双歧杆菌脂磷壁酸抗氧化作用的实验研究

目的 通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸（LTA）对D-半乳糖致衰老小鼠氧化系统指标及Klotho基因表达变化的影响,探讨双歧杆菌LTA延缓衰老的分子机制。方法 在D-半乳糖诱导小鼠亚急性衰老的同时,每日腹腔注射双歧杆菌LTA。用试剂盒检测小鼠肾脏组织SOD活性及MDA的含量,同时用RT-PCR、Western blot及免疫组化方法检测各组小鼠肾脏组织Klotho基因表达情况。结果 与青年对照组小鼠比较,衰老模型组小鼠SOD活性显著下降,MDA含量显著升高,Klotho基因在转录和翻译水平表达均明显下降;而双歧杆菌LTA能显著逆转上述变化。结论 双歧杆菌LTA可能通过提高衰老小鼠的抗氧化活性及上调Klotho基因表达,从而发挥其延缓衰老的作用。     

双歧杆菌脂磷壁酸对衰老小鼠脑组织自由基代谢和器官指数的影响

目的　通过研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸 (LTA)对亚急性衰老小鼠脑组织自由基代谢及器官指数的影响 ,探讨双歧杆菌抗衰老的分子机理。方法　D 半乳糖诱导小鼠衰老的同时 ,连续注射双歧杆菌LTA ,检测小鼠器官指数、脑组织自由基代谢的变化。结果　模型组小鼠的脑指数、胸腺指数、肾指数显著降低 ,脾指数显著升高 ;脑组织的SOD、NO、NOS显著下降 ,MDA显著升高。而双歧杆菌LTA能显著逆转上述变化。结论　双歧杆菌LTA具有一定的抗衰老作用     

A组β溶血性链球菌脂磷壁酸抗体在风湿热诊断中的意义

目的 探讨A组β溶血性链球菌（乙链菌）脂磷壁酸（LTA）抗体在风湿热诊断中的意义。方法 用从A组乙链菌中提取的LTA作为抗原，采用斑点酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中的LTA抗体。结果 ①风湿性心脏炎组LTA－IgG抗体滴度水平高于静止期风湿性心脏病组、病毒性心肌炎组、非湿性心脏瓣膜病组，其他关节炎组的滴度水平；②活动期风湿热患者LTA－IgG抗体阳性率（64％）高于对照组的阳性率；③风湿性心脏炎患者的LTA－IgG抗体阳性率与外周血淋巴细胞促凝血活性（PCA）、抗链球菌壁多糖抗体（ASP）、抗DNAse－B、血沉、C反应蛋白的阳性率相接近，高于抗链球菌溶血素O(ASO)的阳性率。结论 血清LTA抗体在判断风湿热和风湿性心脏病风湿活动有较高的敏感性和一定的特异性。     

A组乙型链球菌脂磷壁酸的提取及其交叉反应性研究

目的 探讨A组乙型链球菌(iAS)脂磷壁酸(LTA)提取方法及其在风湿热发病过程中的意义。方法 用曲通114(TX—114)从GAS中提取LTA并用阴离子交换树脂二乙基氨基纤维素(DEAE—Sephace1)层析纯化；做LTA与人心瓣膜抗原吸附试验；分析LTA抗体的滴度与风湿性心脏病瓣膜病理结果的关系。结果 用TX—114提取并用阴离子交换树脂DEAE-Sephaccl层析纯化的LTA纯度较高，且保持了LTA的生物学活性；吸附抗体后的血清标本LTA抗体由阳性转为阴性，而末吸附抗体的血清标本LTA抗体仍为阳性，提示LTA与人心瓣膜之间存在交叉抗原性：血清LTA—IgG抗体阳性的4例患者中有3例病理切片发现心瓣膜或心肌间质有灶性炎症细胞浸润；血清LTA-IgG抗体阴性的6例病人均未见灶性炎症细胞浸润(Fiher精确概率=0．033)。结论 TX—114法是提取GAS的LTA的有效新方法；GAS的UFA与人心瓣膜之间存在交叉抗原性，LTA可能参与了风湿热的发病过程。     

双歧杆菌生物学作用研究进展

双歧杆菌(B ifidobacteria;Bb)是人和哺乳动物回肠末端及大肠内最主要的生理性菌群,是革兰氏阳性菌,形态多样,可呈V字、Y字、弯曲状、球拍状、棍棒状、球杆状甚至球状,最适pH为6.7~7.0,最适生长温度为36℃~38℃,无芽孢、荚膜或鞭毛,无运动性。一些双歧杆菌初代培养为分叉状(b i     

嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌治疗实验性结肠炎小鼠的作用及其机制

目的 评价青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌对实验性结肠炎小鼠模型的治疗效果并初步探讨其机制.方法 75只BABL/C小鼠均分为5组并给予相应处理,其中4组为实验组,分别为:青春双歧杆菌BF0624治疗组(B组)、嗜酸乳杆菌LT0637治疗组(L组)、水杨酸柳氮磺胺吡啶治疗组(S组)、0.9%氯化钠对照组(NS组);另设正常对照组(N组).实验组小鼠用4%葡聚糖硫酸钠造模,N组则饮用0.9%氯化钠溶液.实验期间每天记录动物体重、大便隐血情况,计算疾病活动指数(DAI).在第4、6、8天各组各处死5只小鼠,分离结肠,测量其长度,行病理组织学检查,逆转录PCR和Western印迹法分别测定热休克蛋白(HSP)70、糖皮质激素受体(GR)、白细胞介素(IL)-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α的基因和蛋白表达.结果 青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637能缓解实验性结肠炎小鼠的肠道炎性反应,第3天时L组小鼠DAI积分(1.8±0.4)低于NS组(2.8±1.0),从第5天开始各治疗组DAI均明显降低.B组、L组、S组第8天时结肠长度分别为(9.0±0.6)、(9.3±0.6)、(8.8±1.1)cm,均大于NS组[(8.1±0.6)cm,P值均＜0.05].第8天时L组小鼠结肠黏膜病理组织学明显改善(组织学评分6.0±1.0).B组和L组IL-10和HSP70表达上调,TNF-α表达下调,GR无变化.结论 青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637均对溃疡性结肠炎有治疗作用,益生菌的治疗机制可能与上调HSP70和IL-10以及下调TNF-α的表达有关.     

双歧杆菌对末端回肠黏膜的保护作用及其机制

目的 探讨实验性末端回肠炎TLR2、TLR4变化及双歧杆菌干预下的表达,研究双歧杆菌对末端回肠黏膜的保护作用及其机制.方法 清洁级SD雄性大鼠120只,随机分为6组:正常对照组(A)、模型对照组造模组(B)、缝线组(H)及双岐杆菌低剂量干预组(C)、中剂量干预组(D)、高剂量干预组(E);观察各组大鼠末端回肠黏膜的形态学变化,包括肉眼及病理学评分(histopathological score,HS),免疫组化法检测TLR2,TLR4的表达,进行统计学分析.结果 (1)肉眼及病理学观察,模型对照组与各组相比,炎症评分有显著性差异(P＜0.05).(2)造模组肠上皮细胞TLR2和TL R4的平均吸光度值较其余5组高(P＜0.05).(3)实验性末端回肠炎炎症程度与TLR2和TLR4相关性,末端回肠组织炎症越重,TLR2、TLR4的表达率越高.(4)双歧杆菌的保护作用,干预组TLR2和TLR4的平均吸光度值低于模型组(P＜0.05).结论 双歧杆菌可降低末端回肠的炎症反应,对实验性末端回肠炎的保护作用,可能是通过降低TLR2、TLR4的表达得以实现的.     

重组双歧杆菌研究进展

双歧杆菌是人和动物肠道内重要的益生菌。近年来,随着基因工程技术的发展,选择具有益生功能的双歧杆菌作为载体传递系统,在细菌、病毒、肿瘤、寄生虫等领域构建了一系列重组双歧杆菌,具有广泛的应用前景。     

双歧杆菌定量分析技术研究进展

传统细菌培养计数法是依据细菌表型特征来对双歧杆菌进行鉴别计数的,MTPY和BSM培养基是经常使用的双歧杆菌培养基．近年来包括点杂交、荧光原位杂交、荧光原位杂交结合流式细胞计数和荧光实时定量PCR技术在内的以核糖体及其编码基因核酸序列为鉴别基础的分子生物学技术被广泛用于双歧杆菌的定量定性分析,其中荧光原位杂交结合流式细胞计数和荧光实时定量PCR技术是目前较为理想的方法．     

肝移植患者肠道双歧杆菌的生态结构

目的探讨肝移植患者肠道双歧杆菌属细菌种群分子生态结构变化特点。方法采用荧光定量PCR技术分析健康人27例、肝硬化患者51例及肝移植后患者113例粪便双歧杆菌在属及种水平上的定性和定量变化。结果与健康人比较,肝移植及肝硬化患者肠道双歧杆菌总量、肠道假小链双歧杆菌或小链双歧杆菌组细菌及青春型双歧杆菌显著减少均P<0.01;肝移植患者肠道长双歧杆菌显著增多(P<0.01)。肝移植患者肠道假小链双歧杆菌或小链双歧杆菌、青春型双歧杆菌、短型双歧杆菌检出率显著低于健康人群均P<0.01。肝移植组患者肠道双歧杆菌多样性显著低于健康人群(X~2=20.1,P<0.01)。结论肝移植及肝硬化患者肠道双歧杆菌种群生态结构均存在显著异常,尤以假小链双歧杆菌或小链双歧杆菌组及青春型双歧杆菌的数量及检出率降低最为显著,肝移植组患者肠道双歧杆菌多样性显著低于健康人群。     

热诱导延迟损伤大鼠心肌细胞凋亡机理的探讨

目的探讨热诱导延迟过氧化氢(H2O2)造成大鼠心肌细胞凋亡机理。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生热休克蛋白70(HSP70)，用H2O2造成心肌细胞损伤。采用Western Blottmg、流式细胞仪、Bcl-2原位杂交、免疫组化检测Caspase-3等作为检测指标，观察心肌细胞损伤，以及HSP70对心肌细胞的保护作用。结果温度诱导后HSP70在胞浆中大量表达，保护组凋亡率显著低于损伤组，Bcl-2和Caspase-3在损伤组大量表达。结论HSP70可延迟细胞凋亡，对心肌细胞具有保护作用。     

茶多酚对H_2O_2诱导HL-60细胞癌基因表达的影响

目的　观察茶多酚对 H2 O2 诱导 HL- 60细胞癌基因表达的影响 ,同时观察细胞 DNA片段化程度的变化。方法　用二苯胺法对小片段 DNA进行分析 ,流式细胞仪观察癌基因表达变化。结果　 H2 O2 打断 DNA的能力与其作用浓度及时间有关 ,H2 O2 可使细胞 c- fos,c- jun,c- myc,bcl- 2 ,p53表达发生变化 ,茶多酚可以影响 H2 O2 诱导的 DNA损伤及癌基因表达。结论　茶多酚在一定浓度下 ,可以抑制 H2 O2 诱导的 DNA氧化损伤 ,并抑制癌基因表达的变化。高浓度茶多酚可以增强 H2 O2 的效应     

Bifidobacterium lipoteichoic acid and false ELISA reactivity in aspergillus antigen detection

A major difficulty with the detection of circulating galactomannan, a cell-wall polysaccharide released by Aspergillus sp during growth, in the serodiagnosis of invasive aspergillosis is the occurrence of false-positive ELISA results, especially in neonates and infants. On the basis of molecule similarity, we postulate that a lipoteichoic acid of Bifidobacterium sp can act as epitope for the monoclonal antibody used in the ELISA. The neonatal gut is heavily colonised with Bifidobacterium sp and these bacteria or their lipoteichoic acid might cause ELISA reactivity with serum after translocation because of immaturity of the intestinal mucosa. If our hypothesis is correct, we might find a method to discriminate between false-positive and true-positive ELISA results and thereby prevent unnecessary pre-emptive treatment of patients.     

7-二氟甲氧基金雀异黄素对H_2O_2诱导血管内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用

目的 探讨7-二氟甲氧基金雀异黄素对氧化应激诱导血管内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用及其机制.方法 荧光分光光度计检测单核细胞与血管内皮细胞的黏附,酶联免疫吸附法检测E选择素和细胞间黏附分子1等黏附分子的释放,Western blotting检测P38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平.结果 H2O2处理血管内皮细胞24 h后,内皮细胞-单核细胞的黏附率显著增加,内皮细胞E选择素和细胞间黏附分子1的释放增加;加入7-二氟甲氧基金雀异黄素后,血管内皮细胞-单核细胞的黏附率以及内皮细胞释放E选择素和细胞间黏附分子1等黏附分子呈浓度依赖性减少.H2O2处理血管内皮细胞24 h后,可显著激活P38丝裂原活化蛋白激酶,这一作用可被7-二氟甲氧基金雀异黄素所抑制.给予P38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制荆SB203580亦可阻断H2O2诱导的内皮细胞-单核细胞黏附及内皮细胞E选择素和细胞间黏附分子1的释放.结论 7-二氟甲氧基金雀异黄素对氧化应激诱导的血管内皮细胞与单核细胞黏附具有拮抗作用,其机制可能与其抑制P38丝裂原活化蛋白激酶的激活进而阻断内皮细胞释放黏附分子E选择素和细胞间黏附分子1有关.     

Structure-based mechanism of lipoteichoic acid synthesis by Staphylococcus aureus LtaS

Staphylococcus aureus synthesizes polyglycerol-phosphate lipoteichoic acid (LTA) from phosphatidylglycerol. LtaS, a predicted membrane protein with 5 N-terminal transmembrane helices followed by a large extracellular part (eLtaS), is required for staphylococcal growth and LTA synthesis. Here, we report the first crystal structure of the eLtaS domain at 1.2-Å resolution and show that it assumes a sulfatase-like fold with an α/β core and a C-terminal part composed of 4 anti-parallel β-strands and a long α-helix. Overlaying eLtaS with sulfatase structures identified active site residues, which were confirmed by alanine substitution mutagenesis and in vivo enzyme function assays. The cocrystal structure with glycerol-phosphate and the coordination of a Mn²⁺ cation allowed us to propose a reaction mechanism, whereby the active site threonine of LtaS functions as nucleophile for phosphatidylglycerol hydrolysis and formation of a covalent threonine–glycerolphosphate intermediate. These results will aid in the development of LtaS-specific inhibitors for S. aureus and many other Gram-positive pathogens.     

外阴阴道念珠菌病阴道乳酸杆菌的分布及作用

目的 通过对外阴阴道念珠菌病（vulvovaginal candidiasis，VVC）患者与正常妇女阴道乳酸杆菌优势菌种和产H2O2能力的比较，初步探讨乳酸杆菌在VVC发病中的作用。方法 以66例VVC患者为实验组，50例正常妇女为对照组。1．将阴道分泌物接种在MRS乳酸杆菌琼脂培养基上，在CO2环境下培养，采用微量生化试验鉴定乳酸杆菌；2．将乳酸杆菌接种在H2O2鉴定培养基上，根据显色鉴定是否产H2O2。结果1．两组在乳酸杆菌的分布上无差别（P〉0．05），均以嗜酸乳酸杆菌、詹氏乳酸杆菌和卷曲乳酸杆菌为优势菌种；2．对照组H202阳性乳酸杆菌的分离率明显高于实验组，分别为23例（46％）和6例（9．09％），有显著性差异（P〈0．01）；3．两组内三种优势乳酸杆菌产酸能力相似（P〉0．05），但两组间相比，VvC组嗜酸乳酸杆菌和卷曲乳酸杆菌产H202能力较对照组下降（P〈0．05）。结论 1．VVC患者与正常妇女阴道内乳酸杆菌菌种分布相似；患VVC后阴道嗜酸乳酸杆菌和卷曲乳酸杆菌产酸能力下降；2．VVC的发生与H2O2阳性乳酸杆菌的数量有关。     

茶多酚对HL-60细胞氧化损伤时DNA双链残余率的影响

观察茶多酚对ＨＬ－６０细胞氧化损伤时ＤＮＡ双链残余率的影响。方法采用ＤＮＡ功光旋旋法对ＤＮＡ双链残余率进行检测。结果过氧化氢可以对细胞ＤＮＡ造成损伤,细胞浓度为１．５＊１０＾９／Ｌ时,过氧化氢浓度在０．１－０．５ｍｍｏｌ／Ｌ时与ＤＮＡ双链残余率有良好的线性关系。     

过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞Caspase-3表达及超微结构改变的影响

目的探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡、Caspase-3表达和细胞超微结构的影响。方法RPMI1640添加谷氨酰胺组即体外培养细粒棘球蚴原头节,用5mmol/L H2O2诱导8h,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL法)检测原头节细胞凋亡情况,用过氧化物酶标记链霉卵白素(SP)染色半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)。在透射电镜下观察原头节细胞超微结构的变化。结果过氧化氢诱导原头节细胞凋亡细胞增加,caspase-3表达增加,电镜观察原头节细胞异染色质增加,部分细胞染色质异常浓缩呈现凋亡细胞征象。结论H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡,且caspase-3参与原头节细胞的凋亡。     

内吗啡肽对过氧化氢诱导的大鼠胰岛损伤的保护作用

目的 研究过氧化氢(H2O2)对胰岛的损伤及内吗啡肽(EMs)对这种损伤的保护作用.方法 成年雄性Wistar大鼠18只,体质量200～300 g,体外分离、纯化和培养Wistar大鼠胰岛,双硫腙(DyTZ)染色鉴定,锥虫蓝染色检测细胞活力,葡萄糖刺激实验检测胰岛生物活性.四唑蓝(MTT)分析不同浓度的H2O2对胰岛的...     

Differential effects of oxidative stress on hepatic endothelial and Kupffer cell eicosanoid release in response to endothelin-1

OBJECTIVE: The vasoconstrictor endothelin-1 can induce vasomodulators release like nitric oxide in the liver. Here the authors explored whether endothelin-1 can stimulate endothelial and Kupffer cells release of other vasomodulators under normal and stress conditions. METHODS: Cells were cultured for 24 h and treated with H2O2 (25 microM) for 6 h and subsequently with endothelin-1 (10 nM) for 10 min. Eicosanoid release was assessed in the media by enzyme immunoassay. RESULTS: Endothelin-1 mediated cPLA2 phosphorylation and increased prostaglandin (PG) I2, PGE2 and thromboxane A2 (TXA2) release in endothelial cells while it only increased TXA2 in Kupffer cells. H2O2 significantly increased PGI2, PGE2 and TXA2 in endothelial cells through an upregulation of cyclooxygenase-2, thromboxane synthase A2, and phosphorylation of cPLA2. Endothelin-1-induced PGI2, PGE2, and TXA2 release in endothelial cells were inhibited by H2O2 correlating with the absence of further cPLA2 phosphorylation. In Kupffer cells, H2O2 only increased TXA2 synthesis and further endothelin-1 stimulation of TXA2 was possible through a higher increase in cPLA2. CONCLUSION: These results indicate that under normal conditions endothelial cells play a pivotal role in liver microcirculation regulation. Oxidative stress not only disrupts the basal balance of vasomodulators in the liver but also affects endothelin-1-induced effects in both Kupffer cells and endothelial cells.