维拉帕米抑制快速起搏诱导心房肌细胞离子通道重构的研究

目的利用原代培养的心房肌细胞建立快速起搏模型,研究维拉帕米对L-型钙通道及钾通道Kv4.3在快速起搏早期的表达的影响.方法原代培养大鼠心房肌细胞,并建立快速起搏细胞模型,实验分为:对照组、快速起搏组、维拉帕米 快速起搏组以及维拉帕米组,利用RT-PCR以及Western blot方法检测L-型钙通道α1c及钾通道Kv4.3在不同情况下mRNA和蛋白的表达变化.结果快速起搏24 h后L-型钙通道α1c的mRNA和蛋白表达较对照组明显降低,起搏前给予维拉帕米预处理,再经24 h起搏后,L-型钙通道α1c以及钾通道Kv4.3 mRNA及蛋白表达较对照组稍降低,二者差异无显著意义,但与未经维拉帕米处理的起搏组比较差异有显著意义(P＜0.05).结论快速起搏早期,原代培养心房肌细胞L-型钙通道α1c及钾通道Kv4.3的mRNA和蛋白表达均出现不同程度的降低,提示其发生了离子通道重构,但维拉帕米能明显抑制快速起搏早期离子通道重构的发生.     

房颤心房肌L型钙通道α1c亚单位mRNA的差异表达改变及意义

目的 研究房颤心房肌L型钙通道结构重塑的分子基础。方法心脏手术中采集慢性房颤及宴性心律患者右心房肌，提取总RNA行逆转录，应用PCR技术检测L型钙通道α1c亚单位不同位置的mRNA片段表达。结果 α1c亚单位Ⅰ、Ⅱ跨膜区连接对应的mRNA丰度。慢性房颤心房肌较窦性心律心房肌差异无显著性；α1c亚单位Ⅳ跨膜区对应的mRNA丰度，慢性房颤心房肌较窭性心律心房肌明显降低。结论 房颤心房肌L型钙通道结构重塑与α1c亚单位的亚型表达改变有关。     

慢性房颤患者心房肌L型钙通道α1c亚基mRNA表达的观察

目的比较慢性房颤与窦性心律心房肌L型钙通道α1c亚基mRNA的表达改变,探讨房颤心房肌L型钙通道的离子重构特点.方法选择43例接受心脏瓣膜置换的风心病患者,慢性房颤者24例,窦性心律者19例,于体外循环建立初采集右心房游离壁组织,应用半定量RT-PCR测定α1c 亚基Ⅰ-Ⅱ跨膜区连接对应的mRNA片段表达.结果慢性房颤心房肌L型钙通道α1c亚基mRNA的表达较窦性心律心房肌无明显差异.结论房颤心房肌L型钙通道的离子重构可能与α1c亚基的亚型表达改变有关.     

兔心房组织L型钙通道表达的增龄性变化及卡托普利的干预作用

目的 动态观察家兔心房组织L型钙通道表达的增龄性改变以及血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利的干预作用.方法 健康家兔按月龄分为成年、老年和老年+卡托普利干预组.药物干预8周后,体表心电图测量P波平均时限和P波离散度;ELISA检测试剂盒测定心房组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量;real-time PCR技术测定兔左心耳L型电压依赖型钙通道α1C亚单位的mRNA表达;Western blot检测L型钙通道α1C亚单位蛋白表达. 结果 与成年组相比,老年组的P波平均时限延长,P波离散度增大(P＜0.01);心房组织AngⅡ的含量增加(P＜0.01);L型钙通道α1C亚单位基因表达明显下调(P＜0.01).与老年组相比,卡托普利干预组P波平均时限以及P波离散度均缩短,心房组织AngⅡ的含量减少(P＜0.05);卡托普利干预组L型钙通道α1C亚单位的mRNA及蛋白含量较老年组均上调(P＜0.05). 结论 心房肌细胞L型钙通道α 1C亚单位基因和蛋白表达的增龄改变可能是老年易发房颤的分子机制之一;而卡托普利对这种增龄性改变的逆转作用可能是其防治房颤的潜在机制.     

慢性心房颤动患者心房肌钙转运调控蛋白基因转录表达的改变

目的探讨心房颤动(AF)时心房肌细胞钙超载的原因及其在AF发生和维持中的作用。方法采集风湿性心脏瓣膜病窦性心律患者12例(对照组)和AF患者14例(AF组)的右心耳组织,采用RT-PCR方法检测心房肌钙转运调控蛋白mRNA表达水平,测量AF患者左右心房内径、二尖瓣口面积和肺动脉收缩压。结果与对照组相比,AF组患者L-型电压依赖钙通道a1c亚基(LVDCCa1c)、肌浆网Ca2 -ATP酶和兰尼碱受体(RYR2)的mRNA表达水平显著下调(P均<0.01),三磷酸肌醇受体(IP3R1)的mRNA表达水平上调(P<0.05),而磷酸受纳蛋白和肌集钙蛋白的mRNA表达水平无明显改变(P均>0.05)。AF组患者肌浆网Ca2 -ATP酶的mRNA表达水平与左心房内径呈负相关(r=-0.573,P=0.032),与二尖瓣口面积呈正相关(r=0.625,P=0.017);LVDCCa1c的mRNA表达水平与二尖瓣口面积呈正相关(r=0.719,P=0.004)。结论细胞内钙超载机制可能参与了AF的发生和维持,心房肌钙转运调控蛋白mRNA表达异常可能是钙超载的分子生物学机制,钙转运调控蛋白mRNA表达异常与左心房解剖学改变之间存在内在联系。     

辛伐他汀防治心肌细胞肥大效应及其与钙通道关系的研究

目的：探讨辛伐他汀对心肌细胞肥大的防治作用及其与钙通道活动的关系。方法：采用血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型。应用改良Lowry法测定心肌细胞总蛋白含量。相差显微镜测定心肌细胞表面积。CCK-8法检测心肌细胞活力变化。westernblot方法检测心肌细胞L-型钙通道亚单位Cav1.2（α1C）、T-型钙通道亚单位Cav3.1（α1G）、Cav3.2（α1H）蛋白表达的变化。应用激光共聚焦显微镜技术检测[Ca^2＋]i的变化。结果：（1）辛伐他汀能明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量及细胞表面积的增加,同时提高心肌细胞活力;（2）辛伐他汀能明显降低心肌细胞T-型钙通道α1G、α1H蛋白表达,但对L-型钙通道α1C蛋白表达无明显影响;（3）辛伐他汀可呈剂量依赖性抑制心肌细胞肥大所致的钙离子超载。结论：辛伐他汀对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大具有明显的防治作用,其作用机制可能与辛伐他汀抑制T-型钙通道α1G、α1H蛋白的重新再表达有关,并与其抑制细胞内钙超载密切相关。     

消痰解郁方对慢性应激荷瘤大鼠行为的影响及其机制

目的：观察慢性应激对荷瘤大鼠行为的影响,研究抗抑郁方剂消痰解郁方的作用及其机制。 方法：60只Wistar大鼠随机分为正常组、荷瘤组、应激组、应激荷瘤组、消痰解郁方组和氟西汀胶囊组。经过不同的处置后,观察各组大鼠糖水耗食量、行为学得分和体质量,酶联免疫吸附测定法检测血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）含量,蛋白印迹法检测海马Bcl-2蛋白和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK1/2）蛋白表达水平,聚合酶链式反应检测海马组织Bcl-2 mRNA表达。 结果：慢性应激组及荷瘤组大鼠的糖水耗食量、行为学得分、体质量较正常组下降。荷瘤组及慢性应激组大鼠血清TNF-α、IL-6含量升高,海马组织Bcl-2蛋白、mRNA及p-ERK1/2蛋白水平均下降,其中荷瘤大鼠接受应激后较正常大鼠接受应激后血清TNF-α水平增高,同时海马Bcl-2 mRNA水平下降最为显著,差异有统计学意义（P〈0.05）。消痰解郁方能改善慢性应激大鼠及荷瘤大鼠的行为学指标,下调血清TNF-α、IL-6含量,提高Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达水平。 结论：荷瘤大鼠较正常大鼠在接受慢性应激后更易出现抑郁行为,消痰解郁方能改善荷瘤大鼠慢性应激后的行为学改变,其作用机制可能与调节荷瘤大鼠血清TNF-α含量,上调海马Bcl-2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达有关。     

肺静脉源性心房纤颤动物模型中L型钙通道α1c蛋白表达的研究

目的研究肺静脉源性心房纤颤(简称房颤)动物模型中L型钙通道α1c蛋白表达. 方法通过建立兔肺静脉源性房颤的动物模型,并按房颤持续时间或起搏时间的不同分设亚组,应用免疫组化方法检测肺静脉源性房颤组、肺静脉起搏组以及正常对照组的兔肺静脉和心房组织L型钙通道α1c蛋白表达,用图像分析系统对组化抗原表达进行半定量分析. 结果α1c蛋白阳性表达在易发生房颤的动物肺静脉和心房组织中,随着房颤持续时间的延长,出现表达下降,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);而同样刺激条件下,不能诱发房颤的兔肺静脉和心房组织中未出到α1c蛋白表达的变化(P>0.05). 结论肺静脉和心房组织L型钙通道蛋白表达的改变可能参与了肺静脉源性房颤的发生和维持,该通道功能的改变可能是肺静脉源性房颤的发生机制之一.     

次乌头碱对心肌细胞Ca2+调控蛋白mRNA表达的影响

目的 考察次乌头碱(HA)对原代培养乳大鼠心肌细胞L-钙通道、钙调蛋白(CaM)、肌质网雷诺定受体(RyR2)mRNA表达的影响.方法 体外培养乳大鼠心肌细胞,采用RT-PCR法测定L-钙通道α1C亚基、CaM及RyR2 mRNA的表达.结果 HA作用15 min时,60、120 μΜ/L能提高心肌细胞膜L-钙α1C ...     

二十二碳六烯酸对房颤大鼠心房纤维化的影响

目的:探讨二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）对大鼠心房颤动模型心房纤维化的影响,及其对细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2）蛋白、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK1/2）蛋白、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。方法:将80只乙酰胆碱-氯化钙混合液敏感大鼠随机分为对照组（CTL组）、对照DHA处理组（DHA组）、房颤组（AF组）和房颤DHA处理组（DHA+AF组）,各20只。观察各组大鼠房颤持续时间,采用Masson染色法观察大鼠心房组织胶原纤维增生情况,应用Real-time PCR法测定大鼠心房组织中Ⅰ型胶原mRNA表达,Western blot法测定大鼠心房组织中Ⅰ型胶原、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达。结果:实验第10、17天,DHA+AF组大鼠房颤持续时间均明显短于AF组（P<0.01）。与CTL组比较,AF组大鼠心房肌间质可见大量胶原纤维增生,心房纤维化程度高;DHA+AF组大鼠心房肌间质可见少量胶原纤维增生,心房纤维化程度较AF组降低。与CTL组比较,AF组大鼠P-ERK1/2与ERK1/2比值升高（P<0.05）,DHA组比值降低（P<0.05）,而CTL组与DHA+AF组差异无统计学意义（P>0.05）;与AF组比较,DHA组和DHA+AF组与P-ERK1/2与ERK1/2比值均降低（P<0.05）。与CTL组比较,AF组和DHA+AF组大鼠心房组织Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05~P<0.01）;与AF组比较,DHA+AF组大鼠心房组织Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.05）。结论:DHA具有改善SD大鼠房颤模型心房纤维化的作用,此作用与其抑制心房组织ERK1/2通路的活性进而下调心房组织Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达有关。     

“一肾一夹”高血压大鼠心肌钠泵α亚单位的基因表达

探讨“一肾一夹”高血压大鼠心肌钠泵α亚单位各异构体基因表达的改变,为高血压发病机制的深入研究提供理论及实验依据。方法：分别应用分子生物学RT－PCR及免疫组化技术,探讨IKIC高血压大鼠心肌钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平及基因表达的改变。结果：在mRNA水平,1K1C高血压大鼠心肌钠泵α2亚单位表达减弱,α3亚单位表达增强,而蛋白水平表现为α2亚单位表达增强。结：1K1C高血压大鼠心肌钠泵α亚单位基因表达发生改变,这种改变可能与肾血管性高血压的发病有关。     

T型钙通道α1亚基在早产小鼠子宫平滑肌组织中的表达及意义?

目的：探讨早产小鼠子宫平滑肌组织中T型钙通道α1亚基蛋白及mRNA的表达及临床意义。方法利用脂多糖建立小鼠感染性早产模型,通过Real-time PCR、免疫组织化学及Western blot方法检测早产小鼠及同孕龄非早产小鼠子宫平滑肌组织中T型钙通道α1亚基mRNA及蛋白的表达。结果在小鼠子宫平滑肌组织中,Real-time PCR结果显示T型钙通道α1亚基表达的主要亚型为Cav3．1及Cav3．2,Cav3．3不表达。无论在mRNA水平还是蛋白水平,Cav3．1及Cav3．2在早产小鼠的表达明显高于非早产小鼠。结论 T型钙通道的表达变化可能参与了小鼠感染性早产的发生,拮抗T型钙通道有望用于防治早产。     

钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及侵袭转移能力的影响

目的：探讨低氧条件下钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及其侵袭转移能力的影响．方法：在培养基中加入150μmol/L CoCl2模拟化学缺氧;将实验分成对照组、CoCl2组、CoCl2和钙通道阻滞剂维拉帕米（verapamil,VPL）组．用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组中HIF-1α的mRNA水平;蛋白印迹实验和免疫细胞化学检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA—MB-231中HIF-1α蛋白的表达;Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测各实验组中细胞侵袭迁移能力的改变．结果：两株细胞各实验组都存在HIF-1α的mRNA转录和蛋白的表达,CoCl2组HIF-1α mRNA水平和蛋白水平较对照组显著增高（P〈0．01）,加VPL干预后,HIF-1α mRNA水平和蛋白水平都大大降低（P〈0．01）,MCF-7和MDA—MB-231间有显著差异（P〈0．01）;两株细胞的侵袭迁移能力VPL＋CoCl2组较CoCl2组明显降低（P〈0．05）,MDA—MB-231更明显（P〈0．01）．结论：阻断钙信号转导途径可以使HIF-1α的表达下调,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭转移能力．     

L-型钙通道α1亚单位在成年鼠海马神经元上的差异性表达

目的观察L-型钙通道不同的α1亚单位在成年鼠海马不同亚区神经元中表达的变化.方法运用免疫组织化学染色方法特异性地标记脑型L-型L-型钙通道不同的α1亚单位CaV1.2α1C和CaV1.3α1D.结果CaV1.2α1C主要分布在CA1区锥体细胞突起部分及CA3区锥体细胞的胞体区、基树突和远端顶树突;CaV1.3α1D则主要集中分布在海马各亚区的胞体区和近端突起;此外,CaV1.2α1C和CaV1.3α1D在细胞局部的分布特性上亦明显不同,前者主要呈现簇状分布,而后者则呈均匀分布.结论L-型钙通道CaV1.2α1C和CaV1.3α1D亚单位在成年鼠海马不同亚区神经元中呈现差异性表达.     

心房颤动犬心房肌 Calpains mRNA 与蛋白表达改变的研究

目的观察长期心房快速起搏诱发房颤犬心房肌CalpainⅠ、CalpainⅡmRNA和蛋白表达情况。方法RT-PCR和Western-blot方法检测对照组及房颤组犬心房肌CalpainⅠ和CalpainⅡmRNA及蛋白表达情况;光镜、电镜下,观察心房肌病理组织学和超微结构改变。结果房颤组犬心房肌CalpainⅠmRNA和蛋白表达较对照组犬显著上调（P〈0.01,P〈0.05）;房颤组犬心房肌肌溶解明显。结论房颤组犬心房肌CalpainⅠmRNA和蛋白表达显著增加,可能通过引起心房肌肌溶解参与导致房颤心房结构重构。     

腺苷A1受体激动剂拮抗大鼠慢性低氧所致右心室肥厚的实验研究

目的通过外周途径持续给予腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷（CPA）,观察其拮抗低氧致右心室肥厚的作用和机制。方法将24只SD大鼠随机分为3组：A组（常氧组）、B组（慢性低氧组）、C组（慢性低氧＋CPA治疗组）。B、C组于缺氧箱中喂养。于实验第8天予皮下埋泵给予CPA。于第21天处死大鼠,检测右心室/（左心室＋室间隔）[RV/（LV＋S）]、右心室/体重（RV/BW）比值;采用RT-PCR及Western-blot法检测RGS4基因及蛋白表达。结果慢性缺氧组与常氧组相比,RV/（LV＋S）、RV/BW比值明显增高（分别P〈0.01,P〈0.05）,而RGS4的mRNA及蛋白表达水平明显下降（均P〈0.01）;CPA处理后RV/（LV＋S）、RV/BW比值明显低于缺氧组（分别P〈0.01,P〈0.05）,而RGS4的mRNA及蛋白表达水平明显增高（P均〈0.01）。结论外周途径应用CPA能拮抗慢性缺氧所致右心肥厚,其机制可能是通过上调RGS4表达从而抑制G蛋白介导的信号通路。     

氯沙坦对原发性高血压大鼠早期肾脏皮质Na^＋,K^＋-ATP酶α_1亚单位mRNA表达的影响

目的：探讨氯沙坦对原发性高血压大鼠早期肾组织Na^＋,K^＋-ATP酶α1亚单位mRNA表达的影响。方法：选取健康雄性12周龄原发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）12只,随机分为氯沙坦灌胃组（SHR-L组）和溶媒灌胃组（SHR-N组）,每组6只;同源同龄雄性正常血压大鼠（Wistar Kyoto rats,WKY）6只作为对照组（WKY组）。SHR-L组按每只大鼠30 mg/kg.d-1灌胃,WKY组及SHR-N组每日灌胃同体积的溶媒。灌胃8周后测定大鼠血浆和肾组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）变化;RT-PCR检测各组大鼠肾脏皮质Na6＋,K6＋-ATPaseα1亚单位mRNA表达的变化。结果：血浆和肾组织AngⅡ水平：SHR-N组与WKY组相比[（317.13±83.01）ng/L]vs[（180.61±50.02）ng/L],差异有统计学意义（P〈0.05）;SHR-L组与WKY组相比[（466.77±71.61）ng/L]vs[（180.61±50.02）ng/L],差异亦有统计学意义（P〈0.01）;SHR-L组与SHR-N组相比[（466.77±71.61）ng/L]vs[（180.61±50.02）ng/L],差异有统计学意义（P〈0.05）。SHR-L组灌胃8周后肾脏皮质Na＋,K＋-ATP酶α1亚单位mRNA表达明显降低。结论：氯沙坦能有效阻断AT1受体抑制肾脏皮质Na＋,K＋-ATP酶α1亚单位mRNA表达,这可能是氯沙坦治疗原发性高血压疗效机制之一。     

L-型钙通道α1亚单位在成年鼠海马神经元上的差异性表达

目的 观察L-型钙通道不同的α1亚单位在成年鼠海马不同亚区神经元中表达的变化。方法 运用免疫组织化学染色方法特异性地标记脑型L-型L-型钙通道不同的α1亚单位CaV1.2α1C和CaV1.3α1D。结果 CaV1.2α1C主要分布在CA1区锥体细胞突起部分及CA3区锥体细胞的胞体区、基树突和远端顶树突;CaV1.3α1D则主要集中分布在海马各亚区的胞体区和近端突起;此外,CaV1.2α1C和CaV1.3α1D在细胞局部的分布特性上亦明显不同,前者主要呈现簇状分布,而后者则呈均匀分布。结论 L-型钙通道CaV1.2α1C和CaV1.3α1D亚单位在成年鼠海马不同亚区神经元中呈现差异性表达。     

心脏瓣膜病房颤患者左右心房纤维化机制比较

目的 探讨心脏瓣膜病(瓣膜病)慢性房颤患者左右心房肌间质纤维化的分子生物学机制是否存在差异.方法 接受开胸换瓣的手术患者45例,慢性房颤患者27例,窦性心律患者18例,术中分别取左、右心耳组织.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(KT-PcR)测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-1、9(MMP1、MMP9))以及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TMP1)的mRNA表达水平.结果 ①与窦性心律组相比,慢性房颤组患者左、右心房肌组织中Ⅰ型胶原、MMP1、MMP9的mRNA表达水平均上调(P<0.05),TMP1的表达水平均下调(P<0.01).②窦性心律组患者左右心房肌组之间I型胶原、Ⅲ型胶原、MMP1、MMP9、TMP1的mRNA表达水平差异均无显著性(P>0.05).③慢性房颤组患者MMP1的mRNA在右心房肌组织中表达水平较左心房上调(P<0.05).MMP9的mRNA在左心房肌组织中表达水平较右心房上调(P<0.01).④无论左心房还是右心房.MMP1、MMP9的mRNA表达水平均与Ⅰ型胶原的mRNA表达水平呈正相关,与TMP1的mRNA表达水平呈负相关.结论 心房肌组织中MMP1/TMP1以及MMP9/TMP1的mRNA表达水平失衡引起Ⅰ型胶原转录水平的改变,可能是瓣膜病慢性房颤患者心房肌间质纤维化的分子基础,而左、右心房间质纤维化是被MMP1和MMP9差异化调控的.     

L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的表达

目的 研究L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的空间表达情况。方法制备成年大鼠心脏冰冻切片，结合大体位置和HE染色结果快速辨认出窦房结、房室结和结后延伸，采用免疫荧光和免疫印迹技术检测L型钙通道α1C亚单位在大鼠窦房结、房室结、结后延伸、右房、右室的表达，用共聚焦显微镜观察其表达部位，通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行分析。结果荧光呈现点状、斑状或不规则的短线状，主要分布于细胞膜及细胞内的膜性结构，其荧光强度由弱到强依次为窦房结、房室结、结后延伸、右心房、右心室，房室结和结后延伸之间无显著性差异（P〉0．05），其余两两相比均有显著差异（P〈0．05），其中右心房、有心室明显强于窦房结、房室结和结后延伸（P〈0．01）。各部位在相对分子质量200000左右可见一特异性蛋白条带。对蛋白条带进行灰度值分析，结果与免疫荧光相一致。结论L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏分布广泛，在不同部位表达量不同，在工作肌组织的表达量明显高于传导组织．提示钙电流在心脏不同部位有不同的分子基础.