肝再生增强因子在肝再生中的作用

肝脏是人体少有的能够快速再生的器官之一，很多病理状态都可引起肝细胞再生，其复杂的生理功能受到多种生长因子的调节。已知的可以促进肝细胞再生的生长因子有：肝细胞生长因子（HGF）、     

人肝再生增强因子表达载体的构建及其在酵母中的表达

肝再生增强因子是一种多肽调节因子,具有重要的生物学功能,与高等生物线粒体的生成、细胞分裂周期调节及肝脏,睾丸等重要脏器发育有关,最主要是能特异的刺激肝源细胞的增殖。对于肝再生增强因子（augmenter of liverregeneration,ALR）的产生、分泌、体内转运的过程都存有诸多疑间。因此为了进一步研究该蛋白质的功能,我们在酵母细胞中表达了ALR。     

鼠人肝再生增强因子的cDNA克隆及序列分析

目的克隆大鼠及人肝再生增强因子的ｃＤＮＡ．方法按文献报道大鼠及人肝再生增强因子核苷酸序列设计合成引物．利用ｍＲＮＡ抽提试剂盒分别从乳鼠及人胎肝组织中提取ｍＲＮＡ，再逆转录聚合酶链反应扩增出需要的ｃＤＮＡ片段，经克隆入ｐＧＥＭＴ质粒后以Ｔ７ＤＮＡ聚合酶序列分析试剂盒测定ｃＤＮＡ的序列．结果经ＲＴＰＣＲ反应顺利扩增到４７０ｂｐ的鼠肝再生增加因子ｃＤＮＡ及３８４ｂｐ的人肝再生增强因子．结论所得到的ｃＤＮＡ序列与文献报道一致     

肝再生增强因子研究进展

肝再生增强因子是一种新型的肝细胞刺激因子。本文从分子生物学特性、生物活性与作用机制等方面对肝再生增强因子的研究进展进行综述。     

人肝再生增强因子基因组DNA的克隆化与序列分析

目的 克隆人肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｇｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ,ＡＬＲ）的基因组ＤＮＡ,并进行序列分析。方法 采用人肝再生增强因子ｃＤＮＡ及其编码序列, 核苷酸序列数据库（ＧｅｎＢａｎｋ）以Ｂｌａｓｔ为工具进行核苷酸同源性比较分析,寻找相应的ＡＬＲ基因组ＤＮＡ序列。结果 从ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸序列数据库中寻找到ＡＬＲ基因组ＤＮＡ全序列,由１８１３个核苷酸组成。     

肝再生增强因子研究进展

肝再生过程的启动与调控机制一直是人们关注的热点。1975年LaBrecque等首次证实了一种能特异性刺激哺乳动物肝细胞DNA合成的物质：肝刺激物（hepatic stimulatory substance,HSS）。     

人肝再生增强因子阅读框的cDNA克隆和序列分析

目的获取人肝再生增强因子（ＡＬＲ）阅读框的ｃＤＮＡ克隆，为进一步研究打下基础。方法从人胎肝中提取总ＲＮＡ作为模板，以寡聚ｄＴ为引物逆转录台成第一链ｃＤＮＡ，用我们设计的引物和ＰＣＲ方法扩增双链ｃＤＮＡ。ＰＣＲ产物约３８０ｂｐ并被亚克隆人ｐＵＣ１９，经测序和ＰＣＧＥＮＥ软件分析。结果获得人ＡＬＲ完整阅读框的ｃＤＮＡ片段，长度为３７８ｂＰ。与大鼠ＡＬＲ和最近报道的人ＡＬＲ序列比较同源性分别为８６、５％和９９．２％。结论成功地克隆人ＡＬＲ完整阅读框的ｃＤＮＡ，同时提示人ＡＬＲ参与了人胎儿晚期发育过程中胎肝的生长调节。     

人肝脏再生增强因子对体外肝细胞生长的影响

目的基因工程方法纯化人肝脏再生增强因子（hALR）,研究hALR对体外培养肝细胞生长的影响。方法构建hALR原核表达载体PGEX-3X-hALR,诱导表达、纯化收集GST-hALR,用X因子切去GST,凝胶过滤得到高纯度hALR蛋白;分别用正常肝细胞（L-02细胞）和肝癌细胞（HepG2细胞）分析hALR对其生长的影响。结果hALR原核表达载体pGEX-3X-hALR构建成功,经诱导表达,可纯化得到高纯度的hALR蛋白。hALR蛋白能促进正常肝细胞的生长,并与浓度成正相关;而肝癌细胞的生长却起抑制作用。结论成功表达和纯化重组hALR蛋白,hALR促进正常肝细胞的生长而抑制肝癌细胞生长。     

重组人肝再生增强因子对大鼠肝部分切除后肝再生的影响

目的观察原核表达的重组人肝再生增强因子（rhALR）对大鼠肝再生的影响。方法按Higgins方法进行大鼠34％肝切除。术后4-6h各实验组大鼠经腹腔注射rhALR剂量分别为50μg、100μg、200μg、400μg、800μg,对照组给生理盐水。术后30h杀鼠取肝,增殖核抗原（PCNA）免疫组化染色和HE染色,进行肝细胞核PCNA阳性细胞计数和有丝分裂计数。结果rhALR能促进肝部分切除后大鼠肝细胞的有丝分裂和细胞核PCNA的表达,并呈现一定的剂量依赖关系。结论rhALR能促进在鼠肝再生和肝细胞增殖。     

重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化

目的通过构建原核表达系统，在大肠埃希菌中表达重组人肝再生增强因子（hALR）蛋白，为各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗提供新的治疗方法奠定基础。方法利用正常人肝组织提取总RNA，经一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）获取hALR cDNA全序列，构建原核表达载体hALR—pET28a（＋）转化大肠埃希菌（BL21），诱导表达重组hALR蛋白，以组氨酸为标签进行蛋白纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western Blot鉴定重组蛋白。结果经双酶切和DNA测序证实hALR cDNA正确插入表达载体pET28a（＋），成功表达并纯化得相对分子质量为23000的重组蛋白，低温诱导表达使可溶蛋白明显增加，与预期结果相符。结论成功表达和纯化获重组hALR蛋白。     

肝细胞生长因子能否刺激肝再生的研究

研究表明,涉及促进肝细胞再生的细胞因子、激素计20余种。许多生长因子的核酸已被克隆和序列化。对肝细胞再生的研究已从动物肝细胞的培养到应用人肝细胞进行培养,制作暴发性肝衰竭(FHF)及肝硬变的动物模型,对动物及人肝组织进行增殖细胞核抗原(PCNA)表达的研究。10余年来,大     

用酵母双杂交系统筛选人肝再生增强因子的相互作用蛋白

采用酵母双杂交系统,寻找人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白,探讨hALR在肝再生过程中的分子生物学机制。 1.材料与方法:(1)主要材料:MATCHMAKER双杂交系统3试剂盒、预转化人肝脏cDNA文库、YEASTMAKERTM酵母转化系统、YEASTMAKERTM酵母质粒分离试剂盒、酵母菌培养基、X-α-Gal等均购自美国Clontech公司。(2)“诱饵”质粒的构建及鉴定:用RT-PCR技术从水囊引产的4月龄人胎肝     

肝再生增强因子在肝脏中的作用

肝再生增强因子（ALR）除了促进肝再生，保护肝损伤之外，可能在肝脏的器官形成和发育中也发挥着重要作用。介绍了ALR在肝脏中的生物学功能和机制研究的最新进展，并归纳总结了ALR在肝脏疾病的诊断和治疗中的应用。指出ALR可能通过线粒体途径调控肝细胞的凋亡，从而参与肝脏的修复和再生。未来ALR可能作为肝衰竭患者肝再生及预后评估的候选分子，并有望成为临床治疗严重肝病和肝衰竭的有效药物。     

从人肝癌细胞cDNA表达文库筛选人肝再生增强因子相互作用蛋白及其活性初步鉴定

目的利用噬菌体表面展示技术筛选人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白并初步鉴定噬菌体展示肽的生物学活性。方法以hALR为靶蛋白,采用T7噬菌体表面展示技术从人肝癌细胞cDNA表达文库筛选与 hALR相互作用的特异噬菌体克隆;对获得的特异噬菌体克隆cDNA插入片段进行测序及生物信息学分析;利用3H- TdR掺入法测定噬菌体展示肽及联合hALR对QGY肝癌细胞的增殖效应。结果经过四轮生物淘洗,特异噬菌体克隆富集,获得212 bp的噬菌体cDNA插入序列,生物信息学分析与人Citron激酶同源性达100％;该噬菌体展示肽及联合应用hALR对QGY细胞具有促增殖效应。结论利用噬菌体表面展示技术可以筛选出与hALR具有相互作用的多肽,该序列与人Citron激酶完全同源,Citron激酶可能参与了hALR促肝癌细胞增殖的过程。     

重组人肝再生增强因子原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 用聚合酶链反应法（ＰＣＲ）和基因重组技术构建重组人肝再生增强因子原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达。方法 利用ＰＣＲ方法从我们构建的ＰＵＣ１９－ｈＡＬＲ质粒中扩增出带ＮｄｅⅠ和ＢａｍＨⅠ酶切位点的ｈＡＬＲ编码区ＤＮＡ。ＰＣＲ产物和质粒ｐＥＴ１１ａ分别被相应内切酶消化,然后被Ｔ４ ＤＮＡ连接酶连接以获取重组表达质粒。重组表达质粒ｐＥＴ１１ａ－ｈＡＬＲ经电转化入大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,在Ｉ     

细胞因子与肝再生

肝脏实质细胞与非实质细胞的相互作用是肝脏对外界刺激的最基本的生理和病理应答,非实质细胞在肝部分切除术后肝再生的应答过程中起着重要的调节作用,调节着肝细胞的代谢和生长,而细胞与细胞之间相互作用的桥梁主要来自于细胞因子,细胞因子在肝再生过程中又起着非常重要的作用。目前研究较多的细胞因子主要有肝细胞生长因子(HGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、表皮生长因子(EGF)、白介素(IL-1,IL-6)等。现将有关研究进展综述如下。     

大鼠肝再生增强因子假基因的克隆化与序列分析

目的 研究大鼠肝再生增强因子（augmenter of liver regeneration,ALR）在大鼠基因组织中的存在方式。方法 以大鼠基因组DNA为模板,根据ALP cDNA序列设计引物,用多聚酶链反应（PCR）扩增产物,连入pGEM Teasy Vector后测序。结果 PCR法扩增出两条产物,其一经测序发现为ALR的假基因,预测氨基酸序列与ALR的同源性为88.8%。结论 作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子,大鼠ALR存在假基因,提示可能存在ALR多基因家族。为研究ALR分子的进货规律提供了依据。