聚合酶链反应—微孔板杂交技术用于乙型肝炎病毒DNA的检测

目的：建立乙肝病毒DNA的聚合酶链反应（PCR）－微孔板杂交法,使PCR结果判定更加客观。方法：我们使用煮沸裂解法提取模板DNA,将PCR引物5′端标记生物素,用PCR产物与包被有亲和素的微孔板结合,并与含荧光素特异探针杂交,酶标记抗荧光素抗体与之结合进行显色反应,通过测定其吸光度来判断结果,结果：所建立的PCR－微孔板杂交法的阳性检出率（68／160）比PCR－电泳地（60／160）高,检测时间约是Keller法的1／10。结论：该法较敏感、特异和客观地检测临床标本中的乙型肝炎病毒DNA。     

扩增结核分枝杆菌DNA的微孔杂交比色检测

目的建立简单的杂交方法特异地检测聚合酶链反应(PCR)扩增的结核杆菌DNA.方法用玻璃粉提纯结核分枝杆菌DNA,dUTP-脲DNA糖基化酶(UDG)防污染,用5'端标记生物素的引物进行PCR扩增,5'端带标记的扩增产物与固定在微孔板上特异探针杂交,然后用酶标链霉亲和素进行酶联免疫法检测.结果对100份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的痰标本检测,扩增杂交法检出40份阳性,比抗酸染色法(15/100),培养法(28/100)和PCR电泳法(35/100)检出率高,而50份来自无结核感染者的痰标本,几种方法检查均为阴性.结论该方法可灵敏、特异、客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌,比传统PCR-电泳法优越.     

用聚合酶链反应微孔板杂交技术检测HBV DNA

目的 :建立并优化HBVDNA的PCR 微孔板杂交技术检测体系 ,使临床PCR结果判定更加客观可靠。方法 :采用碱裂解标本中的HBV、玻璃粉吸附提纯模板DNA ,用 5’端标记生物素的引物进行PCR ,PCR扩增产物与包被于微孔板中的靶基因杂交 ,酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合后 ,用酶底物与所标记酶进行显色反应 ,最后通过测定其光密度来判定结果。结果 :建立并优化的PCR 微孔板杂交检测方法提高了检测的灵敏度和特异性。PCR 微孔板杂交法对HBVDNA的检出阳性率 (79.8% )比电泳法 (6 9.0 % )高 ,2 0份非乙肝患者血清标本两方法检测均阴性。结论 :本方法灵敏、特异、操作简便、快速、结果客观可靠。     

聚合酶链反应-微孔板杂交法检测结核杆菌的临床应用及其评价

目的　对聚合酶链反应 ( PCR) -微孔板杂交法检测结核杆菌的临床适用性和可行性进行评价。方法　收集 1130份临床标本 ,分别用抗酸染色、培养、PCR电泳及 PCR微孔板杂交法进行结核杆菌检测 ,并结合临床诊断和疗效观察对实验结果进行分析。结果　 10 0份临床证实无结核病的体液标本经抗酸染色和 PCR电泳 ,分别有 1例和 2例假阳性 ,但经培养和 PCR微孔板杂交法未查出阳性 ;其余 10 30份高度怀疑含有结核杆菌的体液标本的检测结果 ,以 PCR微孔板杂交阳性检出例数最高 ( 481/ 10 30 ) ,其次为 PCR电泳 ( 40 6 / 10 30 )、培养 ( 36 5 /10 30 )以及抗酸染色 ( 2 5 6 / 10 30 ) ;χ2 检验结果显示 ,PCR微孔板杂交的结核杆菌阳性检出例数与其它三种方法比较均呈显著或极显著性差异 ( P<0 .0 0 83及 P<0 .0 0 17)。结论　 PCR-微孔板杂交方法是特异、灵敏、准确、快速的结核杆菌检测方法 ,具有推广应用价值     

聚合酶链反应—微孔板杂交法检测结核分支杆菌的临床应用及其评价

目的：对聚合酶链反应-微孔板杂交法检测结核分支杆菌的临床适用性和可行性进行评价。方法：收集1130份临床标本，用抗酸染色、培养、PCR电泳、PCR微孔板杂交法分别进行结核杆菌的检测。并结合临床诊断和疗效观察对实验结果进行分析。结果：100份临床证实杂交法未查出阳性，1030份高度怀疑含有结核杆菌的体液标本的检测结果。以PCR微孔板杂交阳性检出例数最高（481/1030），其次为PCR电泳（406/1030）、培养（365/1030）以及抗酸染色（256/1030）；X^2检测结果显示PCR微孔板杂交的结核杆菌阳性检出例数与其它三种方法比较的呈显著或极显著差异。结论 PCR-微孔板杂交方法是一种特异、灵敏、准确、快速的结核杆菌检测方法。具有广泛推广应用的价值。     

微流芯片定量检测血清HBV DNA

目的 选择一种能进行HBV DNA准确定量的检测方法。方法 比较内对照竞争PCR-微流芯片分析法与内对照竞争PCR-微孔板杂交法及PCR-微孔板杂交法在血清HBV DNA检测上的优劣。结果 微流芯片分析的线性范围高于两种微孔板杂交．前者标本稀释试验线性相关较好，后者则寿在滞现象。结论内对照竞争PCR-微流芯片分析法检测HBV DNA特异性强灵敏度高。     

应用探针微孔板杂交技术检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

寻找一种检测孕妇血浆中胎儿DNA新方法.采用SRY探针微孔板杂交法,通过PCR产物与SRY探针杂交,然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色,读取光密度值.结果发现探针微孔板杂交检测法的灵敏性和特异性均高于电泳检测方法.提示探针微孔板杂交检测技术的灵敏性和特异性较高,更适用于临床应用.     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌

目的评价聚合酶链反应 (PCR) -微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌的价值。方法 :应用结核病细菌学涂片、培养常规检测方法及PCR -微孔板杂交技术检测 138例结核病患者痰标本 ,4 2例非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果 :用常规细菌学方法检测临床标本中结核杆菌敏感度为 37% (5 1/ 138) ,用PCR-微孔板杂交技术检测敏感度为 5 6 % (77/ 138) ,高于常规检测法 19%。用PCR -微孔板杂交技术检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 :PCR -微孔板杂交技术将PCR扩增、核酸杂交的技术及酶免技术相结合 ,简便、快速、敏感度高、特异性强 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

PCR-ELISA检测TB DNA方法的建立及其初步应用

目的 建立灵敏，快速，特异的PCR-ELISA检测结核菌DNA的方法。方法 用一对生物素标记的上游引物和未标记的下游引物对TBIS6110的一段DNA进行快速PCR扩增，使扩增产物的一条链上带有生物素，同时PCR反应液中存在有地高辛的标记的检测探针，随着PCR的结束，探针与生物素标记的扩增产物形成特异的杂交体，该杂交体通过链霉亲和素被固定在微孔板表面，然后用标记有过氧化物酶的地高辛抗体与杂交体上的地高辛结合，漂洗后加底物显色。测定吸光度值（A450nm)。结果 该方法灵敏，特异，快速，可以检测出10copies的模板量，对临床60例痰标本进行培养法。结论 该方法适用于临床进行快速的TB基因检测，也可用于其它病原体的检测。     

食源致病菌96 微孔板DNA 诊断芯片的研制及在一起食物中毒突发事件中的应用

目的研制能同时检测9种常见食源致病菌的96微孔板DNA诊断芯片。方法针对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7(Stx1和Stx2)、志贺氏菌、产单核细胞李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌等9种最常见的食源性致病菌,首先选择合适的保守基因,设计种特异性的PCR引物(5'端标记生物素)和检测探针,通过参数优化建立一管多重PCR扩增体系;然后按5×5的阵列格式将探针点制到96微孔板的微孔内,通过条件优化建立稳定的PCR产物与固化探针的微孔杂交体系;采用链霉抗生物素蛋白碱性磷酸酶和化学显色底物NBT/BCIP来检测特异性的PCR杂交产物。结果20株标准菌株验证已建立的食源致病菌微孔板DNA诊断芯片,获得比较特异和稳定的实验结果。在一起食物中毒事件中,该芯片在采样后12h内检出金黄色葡萄球菌,与传统的细菌分离培养和生化鉴定的结果相符。结论本研究建立的新型食源致病菌96微孔板DNA诊断芯片具有快速、准确、自动化和高通量等特点,为快速应对食物中毒等突发公共卫生事件提供了非常有价值的检测技术。