奥沙利铂逆行隔离灌注对兔VX2移植肝癌的疗效和毒性观察

目的 对兔VX2移植肝癌行奥沙利铂(L-OHP)隔离灌注实验,观察不同流出道途径对L-OHP的抗肿瘤作用和肝脏毒性的影响.方法 将接种VX2肿瘤的新西兰兔随机分为三组,每组20只:A、B组均经肝动脉灌注5 mg/kg的L-OHP,C组为空白对照,其灌注液中不含L-OHP.A组为顺行灌注,灌注液经肝静脉流出;B、C组为逆行灌注,灌注液经门静脉流出.每组术后6 h、12 h检测血生化、肝组织病理学、血管内皮生长因子(VEGF)表达情况和肝细胞凋亡指数(AI);A、B组行反相高效液相色谱分析法测定L-OHP浓度.结果 三组血清ALT、AST在术后6 h、12 h均显著升高,A组明显高于B和C组,各组间比较差异均有统计学意义(tALT=2.328、tALT=7.116、tALT=3.124 P＜0.05;tAST=2.547、tAST=4.710、tAST=2.238 P＜0.05).A组术中L-OHP外周血浓度和肝组织浓度均明显高于B组(t=3.091,P＜0.05;t=2.778,P＜0.05),但A、B组肿瘤组织及流出道L-OHP浓度比较差异无统计学意义(t=1.461,P＞0.05;t=0.223,P＞0.05).术后12 h A组肝脏病理改变较B组严重.术后12 h A和B组VEGF表达水平较C组显著降低(tAC=2.728,P＜0.05;tBC=3.397,P＜0.01),但A组和B组比较,差异无统计学意义(t=0.591,P＞0.05).术后12 h A组肝细胞凋亡指数(AI)明显高于B和C组,且各组间比较差异均有统计学意义(tAB=3.689,P＜0.01;tAC=5.067,P＜0.01;tBC=2.607,P＜0.05).结论 L-OHP隔离灌注具有明显抗肿瘤作用;化疗灌注液经门静脉逆行流出是一种较安全的区域化疗方法.     

VX2肝癌兔肝动脉联合门静脉插管模型的建立及其手术方法的比较

近年来,在肝癌双重血供(肝动脉和门静脉)的理论基础上,经肝动脉联合门静脉插管栓塞/化疗灌注/化疔栓塞治疗中晚期肝癌患者的方法在临床上有广泛运用,并在许多临床研究中取得比单纯经肝动脉治疗更好的效果[1-4].但其结果尚未能得到公认及未在基础实验中得到很好证明.兔VX2肝癌模型是少数建立在较大动物体内且适于进行插管实验研究的动物模型[5-6],且已有经肝动脉插管VX2肝癌兔模型的报道[7-8],但尚未见肝动脉联合门静脉插管VX2肝癌兔模型的报道,且目前的研究多采用显微镜下插管的方法,认为显微镜下视野清晰,对血管损伤小,手术需要时间短,插管成功率高[9].     

兔肝VX2肿瘤模型的建立及影像学研究现状

VX2肿瘤细胞株是一种可移植的肿瘤细胞株,可接种到兔的肝脏、肾脏等部位,建立原位肿瘤动物模型。兔VX2肝癌模型是目前较常用的实验性动物肝癌模型,本文就兔肝VX2肿瘤模型的建立和影像学表现进行综述。     

诺帝-褐藻酸钠微球血管内介入治疗兔VX2肝癌

目的探讨诺帝-褐藻酸钠微球(KMG)血管内介入治疗兔VX2肝癌的效果。方法将50只VX2肝癌模型兔随机分为5组(n=10),于DSA引导下行靶血管灌注:A组灌注生理盐水,B组诺帝,C组KMG,D组5-氟尿嘧啶+KMG,E组诺帝-KMG。术前1天及术后2周行增强CT扫描,比较各组肿瘤体积及体积增长率。采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)表达,计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果术前1天各组肿瘤体积差异无统计学意义(P均0.05);术后2周,A、B组肿瘤体积及体积增长率均大于C、D、E组(P均0.05)。5组间VEGF阳性率及MVD差异均有统计学意义(P均0.01),E组VEGF阳性率及MVD均低于其他各组(P均0.05)。结论诺帝-KMG血管内介入治疗兔VX2肝癌效果较好。     

兔VX2肝癌模型的制作及CT、MRI表现

目的建立稳定的兔VX2移植性肝癌模型,分析少血供移植性肝恶性肿瘤的CT及MRI影像特征,与病理学相对照。方法取荷瘤兔后腿肌肉内VX2肿瘤,剪成小块后,经开腹种植于30只新西兰大白兔肝左叶或肝中叶,于种植后第2周、第3周分别进行CT及MRI增强扫描,统计肿瘤种植成功率,观察肿瘤体积及生长指数,分析肿瘤CT及MRI平扫和增强表现,区分富血供、少血供肿瘤;分别处死2只实验兔进行病理分析,与影像学相对照。结果VX2移植瘤种植成功22只;成瘤率为73%。2周与3周时肿瘤生长率有显著差异(P<0.01)。VX2移植瘤在CT及MRI上表现为占位性病变,呈类圆形或分叶状低密度或低信号结节,增强后发现少血供VX2移植瘤14只,表现为肿瘤无强化或轻微强化,肿瘤主体保持为低密度或低信号;富血供肝移植瘤8只,表现为肿瘤中度强化或明显强化,肿瘤主体密度或信号明显高于肝实质。光镜下肿瘤新生毛细血管虽较丰富,但纤细。结论经开腹种植法制作兔VX2肝移植瘤模型是一种简单、成功率高的建模方法,但易发生转移。CT及MRI平扫和增强扫描是检测肿瘤生长和血供的可靠方法,兔VX2肝移植瘤模型在CT与MRI上主要是一种少血供肝癌模型。     

兔肝癌动脉插管介入技术研究

兔VX2肝癌模型是一种适合经导管动脉化疗栓塞术( TACE)实验研究的肝癌动物模型。我们对兔VX2肝癌模型介入插管技术进行了改良,提高了插管成功率,现报道如下。一、材料与方法1.材料:6 ～8个月龄新西兰大白兔20只,体质量2.0～2.5 kg,雌雄不限,购自山东省农业科学院。VX2瘤细胞株由美国引进。介入器械:3F微导管及微导丝、自制股动脉导管鞘等。主要设备:德国西门子大C臂数字减影血管造影(DSA)。2.建立移植性肝癌模型:将瘤细胞接种于兔大腿内侧近腹股沟部位皮下,使其成瘤并传代,2周左右瘤体可长至1 ～2 em3,手术取出传代瘤株,取靠近边缘的鱼肉样肿瘤组织在平皿上剪成l～2 mm3的小块,以生理盐水反复冲洗,作为瘤种备用。将预接种兔麻醉后固定,剑突下切口长1 ～2 em打开腹腔,暴露肝脏。     

建立改良法兔VX2肝癌模型及肝动脉联合门静脉插管的应用

目的采用改良法建立兔VX2肝癌模型,探讨经肝动脉联合门静脉插管技术的应用并分析其影响因素。方法对60只健康新西兰大白兔行改良开腹穿刺接种法移植肝癌,并行肝动脉联合门静脉造影,根据术后是否发生短期死亡(术后7天内)分为存活组和死亡组,将可能导致实验兔死亡的因素进行单因素分析,以有统计学意义的指标为自变量,建立二分类Logistic回归模型,分析导致实验兔死亡的独立危险因素。结果 60只实验兔均移植肿瘤成功,9只(9/60,15.00%)实验兔术后短期内死亡,51只(51/60,85.00%)存活。单因素分析显示两组间体质量2.5kg、术中追加麻醉、手术时间≥60min、切口长度≥5cm及总出血量≥25ml为相关影响因素(P均0.05)。Logistic回归分析筛选出体质量2.5kg、术中追加麻醉及出血量≥25ml为手术死亡的独立危险因素(P均0.01)。结论改良法兔VX2肝癌模型建立成功率较高;选择体重较大的实验兔,同时加强手术技巧的训练,减少术中出血量和避免术中追加麻醉是进行肝动脉联合门静脉造影时降低实验兔死亡率的有效措施。     

CT引导下兔VX2肝癌模型制作及血管造影技术

目的改进兔VX2肝癌模型制作方法,研究其血管造影方法及腹腔动脉血管解剖特点。方法对45只新西兰大白兔在CT定位下经皮穿刺肝左叶后注入VX2瘤块制作兔VX2肝癌模型,植入2周后穿刺股动脉行腹腔干-肝动脉造影。结果 42只兔建模成功,肿瘤接种成功率为93.33%(42/45);血管造影可清楚显示腹腔干动脉各分支情况,肝内肿瘤血供丰富。结论 CT引导下经皮穿刺注射VX2瘤块法建模成功率较高。兔VX2肝癌为富血供型肿瘤,血管造影可准确显示肿瘤及其血供,有助于肝动脉途径介入实验研究。     

环五肽RGD靶向的纳米金偶联VEGFsiRNA增强兔VX2肝肿瘤射频消融损伤效应的研究

目的:探讨环五肽RGD(Tyr RGD)靶向的纳米金颗粒(GNPs)偶联VEGF小干扰RNA(Tyr RGDGNPs-VEGFsi RNA)复合物对兔肝脏VX2肿瘤射频消融(RFA)损伤效应的影响。方法:采取开腹肝脏种植VX2肿瘤组织块的方法建立兔VX2肝癌模型。首先将6只肝癌兔均分为两组分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物和GNPs,注射48 h后,透射电镜检测两者在肿瘤标本中的聚集和分布情况。然后将30只肝癌兔均分为3组,分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物、GNPs、生理盐水48 h后,行RFA治疗,48 h后切取标本,行病理学观察,测量肿瘤毁损体积,TUNEL法检测残癌细胞凋亡。最后将27只肝癌兔均分为3组,分别行RFA+Tyr RGD-GNPsVEGFsi RNA注射,RFA+生理盐水注射、生理盐水注射,饲养至自然死亡,记录生存时间。结果:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物在肿瘤中的聚集明显优于GNPs(14.2颗/500 nm视野vs.0颗/500 nm视野,P0.01)。注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物后的RFA治疗毁损体积明显大于注射GNPs和生理盐水(5.12 cm3 vs.1.78 cm3 vs.1.49 cm3,P0.01),且前者残癌区肿瘤细胞凋亡数明显高于后两者(111.7个vs.36.3个vs.34.7个,P0.01),而后两者上述指标差异均无无统计学意义(均P0.05)。RFA+Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA治疗的肝癌兔较RFA+生理盐水治疗、单纯生理盐水治疗的肝癌兔的平均生存时间明显延长(70.9 d vs.51.2 d vs.43.9 d,P0.01)。结论:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物能在肝脏肿瘤中靶向聚集,具有扩大RFA毁损范围和促进肿瘤细胞凋亡的作用,从而增强RFA疗效。     

兔肝癌组织缺血再灌注后的损伤及凋亡

目的研究肝癌缺血再灌注后的损伤及凋亡。方法超声引导穿刺新西兰兔肝脏左中叶注射VX2肿瘤组织混悬液,建立肝脏肿瘤模型,阻断肿瘤所在的肝左中叶的肝动脉分支60min后去除血管阻断恢复血流,分别再灌注0min、1h、1d、3d和1w。取肿瘤组织、癌周组织和肝脏组织,除测定肿瘤组织和肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量外,还对肿瘤组织、癌周组织及肝脏组织进行了HE染色。结果缺血再灌注后肿瘤组织和正常肝组织中的SOD浓度均迅速下降并分别于再灌注1h和0min达最低水平(64.59±4.97,12.38±0.31),其后逐渐恢复(112.83±5.84,25.78±0.56)但至再灌注7d仍低于再灌注前(200.32±26.43,42.00±1.07)。但癌组织中的SOD含量下降更为显著。从缺血再灌注开始至7d肿瘤组织的MDA含量下降(21.59±0.59),而肝脏组织缺血再灌注后0min至7d(29.04±1.43),MDA含量明显升高,均高于缺血再灌注前水平(18.26±0.43)。HE染色显示,肝癌组织缺血再灌注后凋亡细胞明显增多,其中以1d最为显著(23.08%),而癌周和肝组织改变不甚明显(与同时点的癌组织相比P<0.01)。结论缺血再灌注可增强对肝癌组织的损伤并促进细胞凋亡而癌周和正常肝脏组织的改变不明显。     

兔肝VX2肿瘤移植模型的复制及其意义

目的：探讨建立兔肝VX2肿瘤模型，为该模型的应用提供实验依据。方法：采用VX2细胞株复制兔肝肿瘤模型，并改进其制作方法，观察其肿瘤的生长过程，并检测肝功能谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及总胆红素(TB)在模型制作前、后不同时相的变化，同时观察脏器转移、组织病理学改变、影像学表现及实验动物的自然生存时间。结果：接种后3周均可见到肿瘤生长，肿瘤直径为1．5～2．0cm左右，肿瘤接种成功率为100％；彩超检查显示肝脏有结节样增强回声，CT示肿瘤为低密度病灶，增强扫描见病灶不均匀强化。移植肿瘤外观呈灰白色，扪之质地较硬，无明显的包膜，剖开肿瘤中心可见灶性坏死；光镜下见肿瘤细胞核浆比例大，细胞排列紊乱，呈浸润性生长；动物接种后的自然生存时间为40～53d，死亡原因主要为肿瘤生长及转移引起的多脏器功能衰竭。结论：兔肝VX2肿瘤从病理表现、病理过程及转移均与人肝癌相似，该模型具有容易复制、生长周期短、成功率高及模型稳定等特点，是一种较理想的肝肿瘤实验动物模型。     

肝癌组织和正常肝组织缺血再灌注损伤的比较研究

目的比较肝癌和正常肝组织的缺血再灌注损伤。方法兔肝脏注射VX2肿瘤组织混悬液建立肝脏肿瘤,和缺血再灌注模型。测定再灌注各时点组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;用HE和TUNEL染色观察和比较两种组织的细胞凋亡情况。结果缺血再灌注后癌组织中的SOD浓度下降显著,于再灌注1h即达最低水平(64.59±4.97NU/mgprot),其后逐渐恢复,但至再灌注7d仍低于再灌注前(121.12±6.88NU/mgprot)。与正常肝组织比,癌组织缺血再灌注后MDA的浓度下降,变化与SOD相似;凋亡细胞数量明显增加,至1d时达最高水平;至再灌注7d时阳性细胞仍多于缺血再灌注前,其凋亡细胞数量多于正常肝组织。结论癌组织对缺血再灌注的影响和损伤较正常肝组织更为敏感。     

肝癌区域性治疗的新突破——肝脏隔离灌注化疗

我国的肝癌患者约占全世界的 5 0 % ,其死亡率占恶生肿瘤死亡率的第二位。长期以来 ,手术切除一直是肝癌的首选治疗方法 ,但临床诊断明确的肝癌患者多数已属中晚期 ,可行手术切除者不足 2 0 %。近年来随着细胞生物学、影像学、介入放射学的发展 ,各种区域性化疗方法应运而生并迅速发展 ,为肝癌的开辟出新的领域。肝脏隔离灌注 (isolated liver perfusion IL P)化疗作为新近开展起来的技术为肝癌区域性化疗注入了新的活力。1　肝脏隔离灌注化疗的国内外研究进展要是通过阻断肝脏周围血管 ,将肝脏循环隔离于体循环之外 ,然后采用体外循环装…     

CD147在兔VX2模型肿瘤组织的表达及意义

目的观察CD147在兔VX2模型肿瘤组织及癌旁组织的表达,并与人肝癌组织进行比较。方法标本分为肿瘤组,癌旁组,人肝癌组(每组数n=10)。应用免疫组织化学三步法(S-P)对比CD147在细胞的定位和表达,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肿瘤组与癌旁组的CD147 mRNA的表达差异,应用免疫印迹(Western blot)蛋白半定量法,对比肿瘤组和肝癌组CD147蛋白量的表达水平。结果CD147表达定位于兔VX2肿瘤细胞和人肝癌细胞膜,染成棕黄色,癌旁组织细胞无表达,膜无明显染色。CD147在mRNA水平上,肿瘤组和癌旁组的表达差异有统计学意义(t=13.836,P<0.01)。肿瘤组和肝癌组的蛋白积分吸光度(IOD)和内参的比值为2.4591±1.2524和2.1251±0.1543,差异无统计学意义(t=0.529,P>0.05)。结论CD147在恶性肿瘤组织高表达,在兔VX2模型肿瘤组织与癌旁组织表达则存在明显不同。此模型适宜应用于与CD147有关的一系列的研究。     

兔VX2肝癌模型制作的完善及综合影像学评价

目的进一步完善兔VX2肝癌模型的制作,比较兔VX2肝癌的CT、MRI、DWI及DSA影像表现,评价各影像检查对瘤体显示的优越性。方法实验动物为新西兰大白兔。模型制作前期实验采用开腹VX2瘤粒包埋法接种,后期采用开腹VX2瘤粒悬浮液针头注入法,均接种于兔肝左叶。接种两周后行CT、MRI及DWI成像,随后行经股动脉肝动脉超选择DSA。结果前期实验瘤块种植成功率66.7%(8/12),后期实验种植成功率100%(24/24)。CT平扫肿瘤为略低密度病灶,强化不明显,境界清晰;MR T1WI呈较低信号影,EPI序列T2WI呈略高信号影;DWI成像见高亮信号影,显示清晰;DSA造影可见肝左叶孤立的瘤体由增粗的动脉供血,肿瘤血管较丰富。结论兔VX2肝癌模型是介入治疗实验研究极为理想的动物模型。VX2瘤粒悬浮液针头注入法较瘤粒包埋法成功率更高。CT、MR平扫、EPI序列及DWI成像对于肿瘤的影像评价互有优势,EPI及DWI成像可更敏感地显示肿瘤,DSA可清晰地显示肿瘤的供血。     

兔肾VX2肿瘤声像图特点及超声造影的实验观察

目的分析兔肾VX2肿瘤在二维灰阶超声（2DUS）、彩色多普勒血流显像（CDFI）、方向性能量多普勒（CCD）及超声造影（CEUS）的表现,探讨CEUS在检测兔肾VX2肿瘤中的作用。方法采用超声引导下组织悬浊液注射法建立18只兔肾VX2肿瘤模型,应用2DUS、CDFI和CCD观察肾肿瘤的大小、形态、内部回声和血流表现,实时观察肿瘤在CEUS模式下的造影剂灌注。结果肿瘤2DUS以低回声-等回声为主要表现,形态呈圆形或欠规则,CDFI及CCD呈星点状、短棒状或树枝状血流。肿瘤大部分表现为低增强或者环形增强模式。结论常规超声可作为检测VX2兔肾肿瘤的有效手段,用来实时观察肿瘤的生长变化,CEUS能更好地反映了兔肾种植瘤的特征性血供及微血管灌注情况。     

L-精氨酸在人肝癌裸鼠肝脏移植瘤生长中的作用

目的 探讨L-精氨酸(L-arg)在人肝癌裸鼠肝脏移植瘤生长中的作用.方法 建立人肝癌裸鼠肝脏移植瘤模型,使用L-arg进行干预治疗,采用免疫组化方法 和图像分析技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 (1)小剂量L-arg(0.5 g·kg~(-1)·d~(-1))组、大剂量L-arg(1g·kg~(-1)·d~(-1))组和对照组移植瘤重量分别为(985±76)mg、(328±35)mg、(586±56)mg;大剂量L-arg组移植瘤重量较对照组显著减少(P＜0.05);小剂量L-arg组移植瘤重量较对照组显著增加(P＜0.05).(2)大剂量L-arg组移植瘤PCNA的表达较对照组显著下调(P＜0.05),小剂量L-arg组和对照组比较无明显差异(P＞0.05).(3)大剂量L-arg组NO水平较对照组和小剂量组显著升高(P＜0.05),小剂量L-arg较对照组显著升高(P＜0.05).(4)大剂量L-arg组移植瘤凋亡指数(AI)明显高于对照组(P＜0.05);小剂量L-arg对移植瘤AI无明显影响(P＞0.05).结论 L-精氨酸对肝癌具有双重作用.小剂量L-精氨酸可促进肝癌生长;大剂量L-精氨酸抑制肝癌的生长.     

兔脊柱VX2移植瘤模型的建立及生物学特性观察

目的探讨兔脊柱VX2移植瘤模型的建立方法及其生物学特性。方法新西兰大白兔25只,分为两组。实验组（20只）采用VX2瘤细胞悬液经横突椎弓根注射法建立兔脊柱VX2移植瘤动物模型,对照组（5只）以生理盐水注射代替VX2瘤细胞悬液进行同样操作。接种后每天观察下肢神经功能变化,接种术后第2周起每周行X线、CT影像学检查肿瘤生长情况。动物出现下肢瘫痪、死亡或接种后6周为观察终点,取出接种椎作组织学检查。结果对照组5只兔观察期内均未出现神经功能障碍,检查未见异常。实验组中1只兔因钻孔破人椎管,退出实验。19只兔成功接种,1只于接种术后9天感染死亡,1只经病理检查证实观察截止时仍无肿瘤生长,其余17只成瘤（89．5％）。观察期内9只出现完全瘫痪,5只不全瘫,其余3只未出现神经功能障碍。结论经横突-椎弓根种植法建立兔脊柱VX2移植瘤模型具有成瘤率高、可重复性好的特点。该模型能较好地模拟脊柱转移癌发展、压迫脊髓导致瘫痪的病理过程,有助于脊拄转移癌各种治疗模式的研究和探索。     

不同剂量高强度聚焦超声辐照兔肝VX2移植瘤的病理学观察

目的观察不同剂量高强度聚焦超声（HIFU）对兔肝VX2移植瘤形态和超微结构的影响。方法通过光镜、电镜观察VX2兔肝移植瘤受不同剂量高强度聚焦超声辐照后即刻、72 h时靶区的病理学特点。结果不同剂量HIFU辐照后即刻,瘤细胞大致有6种表现形式：细胞生长旺盛、可逆性损伤、不可逆性损伤改变、变性坏死、凝固性坏死和裂解坏死;72 h后主要有2类转归形式：细胞趋于正常或进一步溶解、吸收。结论 180 W为一次性HIFU辐照的最佳剂量;剂量组合或为一种更理想的肿瘤治疗方法。     

肝脏移植技术医疗质量控制指标(2020年版)

一、肝癌肝脏移植指标(LIT-01)(一)肝癌肝脏移植受者比例(LIT-01-01)定义:肝癌肝脏移植受者人数占同期肝脏移植手术受者总人数的比例。计算公式:肝癌肝脏移植受者比例=肝癌肝脏移植受者人数/同期肝脏移植手术受者总人数×100%(二)单发肿瘤,直径不超过5 cm的肝癌肝脏移植受者比例(LIT-01-02)定义:单发肿瘤,直径不超过5 cm的肝癌肝脏移植受者人数占同期肝癌肝脏移植手术受者总人数的比例。