CT1修饰的神经干细胞移植癫痫持续状态大鼠海马后的迁移、分化及对空间记忆的影响

目的 观察心肌营养素1(CT1)修饰的神经干细胞(NSCs)移植癫痫持续状态(SE)大鼠海马后的存活、迁移和分化情况,观察对大鼠空间记忆功能的影响.方法 (1)将携带CT1基因的重组腺病毒(Adv-CT1)转染NSCs,并用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记.(2)随机将54只SE大鼠分为联合移植组、单纯移植组及模型对照组(各18只),分移植后1、4及8周3个时间点(各6只).(3)共聚焦荧光显微镜下观察NSCs存活、分化及迁移;水迷宫试验观察空间记忆功能.结果 移植后4及8周,联合移植组双标阳性细胞数明显多于单纯移植组,并见细胞迁移,单纯移植组未见细胞迁移;联合移植组大鼠逃避潜伏期短于单纯移植组(P<0.05).结论 CT1能促进NSCs在SE大鼠脑内的存活、迁移和分化,NSCs-CT1联合移植可改善大鼠SE后空间记忆功能障碍.     

神经干细胞和嗅鞘细胞联合移植与神经干细胞移植治疗实验性脑出血的比较

目的对比神经干细胞(NSCs)和嗅鞘细胞(OECs)联合移植与NSCs移植治疗大鼠脑出血的疗效。方法制作大鼠脑出血模型,记录细胞移植后对照组和移植组(NSCs组、NSCsOECs组)大鼠运动功能,采用免疫组化观察移植细胞在体内存活、分化和迁徙的情况。结果NSCsOECs组和NSCs组移植NSCs分别有14.19%和2.96%分化为神经元,差异有统计学意义(χ2=154.79,P<0.01),30d时神经功能缺损评分NSCs组为1.60±0.13,NSCsOECs组为1.01±0.11,差异有统计学意义(P<0.05),OECs移植后能存活、迁徙,NSCs移植后能存活、分化为神经元、星形和少突胶质细胞,并向损伤区迁徙。结论OECsNSCs移植改善脑出血大鼠运动功能的疗效优于单纯NSCs移植。     

心肌营养素1修饰的神经干细胞移植对癫(癎)持续状态大鼠海马损伤及苔藓纤维发芽的影响

目的 观察心肌营养素1(CT1)修饰的神经干细胞(NSCs)移植到癫(癎)持续状态(SE)大鼠海马后的存活、迁移和分化情况,探讨CT1-NSCs移植对海马神经元损伤及苔状纤维发芽(MFS)的影响.方法 建立氯化锂-匹罗卡品致SE大鼠模型,随机分为CTI-NSCs移植组、单纯NSCs移植组、模型组和正常对照组,每组18只.各组再分为移植后1、4、8周3个时间点,每个时间点6只.共聚焦免疫荧光显微镜下观察移植的NSCs在脑内存活、分化及迁移情况;Nissl染色观察海马神经元形态并计数CA1区神经细胞数;Timm染色检测海马齿状回MFS形成.结果 (1)移植后4周及8周,CT1-NSCs移植组双标阳性细胞数量明显多于单纯NSCs移植组,前者可见神经细胞向周围迁移,后者未见明显迁移现象.(2)SE后大鼠CA1区神经细胞数随时间推移进行性减少,CTI-NSCs移植组细胞数(移植后1、4,8周分别为68.85±11.49、60.89±12.17和51.51±13.34)多于单纯NSCs移植组(67.92±10.78、42.56±11.47和30.49±10.12),4、8周时差异有统计学意义(t=4.650、5.334,P<0.05).(3)SE后大鼠齿状回内分子层可见MFS形成,且MP3评分随时间推移进行性增高;移植后1、4,8周时CT1-NSCs移植组MFS分值(0.77±0.04、2.48±0.89和2.39±0.82)明显低于单纯NSCs移植组(1.12±0.62、3.17±0.64和3.88±0.51,t=6.059、9.511、9.728,P<0.05).结论 CT1能够促进NSCs在SE大鼠脑内存活、迁移和分化,CTI-NSCs移植对SE大鼠海马损伤有修复作用,并可抑制海马MFS形成.     

神经干细胞移植于慢性癫痫鼠海马CA3区对其癫痫发作影响的研究

目的 研究神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植到慢性海人酸(kainic acid,KA)癫痫鼠海马CA3区后对大鼠癫痫发作的影响.方法 用KA脑审注射制作慢性癫痫模型.将原代培养的、EGFP标记的NSCs移植到慢件癫痫鼠的海马CA3区.分别在移植后第2周、第4周、第8周和第12周连续进行7天观察大鼠癫痫发作频率和程度,在移植后第10周进行发作间期右侧海屿深部脑电监测.然后取脑冰冻切片,在倒置荧光显微镜下直接观察移植细胞的存活和迁移,用免疫荧光染色观察移植细胞分化情况,Timm's染色观察海马齿状回异常苔状纤维发芽.结果 移植后12周仍有大量移植细胞存活(65,045.00±881.72).NSCs在移植区以胶质细胞分化为主,在齿状回和海马各区以神经元分化为主,γ-氨基丁酸(GABA)能神经元在齿状回门区和海马CA3区分化比率较高.NSCs移植后第4周移植组癫痫鼠的发作次数与对照组相比开始减少,Timm's染色计分和发作程度也有明显改善,两组发作问期脑电图尖、棘波在每个观察期的发放次数分别是3.83±4.96和27.16±21.08,,结论 将NSCs移植到慢性KA癫痫鼠的海马CA3区,移植细胞不仪能够长期存活、迁移到海马齿状回的各区,而且能够分化为神经元和神经胶质细胞,特别是GABA能神经元,同时还能够抑制齿状回颗粒细胞的苔状纤维发芽,从而减少癫痫发作次数,减轻癫痫发作程度.     

维甲酸和Shh因子联合诱导神经干细胞分化为胆碱能神经元及其体内移植的实验研究

目的 探讨维甲酸和Shh因子联合诱导大鼠神经干细胞(NSCs)分化为胆碱能神经元的可行性. 方法 分离、培养和鉴定大鼠的NSCs,联合应用维甲酸和Shh因子诱导NSCs分化,应用胆碱能细胞特异抗体VAChT作组化鉴定,通过流式细胞仪计数诱导后胆碱能神经元的比例;并将其注射到大鼠脊髓,观察体内存活情况. 结果 维甲酸和Shh因子联合诱导NSCs可以产生较高比例的VAChT阳性细胞,阳性率达77.26%±0.99%,明显优于对照组:移植体内的细胞可以存活并具有一定迁移能力. 结论 应用维甲酸和Shh因子联合诱导NSCs能产生较高比例的胆碱能神经元,可以为修复脊髓损伤提供新的细胞来源.     

骨髓来源和脑来源神经干细胞移植治疗大鼠脑损伤的实验研究

目的将骨髓来源和脑来源神经干细胞(NSCs)移植入大鼠脑损伤模型,比较两种细胞移植治疗脑外伤的效果和临床应用价值。方法分别在体外培养骨髓来源和脑来源的NSCs,待两种细胞多次传代并分别以nestin、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定,BrdU标记后,移植入已经建立好的大鼠脑损伤模型损伤部位,观察记录大鼠行为能力变化。于移植后10d和20d取鼠脑进行免疫组化分析,比较两种细胞在脑内的存活和迁移情况,及脑组织的修复情况。结果两种来源NSCs均可在移植区存活并向周围脑组织迁移,两组大鼠行为能力均有一定程度恢复,且两组之间差别无显著性意义(P＞0．05),而与对照组差别有显著性意义(P＜0．05)。结论骨髓来源NSCs与脑来源NSCs移植后有相似的存活和迁移能力,两种细胞均可帮助大鼠脑损伤后运动及感觉功能恢复。     

神经干细胞移植促进脑出血大鼠神经功能恢复的实验研究

目的探讨脑内定向移植神经干细胞(NSCs)治疗脑出血的可行性和机制。方法采用在成年大鼠中立体定向纹状体内注入新鲜自体血液制作实验性脑出血模型,术后1d采用立体定向将在体外扩增、纯化并经BrdU标记的神经干细胞移植入脑出血部位,通过神经功能缺损评分来观察移植后大鼠神经行为学改善情况,并通过双标GFAP、NeuN、BrdU免疫组化来检测移植入脑的NSCs。结果移植的NSCs迁移至血肿周围区,并分化为神经元(≈10%BrdU阳性细胞)和星形胶质细胞(≈75%);与对照组比较,NSCs移植组在移植后1周有更好的神经功能缺损评分,而且此疗效可维持长达8周。结论移植的NSCs可在脑出血的大鼠脑中存活、迁移,并促进功能恢复。立体定向移植神经干细胞可改善实验性脑出血大鼠的神经功能。     

移植时间对大鼠视神经损伤后神经干细胞迁移的影响

目的探讨移植时间对大鼠视神经损伤后神经干细胞(NSCs)在视网膜内迁移的影响。方法 18只SD大鼠行右侧视神经损伤后按随机数字表法随机平均分为3组,并分别于损伤后当天及伤后7d和14d采用微量注射法行右眼视网膜下腔移植2μl(105个/μl)转染绿色荧光蛋白基因的NSCs(GFP-NSCs)。4周后处死大鼠,取右眼球做冰冻切片,对迁移到视网膜内的移植细胞进行计数。各组切片分别用胸腺细胞表面糖蛋白、胶质纤维酸性蛋白、β微管蛋白、视紫红质抗体进行免疫标记,观察各组移植细胞在视网膜上的分化情况。结果损伤当天及伤后7和14d移植组视网膜上的GFP阳性细胞数分别为(163441.14±16876.81)个、(145736.57±27449.07)个和(117291.33±15849.19)个,两两相较,均差异显著(P<0.01)。三组的移植细胞均可在宿主视网膜内存活、迁移,且可分化为神经胶质细胞、神经元和视网膜神经节样细胞。结论大鼠视神经损伤后随着移植时间的推迟,迁移到宿主视网膜内的移植细胞量下降。     

甘氨酸通过抑制大鼠创伤性脑损伤后炎症反应来发挥神经保护作用

目的 探讨甘氨酸对创伤性脑损伤(TBI)大鼠的神经保护作用及机制。方法 将SD雄性大鼠随机分为对照(Sham)组、脑损伤+溶剂(TBI+Vehicle)组和脑损伤+甘氨酸(TBI+Glycine)组,采用Feeney's自由落体法建立创伤性脑损伤模型; 术后1 h侧脑室注射甘氨酸(2 mg/kg)或等体积的溶剂; 术后24 h,取脑组织样本; 采用脑含水量测定、蛋白免疫印迹法和免疫荧光法评价甘氨酸对大鼠TBI的神经保护作用; 采用ELISA法检测炎症因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平,评价甘氨酸对TBI后脑组织炎症反应的抑制作用。结果 甘氨酸可减轻TBI后脑水肿,减少皮层神经元损伤; 同时甘氨酸可抑制TBI后炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的过度释放。结论 甘氨酸对大鼠TBI具有神经保护作用; 甘氨酸对TBI后相关炎症因子过度增高的抑制可能部分解释其神经保护作用机制。     

神经干细胞修复中枢神经系统损伤研究进展

利用神经干细胞(neural stem cells ,NSCs)修复中枢神经系统(CNS)损伤存在巨大潜力。NSCs可在多种哺乳动物胎脑或成年个体的脑组织中分离得到,也可以从小鼠和人的胚胎干细胞诱导产生。这些细胞可在体外长期增殖并保持多向分化潜能。NSCs被移植入成年CNS后,在无神经组织发生的区域主要分化为胶质细胞。移植入损伤的脑和脊髓后,NSCs的正常分化明显受到抑制。植入的NSCs和谱系限制性的前体细胞(lineage—committed preeur-sors)可在宿主CNS中存活并迁移。