喉鳞状细胞癌的转录组数据分析及生物标志物筛选

目的 通过数据挖掘分析长链非编码RNA(lncRNA)、微小RNA(miRNA)和信使RNA(mRNA)在喉鳞状细胞癌中的相互作用机制.方法 从肿瘤基因图谱(TCGA)中获取喉鳞状细胞癌的lncRNA、miRNA、mRNA表达谱数据及相关临床数据,从TCGA和GEO数据库中获取喉鳞状细胞癌的DNA甲基化数据.进行蛋白相...     

微RNA-378a-3p靶向SUFU基因促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:研究微RNA(microRNA,miRNA,miR)-378a-3p对乳腺癌细胞体外增殖、凋亡和迁移能力的影响,以及可能的作用机制.方法:利用GEO(Gene Expression Omnibus)数据库分析乳腺癌miR-378a-3p高表达患者与低表达患者的生存情况.使用实时荧光定量PCR法检测人乳腺癌细胞系以...     

化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用

目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制。方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3。实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3)。用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT-PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90%。siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7%,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达。RT-PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据。     

VEGFR-3 siRNA对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的抑制作用

目的:探讨VEGFR-3对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的影响.方法:构建携靶向 VEGFR-3基因siRNA(small interfering RNA)表达载体,转染人结肠癌LoVo细胞, 半定量RT-PCR和Western blotting检测转染前后LoVo细胞VEGFR-3 mRNA和蛋白表达的变化,基质-黏附实验检测细胞转染后的黏附能力,细胞侵袭实验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变.结果: 携靶向VEGFR-3基因siRNA的表达载体成功构建,RT-PCR检测转染siRNA后LoVo细胞VEGFR-3 mRNA表达水平降低;Western blotting检测转染siRNA后72 h LoVo细胞VEGFR-3蛋白表达下降,其表达相对值由(1.26±0.19)降至(0.39±0.12)(P<0.05).转染siRNA 72 h后LoVo细胞的黏附能力显著下降[(0.626±0.047)vs (0.407±0.029), P＜0.05];LoVo细胞穿膜细胞数(6.38±3.25)明显低于空白对照组(24.82±3.44)、非特异性对照组(23.58±3.73) (P＜0.05).结论:siRNA能够在LoVo细胞中引发RNA干扰效应,下调VEGFR-3基因的表达,进而抑制LoVo细胞的黏附能力和侵袭性.     

RNAi抑制STAT3基因表达对人宫颈癌SiHa细胞化疗敏感性的影响

目的:探讨信号转导因子与转录激活因子3(STAT3)短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)真核表达载体对宫颈癌SiHa细胞化疗敏感性的作用.方法:构建STAT3基因shRNA真核表达质粒并转染宫颈癌SiHa细胞,RT-PCR及免疫蛋白印迹分别检测STAT3基因的mRNA及蛋白表达水平.细胞经不同浓度顺铂(DDP)作用后,流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞生长抑制率并计算DDP的50%抑制浓度(IC50).结果:与各对照组细胞相比,转染STAT3基因shRNA真核表达载体的SiHa细胞,STAT3基因在mRNA和蛋白水平表达均下降,凋亡率均明显增加,细胞对DDP的IC50值明显下降,差异均有统计学意义.结论:针对STAT3基因的shRNA真核表达载体有效地抑制宫颈癌SiHa细胞STAT3基因表达,增强其对化疗药物DDP的敏感性.     

LncRNA SNHG1靶向miR-101-3p调控胃癌细胞奥沙利铂耐药性

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核内小RNA宿主基因1(small nucleolar RNA host gene l,SNHG1)靶向微小RNA-101-3p(miR-101-3p)在胃癌细胞BGC-823中对奥沙利铂(OXA)耐药性的影响及其可能的机制.方法 体外培养BGC-823细胞和耐奥沙利铂细胞BG...     

CD44v3短发夹RNA对透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭的抑制作用

目的:研究CD44v3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人结肠癌SW480细胞CD44v3表达及透明质酸诱导的粘附侵袭行为的抑制作用。方法:设计和构建带有U6启动子的CD44v3基因特异性的shRNA干扰表达质粒,转染至SW480细胞,以RT-PCR和Western blot检测SW480细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附模型和Boyden小室模型检测SW480细胞转染前后粘附和侵袭能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的SW480细胞CD44v3mRNA和蛋白表达、以及受透明质酸诱导而粘附于平板和穿过Boyden小室隔膜的细胞数皆显著减少(P<0.01)。结论:针对CD44v3的短发夹RNA能显著抑制透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭行为。     

EDN3基因抑制人乳腺癌细胞的迁移及侵袭北大核心CSCD

目的 :探讨内皮素3(endothelin 3,EDN3)基因对人乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法 :应用RT-PCR法检测EDN3及内皮素受体B(endothelin receptor B,EDNRB)m RNA在人乳腺癌细胞(BT549、MB231、MDA-MB468、MCF-7、SK-BR-3、T47D和BT474)中的表达以及EDN3 m RNA在正常乳腺组织中的表达情况。应用实时荧光定量PCR法检测EDN3 m RNA在人乳腺癌组织及对应的癌旁组织中的表达情况。构建表达EDN3基因的慢病毒重组载体p CDH-CMV-MCS-EF1-Puro-EDN3,病毒包装后将其感染乳腺癌BT549和MB231细胞,应用CCK-8法及Transwell小室法分别检测EDN3基因对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果 :EDN3 m RNA在人乳腺癌细胞中表达缺失,而在乳腺正常组织中可见表达。EDNRB mR NA在BT549、MB231、T47D和SK-BR-3细胞中表达。乳腺癌组织中EDN3 mR NA的表达水平低于对应的癌旁组织(P=0.000 6)。成功构建表达EDN3基因的重组慢病毒载体,并将其成功感染BT549和MB231细胞。EDN3表达对BT549和MB231细胞的增殖无显著影响(P值均>0.05),但能抑制其迁移和侵袭(P值均<0.01)。结论 :人乳腺癌中EDN3基因的表达显著下调。EDN3基因可抑制人乳腺癌细胞的迁移及侵袭。     

环状RNA circ-DHRS3在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨环状RNA circ-DHRS3在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:应用GEO数据库分析膀胱癌组织中circ-DHRS3的表达水平及其与患者临床分期、生存期的关系。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circ-DHRS3在膀胱癌细胞系UMUC3、BIU87、T24、J82中的相对表达量。构建circ-DHRS3过表达的稳转株。克隆形成实验和Transwell实验检测circ-DHRS3对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circ-DHRS3和miR-1275之间的靶向关系。qRT-PCR法检测circ-DHRS3对T24细胞中miR-1275表达的影响。克隆形成实验和Transwell实验检测miR-1275对circ-DHRS3功能的反转作用。Western blot法检测circ-DHRS3对T24细胞中Wnt/β-Catenin分子通路蛋白表达的影响。结果:膀胱癌组织中circ-DHRS3表达降低(P<0.01),并且其表达水平与患者临床分期负相关(P<0.01),circ-DHRS3高表达患...     

RNA干扰靶向沉默诱骗受体3 3基因增加人胰腺癌细胞的放射敏感性

目的:探讨RNA干扰沉默诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)基因对胰腺癌细胞放射敏感性的影响及其相关机制.方法:构建带有DcR3 siRNA序列的稳定表达质粒,通过脂质体转染至胰腺癌AsPC-1细胞株,设对照组、siRNA(-)阴性对照组和DcR3 siRNA组,应用Western blotting检测AsPC-1细胞中DcR3表达的变化,平板克隆形成实验检测转染DcR3 siRNA后AsPC-1细胞放射敏感性的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting检测Caspase-8、Caspase-3和PARP-1表达的变化.结果:DcR3 siRNA组细胞中DcR3蛋白表达水平较对照或siRNA(-)组明显降低(均P＜0.01);DcR3 siRNA组的克隆形成率明显低于对照或siRNA(-)组,其存活分数(survival fraction,SF)降低、α/β比值升高(均P＜0.01);放射后DcR3 siRNA组肿瘤细胞凋亡率明显高于对照或siRNA(-)组(均P＜0.01);转染DcR3 siRNA后可以明显上调Caspase-8、Caspase-3的表达和下调PARP-1的表达.结论:RNA干扰沉默DcR3基因通过激活凋亡因子Caspase-8和Caspase-3促进细胞凋亡,从而增加胰腺癌细胞对放射的敏感性.     

Decreased expression of both FcγRII and FcγRIII mRNA in leukemic granulocytes

Morphologically mature granulocytes from patients with chronic myeloid leukemia exhibit a defect in internalization of heat-aggregated IgG. In this study, we investigate the status of the steady-state levels of the mRNA for the two receptors for IgG, FcγRII and FcγRIII, as a step towards understanding the molecular basis of the defect and in turn the discordant maturation of the leukemic cells. Our data show that the mRNA for both receptors is lower in the leukemic cells relative to the normal cells. This may be one of the causes for the defective endocytosis.     

Regulation of 14-3-3σ expression in human thyroid carcinoma is epigenetically regulated by aberrant cytosine methylation

Increased 14-3-3sigma expression has been observed by immunohistochemistry in papillary and anaplastic tumors, but not follicular thyroid cancers. 14-3-3sigma mRNA expression and methylation status was examined in tumor cell lines and primary thyroid tissues using real-time RT-PCR, bisulfite sequencing and methylation-specific PCR. Most of the 27 CpG's in the gene's CpG island were methylated in normal thyroid, TPC-1, NPA, FTC-238 and 2-7, which did not express 14-3-3sigma. In contrast, they were unmethylated in KAK-1 and anaplastic lines KAT4 and DRO-90. 14-3-3sigma expression was not increased in thyroid carcinomas, the majority of which had a methylated CpG island. In addition, 5-aza-dC treatment increased 14-3-3sigma expression in the FTC-238 and NPA cell lines, which had low baseline expression. We conclude 14-3-3sigma expression in thyroid carcinomas is regulated by CpG island hypermethylation.     

PIK3R3 promotes chemotherapeutic sensitivity of colorectal cancer through PIK3R3/NF-kB/TP pathway

Phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 3(PIK3R3) is overexpressed in different types of human cancer. We previously reported the important role of PIK3R3 in colorectal cancer (CRC). However, the prognosis effect of PIK3R3 in CRC is still remaining unclear. In this study, we explored online clinical databases to analyze the prognosis differences between higher and lower expression of PIK3R3 in CRC patients. Interestingly, we found that better disease-free survival (DFS) were occurred in patients with higher expression of PIK3R3, but there is no significant difference in overall survival (OS). For further, we showed that PIK3R3 could enhance 5-FU induced apoptosis by regulating the expression of thymmidine phosphorylase (TP). In conclusion, PIK3R3 could be considered as a predictor of 5-FU sensitivity for personalized treatment, and a therapeutic target for colorectal cancer.     

G3BP和VEGFR-3在大肠癌中的表达及意义

[目的]探讨G3BP和VEGFR-3在大肠癌中的表达及其意义。[方法]选取60例经手术切除癌组织后的大肠癌病人分别选取癌组织和癌旁组织,应用Westernblot方法分别测定G3BP和VEGFR-3在癌组织和癌旁组织中的表达,分析其相关性。[结果]大肠癌组织中G3BP表达的阳性率为70.0%,癌旁组织中未检出G3BP表达;G3BP表达与大肠癌Dukes分期(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)有显著性相关。大肠癌组织VEGFR-3阳性表达率为58.3%,明显高于癌旁组织VEGFR-3的阳性表达率18.2%(P<0.05);VEGFR-3表达与大肠癌患者的Dukes分期(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)有显著相关性。G3BP和VEGFR-3在大肠癌组织中表达呈正相关(r=0.376,P<0.05)。[结论]大肠癌中G3BP和VEGFR-3存在明显的高表达,与患者Dukes分期、淋巴结转移关系密切,G3BP和VEGFR-3之间存在显著性相关。     

一种三维规则数据场中复杂组织快速分割方法

提出了一种三维规则数据场中复杂组织快速分割方法：首先熵阈值二值化三维医学图像，然后用三维形态学腐蚀操作，断开复杂组织与其它组织间的弱连接，并对复杂组织进行连通标记；接着提取出腐蚀后的复杂组织模板，并对此模板进行三维形态学扩张操作，恢复先前三维形态学腐蚀操作消除的部分；最后采用改进的快速三维种子填充算法精确地分割出复杂组织。复杂组织分割实验结果表明了该方法的有效性。     

三维医学影像诊断工作站-3dmed

本文介绍了一个我们自主开发的三维医学影像诊断工作站.系统运行于Windows NT/2000/98环境,主要包括数据接口、图像预处理、切片重组、三维重建、三维显示、虚拟内窥镜等功能.可广泛用于CT、MRI等医学图像的处理与分析,辅助医生进行临床诊断,具有很好的应用前景.     

表皮生长因子受体3在乳腺癌中的研究进展

表皮因子受体3(ErbB3/HER3)是表皮生长因子跨膜受体家族的成员之一。近年来证实ErbB3/HER3与乳腺癌的发病、复发转移、化疗以及内分泌治疗的疗效密切相关,已成为非常有前景的治疗候选靶点。本文简要综述近年来ErbB3/HER3在乳腺癌中的研究进展。     

重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用

目的：探讨重构型caspase3基因的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法：用重组PCR的方法获得大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase3基因并将其克隆入真核表达载体pcDNA3，转染乳腺癌细胞系SKBr3细胞，通过HE染色、流式细胞仪分析及免疫组化等方法观察其表达后对细胞的促凋亡活性，并将载体DNA直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用。结果：重构型caspase3基因可在SKBr3细胞内表达，转染组较同期对照组出现明显的细胞死亡现象，pcDNA3 revcasp3重组质粒直接注入对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显抑制作用。结论：重构型caspase3基因表达可诱导SKBr3细胞凋亡。