紫甘薯花色苷通过circ_0003998/miR-145轴调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨紫甘薯花色苷(purple sweet potato anthocyanin,PSPA)是否通过circ_0003998/miR-145轴调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭.方法:选用乳腺癌MDA-MB-231细胞,将其分为对照组,200、400和800μg/ml PSPA组,pcDNA组、...     

circ_0001821靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖、凋 亡、迁移和侵袭

目的：探讨circ_0001821通过靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC）A431细胞 增殖、凋亡、迁移及侵袭的分子机制。方法：选取2018年2月至2019年8月海南医学院第二附属医院收治的39例CSCC患者的癌 及配对癌旁组织,以及人CSCC细胞系A431,用qPCR法检测CSCC癌和癌旁组织中circ_0001821的表达水平。利用脂质体转染技 术,分别将si-circ_0001821、si-NC、miR-203 mimic、miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-203转染至 A431细胞,用qPCR法检测转染细胞中circ_0001821和miR-203的表达水平,MTT法、流式细胞术和Transwell实验分别检测A431 细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力,WB法检测细胞中增殖、凋亡、迁移及侵袭相关蛋白的表达水平。通过Circinteractome数据库 预测circ_0001821与miR-203存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0001821与miR-203的靶向关系。结果：CSCC组 织中circ_0001821的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。转染 si-circ_0001821 可显著降低细胞中circ_0001821的表达水平（P<0.01）,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实,circ_0001821可 靶向结合miR-203。转染miR-203 mimic可显著降低A431细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。共转染si-circ_0001821与anti-miR-203 可明显逆转下调circ_0001821 表达对 A431 细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论： circ_0001821通过靶向miR-203调控CSCC细胞A431的增殖、迁移、侵袭能力及细胞凋亡。     

miR-141靶向YAP1抑制肝癌细胞HCC-LM3增殖、迁移和侵袭

目的:探究microRNA-141（miR-141）对肝癌细胞HCC-LM3增殖、迁移、侵袭的影响。方法:通过荧光定量PCR（qPCR）检测肝癌细胞系（HepG2、Huh7、HCC-LM3）与肝上皮细胞THLE-3中miR-141的表达量；免疫印迹试验（Western blot）分析Yes相关蛋白1（YAP1）的表达量。采用噻唑蓝（MTT）实验分析过表达miR-141或沉默YAP1对HCC-LM3细胞增殖的影响，Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-141的靶基因。功能性实验检测过表达YAP1对miR-141调控的HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭作用的影响。结果:qPCR和Western blot的结果表明，肝癌细胞系（HepG2、Huh7、HCC-LM3）中miR-141的表达量下调，YAP1的表达量上调；过表达miR-141和沉默YAP1可以抑制HCC-LM3细胞增殖、侵袭、迁移；生物信息学预测YAP1可能是miR-141的靶基因，双荧光素酶报告基因证实YAP1是miR-141的靶基因；过表达YAP1逆转miR-141对HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-141直接靶向YAP1抑制肝癌HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭。     

circ_0000989通过调控miR-183-5p/LRP6轴促进视网膜母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究环状RNA circ_0000989在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达情况,及其对RB细胞功能的影响和调控机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测RB组织和细胞中circ_0000989的表达水平。采用CCK-8和Transwell检测circ_0000989过表达质粒和miR-183-5p mimics对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用Western blot检测circ_0000989和miR-183-5p对LRP6表达水平的影响。采用双荧光素酶报告基因分析circ_0000989对miR-183-5p的调控。结果:RB组织和细胞中circ_0000989表达显著上调。circ_0000989可以显著促进RB细胞的增殖、迁移和侵袭;而miR-183-5p可减弱此作用。双荧光素酶报告基因和Western blot显示circ_0000989通过吸附miR-183-5p促进LRP6的表达。结论:circ_0000989通过调控miR-183-5p/LRP6轴促进RB细胞增殖、迁移和侵袭,为临床RB患者的诊断和治疗提供了潜在的分子靶点。     

circ_0091579/miR-330-3p/RNF126轴影响结直肠癌LoVo细胞的增殖、侵袭和凋亡

目的:探讨环状RNA circ_0091579作为分子海绵吸附miR-330-3p介导环指蛋白126(ring finger protein 126,RNF126)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、凋亡、侵袭的影响.方法:选取2019年2月至2020年5月在大理大学第一附属医院行手术治疗...     

circ_0001721/miR-198对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨circ_0001721/miR-198分子轴对人前列腺癌细胞DU145生物学行为的影响及相关作用机制。方法:应用qRT-PCR法检测circ_0001721、miR-198的表达量;DU145细胞转染si-circ_0001721、miR-198 mimics、anti-miR-198以及相应的对照（si-NC、miR-NC、anti-miR-NC）;CCK-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、克隆、凋亡、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证circ_0001721与miR-198的靶向关系;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果:与癌旁组织比较,circ_0001721在前列腺癌组织中高表达（P＜0.05）,而miR-198在前列腺癌组织中低表达（P＜0.05）;与转染si-NC或转染miR-NC相比,si-circ_0001721或miR-198 mimics可以提高细胞增殖抑制率、凋亡率和E-cadherin蛋白水平（P＜0.05）,降低克隆形成数、迁移和侵袭数以及N-cadherin蛋白水平（P＜0.05）;circ_0001721可靶向结合miR-198;与共转染si-circ_0001721和anti-miR-NC相比,共转染si-circ_0001721和anti-miR-198降低了细胞增殖抑制率、凋亡率和E-cadherin蛋白水平（P＜0.05）,而增加了克隆形成数、迁移和侵袭数以及N-cadherin蛋白水平（P＜0.05）。结论:敲低circ_0001721可通过上调miR-198抑制前列腺癌细胞的生长和转移。     

lncRNA ZFAS1通过miR-588/HMGA2轴促进肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移

目的：探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本1(lncRNA ZFAS1)调控miR-588/高迁移率蛋白A2(HMGA2)轴对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法：qPCR、WB法检测80例肝癌组织及对应癌旁组织（2018年1月至2019年12月在武汉第三医院首义院区手术切除标本）及人正常肝LO2细胞和肝癌HepG2、Huh7、HCCLM3细胞中ZFAS1、miR-588及HMGA2表达水平;采用Kaplan-Meier进行患者生存曲线分析。将HepG2细胞分为空白组、si-NC组、si-ZFAS1组、si-ZFAS1+inhibitor NC组、si-ZFAS1+miR-588 inhibitor组;qPCR检测各组HepG2细胞中ZFAS1、miR-588表达水平,WB法检测各组HepG2细胞中HMGA2蛋白表达;CCK-8法、Transwell和划痕实验分别检测各组HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验分别验证ZFAS1和miR-588、miR-588和HMGA2的靶向关系。用HepG2细胞移植瘤裸鼠模型检测敲减ZFAS1或/和miR-588对移...     

CAAP1抑制肝癌HepG2细胞凋亡而促进其增殖、迁移和侵袭

目的:探讨CAAP1对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:构建CAAP1过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体pSilencer 2.l-U6 neo/shR-CAAPl,转染肝癌HepG2细胞后,qPCR和WB实验分别检测CAAP1mRNA和蛋白的表达水平.实验分为过表达对照组(p...     

lncRNA CTD-2196E14.5通过海绵吸附miR-744-5p抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨CTD-2196E14.5通过调控miR-744-5p表达对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:通过检索TCGA数据库分析膀胱癌组织及癌旁组织中CTD-2196E14.5的表达水平及其与膀胱癌患者总生存期的关系。采用荧光实时定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qPCR)检测膀胱癌细胞株MGH-U3、T24、253J、J82和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中CTD-2196E14.5的表达水平。采用脂质体介导技术将pcDNA-CTD-2196E14.5质粒、pcDNA空载质粒分别转染253J细胞,即CTD-2196E14.5组和NC组。采用MTT法、流式细胞术和Transwell实验检测CTD-2196E14.5对膀胱癌253J细胞增殖、细胞周期和侵袭的影响。应用lncRNA2function软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证CTD-2196E14.5与miR-744-5p的靶向关系。qPCR检测miR-744-5p的表达。Western blotting检测AMPK信号通路蛋白和细胞周期...     

lncRNA MIR205HG通过调控miR-122-5p促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA) MIR205HG对食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法:RT-PCR检测食管鳞状细胞癌组织以及癌旁组织中MIR205HG的表达量;CCK-8实验检测MIR205HG对食管鳞状细胞癌细胞Eca-109和TE-10增殖的影响;Western blot实验检测侵袭相关蛋白MMP-1和MMP-9以及血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达水平。结果:结果显示,MIR205HG在食管鳞状细胞癌组织中的表达量显著高于癌旁组织的表达量（P＜0.05）;与转染对照si-RNA相比,当细胞转染si-MIR205HG时,MIR205HG的表达量显著被抑制（P＜0.05）;干扰MIR205HG显著抑制食管鳞状细胞癌细胞Eca-109和TE-10的增殖和侵袭（P＜0.05）;此外,si-MIR205HG促进miR-122-5p的表达,且MIR205HG与miR-122-5p表达量呈负相关（P＜0.05）;进一步的研究结果表明,抑制miR-122-5p逆转si-MIR205HG对TE-10细胞增殖和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:MIR205HG能够促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控miR-122-5p来实现的,这一结果能够为食管鳞状细胞癌的临床治疗和诊断提供分子基础。     

circ＿0000615通过靶向miR-432-5p调控胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨circ＿0000615在胆管癌细胞中的表达及其对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响和可能的调控机制。方法:通过qPCR检测circ＿0000615在正常胆管上皮HIBEC细胞和胆管癌CCLP-1、QBC939、TFK-1和RBE细胞中的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ＿0000615与miR-432-5p的靶向关系。将si-NC、si-circ＿0000615(si-circ-1、si-circ-2)、inhibitor-NC和inhibitor-miR-432-5p转染至CCLP-1和QBC939细胞,转染细胞分为si-NC组、si-circ-1组、si-circ-2组、si-NC+inh-NC组、si-NC+inh-miR-432-5p组和si-circ-1+inh-miR-432-5p组,通过CCK-8、EdU和Transwell实验检测各转染组胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果:在胆管癌细胞中circ＿0000615呈高表达而miR-432-5p呈低表达(P<0.05或P<0.01);双荧光素酶报告基因实验证实circ＿0000615与...     

LINC00243靶向miR-1976促进甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC00243对甲状腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响和分子机制。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测正常甲状腺细胞系（HT-ori3）和甲状腺癌细胞系（BCPAP、TPC-1和SW1736）中LINC00243和miR-1976的表达水平。将LINC00243小干扰RNA（si-LINC00243）、miR-1976模拟物（miR-1976 mimics）分别转染TPC-1细胞。细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数量;蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）和MMP9的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证LINC00243和miR-1976的靶向调控关系。结果:与HT-ori3细胞比较,3种甲状腺癌细胞中LINC00243的表达水平显著升高,miR-1976的表达水平显著降低。沉默LINC00243或高表达miR-1976均可抑制TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达（P＜0.05）。LINC00243靶向负性调控miR-1976表达。低表达miR-1976可逆转沉默LINC00243对TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:在甲状腺癌细胞中,LINC00243呈高表达,miR-1976呈低表达。LINC00243通过靶向调控miR-1976促进甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-27a促进胃癌细胞AGS增殖与侵袭及其机制探讨

目的:探究miR-27a对胃癌细胞AGS增殖与侵袭能力的影响,并进一步探讨能否靶向调控盐诱导激酶1(salt induce kinase 1,SIK1)和F框/WD_40域蛋白7(F-box and WD_40 repeat domain protein 7,FBXW7)。方法:利用TCGA数据库分析胃癌组织与邻近正常胃组织之间miR-27a表达水平的差异;利用脂质体LipofectamineTM2000将miR-27a mimics和miR-27a NC转入AGS细胞中,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-27a的表达,CCK-8实验检测细胞增殖活力,细胞平板克隆形成实验检测细胞克隆能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。生物信息学预测miR-27a的靶基因,通过蛋白印迹实验验证miR-27a对SIK1的调控作用;通过双荧光酶素报告基因、Real-time PCR和蛋白印迹实验验证miR-27a对FBXW7的调控作用。利用TCGA数据库分析胃癌组织与邻近正常胃组织之间FBXW7 mRNA表达水平的差异,分析FBXW7 mRNA表达水平与胃癌患者5年生存率的关系。结果:TCGA数据库分析表明miR-27a在胃癌组织中的表达高于邻近正常胃组织。Real-time PCR表明miR-27a在模拟物组中的表达较对照组高,细胞功能实验表明过表达miR-27a能促进胃癌细胞的增殖与侵袭能力;TargetScan预测SIK1为miR-27a的潜在靶基因,蛋白印迹实验表明SIK1不能被 miR-27a靶向负性调控。TargetScan预测FBXW7为miR-27a的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因结果表明miR-27a可抑制FBXW7 3' UTR双荧光素酶活性,突变其结合位点后抑制作用消失。Real-time PCR和蛋白印迹实验表明过表达miR-27a后FBXW7的蛋白与mRNA表达均明显下调。TCGA数据库分析表明胃癌组织中FBXW7 mRNA的表达较邻近正常胃组织明显下降,FBXW7 mRNA表达低的组胃癌患者5年生存率更低。结论:过表达miR-27a能增强胃癌细胞AGS的增殖与侵袭能力,可能是通过负性调控FBXW7发挥的促瘤作用。在胃癌细胞AGS中,SIK1不能被miR-27a负性调控,可能被FBXW7靶向介导泛素化降解。