喉癌细胞增殖活性与组织学恶性度及预后关系的研究

应用增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）单克隆抗体ＰＣ１０免疫组化法、ＤＮＡ图像分析法及核分裂像计数法对７０例喉鳞状细胞癌的增殖活性进行检测。结果显示，王种方法的检测结果具有较好的一致性。细胞增殖活性与喉癌的组织学分化程度及患者的五年生存率有密切关系（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１）。结果表明，检测肿瘤细胞增殖活性对于判断喉癌的恶性度及估计患者的预后具有重要的意义。     

喉癌病人血清中白细胞介素－2受体和腺苷脱氢酶检测

本文应用双抗体夹心法检测喉癌病人血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ），同时还应用次氯酸钠测氨法检测血清中腺苷脱氢酶（ＡＤＡ）活性，检测结果表明，喉癌病人ｓＩＬ－２Ｒ水平明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。差异非常显著，而腺苷脱氢酶活性则低于对照组（Ｐ＜０．０１），尤其是ｓＩＬ２Ｒ水平与喉癌分型、分期有关。     

喉癌患者细胞免疫状态观察

为了观察喉癌患者细胞免疫状态，应用免疫组化技术对７０例喉癌患者的外周血Ｔ淋巴细胞亚群（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４／ＣＤ８）测定，并观察肿瘤组织中的浸润Ｔ淋巴细胞。结果表明：喉癌患者ＣＤ３、ＣＤ４明显低于健康人（Ｐ＜０．０５），ＣＤ８明显高于健康人（Ｐ＜０．０１），ＣＤ４／ＣＤ８明显低于健康人（Ｐ＜０．０１）。晚期喉癌患者ＣＤ４显著低于早期患者（Ｐ＜０．０１），外周血Ｔ淋巴细胞亚群检测与观察肿瘤组织中的Ｔ淋巴细胞浸润程度所表现细胞免疫状态是一致的。     

增殖细胞核抗原在喉上皮癌前病变中的表达及意义

用免疫组化技术对１１例喉上皮单纯性增生（ＳＨＥ），３２例非典型性增生（ＡＨＥ）及４２例喉鳞状细胞癌（ＬＳＣＣ）的增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达进行了原位检测。结果表明；在ＳＨＥ、ＡＨＥ及ＬＳＣＣ中，ＰＣＮＡ指数分别为９．５７％、２７．３３％、６８．０５％，差异极有显著性意义（Ｐ＜０．００１）。在轻、中、重度ＡＨＥ中，ＰＣＮＡ指数分别为１３．７９％、３０．８４％、３９．９４％，差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）。提示ＰＣＮＡ表达程度与非典型性增生程度密切相关，是反映细胞增殖状态的生物标志，ＰＣＮＡ组化研究有助于认识喉癌前病变的本质，发展趋势及喉癌的早期诊断。     

晚期喉癌边缘DNA含量和增殖细胞核抗原表达

目的探讨晚期喉癌边缘ＤＮＡ含量和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达与喉癌手术预后的关系。方法通过ＰＣＮＡ表达和ＤＮＡ含量检测，对３４例晚期喉癌边缘进行观察。结果肿瘤边缘１．０、０．５、０ｃｍ处粘膜，ＰＣＮＡ指数分别为８．６２％、１７．７６％和５０．３２％。ＤＮＡ指数分别为０．９８、１．０８２和１．４３６。统计学分析，１．０、０．５ｃｍ处粘膜与０ｃｍ处粘膜差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论中、重度非典型增生的上皮在分裂，增殖等生物学行为方面已与轻度非典型增生和单纯性增生的上皮细胞不同，手术切缘应在中度非典型性增生的粘膜上皮以外，即０．５ｃｍ以外。     

喉癌中P_53基因突变

本文采用ＰＣＲ技术对４例正常喉组织、１０例正常白细胞、３３例喉癌组织，进行Ｐ５３基因的５－６和７－８外显子检测，结果发现喉癌中Ｐ５３基因突变率为６９．６９％（２３／３３）（Ｐ＜０．０１），其中５－６外显子突变率为２４．２４％（８１３３），７８外显子突变率为４５．４５％（１５／３３）。各期喉癌Ｐ５３基因突变率无明显差异（Ｐ＞０．０５）。研究表明Ｐ５３基因的突变是喉癌发生发展过程中的一个重要机制。     

晚期喉癌边缘DNA含量和增殖细胞核抗原表达

目的 探讨晚期喉癌边缘ＤＮＡ含量和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达与喉癌手术预后的关系。方法 通过ＰＣＮＡ表达和ＤＮＡ含量检测，对３４例晚期喉癌边缘进行观察。结果 肿瘤边缘１．０、０．５、０ｃｍ处粘膜，ＰＣＮＡ指数分别为８．６２％，１７．７６％和５０．３２％。ＤＮＡ指数分别为０．９８、１．０８２和１．４３６。统计学分析１．０、０．５ｃｍ处粘膜０ｃｍ处粘膜差异有显著性（Ｐ〈０．０１）。结论 中、重度非     

成纤维细胞生长因子与鼻息肉上皮细胞增殖

为探讨成纤维细胞生长因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＦＧＦ）在鼻息肉组织中的表达及其与鼻息肉上皮细胞增殖之间的关系,将２６例鼻息肉标本及１４例下鼻甲标本行ＦＧＦ和增殖细胞抗原（ｐｒｏ－ｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的免疫组化染色,光镜观察,结果发现ＰＣＮＡ在鼻息肉组的阳性率（７８．６％）显著高于下鼻甲组（０．０％）,ＦＧＦ在鼻息肉组的上皮及腺体的阳性表达率明显高于下鼻甲组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．００１）,且二者的表达具有显著正相关（Ｐ＜０．０１）。我们推测ＦＧＦ对鼻息肉上皮及腺体细胞的增殖具有促进作用并参与鼻息肉的形成。     

喉癌下咽癌患者一级亲属染色体对致突变物的敏感性观察

为探讨遗传因素与喉癌下咽癌的关系，检测了几组不同人群淋巴细胞染色体对致突变物诱发畸变的敏感性，结果：喉癌组、下咽癌组及对照组每细胞染色单体断裂率（ｂ／ｃ值）分别为０．６１±０．２７，０．６６±０．３１和０．２８±０．１２。喉癌和下咽癌的一级亲属组（亲属组）的ｂ／ｃ值为０．４５±０．２６。把健康一级亲属的喉癌、下咽癌患者从喉癌组和下咽癌组中抽出另列为患者组，其ｂ／ｃ值为０．５９±０．２９。亲属组与患者组比较ｂ／ｃ值差别无显著性（Ｐ＞０．０５），但明显高于健康对照组（Ｐ＜０．００１），明显低于喉癌组和下咽癌组（Ｐ＜０．０１）。结果显示喉癌和下咽癌患者及其健康一级亲属对致突变物敏感性均高于健康人，因此喉癌下咽癌患者的一级亲属应列为患癌高风险人群，注意预防癌肿的发生。     

喉癌患者血清唾液酸测定的临床意义

采用比色法对６１例喉鳞状细胞癌、２５例喉及颈部良性病变患者和４０例正常人的血清唾液酸（ＳＡ）含量进行测定。结果表明，喉癌患者血清ＳＡ含量高于良性病变患者和正常人，差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。以大于正常人血清ＳＡ含量的ｘ＋２ｓ为阳性，喉癌患者血清ＳＡ阳性率为６７．５％，良性疾病患者阳性率为１６．０％，差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。此外，血清ＳＡ含量与喉癌患者的临床分期及预后密切相关。提     

喉癌患者血清γ－谷氨酰转肽酶活性测定

测定喉癌术前患者３６例、喉部良性病变患者４０例和正常对照者６１名的血清γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）活性，结果前组与后二组间差异有极显著性（Ｐ＜０．０１）；而后二组间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。证明测定喉癌患者血清γ－ＧＴ活性，可作为喉癌诊断的辅助指标。通过对９例喉癌患者治疗后追踪，观察其酶活性动态变化，证明有助于观察疗效、监测肿瘤有无复发或转移。     

ＭｉＲ-１５０调控 Ｎａｎｏｇ对鼻咽癌侧群细胞增殖、侵袭的影响

目的　检测 ＭｉＲ-１５０在鼻咽癌侧群（ＳＰ）细胞中的表达,并探讨其是否通过调控靶基因 Ｎａｎｏｇ促进鼻咽癌侧群细胞的增殖与侵袭。方法　采用 ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ实时定量荧光聚合酶链式反应（ｑＲＴ ＰＣＲ）法检测 ＭｉＲ-１５０及Ｎａｎｏｇ在鼻咽癌侧群细胞和非侧群（ＮＳＰ）细胞中的表达情况;并通过瞬时转染 ｍｉＲ-１５０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ至 ＳＰ细胞、ｍｉＲ-１５０ｍｉｍｉｃ至 ＮＳＰ细胞中,ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测 Ｎａｎｏｇ的表达情况;进一步通过 ＣＣＫ-８实验、Ｔｒａｎｓｗａｌｌ实验检测鼻咽癌侧群细胞增殖、侵袭能力的变化,数据处理采用两独立样本 ｔ检验。结果　ｑＲＴ ＰＣＲ检测结果表明,ＭｉＲ-１５０在 ＳＰ细胞（０．９９±０．０５）较 ＮＳＰ细胞（０．５９±０．０２）中表达水平升高（ｔ＝８．０６,Ｐ＜０．０００１）,Ｎａｎｏｇ在鼻咽癌ＳＰ细胞（０．９９±０．４７）较 ＮＳＰ细胞（０．４９±０．０５）表达升高（ｔ＝７．５,Ｐ＜０．０００１）;ＳＰ细胞转染 ＭｉＲ-１５０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（０．４６±０．０３）较对照组（１．０１±０．０７）Ｎａｎｏｇ表达下调（ｔ＝６．８５,Ｐ＝０．０００５）、ＣＣＫ ８实验示增殖受抑制、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验示侵袭能力减弱（１１４．４０±５．１４ｖｓ５７．３０±４．２９,ｔ＝８．５,Ｐ＜０．０００１）;ＮＳＰ细胞转染 ＭｉＲ-１５０ｍｉｍｉｃ（１．０１±０．０６）组较对照组（０．４８±０．０４）Ｎａｎｏｇ表达上调（ｔ＝６．１６,Ｐ＝０．０００８）,增殖及侵袭能力增强。结论　鼻咽癌 ＳＰ细胞中ＭｉＲ-１５０与 Ｎａｎｏｇ呈高表达,ＭｉＲ-１５０可通过调控靶基因 Ｎａｎｏｇ促进鼻咽癌侧群细胞的增殖与侵袭。     

喉癌患者多药耐药相关蛋白基因的表达及其临床意义

目的：研究多药耐药相关蛋白基因（ＭＲＰ ｍＲＮＡ）的表达与喉癌患者临床病理特征之间的关系。方法：应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，检测了３５例喉癌患者ＭＲＰ ｍＲＮＡ的表达。结果：喉癌组织中ＭＲＰ ｍＲＮＡ阳性表达率为４５．７％（１６／３５），其阳性表达强度在晚期肿瘤中明显增高（Ｐ〈０．０５），且与肿瘤颈淋巴结转移明显相关（Ｐ〈０．０１），结论：ＭＲＰ ｍＲＮＡ在喉癌中的表达，不仅提示     

喉癌患者血清γ—谷氨酰转肽酶活性测定

测定喉癌术前患者３６例、喉部良性病变患者４０例和正常对照者６１名的血清γ－谷氨转肽酶活性，结果前组与后二组间差异有极显著性（Ｐ＜０．０１）；而后二组间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。证明测定喉癌患者血清γ－ＧＴ活性，可作为喉癌诊断的辅助指标。通过对９例喉癌患者治疗后追踪，观察期酶活性动态变化，证明有助于观察疗效、监测肿瘤有无复发或转移。     

喉癌患者红细胞免疫功能的检测

为观察喉癌患者的红细胞免疫功能，对３０例喉癌患者进行红细胞Ｃ＿３ｂ受体花环率（Ｃ＿３ｂ受体花环率）和红细胞免疫复合物花环率（ＩＣ花环率）检测。结果表明，喉癌患者Ｃ＿３ｂ受体花环率加ＩＣ花环率均较声带息肉患者和正常对照组降低（Ｐ＜０．０１）；喉癌患者术后２０天左右Ｃ＿３ｂ受体花环率和ＩＣ花环率较术前无明显改变（Ｐ＞０．０５）。结果提示喉癌患者红细胞免疫功能低下。     

喉癌患者血清肿瘤坏死因子水平及其临床意义

本实验通过对正常人及喉癌病人血清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）活性的测定，发现两者之间差异显著（Ｐ＜０．０１），喉癌患者的血清ＴＮＦ明显高于正常人，这一结果表明：ＴＮＦ的产生与肿瘤直接相关，动态观察血清中ＴＮＦ活性变化；可作为推测病人病情变化的血清学指标。     

喉癌及癌旁组织中脂质过氧化物及超氧化物歧化酶的研究

本文应用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法对３２例喉癌及癌旁组织，１２例正常喉组织中自由基清除酶———超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性和自由基代谢产物过氧化脂质（ＬＰＯ）含量测定。检测结果表明，喉癌组织中ＳＯＤ活性及ＬＰＯ含量均高于癌旁组织及正常对照组，统计学处理Ｐ＜０．０１，差异非常显著，故认为喉癌的发生与自由基的关系较为密切。     

Myc基因家族在喉癌中的异常扩增及其意义

目的探讨Ｍｙｃ基因家族在喉癌中的异常扩增及其临床意义。方法应用ＰＣＲ非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳激光扫描技术检测了３２例喉癌组织、１２例癌旁组织和６例正常组织。结果正常组织细胞Ｍｙｃ基因无扩增，３２例喉癌中４７％（１５／３２）有Ｃｍｙｃ和Ｌｍｙｃ扩增，４１％（１３／３２）有Ｎｍｙｃ基因扩增。Ｍｙｃ基因扩增率与年龄、性别、喉癌临床分期及分化程度无关（Ｐ＞０．０５），但有淋巴结转移的患者的Ｎｍｙｃ扩增率明显高于无淋巴结转移者（Ｐ＜０．０１）。结论Ｍｙｃ基因３个成员异常扩增是喉癌发生的原因之一，Ｎｍｙｃ扩增在喉癌淋巴结转移过程中可能起正性调控作用。     

喉癌中P_（53）蛋白过度表达

为证实喉癌的发生发展与抗癌基因Ｐ＿（５３）有关，采用单克隆抗体免疫荧光技术对２５例喉癌标本进行了Ｐ（５３）基因表达蛋白定量测定，结果显示，２５例喉癌中有１７例荧光染色阳性，即喉癌中Ｐ（５３）蛋白过度表达为６８．０％（１７／２５），与正常组织相比差异显著（Ｐ＜０．０１），吝期喉癌Ｐ（５３）蛋白表达情况无明显差异（Ｐ＞０．０５）。这说明Ｐ（５３）基因异常导致表达蛋白的堆积是喉癌发生发展中的重要机制之一。     

两种免疫调节剂辅助LAK细胞杀伤喉癌细胞的体外研究

为探讨如何提高白细胞介素－２（ＩＬ－２）／ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的抗肿瘤作用，应用免疫调节剂分枝杆菌多糖（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＭＰＳ）或ＣＤ３单克隆抗体协同ＩＬ－２诱导的健康人外周血淋巴细胞来源的ＬＡＫ细胞在体外扩增，测定其对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性。实验结果：①不同免疫调节剂对ＬＡＫ细胞扩增的影响：实验组三组细胞于体外扩增均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；ＭＰＳ组或ＣＤ３组细胞的扩增倍数比单纯应用ＩＬ－２组为高（Ｐ＜０．０１）；其中扩增倍数最高者为ＭＰＳ组，与ＣＤ３组相比，Ｐ＜０．０５。②不同免疫调节剂诱导的ＬＡＫ细胞对喉癌ＨＥＰ－２细胞的杀伤活性比较：在培养一周时，实验组三组对ＨＥＰ－２细胞的杀伤活性均高于对照组，以ＣＤ３组及ＭＰＳ组杀伤活性最高，其杀伤活性均为５５．５％；于培养第二周，ＣＤ３组杀伤ＨＥＰ－２细胞活性仍较高，其他实验组细胞杀伤活性均明显下降。结论：免疫调节剂ＭＰＳ和ＣＤ３单克隆抗体均可通过增强ＬＡＫ细胞体外增殖和杀瘤活性而提高肿瘤过继免疫治疗效果。