烫伤后高迁移率族蛋白B1的变化及其对脾淋巴细胞周期的影响

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在烫伤中的表达规律及其对烫伤延迟复苏大鼠脾淋巴细胞周期的影响。方法103只大鼠随机分为正常对照组（n=7）、假伤组（n=32）、烫伤组（n=32）和丙酮酸乙酯（EP）液（3．23mg／ml）治疗组（n=32），后3组分别在伤后第1、3、5、7天活杀，采用Western blot检测血浆HMGB1水平，应用流式细胞仪检测细胞周期。结果大鼠烫伤后1、3、5天血浆HMGB1水平显著升高（P〈0．05或P〈0．01）。与假伤组比较，烫伤后1、3天G1期淋巴细胞明显增加，同时G2＋S期细胞百分比明显减少。EP组，伤后第1天G，期淋巴细胞百分比明显减少（P〈0．05），G2＋S期细胞比例明显增加（P〈0．05）。结论HMGB1对严重烫伤后脾淋巴细胞周期具有明显影响，参与了烧伤延迟复苏后免疫功能紊乱的发病过程。     

NF-kB抑制剂对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的　观察NF κB抑制剂———二硫氨基甲酸酞吡咯烷(PDTC)对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响。方法　采用内毒素休克模型 ,4 7只大鼠随机分为正常对照组 (n=8)、内毒素休克组(n =2 4 )和PDTC拮抗组 (n=15 ) ,留取肝、肺、肾组织检测HMGB1mRNA表达及相应器官功能指标的变化。结果　内毒素攻击可导致动物肝、肺、肾组织HMGB1mRNA表达广泛上调 ,分别于 2～6h显著增高 (P <0 0 5 ) ,12h呈现进一步升高趋势。PDTC处理后 12h肝、肺、肾组织HMGB1mRNA表达均显著下调 ,其中肾组织于 2～ 12h趋于伤前范围 ;同时 ,血清ALT、AST、BUN、Cr水平于 6h明显降低 (P <0 0 5 ) ,肺组织髓过氧化物酶活性各时相点均显著低于内毒素休克组 (P <0 0 5 )。结论　NF κB抑制剂能显著抑制内毒素休克动物组织HMGB1mRNA的表达 ;NF κB信号转导通路参与了内毒素介导HMGB1基因表达的调控过程 ,并与脓毒症时的多器官功能损害密切相关。     

烫伤后金葡菌脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1表达及其信号调节机制

采用大鼠 2 0 %III度烫伤合并金黄色葡萄球菌 (简称金葡菌 )攻击所致脓毒症模型 ,观察高迁移率族蛋白 1(HMG 1)在烫伤脓毒症中的变化特点及意义 ,并探讨细胞因子信号转导途径抑制剂早期干预对其诱生的影响。 6 1只动物随机分为正常对照组 (n =6 )、烫伤对照组 (n=9)、烫伤后金葡菌脓毒症组(n=36 )和雷帕霉素 (RPM)拮抗组 (n =10 ) ,检测动物肝、肾组织中TNF α和HMG 1基因表达的改变。结果显示 ,烫伤合并金葡菌攻击后 ,大鼠肝、肾组织中TNF α基因表达迅速增高 ,并于 2h达峰值 (P <0 0 1) ,此后则迅速降低 ;而HMG 1mRNA表达升高较缓慢 ,但持续时间较长 ,其中伤后 2 4h肾脏HMG 1mRNA表达显著高于正常和烫伤对照组 (P <0 0 5 ) ;以RPM干预后 ,大鼠肝、肾组织中TNF α基因表达均显著低于未拮抗组 (P <0 0 5 ) ,同时HMG 1基因表达亦呈降低趋势。该结果提示 ,烫伤后金葡菌感染可导致动物体内HMG 1基因表达上调 ,其机制可能与JAK/STAT信号转导途径的活化有关 ;HMG 1作为“晚期炎症介质”可能参与了脓毒症的发病过程。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后脊髓组织高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的 探讨高压氧对大鼠脊髓损伤组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)变化的影响及其对减轻脊髓损伤炎性反应的作用.方法 160只成年健康SD大鼠,按数字表法随机平分为脊髓损伤组、脊髓损伤+高压氧组、假手术对照组、假手术对照+高压氧组4组,每组再随机平分为1、3、7、14d4个亚组,每亚组10只.在大鼠脊髓损伤后不同时间点,使用脊髓损伤大鼠功能恢复评分(BBB评分)评价后肢功能恢复情况,采用荧光定量PCR、Western blot、免疫组化法,测定HMGB1、核因子κB(NF-κB)的表达.结果 脊髓损伤后损伤组织HMGB1和NF-κB的mRNA及蛋白表达明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01);高压氧干预后,脊髓损伤组织HMGB1 mRNA及蛋白表达降低,1d和3d时差异无统学意义(P＞0.05),7d和14 d时差异具有统计学意义(P＜0.05);高压氧干预后,脊髓损伤组织NF-κBmRNA及蛋白表达降低,1d时差异无统计学意义(P＞0.05),3、7、14 d时差异具有统计学意义(P＜0.05);高压氧干预后,7、14 d BBB评分明显改善,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 高压氧可降低HMGB1表达,减轻脊髓损伤继发炎性反应,促进大鼠神经功能的修复.     

NF-κB抑制剂对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的观察NF-κB抑制剂--二硫氨基甲酸酞吡咯烷(PDTC)对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响.方法采用内毒素休克模型,47只大鼠随机分为正常对照组(n=8)、内毒素休克组(n=24)和PDTC拮抗组(n=15),留取肝、肺、肾组织检测HMGB1 mRNA表达及相应器官功能指标的变化.结果内毒素攻击可导致动物肝、肺、肾组织HMGB1 mRNA表达广泛上调,分别于2～6h显著增高(P＜0.05),12h呈现进一步升高趋势.PDTC处理后12h肝、肺、肾组织HMGB1 mRNA表达均显著下调,其中肾组织于2～12h趋于伤前范围;同时,血清ALT、AST、BUN、Cr水平于6h明显降低(P＜0.05),肺组织髓过氧化物酶活性各时相点均显著低于内毒素休克组(P＜0.05).结论NF-κB抑制剂能显著抑制内毒素休克动物组织HMGB1 mRNA的表达;NF-κB信号转导通路参与了内毒素介导HMGB1基因表达的调控过程,并与脓毒症时的多器官功能损害密切相关.     

金葡菌肠毒素B对哮喘豚鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响及意义

目的：探讨金葡菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxin B,SEB）对支气管哮喘豚鼠模型支气管肺泡液高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1,HMGB1）及Th1／Th2细胞因子水平的影响。方法：18只豚鼠随机分为对照组6只、支气管哮喘豚鼠模型组6只和SEB组6只,模型组用卵白蛋白（ovalbumin,OVA）建立豚鼠哮喘模型,SEB组在OVA致敏前10d于腹腔注射SEB1 ml（10mg／L）,对照组注射等量生理盐水。支气管哮喘诱发后2d,收集支气管肺泡灌洗液进行自细胞和嗜酸性粒细胞计数,WB法测定HMGB1水平,ELISA法检测细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果：模型组肺泡灌洗液白细胞数、嗜酸性粒细胞数及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著升高,IFN-γ浓度显著降低。SEB组白细胞数、嗜酸性粒细胞数量及比例、HMGB1水平和IL-4浓度屁著低于模型组,IFN-γ浓度高于模型组。结论：SEB能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中HMGB1水平及嗜酸性粒细胞数量及比例,其机制可能与Th1／Th2细胞因子比值调节有关。     

高迁移率族蛋白-1在脓毒症发病中的作用与意义

既往普遍认为，“早期”致炎细胞因子是引起机体失控性炎症反应与组织损害的关键介质。新近的研究发现，高迁移率族蛋白-1(HMG-1)可能作为新的“晚期”炎症因子参与了内毒素的致病过程。本文扼要介绍了HMG-1在严重创（烧）伤后脓毒症发生、发展中的作用及其诱生机制，并对其潜在应用价值进行了分析。深入了解和研究HMG-1，可能有助于从全新的角度认识脓毒症和多器官损害的发病机制与临床意义，并为探索其防治方法提供新的思路。     

高迁移率族蛋白B1对大鼠脾脏树突状细胞表面共刺激分子表达的影响

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对树突状细胞(dendritic cells,DC)表面共刺激分子表达的影响,并对其机制进行初步探讨。方法分离正常Wistar大鼠脾脏DC后置于96孔培养板(1×10~5/孔),采用HMGB1刺激,观察HMGB1刺激与DC表面共刺激分子CD80、CD86和主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ表达的时间-效应关系及剂量-效应关系。结果HMGB1刺激后,DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHCⅡ表达分别于24～72 h明显上调(P＜0．05,0．01),其中以作用48 h后DC表面共刺激分子表达上调尤为显著(P＜0．01)；0．1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml的HMGB1刺激均可诱导DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHCⅡ表达增强(P＜0．05,0．01),其中HMGB1的浓度在1μg/ml时,大鼠DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHCⅡ的表达增强最明显(P＜0．01)。结论HMGB1能诱导DC表面共刺激分子表达增强,HMGB1可能是诱导DC成熟的免疫刺激信号。     

高迁移率族蛋白1在大鼠动脉粥样硬化斑块中表达的研究

目的 观察动脉粥样硬化大鼠高迁移率族蛋白1（HMGB-1）的蛋白及基因表达变化,以揭示与炎症相关的动脉粥样硬化发病机制.方法 免疫组织化学染色法观察大鼠主动脉血管动脉粥样硬化斑块内HMGB-1的蛋白表达情况,RT-PCR法检测大鼠主动脉血管HMGB-1的基因表达变化.结果 正常血管壁内存在HMGB-1表达,位于血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞的细胞核内 动脉粥样硬化斑块内HMGB-1分布不均匀,炎症细胞浸润区和坏死区周边基质内表达明显增高,炎症细胞浸润区内以单核-巨噬细胞胞核、胞浆和间质内表达为主,后者成条带状分布于坏死区边缘.动脉粥样硬化斑块内HMGB-1水平均明显升高,与正常血管壁比较差异有显著性（P〈0.01）.结论 动脉粥样硬化大鼠主动脉血管HMGB-1的蛋白及基因表达均明显增强.     

PCT联合HMGB1在急性胰腺炎预后评估中的意义

目的 探讨降钙素原(PCT)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对急性胰腺炎(AP)病情程度及预后的评估价值.方法 分析2013年10月～2014年12月我院收治的160例AP患者临床资料,根据《2013年中国急性胰腺炎诊治指南》,将所有患者分为轻度急性胰腺炎(MAP)组、中度急性胰腺炎(MASP)组和重度急性胰腺炎(SAP)组,分别对比入院后24 h内3组血清PCT、HMGB1水平,并对结果进行对照分析.另选择同期本院体检的健康人50例为正常对照组.结果 AP患者的PCT、HMGB1水平明显高于正常对照组,且随着AP病情的加重,PCT、HMGB1水平呈进行性升高(P＜0.05).结论 早期检测PCT和HMGB1,可尽早明确AP患者的病情,有助于指导临床治疗及评估预后.     

高迁移率族蛋白B1cDNA的克隆与表达

目的克隆人高迁移率族蛋白B1（HMGB1）cDNA,构建重组原核表达载体,对其诱导表达并鉴定,为设计HMGB1 cDNA突变体及诱导表达可竞争性抑制HMGB1炎症效应的突变体蛋白奠定基础。方法提取人新鲜扁桃体组织总RNA,经RT-PCR扩增出人HMGB1 cDNA序列,并克隆至载体pUC18进行序列测定,随后构建于原核表达载体pQE-80L中,经IPTG诱导4小时后,可表达Mr约30 000的蛋白。Western Blotting鉴定所表达的目的蛋白。结果经RT—PCR扩增得到了648bp的cDNA,经序列分析与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了HMGB1蛋白的重组表达质粒,诱导表达了目的蛋白,经Western Blotting证实,在Mr约为30000处有一条清楚的蛋白带。结论获得了HMGB1 cDNA的克隆与原核表达载体。     

高迁移率族蛋白B1的生物学效应及在几种疾病发病中的作用

既往，高迁移率族蛋白B1被认为是典型的非组蛋白，参与核小体结构的构建及稳定，并参与基因转录及DNA重组、修复和复制。近些年的研究表明，在特定情况下，高迁移率族蛋白B1可释放于细胞外，发挥广泛的细胞学效应，同时发现，在几种重要疾病的发病过程中高迁移率族蛋白B1发挥了关键的作用，这些发现使其备受关注。本文拟就高迁移率族蛋白B1的基本特征及其广泛的生理作用与病理效应做一综述。     

创伤性急性肺损伤后高迁移率族蛋白B1的临床相关性研究

目的 研究创伤性急性肺损伤(acute lung injury,ALI)后血清高迁移率蛋白-1(high mobility group box 1 protein,HMGB -1)的水平变化,探讨其与MODS、急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation,APACHEⅡ)评分的相关性,以及其对MODS发生率和死亡率的预警作用. 方法 测定10例正常人与40例ALI患者伤后第1,4,7天的血清HMGB -1水平.根据MODS的诊断标准,将损伤组分为两组:MODS组13例,非MODS组27例.同时评定其MODS、APACHEⅡ分值. 结果 组间比较:非MODS组第1,4,7天HMGB -1水平的表达均高于MODS组(P＜0.05);非MODS组HMGB -1水平的表达高于正常对照组,但低于MODS组.组内比较:非MODS组第4天HMGB -1水平的表达明显高于第1天(P＜0.01),第7天较第4天明显降低(P＜0.01),甚至低于第1天.MODS组血清HMGB -1水平的表达显著升高,并延续数天,第7天较第4天有所降低,但仍高于第1天.伤后第1,4,7天MODS评分随HMGB -1水平的动态变化差异明显.伤后第1,4,7天APACHEⅡ评分比较,差异明显.相关性分析显示,HMGB -1水平的表达与MODS评分、APACHEⅡ评分显著相关. 结论 (1)HMGB -1在ALI患者中呈高表达,其作为晚期炎症介质参与炎性反应往往升高较晚,且持续时间较长.(2)HMGB -1水平变化与并发MODS密切相关.(3)常规检测血清HMGB -1水平并联合评定MODS、APACHEⅡ评分有助于对创伤后脏器功能不全的预测.     

高迁移率族蛋白B1对烫伤大鼠脾脏调节性T细胞免疫功能的影响

目的 观察严蕈烫伤延迟复苏大鼠体内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的变化及其对调节性T细胞(Treg)免疫功能的影响. 方法采用30%体表面积Ⅲ度烫伤延迟复苏模型,将136只大鼠按随机数字表法分为正常对照组(8只)、假烫伤组(32只)、烫伤组(32只)、丙酮酸乙酯(EP)干预组(32只)及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)抗体干预组(32只).后4组实验动物再分为4个亚组,分别于烫伤后1,3,5,7 d无菌取血和脾脏,免疫磁珠法分离大鼠脾脏CD4+CD25+Treg.采用ELISA检测血清HMGB1水平,应用流式细胞术检测Treg表面晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、细胞毒性T淋巴相关抗原4(CTLA-4)及叉头翼状螺旋转录因子P3(Foxp3)表达. 结果 (1)烫伤延迟复苏导致大鼠血清HMGB1水平在伤后1～7 d显著升高,于第3天达峰值(P<0.01).EP干预后烫伤大鼠血清HMGB1水平1～7 d均明显降低.RAGE抗体干预对烫伤大鼠血清HMGB1水平无明显影响(P>0.05).(2)与假烫伤组比较,严重烫伤后1～7 d脾脏Treg表面RAGE、CTLA-4及Foxp3表达均不同程度增强.EP干预组及RAGE抗体干预组上述三项指标较烫伤组明显降低(P<0.05或0.01). 结论严重烫伤后HMGB1可通过RAGE受体对Treg免疫抑制活性产生影响,进而参与烫伤后脓毒症的发病过程.     

大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1诱生机制的初步探讨

目的　探讨腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱生的分子机制。方法　取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞置 2 4孔培养板中 (1× 10 6/孔 ) ,培养 3天后用内毒素 (LPS)刺激 ,观察LPS刺激与巨噬细胞HMGB1mRNA表达的时效关系及量效关系 ,同时观察氟达拉滨 (fludarabine,STAT1抑制剂 )及雷帕霉素 (rapamycin,STAT3抑制剂 )对HMGB1mRNA表达的影响。结果　LPS刺激可使大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA表达明显上调 ,于攻击后 2 4～36h达峰值 ,至 4 8h减弱。LPS的刺激剂量为 75～10 0ng/ml时 ,HMGB1基因表达明显增强。经氟达拉滨和雷帕霉素处理均可明显下调HMGB1基因表达。结论　LPS可诱导大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA表达 ,其诱生机制与Janus激酶 /信号转导子和转录激活因子 (JAK/STAT )途径密切相关。     

正丁酸钠对脓毒症大鼠高迁移率族蛋白B1表达的拮抗作用

目的观察正丁酸钠对严重脓毒症时多器官高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达的影响及意义。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔（CLP）造成脓毒症模型。动物分为正常对照组（n=10）、假手术组（n=10）、盲肠结扎穿孔组（n=20）及正丁酸钠治疗组（n=20）。留取肝、肺、肾及小肠组织和血标本,分别检测HMGB1 mRNA表达及各器官功能指标;同时观察正丁酸钠对脓毒症大鼠的治疗效果（n=57）。结果正丁酸钠处理可显著降低腹腔感染后12及24h大鼠肝、肺、肾及小肠等组织HMGB1 mRNA表达,感染后12h血清丙氨酸转氨酶、肌酐水平比未治疗组显著降低（P〈0．01）,24h肺组织髓过氧化物酶活性亦明显下降（P〈0．01）。早期给予正丁酸钠治疗,大鼠1～6天存活率显著高于未治疗组（P〈0．05或0．01）。结论正丁酸钠对晚期致炎因子HMGB1介导的炎症反应具有潜在的治疗作用。     

休克期切痂对烫伤大鼠高迁移率族蛋白B1及多器官损害的影响

目的观察烫伤大鼠循环高迁移率族蛋白B1（HMGB1）变化规律,探讨休克期切痂改善脏器功能的机制。方法Wistgtr大鼠30％Ⅲ度烫伤后随机分为24h切痂组和72h切痂组。免疫印迹法、酶生化法检测血浆HMGB1含量及脏器功能指标。结果烫伤后血浆HMGB1水平升高2～4倍（P〈0．05或P〈0．01）,心、肺、肝、肾、肠及脾脏等功能指标明显异常（P〈0．05或P〈0．01）。24h切痂组动物伤后2天血浆HMGB1水平明显下降,同时多脏器功能显著改善（P〈0．05）;而72h切痂组仅伤后8天血浆HMGB1水平明显降低和脏器功能的改善（P〈0．05）。血浆HMGB1浓度与肺组织MPO及血浆CK-MB、AST、ALT酶活性以及BUN呈正相关（P〈0．01）,而与脾淋巴细胞MTT及肠组织DAO呈负相关（P〈0．01）。结论循环HMGB1可能参与了烫伤后全身多脏器损伤,休克期切痂有助于减少HMGB1的产生。