双醋酸荧光素－碘化丙啶双染色法鉴别豚鼠外毛细胞活性

为提供一种准确判断单离细胞活性的方法，采用双醋酸荧光素（ＦＤＡ）－碘化丙啶（ＰＩ）双染色，荧光显微镜观察，鉴别了豚鼠耳蜗单个外毛细胞的活性。在激发光下染色后的活细胞显绿色，失活细胞核呈红色。在室温下计数５只豚鼠（１０侧听泡）在断头１、２、３、５和７ｈ后的单离细胞平均存活百分率分别为８５．０％、７８．０％、７０．０％、２３．５％和０。本方法为一种鉴别细胞活性的客观可靠的方法。     

丫啶橙-碘化丙啶双染色法观察大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性

目的探讨大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性鉴别的实验观察方法。方法采用丫啶橙-碘化丙啶(acri-dine orange-propidiumiodide,AO/PI)双染色法,荧光显微镜观察,检测经组织培养后新生大鼠耳蜗基底膜毛细胞的活性。结果在激发光下染色后的活细胞核是亮绿色,失活细胞核呈橙红色。当染液pH为6.5,AO浓度为0.1‰时,细胞染色不足,浓度超过1.5‰时,出现“过染”,最适染色浓度为1‰;当1‰AO的pH值低于5.0时毛细胞蒙上红晕,背景模糊,当pH值高于7.4时,不能区分死亡细胞与活细胞,pH值6.5~7.0时,染色效果最好。结论用pH为6.8的1‰AO、0.1‰PI染色,可清晰分辨死/活细胞。     

TUNEL与碘化丙啶双染检测耳蜗毛细胞的损伤

目的应用TUNEL与PI（碘化丙啶）双染法检测耳蜗毛细胞损伤。方法听力正常豚鼠经庆大霉素致聋后，做耳蜗基底膜铺片，用TUNEL与PI双染检测耳蜗毛细胞损伤的情况。结果在核固缩、核碎裂及部分核肿胀的细胞中TUNEL染色为阳性．细胞核正常及部分核肿胀的细胞中TUNEL染色为阴性。所有有核细胞均能被PI染色。结论通过TUNEL与PI双染可以确定TUNEL染色为阳性的细胞为凋亡的细胞，而核肿胀的细胞中TUNEL染色为阴性者可能为胀亡细胞。