苯并(a)芘、预热及其联合作用对人胚肺细胞HSP70合成的影响

用Western blot方法探讨苯并(a)芘、预热及其联合作用对人胚肺(HEL)二倍体细胞热应激蛋白70(HSP70)合成的影响.结果表明未经S9活化的HEL细胞,在不同剂量的BaP处理后,可轻度诱导HSP70的表达;经S9活化的BaP作用HEL细胞3 h,HSP70表达抑制,呈剂量-反应关系在较高浓度染毒时抑制作用表现明显(P＜0.05);预热应激的HEL细胞HSP70表达增加,但BaP染毒3 h后HSP70表达并不规律,具体表现为低剂量(10～50)μmol/L诱导,而高剂量(50～200)μmol/L呈抑制趋势.结果提示,体外未经代谢活化的BaP可以作为应激原诱导热休克反应;HSP70表达降低可能是BaP代谢活化产物作用的结果,预热诱导HSP70表达增加很可能掩盖了低浓度时BaP对HSP70合成的抑制作用.     

苯并[a]芘作用下HSP70、P53在人胚肺细胞中定位及共表达的研究

目的:探讨苯并[a]芘(BaP)作用下HSP70、P53在人胚肺细胞(HEL)中的定位及共表达。方法:培养正常人胚肺二倍体细胞,分别以0,10,50,100,200μmol·L-1BaP染毒3h,用双重免疫荧光组织化学法和激光扫描共聚焦显微镜检观察HSP70、P53的表达。结果:HEL细胞经不同浓度的BaP染毒3h后,HSP70在胞浆、胞核均有表达,随BaP染毒浓度的增加,逐渐由细胞浆表达向核转移;而P53表达在胞浆、胞核均呈增加趋势(除200μmol·L-1BaP外),胞核中P53蛋白表达水平略高于胞浆;小于50μmol·L-1BaP处理的HEL细胞,HSP70和P53以细胞浆共表达为主,而BaP浓度大于50μmol·L-1时,主要表现为胞核共表达。结论:BaP染毒的人胚肺细胞HSP70、P53的分布及定位方式具有浓度依赖的趋势,表现为随BaP染毒浓度的增加,HSP70与P53由胞浆共表达转变胞核共表达。     

苯并(a)芘对小鼠肺组织细胞色素P450 1A表达的影响

目的研究苯并（a）芘（BaP）作用下小鼠肺组织细胞色素P450 1A（CYP1A）的表达和肺组织病理形态学改变。方法昆明种雄性小鼠56只，随机分为2组（28只／组），BaP染毒组（4个亚组，7只／亚组），分别以0、0．32、1．58、7．89mg／kg体重腹腔注射BaP，每周染毒4d，持续7周；预热染毒组（4个亚组，7只／亚组），每次实验前39℃，预热2h，再用染毒组相同的剂量和时间至染毒结束。其中0mg／kg体重BaP为植物油溶剂；采用Western blot法检测小鼠肺组织CYP1A表达水平，光镜观察肺组织病理学变化。结果0．32mg／kg体重BaP染毒时，小鼠肺组织CYP1A表达增加，BaP剂量继续增加，CYP1A表达反而降低；预热应激组CYP1A表达有相同的变化趋势，但比相同剂量的BaP染毒组表达水平高；BaP染毒后小鼠肺组织有炎性增生的表现。结论低剂量BaP染毒诱导小鼠肺组织CYP1A表达增加，高剂量BaP染毒则抑制CYP1A表达。     

热应激蛋白70对苯所致骨髓干细胞活性损伤的保护研究

目的 探讨热应激蛋白70（HSP70）对苯所致骨髓干细胞活性损伤的保护作用。方法 取小鼠骨髓干细胞，体外33℃，5％CO2孵箱中孵育过夜。随机分为：普通组，以不同浓度（0mmol/L,2mmol/L，10mmol/L，50mmol/L）的苯染毒2h；热应激组，细胞40℃受热1h，再以苯浓度0mmol/L，2mmol/L，10mmol/L，50mmol/L染毒2h。应用四唑盐（MTT）比色试验检测骨髓干细胞活性。结果 随着受热时间延长，HSP70表达增加，接受预热应激（40℃受热，33℃恢复1h）后的细胞经不同浓度（2mmol/L，10mmol/L）苯染毒2h，其细胞活性较未接受预热应激的普通组细胞高。结论 HSP70的增加可能与热应激后苯所致骨髓细胞毒性减轻密切相关。     

槲皮素对热休克诱导人肝癌HepG2细胞HSP70和P-gp表达的影响

目的：研究热休克诱导人肝癌HepG22细胞热休克蛋白70（HSP70）和P－糖蛋白（P-gp)随时间的表达规律，并研究应用槲皮素（Qu)对二表达的抑制效应。方法：（1）使用恒温水浴法42℃热休克HepG2细胞90min；（2）采用免疫细胞化学法，流式细胞术检测热休克前，热休克后2，4，8，12，24h时HSP70和P－gp的表达规律，以及热休克前1h应用槲皮素在热后4h二的表达。结果：（1）42℃热休克诱导HepG2细胞，HSP70表达增多，“核内迁移”，阳性细胞数升高，4h达到最高（11．47％），较对照组（6．64％）升高近2倍（P＜0．005），24h后回落到低值，细胞核内表达减少；P－gp阳性细胞数随HSP70升高后升高，12h达到最高值（96．31％），较对照组（33．95）升高近3倍（P＜0．005），24h回落到低值，同时，细胞内低水平的HSP70表达在细胞质中，少部分在细胞核内。（2）热休克前应用槲皮素能有效抑制热2休克诱导HSP70和P-gp的过量表达，槲皮素并能有效抑制二内在表达，以100－200μmol/L Qu作用明显（P＜0．005），呈浓度剂量效应。结论：（1）热休克可能诱导HepG2细胞HSP70和P－gp的过量表达，P－gp与HSP70具有相关关系；（2）槲皮素可能在转录水平上抑制HepG2细胞HSP70和P－gp的合成。     

HSP70在化学性缺氧诱导毛细胞损伤中的作用

目的：探讨热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）在氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导听细胞损伤中的作用。方法：应用CoCl2处理HEI-OC1听细胞,建立化学性缺氧诱导耳蜗外毛细胞损伤的体外模型。细胞计数试剂盒-8（cell count kit 8,CCK-8）比色法检测细胞存活率,免疫印迹法（Western blot）检测HSP70的蛋白表达。结果：在150-750μmol/L浓度范围内,不同浓度的CoCl2处理听细胞24 h可引起明显的细胞毒性,使细胞存活率呈剂量依赖性地降低。300μmol/L CoCl2作用听细胞30-240 min可时间依赖性地上调HSP70的蛋白表达。HSP70抑制剂槲皮素（quercetin,Quer）可在蛋白水平下调CoCl2引起的听细胞内HSP70表达增加。Quer通过抑制HSP70的表达可加重CoCl2诱导的听细胞缺氧性损伤。结论：适应性HSP70表达增加可保护听细胞对抗缺氧诱导的损伤。     

热应激对A549细胞HSP70、XPA修复酶表达的影响

目的研究热应激作用下A549细胞热休克蛋白70（HSP70）和XPA修复酶的表达规律及其可能的意义。方法利用免疫印迹方法（Western blot）检测A549细胞中HSP70、XPA修复酶的表达水平。结果A549细胞接受不同温度（39、41、42、43℃）处理2h后,HSP70表达水平随温度的增高而逐渐增加,并在42℃应激时表达最高,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）;细胞接受42℃应激1～4h,HSP70表达水平随应激时间的增加而递增,与对照组相比,细胞在42℃应激2～4h时HSP70表达显著上调（P〈0.05）。两处理组细胞XPA修复酶表达水平均无明显变化（P〉0.05）。结论高温能诱导HSP70的表达,并呈一定的温度-效应和时间-效应关系,而对XPA修复酶未见明显影响。     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法不同浓度（0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L）的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0μmol/L BaP）升高,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。W estern b lotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5μmol/L BaP组最高（P〈0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0μmol/L BaP组活力最高（P〈0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。 更多还原     

精氨酸对热暴露小鼠肝脏HSP70表达的免疫组化研究

用免疫组织化学方法研究了热习服小鼠42℃热暴露50min恢复期0－24h肝脏热休克蛋白70（HSP70）表达的动态变化及L－精氨酸干预的热处理小鼠42℃热暴露50min后恢复期8h肝脏HSP70的表达。结果：（1）HSP70主要定位于肝脏胞质，细胞核中较少；（2）HSP70在热应激后8－12h达高峰；（3）精氨酸对热处理小鼠肝脏HSP70的表达有增强作用。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素通过活化过氧化物酶体增殖因子激活受体γ诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

目的探讨5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素（ADFMChR）通过活化过氧化物酶体增殖因子激活受体（PPARγ）诱导人卵巢癌细胞凋亡作用的分子机制。方法采用MTT法测定ADFMChR对卵巢癌（CoC1）细胞系细胞增殖抑制作用;碘化丙啶染色流式细胞术（FCM）检测ADFMChR诱导CoC1细胞凋亡程度;DNA琼脂糖凝胶电泳证实ADFMChR诱导CoC1细胞凋亡作用。Western印迹检测ADFMChR对CoC1细胞PPA脚,NF-κB,Bcl-2,Bax蛋白表达的影响。结果MTY法显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制CoC1细胞增殖作用,IC50值为7．76μmol／L;FCM分析ADFMChR呈剂量依赖性诱导CoC1细胞凋亡,ADFMChR（10．0,30．0μmol／L）处理CoC1细胞48h,凋亡率分别为33．07％和73．70％,均高于相应浓度白杨素诱导凋亡率（21．70％、40．00％）;ADFMChR（30μmol／L）处理CoC1细胞48h的DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带,加用PPARγ／阻断剂（GW9662）后条带消失;Western印迹分析ADFMChR以剂量依赖方式上调CoC1细胞PPA脚和Bax蛋白表达,下调NF-κB和Bcl-2蛋白表达。结论ADFMChR通过活化PPARκ抑制NF-κB和Bcl-2表达,上调Bax,诱导CoC1细胞凋亡。     

汉坦病毒感染体外诱导VeroE6细胞热休克蛋白的表达

目的 研究汉坦病毒（HTV）感染后对细胞应激基因表达的影响。方法 用HTV感染其敏感细胞株VeroE6细胞,用Western印迹杂交、RNA斑点杂交及原位杂交分别分析热休克蛋白（HSP）的表达及编码HSP的mRNA水平的变化。结果 病毒感染后细胞内HSP70及热休克蛋白mRNA水平均有增高,而HSP65及HSP27的表达则无明显改变。结论 HTYV感染可以直接诱导HSP70的高表达,可能在保护细胞免受病毒感染损伤方面具有一定意义。     

代谢活化系统在人细胞转化模型中的应用

【目的】探讨不同的代谢活化系统在人细胞转化模型中潜在的应用价值。【方法】在永生化人肝细胞L02中导入第12密码子突变的H-RAS癌基因（L02-R细胞）,使其处于恶性转化前的易感状态。选择具有代表性的间接致癌物黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）作用于永生化和转化前期细胞株,采用三种代谢系统：高表达代谢酶P450 CYP1A2,低剂量底物诱导和加入经典的大鼠S9代谢辅助系统,通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验来比较在不同的代谢活化系统下,间接致癌物诱导细胞转化的效能。【结果】蛋白印迹验证H-Ras稳定高表达的转基因细胞株构建成功。通过Ames试验,蛋白印记和CYP1A2酶活性等方法比较三种代谢系统酶活性。在未加代谢系统的条件下,经AFB1染毒后第17周L02-R细胞发生转化,而对照组细胞L02-V在染毒20周未能发生转化。而加入S9代谢系统时,AFB1诱导L02-R细胞在第8周发生转化,比未加代谢系统缩短了9周;经低剂量0.1μmol/LAFB1诱导和高表达CYP1A2均使L02-R的转化间期缩短6周,于第11周发生转化。【结论】三种代谢系统都能够促进间接致癌物AFB1的代谢活化,缩短细胞转化的时间,提高细胞转化效率。与传统的S9代谢活化系统相比,低剂量诱导作为新的代谢活化的方法在细胞转化试验中有着良好的应用前景。     

c-Jun氨基末端激酶活化在三丁基锡诱导凋亡中的作用及机制

目的：研究c-jun氨基末端激酶（JNK）参与三丁基锡（Tributyltin, TBT）诱导正常人羊膜细胞FL凋亡的分子机制。方法：FL细胞经不同浓度TBT染毒1h后,PI/Annexin V双染色法检测FL细胞凋亡率。Western blot检测FL细胞JNK的磷酸化水平,Bax定位、Bcl-2的磷酸化水平及总Bax和Bcl-2表达水平。结果：与对照组相比,4μmol/L和6μmol/L的TBT染毒剂量组细胞凋亡率明显升高,2μmol/L～6μmol/L剂量组JNK磷酸化水平升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。JNK特异抑制剂SP600125明显降低TBT诱导的FL细胞凋亡率,而JNK特异抑制剂SP600125对Bax定位、Bcl-2的磷酸化水平及总的Bax和Bcl-2表达量无影响。结论：JNK的活化是TBT诱导FL细胞凋亡的重要因素,但JNK介导凋亡的途径并非通过调控凋亡相关因子Bax和Bcl-2。     

hexarelin的细胞保护作用研究

目的研究生长素释放肽hexarelin是否具有细胞保护作用。方法利用H2O2作用于RAW264.7巨噬细胞作为细胞氧化应激性损伤模型,以细胞活性(MTT法检测)、热休克蛋白70(HSP70)表达水平(Western blotting法检测)等指标判断细胞损伤及修复情况,观察不同浓度hexarelin预处理不同时间对上述细胞氧化应激性损伤的保护作用。结果与对照组相比,H2O2造成了明显的细胞氧化应激性损伤,细胞活性明显下降,HSP70蛋白表达水平似有升高,但与对照组相比无统计学差异;hexarelin预处理可剂量依赖性地减轻由H2O2所致的细胞活性下降,且这种作用在hexarelin 10-5mol/L、预处理2h对细胞的保护作用最强。单独用hexarelin预处理细胞后,HSP70的表达即明显升高。给予hexarelin预处理,再用H2O2刺激细胞,HSP70的水平进一步升高。结论 Hexarelin具有抗氧化应激和细胞保护作用,这种作用与其诱导HSP70的表达有关。     

HSP70与热应激诱导胸腺细胞凋亡关系的研究

目的 :探讨体外热应激诱导胸腺细胞凋亡与细胞表达HSP 70的关系。方法 :用流式细胞术检测体外热应激后再培养的胸腺细胞不同时间的凋亡率及HSP 70表达阳性率。结果 :体外热应激后 ,胸腺细胞的凋亡率在 0h、6h、12h随时间延长而增高 ,但 2 4h后凋亡率不再增高 ;体外热应激胸腺细胞HSP 70表达阳性率比对照组明显增高 ,在 6h阳性率最高 ,12h、2 4h阳性率逐渐下降 ,至 2 4h ,已明显低于 6hHSP 70的阳性率 (P <0 .0 5 )。结论 :HSP 70是调节体外热应激诱导胸腺细胞凋亡的重要分子之一。     

热休克蛋白70对苯致小鼠骨髓细胞毒作用的研究

目的分析热应激蛋白70(heat stress or stress proteins 70,Hsp70)在苯对小鼠骨髓细胞毒性中的作用,为进一步阐明Hsp70的生物学意义和苯的防治提供科学依据.方法经过原代细胞培养后,细胞分组为: 染毒组 , 以0、2、10、50 mmol/ L浓度的苯染毒2 h ; 热应激染毒组,细胞经40℃受热1 h , 37℃恢复1 h ,再以0、2、10、50 mmol/ L浓度的苯染毒2 h.检测Hsp70表达时的光密度,使用流式细胞术观察Hsp70表达水平和小鼠骨髓细胞凋亡程度的关系.结果小鼠骨髓细胞受热应激30 min后, Hsp70轻度增加, 而应激60,90 min后, Hsp70明显升高.热应激后Hsp70表达增加;热应激组细胞除0剂量染毒组外, 其他剂量组细胞发生凋亡百分比均高于染毒组.热应激后Hsp70表达增加.结论 Hsp70的增加可以提供一定程度的毒物耐受能力或细胞保护功能,热应激后细胞Hsp70的增加不能抑制2,10 mmol/L浓度苯所致小鼠骨髓细胞凋亡的发生.     

脂多糖诱导滑膜细胞产生一氧化氮及木黄酮对其的抑制作用

目的：研究脂多糖（LPS）诱导滑膜细胞产生一氧化氮（NO）及酪氨酸激酶（PTK）抑制剂木黄酮对其的抑制作用。方法：LPS或LPS＋木黄酮体外刺激滑膜细胞，用Griess方法检测上清中NO的含量。结果：LPS能诱导滑膜细胞产生NO，此作用具有时间（0－72h)和剂量依赖性（0．01－100μg/ml）；木黄酮（6．25－50μmol/L）剂量依赖性地抑制LPS诱导滑膜细胞产生NO，50μmol/L木黄酮抑制率达到50．22％。结论：木黄酮能剂量依赖性地抑制LPS诱导滑膜细胞产生NO。     

拘束冷应激对大鼠肾脏热休克蛋白表达和血清皮质醇含量的动态影响

目的：研究拘束冷应激对大鼠肾脏组织热休克蛋白（heat shock protein 70,HSP70）表达和血清中皮质醇（Cortisol,CORT）含量的动态影响及可能的机制。方法：选取50日龄清洁级大鼠77只,随机分为7组,即0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h。采用拘束冷应激法,应激相应时间后,用免疫组织化学方法观察大鼠肾脏组织HSP70的表达,并检测血清中CORT含量。结果：血清中的CORT浓度在1.5 h呈现最高值,其余各时点变化不明显。光镜下可见HSP70在肾小球毛细血管内皮细胞的胞核及肾小管上皮细胞的胞核和胞浆中均有表达。肾脏中HSP70的表达首先呈增加的趋势,1.5～2.5 h HSP70持续高表达（P〈0.01）,之后下降（P〈0.05）。结论：适当强度的拘束冷应激能诱导肾脏组织中HSP70的合成,并且随着时间的延长而增加,但过度的拘束冷应激则可能降低或阻断肾脏HSP70的表达。     

不同应激方式与时程对大鼠海马CA3区HSP70表达及血清皮质醇含量的影响

目的：探讨不同应激方式与时程对大鼠海马CA3区热休克蛋白70（HSP70）表达及血清皮质醇含量的影响.方法：采用慢性限制活动应激（CRS）作为可预知性应激动物模型,每天随机给予不同轻度应激刺激建立慢性不可预知性应激（CMS）动物模型,观察两组动物海马CA3区HSP70的表达及血清皮质醇含量.结果：CMS大鼠海马神经细胞开始出现损伤的时间较CRS晚,损伤程度较CRS轻.CRS较CMS大鼠海马CA3区HSP70表达逐渐增强,且与对照组比较有统计学差异（P＜0.01）.应激组大鼠血清皮质醇较对照组高,动态观察显示应激早期达到高峰.结论：CRS大鼠海马的损伤及HSP70的表达均较CMS明显.不同的应激方式下大鼠HSP70细胞保护效应较损伤效应有所延迟,提示应激前诱导HSP70表达可能会起到预防细胞死亡的作用.     

热休克蛋白70在肝缺血再灌注中的作用

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）在肝缺血再灌注中的作用。方法：阅读国内外有关文献并进行综述。结果：HSP70对肝缺血再灌注具有保护作用。在细胞接受应激刺激后,HSP70表达丰度最高,因此HSP70最受关注。结论：HSP70是目前发现的具有重要保护作用的一类蛋白质,经缺血预处理等的情况下,可诱导组织细胞大量表达,并可能对肝缺血再灌注损伤产生保护作用。