蚂蚁提取液对DNA-蛋白质交联修复能力的研究

目的 探讨蚂蚁提取液(ant extract,AE)对DNA -蛋白质交联(DPC)的修复能力.方法 以甲醛为染毒液,预处理小牛胸腺DNA和卵清蛋白混合液,使之形成DPC,再用不同浓度的AE处理,最后采用SDS - KCI沉淀法来检测不同处理组的DPC修复情况.结果 当甲醛染毒浓度为0.544mol/L时,10μg/ml的小牛胸腺DNA和10μg/ml的卵清蛋白DNA -蛋白质交联程度最高;制备2％的AE时,选择pH 7.6的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液作为组织匀浆液,AE具有最强的DPC修复能力,且用pH 3.6的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液制备的AE也具有部分DPC修复能力;0.002％、0.02％、0.2％和2％的AE具有一定的DPC修复能力,且存在明显的浓度-效应关系.结论 本研究确定了蚂蚁提取液制备过程中缓冲液的最佳pH值,并证明了蚂蚁提取液具有一定的DPC修复能力.     

液态甲醛致小鼠肝和睾丸DPC研究

目的检测甲醛致小鼠DPC的损伤。方法采用KCl-SDS沉淀法来检测液态甲醛染毒后小鼠肝和睾丸中DNA-蛋白质交联的形成及修复情况。结果采用20．0mg／kg的甲醛染毒小鼠,6h组肝细胞内DPC系数没有明显增加（P〉0．05）,12h组肝细胞内DPC系数相对空白组明显增加（P〈0．05）,18h组肝细胞内DPC系数达到最高,且与空白组有极显著差异（P〈0．01）。24h组肝细胞内DPC系数降低,且与空白组比较没有显著性差异;经过20mg／kg的甲醛染毒后,6h、12h和18h组睾丸细胞内DPC系数相对于空白组都有极显著性增加（P〈0．01）,24h组睾丸细胞内DPC系数与18h组相比显著降低,且与空白组比较没有显著性差异。结论较高浓度的液态甲醛能够引起小鼠肝脏和睾丸形成DNA-蛋白质交联,且所形成的DNA-蛋白质交联在24h内能够完全修复。     

甲醛致Wistar大鼠骨髓细胞遗传毒性研究

目的检测经不同浓度甲醛染毒后所致大鼠骨髓细胞的遗传损伤。方法采用KCl-SDS沉淀法检测液态甲醛所致DNA-蛋白质交联(DPC)效应和单细胞凝胶电泳技术检测甲醛对DNA的损伤效应。结果低浓度的甲醛(5μmol/L和25μmol/L)不能引起DNA-蛋白质的交联但可造成骨髓细胞DNA的严重断裂(P<0.01);较高浓度的甲醛(125μmol/L,625μmol/L)可以产生明显的DNA-蛋白质交联作用(P<0.01)。结论甲醛可造成骨髓细胞DNA的断裂和DNA-蛋白质交联,而DNA-蛋白质交联可以对细胞产生严重的遗传毒性,这可能是甲醛导致白血病的分子机制。     

甲醛致大鼠肝细胞DNA-蛋白质交联的研究

目的 探讨甲醛致生物机体DNA-蛋白质交联(DNA-Protein crosslinks,DPC)作用.方法 研究以Wistar大鼠肝组织为实验材料进行体内和体外实验,采用KCl-SDS沉淀法来检测甲醛染毒后大鼠肝细胞DNA-蛋白质交联的含量.结果 低浓度的气态甲醛(0.5 mg/m3)不能引起DNA-蛋白质的交联,较高浓度的甲醛(1.0mg/m3,3.0mg/m3)可以诱导明显的DNA-蛋白质交联作用(P<0.01);体外实验结果显示:经低浓度甲醛(12.5μmol/L)处理1h后,大鼠肝细胞内的DPC系数稍有变化,但与空白对照组相比无显著差异,而随着甲醛浓度上升,细胞中的DPC含量出现了显著性上升.结论 体内和体外实验表明:低浓度的甲醛不能引起DNA-蛋白质的交联,而较高浓度的甲醛可以引起明显的DNA-蛋白质的交联作用.     

β-榄香烯与核酸的结合作用

本文中用DNA热变性实验及荧光分析法研究了β-榄香烯与小牛胸腺DNA的结合作用．热变性实验表明β-榄香烯可使小牛胸腺DNA的热变性温度Tm值下降2℃，小牛胸腺DNA(30μg／ml)与β-榄香烯(20μg／ml)温育后．激发波长为3．4nm,发射波长为358nm,其荧光强度为0．315，此时小牛胸腺DNA(30μg／ml)的荧光强度仅为0．020,用酵母的t-RNA与-β-榄香烯实验也取得类似的结果。对β-榄香烯的抑癌机理用量子化学CNDO／2方法计算的结果进行了探讨。β-榄香烯的前沿轨道能级ELUMO=0．0168 au EHOMO=03239au鸟嘌呤的ELUMO=0．1629au其EHOMO=-0．25960au胸腺嘧啶的ELUMO=0．1324au．其EHUMO=0.3550au脲嘧啶的ELUMO-=0．0888au其EHOMO=-03940au。上述计算结果提示β-榄香烯与核酸碱基的前沿轨道之间的相互作用；因β-榄香烯上的一个甲基带有较正的静电荷，该甲基可能与核酸碱基上的氮原子存在分子间选择性疏水作用。     

邻苯二甲酸二异辛酯致小鼠肝DNA蛋白质交联效应研究

邻苯二甲酸酯是一类广泛应用于人类生产和生活的酸酞酯类人造化学物,许多研究表明其具有广泛的生物学毒性。DNA-蛋白质交联（DNA-protein crosslinks,DPC）是DNA分子的一种严重损伤。本文以小鼠肝为实验材料,采用Kcl-SDS沉淀法检测邻苯二甲酸二异辛酯（DEHP）腹腔注射染毒两周后,检测其导致的小鼠肝DPC效应。实验结果表明,低浓度的DEHP（62．5mg／kg）不能致DPC效应（P〉0．05）,随着染毒浓度的倍增（125mg／kg,250mg／kg,375mg／kg）,其DPC系数也随之升高,可导致明显的DPC效应（P〈0．01）,而在500mg／kg染毒组,由于其染毒剂量达到小鼠的致死水平,其DPC效应虽然与空白对照组相比有极显著性差异（P〈0．01）,但〈125mg／kg染毒组。结论DEHP在低浓度（62.5mg／kg）时不引起小鼠肝的DPC效应,但其DPC系数随着染毒浓度（125mg／kg,250mg／kg,375mg／kg）的升高而升高,可以导致明显的DPC效应,在染毒剂量（500mg／kg）达到致死水平的染毒组DPC系数明显降低,但仍明显高于空白对照组。     

单细胞碱性凝胶电泳用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂

目的 引进单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法,用以检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂。方法 载有经紫外线和H2O2作用过的胸腺细胞和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1h,在电泳缓冲液中解旋30min,电泳30min,胸腺细胞核用20mg／L的EB染色5min,用荧光显微镜和显微细胞图像分析系统观察和分析H2O2和紫外线在体外条件下对正常胸腺细胞的DNA损伤作用。结果 紫外线和不同浓度H2O20．001、0．01、0．1、1．0mmoL／L均可导致小鼠胸腺细胞DNA损伤,且随着H2O2浓度的增加DNA损伤逐渐加重。结论 SCGE可用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2和紫外线引起的胸腺细胞DNA损伤。     

蚂蚁水提取物对小鼠免疫功能的影响

目的探讨蚂蚁水提取液对小鼠免疫功能的影响。方法将小鼠分为3组,分别灌胃给蚂蚁水提取液、人参液和生理盐水,连续7d后测定小鼠T、B淋巴细胞增殖和IL-1、2、3活性。结果与对照组比较蚁液及人参液均能使小鼠T、B淋巴细胞增殖(P<0．01),增加IL-1、2、3活性(P<0．01)。结论蚂蚁水提取液和人参液对小鼠免疫功能具有促进作用。     

非特异性酯酶染色实验条件探讨

目的：探讨非特异性酯酶染色的实验条件。方法：用10％甲醛生理盐水，40％甲醛和甲醛蒸气对非特异性酯酶染色固定条件进行了测定，同时用1／14mol／L、1／15mol／L、1／20mol／L的磷酸盐缓冲（pH7．4）配制的基质液分别在45、60、90分钟的染色条件进行了测定。结果：是选择甲醛固定5分钟染色结果最好。三种不同浓度的磷酸盐缓冲液和三个不同的孵育时间的染色结果经多因素方差分析，P〈0．05，结果有统计学意义。结论：最佳染色条件为甲醛蒸气固定5分钟，用1／15mol／LpH7．4磷酸盐缓冲液配制的基质液。染色孵育60分钟。本法帮助鉴别诊断急性单核细胞白血病和急性粒细胞白血病有较大的实用价值。     

苦豆子中生物碱含量测定方法新探

苦豆子中生物碱具有一定水溶性，用氯仿难以提取完全。笔者采用水或pH＝5．6的醋酸缓冲液作提取液，即将其中的生物碱转化成生物碱盐的方法，提取苦豆子中的生物碱。经DU－7紫外分光光度计测试，最大吸收波长为417nm，线性范围0～13μg／mL，变异系数0．65％，回收率：水提取为98．23％；醋酸缓冲液提取为98．72％，结果表明：测试数据准确，方法可行     

柱前衍生高效液相色谱法测定克拉霉素血药浓度

目的采用柱前衍生高效液相色谱法测定克拉霉素血药浓度。方法克拉霉素血浆样品以正己烷-正丁醇混合溶液萃取后,与2,4-二硝基苯肼衍生化后进样。色谱柱为KromasiC18(4.6mm×250mm,5μm),0.05mol/LNH4H2PO4缓冲液(pH=6.5)-乙腈(68:32)为流动相,柱温室温,流速1.0mL/min,检测波长340nm。结果克拉霉素血药浓度在50～3000μg/L范围内,浓度与峰面积比有良好的线性关系(r=0.9998),最低检测浓度为30μg/L。平均方法回收率为(99.2±3.5)%(n=15)。日内RSD≤4.9%,日间RSD≤7.7%。结论本方法简单快速、准确,可用于克拉霉素临床药动学研究。     

荧光增敏法测定咽炎片中丹皮酚的含量

目的 建立测定咽炎片中丹皮酚含量的荧光分析法.方法 基于AlC13试剂对于丹皮酚具有荧光增敏作用,在pH7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲体系中,于最大发射波长λem=455 nm处（最大激发波长λex=295nm）下检测丹皮酚的含量.结果 丹皮酚的浓度在1.3 ×10-4～7.3 ×10-4μg/ml内与荧光强度增大值△F呈线性关系良好（r=0.999）,回归方程为△F=89.45p（×10-3 μg/ml）-0.2777,检出限为0.8×10-4μg/nl,回收率为95.4％～97.8％,相对标准偏差小于2.53％.结论 该方法准确可靠,可应用于咽炎片中丹皮酚含量的测定.     

毛细管电泳法同时测定苯麻滴鼻液中2种组分含量

目的建立一种快速测定苯麻滴鼻剂中两种组分含量的方法。方法采用毛细管区带电泳分离模式,运行缓冲液为20 mmol.L-1磷酸缓冲液（pH 5.0）,检测波长204 nm,内标物为甲氧苄啶。结果盐酸苯海拉明在2.5-62.5μg.mL-1,盐酸麻黄碱在10-250μg.mL-1范围内线性关系良好（r=0.9999）,在75%-125%处方标示量范围内,回收率符合要求。结论毛细管电泳法可用于同时测定苯麻滴鼻液中盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱含量,方法准确可靠,操作简便易行。     

盐酸雷洛昔芬平衡溶解度与表观油水分配系数的测定

目的测定盐酸雷洛昔芬的平衡溶解度以及表观油水分配系数,为药物新剂型设计与研究提供基础。方法采用饱和溶液法和摇瓶法测定盐酸雷洛昔芬在蒸馏水和pH 2.0-9.0磷酸盐缓冲液的平衡溶解度及其在正辛醇-水/磷酸盐缓冲液体系中的表观油水分配系数。结果 37℃时,盐酸雷洛昔芬在水中溶解度为（3.941±0.06）μg/mL,在pH 2.0-9.0缓冲液中,平衡溶解度随pH值升高而减小;盐酸雷洛昔芬在正辛醇-水体系中表观油水分配系数（P）为（17.261±2.84）,lgP=1.24;在正辛醇-缓冲液体系中,P值随pH值升高而增大。结论本文建立的测定方法简单可行,盐酸雷洛昔芬不溶于水,且pH值影响平衡溶解度和表观油水分配系数。     

替米沙坦氢氯噻嗪片的溶出度研究

目的：考察替米沙坦氢氯噻嗪片中替米沙坦和氢氯噻嗪在四种不同介质中的溶出行为。方法参照日本《医疗用药品品质情报集》中的溶出度试验条件,并根据替米沙坦氢氯噻嗪片处方成分的理化性质对溶出介质进行选择,分别考察了替米沙坦氢氯噻嗪片在pH 1.2的人工胃液（含0.5％十二烷基硫酸钠溶液）、pH 4.0醋酸盐缓冲液（含0.5％十二烷基硫酸钠溶液）、pH 6.8磷酸盐缓冲液（含0.25％十二烷基硫酸钠溶液）及水（含0.25％十二烷基硫酸钠溶液）中的体外溶出行为,采用高效液相色谱法测定替米沙坦氢氯噻嗪片中替米沙坦和氢氯噻嗪的溶出度,并通过相似因子（ f2）法对两种成分的溶出度曲线进行相似性比较。结果替米沙坦和氢氯噻嗪的线性范围分别为20~50μg·L-1和6~20μg·L-1;在以上四种介质中,以替米沙坦为参比,替米沙坦氢氯噻嗪片中氢氯噻嗪的f2大于50。结论该方法简便、准确,重复性好,可用于该片剂的溶出度测定;替米沙坦氢氯噻嗪片中替米沙坦和氢氯噻嗪具有相似的溶出特点。     

奥硝唑结肠定位片的制备及其体外释放度评价

目的制备奥硝唑结肠定位片,并评价其体外释药情况。方法制备奥硝唑含药片芯,依次包被隔离层、时滞层和肠溶层制备奥硝唑结肠定位片,并考察包衣片的体外释药情况。结果最佳包衣液处方为隔离层增重约1．0％,肠溶层增重3％,PVP用量为60％,Eudragit L100和Eudragit S100质量比为2：3;体外释放度研究表明,制得的奥硝唑结肠定位片在pH1．0 HCl溶液中未释药,在pH6．8的磷酸盐缓冲液中4h累积溶出小于5％,在pH7．6的磷酸盐缓冲液中2h释药大于90％。结论奥硝唑结肠定位片在体外具有结肠定位释放的特性,能达到治疗结肠部位疾病的目的。     

人血浆中病毒唑浓度的高效液相色谱测定法建立

目的建立高效液相色谱法测定人血浆中病毒唑的浓度。方法采用液-液提取法处理血浆样品,色谱柱为C18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为50mM（pH=3．23）的磷酸缓冲液和乙腈,流速为1．0ml·min^-1,紫外检测波长为235nm,柱温为25℃。结果血浆中内源性物质对样品测定无干扰。血浆中病毒唑浓度在0．08～10．0μg·m^-1范围内,线性关系良好（r=0．9971）,最低定量浓度为0．08μg·ml^-1,平均提取回收率为82．3％,日内、日间RSD分别小于7．2％和11％。结论本法简便、快速、准确,适用于病毒唑的血药浓度监测和药代动力学研究。     

高效液相色谱法测定头孢克肟咀嚼片的含量

目的建立头孢克肟咀嚼片高效液相色谱法含量测定方法。方法色谱柱为Eclipse XDB—C18柱（150mm×4．6mm,5μm）;流动相为四丁基氢氧化胺（取10％四丁基氢氧化铵溶液10mL,加水690mL,摇匀,用1．5mol·L^-1磷酸调节pH至7．0）．乙腈（70：30）;流速为08mL·min^-1;检测波长为288nm。结果头孢克肟咀嚼片的浓度在0．025mg·mL^-1-1．6mg·mL^-1范围内线性关系良好,回归方程Y=66902X＋1926．6,相关系数r=0．9993;精密度试验RSD％=0．1％;平均回收率为100．9％,RSD％=0．56％。结论本方法简便、准确、重复性好,适用于头孢克肟咀嚼片的含量测定。     

草珊瑚药材毛细管电泳指纹图谱条件探索

目的:本试验对草珊瑚药材指纹图谱电泳条件进行摸索。方法:主要对电泳缓冲液的组成,缓冲液pH值,分离电压,分离温度,进样量和添加剂进行考察。结果:草珊瑚药材毛细管指纹图谱的电泳条件为:电泳缓冲液7.5 mmol/L硼砂-磷酸二氢钠-8%乙腈-0.8 mmol/Lβ-环糊精(β-CD),进样量2.76 kPa(3s),分离电压17kV,柱温15℃,检测波长340 nm。结论:通过对电泳条件的全面摸索,得到草珊瑚药材毛细管电泳指纹图谱的最佳分离条件。     

兔血浆利福平的反相高效液相色谱分析及药代动力学研究

目的建立兔血浆利福平（rifampicin,RFP）反相高效液相色谱分析方法（reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC）。研究其静脉给药后兔体内血浆药代动力学参数。方法以Agilent ZORBAX XDB-C18柱（5μm,4.6mm×150mm）为分析柱,流动相为0.02mol·L^-1磷酸二氢钠缓冲液（PH7.0）∶甲醇=30∶70;流速1.0mL·min^-1;柱温：35℃,检测波长330nm。8只新西兰大白兔分别按RFP12mg·kg^-1静滴,RP-HPLC法检测血浆药物浓度。所得血药浓度数据经DAS软件拟合分析。结果 RFP在0.5～72μg·mL^-1血浆浓度范围内线性关系良好（r=0.99969）,平均提取回收率为99.72%,日内、日间变异系数（RSD=5）分别为2.6%～4.4%和2.2%～2.9%。静脉滴注RFP在兔体内药代动力学过程符合双隔室模型（权重系数为1/cc）,T1/2=（2.87±0.78）h,Cmax=（12.49±1.57）mg·L^-1,AUC（0-∞）=（50.05±14.50）mg·（h·L）^-1。结论本研究建立的兔血浆利福平RP-HPLC方法简便、准确、重现性好,可用于兔体内利福平血药浓度的测定,兔体内利福平药代动力学过程符合双隔室模型,体内药代谢动力学参数为利福平其它剂型的研究提供参考。