人胎盘型GST-π抗体对大肠腺癌和腺瘤免疫组化标志的意义

应用人胎盘型谷胱甘肽-S转移酶(GST-π)抗体,以免疫组化PAP法检测85例大肠癌、34例腺瘤、9例腺瘤癌变组织GST-π活性。结果显示:27例正常大肠粘膜GST-π均呈阴性。大肠癌组织中GST-π呈阳性者74例,总阳性率为87.05%;绒毛状腺癌和高分化管状腺癌阳性率为93.33%,未分化癌和粘液腺癌阳性率只达77.27%。视为癌前疾病的异型增生腺瘤34例,总阳性率为64.7%,轻度和中～重度异型增生阳性率分别为42.85%和80%,腺瘤癌变9例为阳性。结果表明GST-π抗体免疫组化的检测,可作为大肠癌早期诊断一项新的较灵敏的指标。GST-π在大肠癌组织中的含量及分布除标志分泌、释放的不同外,可能有助于判断大肠癌的预后。     

细胞凋亡与谷胱甘肽－S－转移酶、谷胱甘肽－S－转移酶－π关系的研究

经ＣＳＣ、ＤＥＮ、ＭＮＵ等致癌物转化和未转化的凋亡Ｒａｔ－１细胞谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴｓ）、谷胱甘肽－Ｓ－转移酶－π（ＧＳＴ－π）活性均较其相应的未凋亡细胞显著增高（Ｐ＜０．０５～０．０１）。经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实，上述凋亡细胞ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平也增高，这可能是导致ＧＳＴｓ和ＧＳＴ－π活性增高的主要原因。由于ＧＳＴｓ可催化谷胱甘肽（ＧＳＨ）与众多亲电子物质结合而有重要解毒功能，故推测培养细胞因营养匮乏引起凋亡时，其自身代谢产生的有毒物质无法及时被清除而积聚，可能启动了细胞自身的防御体系，行使自我保卫功能，从而刺激ＧＳＴｓ活性增高。     

肝星状细胞活化增殖和凋亡及奥曲肽的影响

背景：肝星状细胞的活化增殖在肝硬化的发生发展中起关键作用,临床广泛应用的生长抑素衍生物奥曲肽有多种生物学效应,但它对肝星状细胞的活化增殖及凋亡有何影响尚不清楚。 目的：观察奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响。 方法：实验选用肝星状细胞株HSC-T6的传代细胞。MTT法检测不同浓度(1×10^-2,1×10^-3,1×10^-4,1×10^-5,1×10^-6,0 mmol/L)奥曲肽干预24,48,72 h对肝星状细胞增殖的影响;TUNEL凋亡检测试剂盒荧光显微镜方法检测不同浓度(0,1×10^-5,1×10^-2 mmol/L)奥曲肽干预24 h对肝星状细胞凋亡的影响。 结果与结论：奥曲肽浓度越高、作用时间越长对培养的肝星状细胞增殖抑制越明显,呈现浓度和时间依赖性;奥曲肽对培养的肝星状细胞凋亡随奥曲肽浓度的增加而增加。结果可见奥曲肽对培养的肝星状细胞增殖抑制呈浓度 (0~10^-2 mmol/L)和时间(24,48,72 h)依赖性,并能诱发其凋亡。     

肠道肿瘤和增生性病变中GST-π与p53蛋白表达的关系

目的：探讨胎盘型谷胱甘肽S转移酶（GST－π）与p53蛋白在肠道肿瘤和增生性病变中表达及相互关系。方法：应用免疫组化S－P法检测33例肠腺癌,15例肠腺瘤伴不典型增生,24例肠腺瘤和10例肠息肉病变组织中GST－π与p53蛋白的表达情况。结果：33例腺癌中GST－π与p53蛋白的阳性表达率高达87．88％和84．55％,与其他几组相比差异有显著性（P＜0．01）,腺瘤伴不典型增生组的表达率也较高为80％和66．67％。结论：在肠道良性增生性病变的早期就可以有GST－π与p53蛋白的表达,随着细胞增生的明显及不典型增生到恶性变,表达率显著增高,说明GST－π与p53蛋白的表达在肠道病变中与细胞的异型性呈正相关,它们可作为腺癌及癌前病变的一个标志物。     

卡博替尼、克唑替尼和奥西替尼 对小鼠髓源抑制性细胞亚型和凋亡的影响

目的探讨卡博替尼、克唑替尼和奥斯替尼(AZD9291)对小鼠骨髓或脾脏源性抑制细胞(MDSCs)亚群比例、凋亡及增殖的影响。方法免疫磁珠法分离BALB/c小鼠(雄性)骨髓G-MDSCs和M-MDSCs,分别加入卡博替尼(0.01、0.1、0.3和0.9μmol/L)、克唑替尼(0.2、2、20和200μg/mL)或AZD9291(0.01、0.1、1和10μmol/L)培养24 h,采用流式细胞术(FCM)检测3种靶向药物对MDSCs亚型的影响,CCK-8法检测MDSCs增殖;流式细胞分选仪分选小鼠骨髓Gr-1~+CD11b~+细胞,检测Gr-1~+CD11b~+细胞凋亡。结果克唑替尼处理组骨髓粒细胞型MDSCs(G-MDSCs)、单核细胞型MDSCs(M-MDSCs)比例均下降(P0.05);卡博替尼处理组脾脏G-MDSCs比例下降(P0.05);卡博替尼、克唑替尼处理骨髓MDSCs后早期凋亡比例增加(P0.05),AZD9291处理的MDSCs凋亡比例无明显变化。结论卡博替尼和克唑替尼可能通过诱导MDSCs凋亡降低MDSCs比例。     

三种反义c-myc RNA对HL-60细胞凋亡的影响

目的 :了解和比较不同的反义c myc基因导入对HL 60细胞凋亡的影响。方法 :将分别载有c myc第 1、2和3外显子反义片段的三种重组逆转录病毒表达载体aM 1、aM 2和aM3导入体外培养的HL 60 ,并观察基因稳定表达对靶细胞凋亡的影响。结果 :(1 )光镜下aM2、aM 3组细胞核质比例明显缩小 ,出现凋亡小体等凋亡的形态特征 ;(2 )透射电镜下显示反义载体的导入使细胞胞质中出现了大量的自噬体和自噬泡 ,该现象的出现以aM1组为主 ;(3 )反义c myc导入引起HL 60中ACP酶活性增高 (aM1 >aM 3 >aM2 ) ,尤其是aM 1组 ,约提高了 86%。 (4 )流式细胞仪显示aM 2和aM3的瞬时和稳定表达都诱使HL 60凋亡率增高、细胞体积缩小、核质比减小 ,aM 1则无上述凋亡诱导作用。结论 :aM 2、aM3的导入促使HL 60出现了凋亡样改变 ,而aM 1则主要使细胞出现自噬。     

粘着斑激酶反义寡核苷酸对平滑肌细胞粘附迁移和凋亡的影响

为研究粘着斑激酶反义寡核苷酸对平滑肌细胞粘附迁移和凋亡的调控作用 ,采用纤粘连蛋白 (fibronectin ,FN)诱导平滑肌细胞 (smoothmusclecells,SMCs)粘附迁移并活化粘着斑激酶 (focaladhesionkinase ,FAK) ,将FAK反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotides,ODNs)经脂质体转染细胞 ,观察对FAK磷酸化、细胞粘附迁移以及凋亡的影响。结果表明 ,FN在有效地诱导SMCs粘附迁移并活化FAK的同时 ,凋亡细胞数显著低于对照 ,(8 96± 1 2 ) %和(2 3 45± 9 6 ) %。脂质体可有效地介导ODNs转染 ,转染效率为 (86 7± 4 5 ) % ,FAK磷酸化表达量明显减少 ,不同浓度FN组 5～ 6 0mg L ,细胞铺展率减少 17 89%～ 2 7 6 7% ,10、2 0、40和 6 0mg LFN组迁移细胞数也分别显著减少2 3 2 6 %、2 1 6 3%、19 31%、17 88% ,凋亡细胞数比对照高 33 5 7% (P <0 0 5 ) ,也显著高于FN组。据此可以认为FAK活化及其介导的信号转导通路是细胞外基质诱导SMC粘附迁移并抑制其凋亡的重要因素。反义FAKODNs可有效地对此进行调控     

谷胱甘肽S-转移酶π对维吾尔族非小细胞肺癌化疗耐药性的影响

目的 探讨维吾尔族非小细胞肺癌（NSCLC）患者肿瘤组织中谷胱甘肽S-转移酶π（GST-π）的表达对铂类为基础的标准化疗方案化疗耐药性的影响.方法 收集2009年1月至2012年6月新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的维吾尔族Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者94例,免疫组化检测化疗前肿瘤组织标本GST-π的表达.患者给予2～4周期铂类为基础的标准方案化疗,然后对化疗后患者的反应率（RR）、总生存期（OS）及肿瘤进展时间（TTP）进行评价.结果 免疫组化显示维吾尔族NSCLC患者肿瘤组织GST-π的阳性率为57.4％（54/94）.GST-π阳性患者与GST-π阴性患者比较,吸烟史与病理类型的差异有统计学意义（均P＜0.05）.GST-π阳性患者化疗后RR、OS及TTP分别为3.7％（2/54）、（203.25±103.65）d、（112.86±67.35）d,GST-π阴性患者分别为12.5％（5/40）、（463.23±204.25）d、（197.56±103.25）d,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 GST-π表达差异可能是维吾尔族NSCLC患者对铂类为基础的标准化疗方案化疗耐药性差别的重要因素.     

结直肠癌组织中P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ和p53的协同表达

目的：探讨结直肠癌组织中P－糖蛋白（P-gp）、拓扑异构酶（Topo-Ⅱ）、谷甘胱肽－S－转移酶（GST-π）和p53的表达与病理组织学分级,临床分期、淋巴结转移和生存率的相关性及其协同表达的意义。方法：用免疫组化方法检测136例术前未进行化疗的结直肠癌组织中P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ和p53的表达。结果：P-gp、GST-π和p53的表达与病理组织学分级、淋巴结转移和临床分期无关（P＞0．05）,与生存率明显相关（P＜0．01）,Topo-Ⅱ的表达与本组临床病理参数均无相关性。结论：应用免疫组化检测结直肠癌组织中P-gp、GST-π、和p53的表达,对肿瘤的化疗药物选择和预后判断具有显著的临床意义。     

拓扑替康对HeLa细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察拓扑替康(TPT)对宫颈癌Hele细胞增殖与凋亡的影响.方法:在相同放疗条件下,采用MTT法检测不同浓度TPT对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞周期,TUNEL法检测TPT对HeLa细胞凋亡的影响.结果:随着TPT浓度升高(0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、升至0.4 mg/L),HeLa细胞的增殖抑制率逐渐升高,细胞的凋亡率依次增加.结论:TPT能抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖并促进其凋亡.     

Taxol对宫颈癌U14细胞增殖、凋亡及α2,6-SA和ST6Gal mRNA表达的影响

目的:研究泰素(Taxol)对小鼠宫颈癌U14细胞株增殖、凋亡以及α2,6-唾液酸(SA)和α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal)mRNA表达的影响,为进一步探讨宫颈癌Taxol化疗机制提供新思路。方法:Taxol处理U14细胞后,MTT检测Taxol对U14细胞的IC_(50)值。流式细胞术检测细胞α2,6-SA、细胞凋亡相关因子(Bcl-2、Bax、caspase8和caspase 3)、凋亡率和细胞周期改变。qPCR检测ST6Gal1和ST6Gal2 mRNA的表达。结果:与对照组相比,Taxol对U14细胞有明显的抑制作用,减弱α2,6-SA荧光强度,上调Bax表达,下调Bcl-2表达,降低Bcl-2/Bax比值,并增强caspase 8和caspase 3活性;Taxol处理显著增加U14细胞凋亡率及S期细胞和G2/M期细胞比率,此外还下调ST6Gal1 mRNA表达。结论:α2,6-SA和ST6Gal可能参与了Taxol对U14细胞细胞周期和凋亡调控的多重作用。     

谷胱甘肽对染锰大鼠生精细胞凋亡与增殖的影响

目的:研究谷胱甘肽(GSH)对染锰大鼠生精细胞凋亡与增殖的作用及机制。方法:雄性SD大鼠48只随机分为6组,各组给锰途径为腹腔注射。采用TUNEL法检测生精细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学法检测生精细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果:与空白对照组比较,GSH对照组和15mg/kg GSH组生精细胞AI与生精细胞PCNA增殖指数(PI)均无显著性差异;与各自对应的单纯染锰组比较,15mg/kg GSH组和30mg/kg GSH组生精细胞AI均显著降低而PI均显著升高;30mg/kg组与15mg/kg组比较,生精细胞AI显著升高而PI显著降低;各组大鼠生精细胞AI和PI呈负相关。结论:15mg/kg和30mg/kg氯化锰可诱发大鼠睾丸生精细胞凋亡,两者存在剂量-效应关系;各组大鼠睾丸生精细胞AI和PI呈显著负相关;GSH对锰诱发大鼠生精细胞凋亡具有拮抗作用;GSH可能拮抗锰对大鼠生精细胞增殖的抑制作用。     

hTERT基因反义核酸对化疗药物诱导CEM细胞凋亡的影响

目的：利用人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义寡核苷酸(ASODN)抑制人T淋巴细胞白血病细胞株(CEM)端粒酶活性后,探讨化疗药物(顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙)对CEM细胞凋亡的影响。方法：采用台盼蓝拒染法观察hTERTASODN与化疗药物(顺铂、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙)联合作用对CEM细胞系生长的影响;姬姆萨染色法观察凋亡细胞的形态变化;通过流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果：hTERTASODN作用于CEM细胞24h再加入柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙,对细胞生长的抑制分别与单用柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙及hTERT正义寡核苷酸(SODN)联合柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙组相比,统计学上无显著差异(P＞0.05)。hTERT反义核酸作用于CEM细胞24h加入顺铂,再共同作用48h,CEM活细胞均数为2.318×108cells/L,与单用顺铂组(3.250×108cells/L)及hTERT正义核酸联用顺铂组(3.175×108cells/L)相比,对细胞抑制明显增强(P＜0.05)。hTERTASODN作用于CEM细胞24h再加入顺铂作用48h,细胞出现典型的凋亡形态学改变。hTERTASODN与2.5μmol/L顺铂联合作用于CEM细胞48h的凋亡细胞百分率(19.47%)分别同SODN与顺铂联合作用组(6.97%)、单用顺铂作用组(6.02%)进行比较有显著差异(P＜0.01)。结论：hTERT基因反义寡核苷酸能促进顺铂诱导CEM细胞凋亡。     

靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸对树突状细胞凋亡的影响

目的研究靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸（PNA）对树突状细胞（DC）CCR7蛋白表达及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法体外培养大鼠骨髓来源的Dc，脂多糖（LPS）诱导成熟。设计靶向CCR7mRNA翻译起始区的反义PNA，以随机PNA和空白组为对照处理体外培养7d的未成熟Dc，脂多糖诱导48h后收集成熟Dc，免疫细胞化学染色法检测CCR7蛋白表达，流式细胞术检测细胞凋亡率，Westernblot检测磷酸化Akt和Akt蛋白表达。应用渥曼青霉素（wortmannin）抑制磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，P13K）／Akt信号通路进一步观察磷酸化Akt蛋白表达和细胞凋亡率的变化。结果反义PNA组DCCCR7蛋白表达明显低于随机PNA组和空白组，而细胞凋亡率却明显增高，差异有统计学意义（P〈0．05），Westernblot检测显示反义PNA组Akt蛋白磷酸化水平明显低于随机PNA组和空白组，差异有统计学意义（P〈0．05）。DC经P13K抑制剂预处理后，CCR7介导的Akt蛋白磷酸化及抗凋亡作用被阻断。结论CCR7反义PNA能够有效抑制体外培养的大鼠DC趋化因子受体CCR7的表达并导致其发生凋亡，其机制可能是阻断了CCR7介导P13K／Akt信号转导通路的活化。     

二烯丙基二硫与硼替佐米联合应用诱导成神经细胞瘤细胞凋亡及活性氧的生成

目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)与硼替佐米(bortezomib)联合应用诱导人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡以及活性氧(ROS)的变化.方法:分别以DADS、硼替佐米单药和联合用药处理成神经瘤细胞SH-SY5Y细胞株,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定对细胞增殖的影响,Hoechst-33528染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡以及细胞内ROS的变化.结果:DADS和硼替佐米联合应用可使SH-SY5Y细胞的凋亡急剧增加,它们的联合应用还使细胞内ROS的生成比任何单一用药都多.结论:硼替佐米可促进DADS诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,ROS的产量增加可能在其中发挥了重要作用.     

Survivin反义核酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

Survivin是凋亡抑制蛋白（IAP）家族的一个成员，具有强大的抗细胞凋亡功能，在几乎所有肿瘤组织中特异性表达，而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。本研究针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸，RT—PCR检测表明，该序列反义寡核苷酸可明显降低细胞中survivin基因的mRNA含量；Western印迹显示Survivin蛋白水平也被降低。MTT比色实验法检测结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制SMMC-7721细胞增殖，抑制率为43％，远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。反义寡核苷酸还显著增强SMMC-7721细胞对于抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性，TUNEL法检测结果显示，在较低高三尖杉酯碱浓度下，反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。本研究结果提示，survivin表达的靶向抑制有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。     

Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞凋亡的诱导效应

目的：利用骨肉瘤OS-732细胞,探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对survivin基因表达的影响及其诱导肿瘤细胞凋亡的效应。方法:设计合成特异性靶向survivin的ASODN,以不同浓度和时间对OS-732细胞进行转染,并设空白、正义（SODN）对照组进行比较。采用RT-PCR、Westernblotting、免疫细胞化学技术检测各组OS-732细胞中survivinmRNA、蛋白表达状态,吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡水平和形态变化,MTT法检测细胞生长抑制情况,激酶活性测定法检测细胞中caspase-3活性程度。结果:转染ASODN各组OS-732细胞survivinmRNA和蛋白表达均明显弱于空白对照组、SODN组;细胞凋亡率（AI）显著增加,细胞生长相应受抑,caspase-3活性显著提高;上述效应在ASODN各组存在一定的时间浓度依赖性;而SODN各组与空白对照组间各项指标均无明显差异。结论:ASODN能够特异性下调OS-732细胞中survivin基因表达,激活凋亡效应蛋白酶caspase-3,在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用。     

hTERT 基因反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 在体外实验中，探讨hTERT反义核酸诱导卵巢癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法采用TUNEL染色法，定性、定量地研究hTERT反义核酸与卵巢癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果hTERT反义核酸在体外能诱导卵巢癌细胞发生凋亡。下调bcl-2的表达，增强bax的表达。结论诱导卵巢癌细胞发生凋亡是hTERT反义核酸抗卵巢癌作用的机制之一。hTERT反义核酸可能通过下调bcl-2的表达及增强bax的表达诱导卵巢癌细胞发生凋亡。     

Livin反义寡核苷酸对人HL60细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Livin mRNA反义寡核苷酸（ASODN）对人白血病细胞（HL60）增殖及凋亡的影响。方法 用免疫组织化学检测Livin蛋白表达,设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN）,脂质体转染HL60细胞。用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞增殖,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Livin mRNA的表达,原位末端标记技术（TUNEL）、电镜检测细胞凋亡率和形态学改变。结果Livin ASODN在终浓度为600nmol／L作用HL60细胞48h时,能明显地抑制其增殖,降低Livin mRNA的表达,HL60细胞在形态学上出现明显的凋亡改变,细胞凋亡率显著增加 (P<0.01)。结论Livin ASODN可有效抑制HL60细胞的增殖,下调Livin基因表达,并促进HL60细胞凋亡,在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用。