不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

建立从人外周血分离，纯化，培养，扩增树突状细胞前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖，分化成熟的影响。方法 人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌｌ，ｅｒｃｏｌｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫增减细胞化学染色。     

不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

目的建立从人外周血分离、纯化、培养、扩增树突状细胞（ＤＣ）前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖、分化成熟的影响。方法人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌ、Ｐｅｒｃｏｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｈｒＧＭ－ＣＳＦ）培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４（ＩＬ－４）联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫细胞化学染色。结果分离的ＤＣ前体经１周左右时间培养，细胞数量可扩增２０～３０倍，纯度达９０％以上，ＧＭ－ＣＳＦ与ＩＬ－４联合培养所得到的ＤＣ数量约为用ＧＭ－ＣＳＦ培养的１．５倍。ＤＣ具有典型的树枝状或裙褶状突起，并表达高水平的ＨＬＡ－ＤＲ，其ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３的表达均为阴性。结论用ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４联合作用更能促进ＤＣ的体外扩增及分化。     

雷帕霉素对人单核细胞来源的树突状细胞免疫功能的影响

目的：研究雷帕霉素对人树突状细胞（DC）免疫功能的影响。方法分离外周血单个核细胞,在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM- CSF）、IL-4、胎牛血清及有或无雷帕霉素的培养条件下制备DC。用流式细胞仪检测DC表型（CD1a、CD83、CD86、HLA- DR）;混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激能力;流式细胞仪检测DC吞噬功能和凋亡细胞数;ELISA法测定MLR上清液中的细胞因子。结果与对照组比较,经雷帕霉素处理的DC表面CD1a、CD83、CD86、HLA- DR的表达明显降低（均P＜0.01）;对T淋巴细胞刺激的能力下降（P＜0.01）;细胞吞噬能力下降（P＜0.01）;凋亡细胞数增加（P＜0.01）,MLR中细胞因子（TNF-α、IL-10、IL-12）浓度降低（均P＜0.01）。结论雷帕霉素对人树突状细胞免疫功能有明显的抑制作用,可能是其防止冠状动脉支架术后再狭窄的机制之一。     

不同培养基和促成熟组合对人外周血来源树突状细胞发育的影响

目的探讨X-VIVO 15TM和CellGro两种培养基和不同促成熟方法对人外周血来源单核细胞向树突状细胞（DC）发育分化的影响。方法利用GM-CSF＋IL-4细胞因子组合,改变促成熟方法 ,通过对未成熟和成熟DC形态观察,用流式细胞仪检测细胞表型,应用ELISA法检测不同培养体系上清液中所含细胞因子的变化,分析不同培养基和不同促成熟方法对DC功能的影响。结果促成熟方法一致的前提下,两种培养基培养的DC在形态上无显著差异,但应用CellGro培养的DC的CD83表达高于X-VIVO培养的。在培养基一致的前提下,鸡尾酒组培养的DC的CD83表达高于TNF-α组。结论不同的培养体系可获得功能不同的DC。     

普伐他汀对人单核细胞源树突状细胞免疫功能的影响

目的　探讨普伐他汀对在免疫调控中起重要作用的人单核细胞源树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法　采用免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,经含重组粒细胞巨噬细胞刺激因子(100 ng/ml)和重组白介素(rhIL) 4(20 ng/ml)的Cellgro培养,使其分化为DC。DC与50~100μmol/L普伐他汀孵育72 h后,采用流式细胞术检测DC表型(CD1a、CD40、CD86、HLA DR),混合T淋巴细胞反应检测DC对淋巴细胞增殖的影响,采用酶联免疫吸附试验法检测细胞培养上清液中Th1/Th2 [白介素(IL)- 12、干扰素(IFN) γ/ IL- 2、IL- 10]细胞因子的浓度。结果　与对照组相比,经普伐他汀处理的DC可下调CD80、CD86、HLA DR和CD1a的表达,对T淋巴细胞增殖作用明显减弱,明显抑制DC- Th1 细胞因子IL -12 和IFN -γ的分泌(P<0.05),但对Th2细胞因子IL -2 和IL -10水平无明显影响。100μmol/L甲羟戊酸可逆转普伐他汀的作用。结论　普伐他汀可明显抑制DC的成熟和免疫活性,此作用与甲羟戊酸途径有关。这可能是他汀类药物免疫调节的新机制。     

人外周血树突状细胞体外诱导培养及表型鉴定

目的从健康人外周血中分离单个核细胞（peripheral blood mononuclearcell,PBMC）,经体外诱导培养获取成熟树突状细胞（dendritic cell,DC）.方法取健康人新鲜外周血,经密度梯度离心法分离,获得单个核细胞,在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养.置37℃、5%CO2培养箱内静置培养2 h后除去悬浮细胞.培养液中加入rhGM-CSF和rhIL-4继续培养贴壁细胞5 d,然后加入TNF-α促进其分化成熟.倒置显微镜下观察DC形态,流式细胞仪（flowcytometer,FCM）对其进行表型鉴定.结果显微镜下观察DC细胞形态不规则,表面有大量的毛刺状突起;成熟DC细胞表面CD83、CD80分子表达明显增高.结论用rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合培养可以从健康人外周血诱导培养出成熟的树突状细胞.     

人外周血单核细胞体外诱导树突状细胞及鉴定

目的：建立从人外周血单核细胞体外诱导培养树突状细胞（dendritic cell,DC)的方法。方法：分离人外周血单个核细胞,以细胞因子粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）,白细胞介素－4（IL－4）,肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导培养获得DC,电镜及共聚集显微镜观察其形态,流式细胞术检测细胞表面抗原,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性。结果：从正常外周血分离得到的单核细胞,体外经重且人GM－CSF,IL－4,TNF－α的共同诱导培养,得到大量成熟DC,形态学观察可见典型DC特征,荧光激少在细胞分离器（FACS）检测表明,诱导的DC高表达HLA－DR（96％）,CD83（94．2％）,CDla(94.2%)分子,同时也高表达CD40（97．7％）,CD80（98．2％）分子,同种混合淋巴细胞反应显示,诱导的DC具有很强的激发同种T细胞增殖的能力。结论：人外周血单核细胞体外经细胞因子贯序诱导培养,可以生成大量功能成熟的DC,为进一步开展DC的基础研究和临床应用提供了可能。     

人外周血来源的树突状细胞的体外诱导培养

目的：从健康人外周血中诱导高纯度树突状细胞(DC)。方法：将外周血单个核细胞用贴壁法分离出单核细胞,经多细胞因子联合诱导出DC。结果：培养8～9d后即可获得大量高纯度的成熟DC,经流式细胞仪检测,所得细胞中高表达共刺激分子和粘附分子,表现为成熟DC的特征。结论：利用多细胞因子组合可从外周血诱导大量成熟DC,为DC的临床应用提供依据。     

人外周血单核细胞体外诱导成熟和激活的树突状细胞

目的建立人外周血单核细胞体外培养成熟和激活的树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法。方法从健康成人外周血分离单核细胞(PBM),加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)1000U/mL、重组白细胞介素-4(IL-4)500 U/mL、体外培养7天后,加入或不加入肿瘤坏死因子(TNF-a)100ng/mL,流式细胞仪测定DC的主要组织相溶性复合体(MHC)-II类分子和协同刺激分子,分析其成熟度和激活度。结果PBM经GM-CSF和IL-4诱导培养7天后,细胞成簇,表型为CD8320.6%、CD8655%、CD11c 36.1%、CD643.2%、人类白细胞抗原(HLA)-DR 12.4%;加入TNF-a诱导2天后,细胞表型为CD8380.5%、CD8698%、CD11c 97%、CD643.4%、人类白细胞抗原(HLA)-DR 86%。结论GM-CSF和IL-4诱导培养PBM 7天,可获得大量不成熟DC,该体系有利于DC扩增,加入TNF-a继续培养2天后,DC成熟度高,激活性好,适合肿瘤免疫治疗。     

华蟾素对正常人外周血来源树突状细胞的影响

目的:从树突状细胞(DCs)的分子细胞水平初步探讨华蟾素提高机体免疫力的作用机制。方法:分离正常人外周血单核细胞,以GM-CSF IL-4培养诱导DCs,采用自身配对设计分成对照组和华蟾素组(DCs培养48小时后加入华蟾素)。培养第7天镜下观察两组细胞形态的异同,用流式细胞仪检测DCs表面分子的表达水平,用CCK8检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,用ELISA法检测DCs培养液上清中IL-12的水平。结果:华蟾素组DCs与对照组比较细胞形态相对成熟,表面分子表达水平增高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌能力增强。结论:华蟾素能增强正常人DCs的功能。     

树突状细胞疫苗抗肿瘤作用研究进展

近年的研究证明,肿瘤本身的低免疫原性,肿瘤产生的免疫抑制因子,以及肿瘤病人免疫力的低下,都是造成肿瘤细胞"免疫逃逸"现象发生的原因。而树突状细胞作为体内功能最强的抗原递呈细胞,在以T细胞识别肿瘤抗原为核心的肿瘤免疫治疗中起重要作用。本文主要就树突状细胞在治疗肿瘤方面的作用及研究进展作一综述。     

HESW对体外人体胃腺癌细胞生物学效应的实验研究

本组用国产碎石机引发的高能冲击波（ＨＥＳＷ）处理人体胃腺癌细胞株（ＳＧＣ－７９０１）细胞悬液后，发现其细胞活性，细胞生长速度和集落形成力均有所下降，且与ＨＥＳＷ的次数和电压的高低有明显的相关性，表明ＨＥＳＷ对人体胃腺癌有即刻的毒性作用，还能抑制该肿瘤细胞的生长。电压越高，冲击次数越多，对肿瘤细胞生长的抑制作用越显著。     

肝癌细胞表型的逆转

用SMMC-7721人肝癌细胞株,经10μmol/L维甲酸(RA)处理后,其生长受到抑制,停留在G0/G1期细胞比例上升,而S、G2 M期细胞的比例下降。光镜及图象分析发现该细胞经RA作用后,形态由长棱形为主且核大转变为以多边形为主且核小,核浆比例由0.595下降至0.247。免疫荧光法检测发现,经RA作用后细胞膜上纤维连接蛋白的含量上升。经RA处理的该株细胞,AFP的分泌量明显低于相应天数的对照细胞,而白蛋白的分泌量则明显增高。结果表明:RA可以从细胞生物学、形态学发生物化学水平逆转人肝癌细胞表型。     

重组人生长激素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期作用的实验研究

目的 :探讨重组人生长激素 (r- h GH )对人乳腺癌细胞株 MCF- 7(MCF- 7)增殖和分化的影响。方法 :以不同浓度 r- h GH分别加入处于对数生长期的 MCF- 7进行体外培养 ,4 8h后用流式细胞仪检测细胞周期的百分比构成变化 ,并与对照组进行比较。结果 :不同浓度的 r- h GH作用于 MCF- 7后 ,其细胞周期的 G0 ～ G1 期、S期、G2 ～ M期的细胞百分比变化 ,差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :r- h GH对 MCF- 7的细胞周期无明显影响 ,既无促进 MCF- 7细胞增殖作用 ,也无抑制 MCF- 7细胞的作用。     

不同免疫抑制方法对树突状细胞分化成熟影响的比较

目的:比较不同免疫抑制药物单独或联合作用下对树突状细胞(DC)成熟状态的影响,初步探讨联合应用免疫抑制剂的有效性及作用机制。方法:体外培养小鼠的骨髓DC分为对照组,实验组:加入免疫抑制药物地塞米松(DEX)、环磷酰胺(CTX)、甲基强的松龙(MP),检测培养液上清中白细胞介素12(IL-12)的水平和细胞共刺激分子CD80、CD86的表达水平。结果:实验组成熟DC培养液上清中IL-12的水平、共刺激分子CD80及CD86表达水平均低于对照组(P<0.05);单独的DEX、CTX、和MP处理组的DC CD80、CD86的表达水平降低和CTX+DEX组、CTX+MP组的DC的表达水平下降相近,两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:不同的免疫抑制药物(DEX、CTX、MP)均可影响和阻止DC的进一步成熟,从而增强免疫耐受性,可能是此类药物治疗自身免疫性疾病的重要靶点;对DC成熟的抑制作用与药物浓度呈正相关,但两种免疫抑制药物协同刺激与单一药物刺激比较并不增加对DC成熟的抑制效果,有可能在免疫抑制药物协同作用下在对DC成熟性和机体免疫应答反应上存在不同的机制。     

电离辐射对HepG2细胞系细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞系HepG2细胞细胞周期的影响.方法:以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象:分别以2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后培养24h;以4Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后分别培养6h、12h、24h和48h;以未予射线照射的同步培养细胞为对照.采用流式细胞技术检测不同照射剂量及照射后不同时间点HepG2细胞细胞周期的变化.结果:2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy剂量6MV-X线照射后培养24h,HepG2细胞表现为随着照射剂量的增加,G1期细胞百分率下降;6Gy、8Gy和10Gy剂量组HepG2细胞表现为G2/M期阻滞.4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期阻滞,阻滞峰值为正常的56倍;然后细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡.结论:不同剂量X线照射人肝癌细胞系HepG2细胞,大分割剂量组主要诱导G2/M期阻滞;4Gy剂量射线照射后,S期细胞阻滞明显,并与G2/M期阻滞同步解除,阻滞解除后启动增殖或进入凋亡.     

三氧化二砷对系统性红斑狼疮患者外周血成熟和分化的影响

目的：观察不同浓度三氧化二砷（ATO）对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血体外培养树突状细胞分化成熟和功能的影响,探讨其作用机制,初步阐明DC是否为ATO治疗SLE的作用靶点。方法：分离SLE患者外周血单个核细胞,用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）细胞因子诱导DC成熟,加入不同浓度ATO培养。培养第9d收集DC细胞,流式细胞仪检测CD80、CD86和HLA-DR的表达。MTT法检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力,ELISA法检测混和淋巴细胞反应培养上清IL-10和IFN-γ水平。结果：1.ATO处理后的DC表达CD80、CD86和HLA-DR百分数较对照组明显降低,P均〈0.05,且随ATO浓度的增加DC表达CD80、CD86和HLA-DR百分数降低;2.ATO处理后的DC与T细胞混合培养,其刺激T细胞增殖相应的OD值较对照组明显降低,且随浓度增加降低越明显。3.其混合培养的上清液中IL-10水平较无ATO处理的DC与T细胞的混合培养上清液明显降低,P〈0.05,而IFN-γ水平无统计学差异,P〈0.05结论：ATO在体外可抑制SLE患者外周血DC的成熟,未成熟DC能抑制T细胞增殖及T细胞向Th2细胞转化,从而纠正SLE患者的部分免疫紊乱。     

人参二醇组皂甙对人肾小管细胞增殖的影响

目的：研究不同浓度的人参二醇组皂甙对培养的人肾小管细胞增殖的影响。方法：用含有7种不同浓度的人参二醇组皂甙（0ug.ml^-1、5ug.ml^-1、10ug.ml^-1、25ug.ml^-1、50ug.ml^-1、75ug.ml^-1、100ug.ml^-1）的培养基,在96孔培养板中培养人肾小管细胞96小时后,以MTT法判定细胞的增殖情况。结果：与对照组比较,在5-25ug.ml^-1浓度范围内,人参二醇组皂甙可明显地促进肾小管细胞增殖;在50ug.ml^-1时,其作用不明显;在75-100ug.ml^-1。则抑制其生长。结论：适量的人参二醇组皂甙能促进肾小管细胞的增殖,浓过高则对其生长产生抑制作用。     

抗树突状细胞单克隆抗体对小鼠实验性自身免疫重症肌无力的作用

用部分纯化的乙酰胆碱受体(AchR)加完全福氏佐剂注射给C57BL/6小鼠可发生实验性自身免疫重症肌无力(EAMG),出现肌力递减,AchR刺激脾淋巴细胞有增殖反应及机体产生抗AchR抗体。预先用抗树突状细胞单抗封闭,可阻止这一过程发生。