟液量多,差异有显著统计学意义(P﹤0.01)。AB两组样本整体相似性为18%,A组各样本群落相似性为29.9%~60.2%,B组各样本相似性30.8%~74%。A组测得5种菌门,包括15种菌属,B组测得4种菌门,12种菌属。A组G^-厌氧杆菌比例为69.65%,B组为64.51%。结论:发生种植体周围黏膜炎时龈沟液量较健康种植体增加,龈沟液量可一定程度上反映种植体周围软组织的健康状况。种植体周围组织在健康状态和发生黏膜炎时的龈沟液中微生物群落均具有高度多样性,但菌群结构差异较大。健康种植体及种植体周围黏膜炎龈下微生物群落均以G^-厌氧杆菌为主,后者G^-厌氧杆菌比例更高。     

Nd:YAP激光治疗牙周炎的疗效评价及其对龈下微生物的影响

目的 比较龈下刮治和根面平整术(scaling and root planning, SRP)联合Nd:YAP激光与单纯SRP治疗对牙周炎患者疗效的差异和龈下微生物的影响。方法 选择符合纳入标准的牙周炎患者。每位患者龈上洁治1周后为本研究基线,随机半口分组。试验侧采用SRP联合Nd: YAP激光治疗;对照侧仅采用SRP治疗。每位患者选择一组同颌同名单根牙,进行龈沟液(gingival crevicular fluid, GCF)和龈下菌斑取样。分别在基线、治疗完成后6周和12周进行探诊深度(probing depth, PD)和探诊出血(bleeding on probing, BOP)的数据采集、龈沟液及龈下菌斑样本的采集。ELISA法检测龈沟液中炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的浓度。16S rDNA高通量测序对各龈下菌斑样本的菌群构成进行分析和比较。结果 试验侧与对照侧的各项临床指标较基线时均有显著改善(P＜0.05),但两组间无明显差异。两组的IL-6浓度较基线均显著下降,治疗后6周,试验侧的 IL-6浓度明显低于对照组(P＜0.05)。龈下菌斑α多样性分析,治疗后6周及12周,对照侧的Shannon指数高于基线,Simpson指数低于基线(P＜0.05)。测序结果显示,治疗后6周,试验侧的普氏菌属(Prevotella)和Saccharibacteria_incertae_incerta_sedis的相对丰度较基线显著下降;密螺旋体属(Treponema)的相对丰度低于对照侧,嗜二氧化碳噬细胞菌属(Capnocytophaga)的相对丰度高于对照侧(P＜0.05),12周时无明显差异。结论 在本研究中,Nd:YAP激光联合SRP和单纯SRP治疗牙周炎均有明显效果,而两种治疗方法在临床指标上无明显差异,辅助使用Nd:YAP激光在短时间内更有利于GCF IL-6浓度的降低和部分牙周致病菌的控制。     

侵袭性牙周炎病原微生物的检测

目的检测侵袭性牙周炎（AgP）患者和牙周健康者龈下菌斑中的7种病原微生物,旨在寻找AgP的主要致病微生物.方法应用以16S rRNA为基础的聚合酶链反应（PCR）技术,检测55例AgP患者和17名健康对照者龈下菌斑中的7种牙周病原微生物：伴放线放线杆菌（Aa）,牙龈卟啉单胞菌（Pg）,福赛坦氏菌（Tf）,牙密螺旋体（Td）,直肠弯曲杆菌（Cr）,中间普氏菌（Pi）,变黑普氏菌（Pn）.结果55例AgP患者中仅有1例检测出Aa,而在健康对照者中未检出该菌.Pg、Tf、Td和Cr在AgP组的检出率分别为81.8%、83.6%、80.0%和81.8%,显著高于健康对照者（17.6%、11.8%、5.9%、29.4%）,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论Pd、Tf、Td和Cr 4种微生物在AgP患者中有较高的检出率,提示它们的共同定植可能在AgP中起重要作用.     

全口一次龈下刮治与分区段龈下刮治的疗效分析

目的：比较一次全口龈下刮治与分区段龈下刮治的临床疗效。方法：选择需进行牙周洁治的慢性牙周炎患者50例,分为实验组25例和对照组25例,实验组一次全口龈下刮治,对照组分四个区段进行龈下刮治,观察3个月内治疗前后PD、BI、PI的变化,并记录患者对治疗的主观感觉和治疗后是否有发热症状。结果：实验组和对照组龈下刮治后3个月,PD、BI均显著降低,两组间无统计学差异（P〈0.05）;与对照组相比,实验组1个月时P（I1.09±0.57）和VAS值（0.37±0.26）显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。两组患者均无治疗后发热症状。结论：全口一次龈下刮治与分区段龈下刮治都可获得良好的治疗效果,全口一次龈下刮治更利于菌斑控制和短期消除治疗不适。     

应用变性梯度凝胶电泳分析牙周基础治疗前后龈下菌群的变化

目的:应用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)方法观察比较牙周基础治疗前后龈下菌群微生态的总体变化,为临床诊疗方案的确定提供实验依据。方法:选取6例慢性牙周炎患者,观察牙周基础治疗前和治疗后6周时的临床指标变化,并采集治疗前后同一位点的龈下菌斑,提取总DNA,扩增不同的16S rDNA片段,DGGE分离,硝酸银染色,对图像进行聚类分析,并绘出聚类树形图。结果:所有患者经过治疗后,与基线相比,牙周状况均明显改善。基线和治疗后6周时,2个区间的DNA片段的条带数目无显著差异。通过聚类分析,证实同一患者基线时和基础治疗后6周时的龈下菌群具有较高的相似性,且不同的DNA片段所得到的条带图谱聚类树形图存在类似结果。结论:同一患者在基础治疗后形成的龈下菌群有类似于治疗前水平的趋势。DGGE能够观察龈下菌群的组成变化,适用于分析大量微生物标本的结构改变。