食品中李斯特氏菌分离株的致病基因检测

１９９６－１９９７年我们对我省的七类食品共３００份进行了李斯特氏菌的污染调查，用ＧＢ４７８９．３０－９４的方法并分离出李斯特氏菌６株，用ＰＣＲ技术对分离菌株中李斯特氏菌的两种主要致病因子李氏溶血素 Ｏ（Ｌｉｓｔｅｒｉｏｌｙｓｉｎ Ｏ， Ｈｌｙ）和内化素基因     

食品中李斯特氏菌分离株的致病基因检测

1996～1997年我们对广东省的6类食品共309份分离出的16株李斯特氏菌作致病基因检测.现将结果报告如下.     

套式PCR快速检测单增李斯特氏菌

根据GenBank数据库的单增李斯特氏菌iap基因设计两对引物,建立了套式PCR快速检测单增李斯特氏菌的方法。两对引物分别扩增出约1500bp和500bp片段,与预期大小一致。对菌液、模拟样品的检测表明,本方法能有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对PCR检验的干扰作用。套式PCR方法具有很好的特异性;灵敏性实验检测极限为101CFU／ml;人工污染猪肉检测极限为103CFU／ml;可在7h内完成检测,很适宜于进出口食品中单增李斯特氏菌的快速检测。     

PCR检测食品中单核细胞增生性李斯特菌毒力基因

目的 检测食品中分离的单核细胞增生性李斯特茵毒力基因携带率。方法 应用GB4789．30-94单核细胞增生性李斯特菌的检验方法分离菌株，采用PCR检测李斯特菌的两种致病因子。结果 从2000．2001年我省采集的272份食品中分离出35株单核细胞增生性李斯特菌。其中11株含有内化素基因(Internalin，Inl)和李斯特菌溶血素O基因(Listerialysin0，Hly)，1株仅含有内化素基因；其它23株两种基因均为阴性。结论 我省存在发生李斯特菌食物中毒的潜在危险。建立PCR方法检测李斯特菌毒力基因对快速诊断单核细胞增生性李斯特菌有现实意义。     

志贺氏菌iPaH基因PCR法检测结果

从业人员健康体检和临床腹泻病人都要做大便三线培养。但这种传统的细菌培养及生化鉴定方法 ,步骤较烦琐 ,出结果时间较长 ,血清凝集还有交叉凝集现象影响结果的判断。随着ＰＣＲ技术的发展和推广应用 ,我们用ＰＣＲ技术来验证和鉴定志贺氏菌。本文通过ＰＣＲ法检测ｉＰａＨ基因来验证肠道致菌病的属、种 ,以确定病原体。材料与方法1　菌株来源　菌株由市卫生防疫站于 1998年 5～ 10月份 ,从市一医院和儿童医院的腹泻患者中分离的菌株 ,小部分菌株由西湖区防疫站于 2 0 0 0年 4月份从西溪卫生院及本站的健康体检人群中分离得到。2　引物　引…     

食品中李斯特氏菌研究进展

自 2 0世纪 40年代 ,单核细胞增生李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ)在病原学上作为一种人畜共患和食源性疾病的致病菌已得到世界范围普遍的公认。由于其可导致人和动物患脑膜炎、败血症、流产等 ,病死率高达 30 %～ 70 % ,由单核细胞增生李斯特氏菌污染食品 ,引起食源性李斯特氏菌病 (Ｆｏｏｄ ｂｏｒｎｅＬｉｓｔｅｒｉｏｓｉｓ) [1] ,在国内外已引起广泛的关注 ,并开展相应的研究 ,现将李斯特氏菌在食品等环境中的分布、与食源性疾病的关系、对环境的抵抗力、检验方法和李斯特氏菌病预防等研究情况综述如下。1　…     

食源性李斯特氏菌感染症与食品卫生

近年来李斯特氏菌感染症在世界各国有很多报导,也引起食品卫生界的广范重视,为了探讨李斯特氏菌在食品卫生上的意义及危害程度,在我国饮食条件下造成重大危害的可能性,提出防止大规模感染症发生的措施,本文对近年来李斯特氏菌的生物学特性,流行病学等综述介绍。     

李斯特氏菌快速检测研究进展

李斯特菌是一类十分重要的人畜共患病的病原体,其中尤以单核细胞增生李斯特菌最为重要。本菌可引起多种畜禽和人类的严重疾病,人畜感染后,主要表现为脑膜炎,败血症变化和血液中单核细胞增多;家禽感染后主要表现为脑膜炎,坏死性心肌炎及坏死性肝炎。畜禽感染后除骡、驴病死率较低外,马、牛、羊、鸡、兔、猪和犬等均有较高的病死     

李斯特氏菌食物中毒

李斯特氏菌食物中毒是由单核细菌李斯特氏菌引起的,自１９２６年Ｍａｒｒａｙ等从兔和豚鼠的肝脏中分离现该菌以来,有关该菌报道不断。尤其是该菌被证实为食源性致病菌的十年以来,在欧美日等发达国家报道逐年呈上升趋势,其危害程度甚至超过沙门氏菌食物中毒［１］。李斯特氏菌食物中毒能引起人和动物的脑膜炎、败血症等,死亡率达高３０以上［２］。迄今为止,我国尚无人类李斯特氏菌食物中毒的报道,人散在病例和动物食物中毒已见报道［３,４］,由于该菌在自然界存在较为广泛,且其具有独特的生理特性,极易引起食物中毒的暴发流行…     

河南省食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染状况的调查

单核细胞增生李斯特氏菌是一种严重的人畜共患和食品病原菌，可导致人和动物患脑膜炎、败血症、流产等，死亡率高达３０％～７０％〔１〕。由该菌污染食品，引起食源性李斯特氏菌病（ＦｏｏｄｂｏｒｎｅＬｉｓｔｅｒｉｏｓｉｓ），在国际上已引起广泛关注〔２〕。ＷＨＯ和...     

李斯特菌属荧光定量PCR检测方法的建立

目的采用荧光定量PCR技术,建立可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌的快速检测方法。方法选取单增李斯特菌hlyM基因和李斯特菌属23Sr DNA基因为靶基因,分别设计引物和探针,在构建二者的阳性重组质粒基础上,对李斯特菌属和单增李斯特菌进行荧光定量PCR的检测。结果建立的李斯特菌属和单增李斯特菌单重荧光定量PCR检测方法与双重荧光定量PCR的检测方法敏感度一致,分别为18.6拷贝/μl和23.2拷贝/μl。结论建立的双重荧光定量PCR方法可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌。     

福州市食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染调查

单核细胞增生李斯特氏菌(以下简称L.m)是一种严重的人畜普遍易感染的致病菌,可导致人和动物患脑膜炎、败血症、流产等,病死率高达30%～70%.该菌在自然界中广泛存在,土壤是主要的贮主,各种野生和家养动物以及健康人群被认为是该菌的携带者.Gray和killinger从37种不同动物和17种禽类中分离到本菌^[1].家庭环境和多种食品均可被污染.我国于1994年制定了食品中L.m检验方法(GB4789-94).     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法研究

[目的 ]　建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。　 [方法 ]　以miniVIDAS仪结合API系统 ,将该法与传统方法进行比较。　 [结果 ]　该方法能检出 <10个 /mL模拟样品中的单核细胞增生李斯特氏菌 ,与食品中常见的细菌无交叉反应 ,能对非单核细胞增生李斯特氏菌作出正确鉴定。在 4天内能作完全鉴定结果。对 2 2 6份实样的检测 ,检出率为 11.5 %。　 [结论 ]　以miniVIDAS仪结合API系统建立的方法具有特异性好、灵敏度高、快速简便的特点 ,是一种较好的检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法     

应用Taqman实时PCR法检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌

目的建立敏感快速的检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌的实时PCR方法。方法以hlyA基因为靶标,建立并验证实时PCR法的特异性。选用单核细胞增生李斯特菌CMCC 54004,制备不同浓度的纯菌液,用实时PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率。进行人工染菌实验,染菌量分别为每25g猪肉样本1.3×100、1.3×101、1.3×102、1.3×103、1.3×104、1.3×105和1.3×106CFU。分别在增菌0、4、8、12、18、24、30、36和46 h取1 ml培养液,提取DNA进行实时PCR检测,并用PCR和传统方法进行检测,比较3种方法检测的敏感性和特异性。采集24份市售猪肉样本,用这3种方法进行检测,进一步比较三者的阳性检出率。结果建立的实时PCR法特异性好,对纯菌液的检出限为1.3×103CFU/ml。人工染菌样本增菌24 h后,实时PCR检出限1.3 CFU/25 g,PCR及传统方法达到这一检出限需要增菌46 h。根据增菌24 h的检测结果,建立实时PCR样本标准曲线。24份猪肉样本,实时PCR检出17份阳性,阳性率70.83%(17/24),与PCR和传统方法的阳性率一致。根据所得的样本标准曲线,对检测样本进行定量分析,确定了阳性样本中初始含量菌。结论所建立的实时PCR具有快速简便、敏感特异等优点,整个操作可在27 h内完成,适用于猪肉中单核细胞增生李斯特菌的快速定量检测。     

单抗夹心ELISA检测李斯特氏菌方法的建立及其初步应用

本研究以李斯特氏菌属特异单抗为核心试剂,建立了快速检测该菌的单抗夹心ELISA试验,该法敏感、特异,且检测时间缩短为2～4天,对李斯特氏菌的最低检测限为10~scfu/ml。经对实际样品的初步检测结果显示,具有重要应用价值。     

单增李斯特氏菌核酸层析检测试剂盒在食品检测中的应用

目的研究单增李斯特氏菌核酸层析检测试剂盒的准确性和特异性。方法从市场采集自然样品70份,经过2步增菌后,用核酸层析检测试剂盒进行检测,同时用传统方法进行验证。结果 70份样品试剂盒检测阳性3份,阴性67份,而传统方法检测阳性4份,其中1份阳性样品试剂盒检测为阴性。试剂盒检测的准确率达到98.60%。特异性试验表明该剂盒检测标准菌株特异性好,与常见的食源性致病菌均无交叉反应。结论单增李斯特氏菌核酸层析检测层析试剂盒特异性好,检测准确率高,能够满足食品中单增李斯特氏菌检测的需要。     

多重-巢式PCR检测食品中单增李斯特菌研究

〔目的〕建立多重—巢式PCR联合检测体系快速检测食品中的单增李斯特菌。〔方法〕针对单增李斯特菌中多个稳定的特异性基因(hlyA、plcB、prfAi、ap),设计并筛选出6对引物用于多重PCR、2对引物用于巢式PCR,组成多重—巢式PCR联合检测单增李斯特菌,并对珠海地区6类冷冻冷藏食品中单增李斯特菌的带菌情况进行了初步调查。〔结果〕建立的多重—巢式PCR联合检测体系特异性良好,多重PCR的灵敏度达到1×102cfu/ml,巢式PCR的灵敏度达到1×101cfu/ml。在检测的3439份样品中,单增李斯特菌阳性率达22.39%。〔结论〕该检测体系具有快速可靠、灵敏准确及特异性好的特点,有效缩短了检验周期,从传统的14d缩短到2d。对珠海地区6类冷冻冷藏食品中单增李斯特菌的带菌情况有了一定了解。     

李斯特氏菌食物中毒及防治对策

李斯特氏菌属 (Ｌｉｓｔｅｒｉａ)有 8个菌种 ,即单核细胞增生李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ)、伊凡若夫李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｉｖａｎｏｖｉｉ)、无害李斯氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｉｎｎｏｃｕａ)、韦尔西梅氏李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｗｅｌｓｈｉｍｅｒｉ)、西李杰氏李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｓｅｅｌｉｇｅｒ ｉ)、脱硝化李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ)、灰色李斯特氏菌(Ｌｉｓｔｅｒｉａｇｒａｙｉ)、缪雷氏李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｕｒｒａｙｉ) [1] 。引…     

食品中分离的李斯特氏菌的致病基因分析

１９９６—１９９７年作者对全国１２个省市的７类食品共３７４６份进行了李斯特氏菌的污染调查,共分离出李斯特氏菌１６５株。用ＰＣＲ技术对分离菌株中李斯特氏菌的２种主要致病因子李氏溶血素Ｏ和内化素的基因进行了检测,其中５７株仅有内化素基因,２７株同时具有内化素基因和李氏溶血素Ｏ基因。两种致病基因均未检出的共有８１株。本研究说明判断单增李氏菌的主要指标是小鼠毒力试验阳性而不是其溶血反应,同时检测溶血素Ｏ和内化素２种基因对单增李氏菌有鉴别意义。