冰片逆转小细胞肺癌顺铂耐药的研究

摘 要：［目的］ 评价冰片对小细胞肺癌（SCLC）顺铂（DDP）耐药的逆转作用及其对P糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）和小凹蛋白-1 (Caveolin-1)表达的影响。［方法］ 利用前期建立的SCLC DDP耐药细胞株LTEP-P/DDP，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测冰片和/或DDP的抗肿瘤活性，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，Western blotting检测P-gp和Caveolin-1的表达。［结果］冰片联合DDP对LTEP-P/DDP-0.75 细胞的增殖抑制作用较单用DDP显著性增加（P<0.05），耐药逆转指数为2.246。LTEP-P/DDP-0.75细胞经冰片联合DDP处理细胞后，较单用DDP处理组的G0/G1期和S期降低，G2/M期升高，差异有显著性（P<0.05）。冰片和DDP联合处理后，LTEP-P/DDP-0.75细胞凋亡显著性上升（P<0.05），LTEP-P/DDP-0.75细胞Caveolin-1相比LTEP-P细胞显著性上升（P<0.05），冰片或DDP单独用药组Caveolin-1显著性变化，冰片联合联合DDP组相比对照组能显著性降低LTEP-P/DDP-0.75细胞Caveolin-1表达（P<0.05），而对P-gp无显著性抑制作用。［结论］ 冰片能在一定程度上逆转LTEP-P/DDP-0.75对DDP的耐药，其作用可能与抑制Caveolin-1表达有关。     

穿心莲内酯通过抑制Fas/FasL 信号轴降低子宫内膜癌Ishikawa/DPP 细胞对顺铂的耐药性

目的：探讨穿心莲内酯（Andro）调节脂肪酸合成酶（Fas）/脂肪酸合成酶配体（FasL）信号轴对子宫内膜癌Ishikawa 细胞顺铂（DDP）耐药性的影响。方法：采用0、5、10、20 μg/mL DDP分别处理Ishikawa 细胞和顺铂耐药的Ishikawa/DPP 细胞,0、5、 10、25、50 μmol/L Andro 处理Ishikawa/DDP 细胞,MTT 法检测细胞增殖情况并为后续实验选择合适的给药剂量。将Ishikawa/DDP 细胞随机分为对照组、DDP 组（DDP 干预）、Andro 组（DDP、Andro 干预）、pcDNA3.1-NC 组（转染pcDNA3.1+DDP、Andro 干预）、pcDNA3.1-Fas/FasL 组（转染pcDNA3.1-Fas/FasL+DDP、Andro 干预）,24 h 后,采用qPCR 法检测Fas、FasL mRNA的表达,平板克隆形成实验、Transwell 实验和流式细胞术分别检测细胞克隆能力、细胞迁移与侵袭和细胞凋亡,WB法检测增殖细胞核抗原（PCNA）、BAX、Bcl-2、MMP-2、PD-L1、多药耐药蛋白-1（MDR-1）及Fas、FasL 蛋白表达。结果：DDP 以剂量依赖的方式抑制Ishikawa 和Ishikawa/DPP 细胞增殖,并且与Ishikawa 细胞比较,Ishikawa/DPP 细胞对DDP 的敏感性更低（均P<0.05）;Andro 以剂量依赖性的方式抑制Ishikawa/DPP 细胞的增殖（均P<0.05）。Ishikawa/DPP 细胞中Fas、FasL 的表达水平均高于Ishikawa 细胞（均P<0.05）。选取20 μg/mL DDP 和25 μmol/L Andro 为干预剂量,干预时间24 h。与对照组比较,DDP 组Ishikawa/DPP 细胞中PD-L1、MDR-1、Fas、FasL mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,而克隆形成率、迁移与侵袭细胞数、凋亡率差异均无统计学意义（均P>0.05）;与DDP组比较,Andro 组Ishikawa/DPP 细胞中Fas、FasL mRNA表达水平、细胞克隆形成率、迁移与侵袭细胞数、 PCNA、Bcl-2、MMP-2、PD-L1、MDR-1、Fas、FasL 蛋白表达水平显著降低,BAX蛋白表达水平及凋亡率显著升高（P<0.05 或P<0.01）, pcDNA3.1-NC 组与Andro 组类似;与pcDNA3.1-NC 组比较,pcDNA3.1-Fas/FasL 组 Ishikawa/DPP 细胞上述指标变化均被逆转（P<0.05）。结论：Andro 可能通过抑制Fas/FasL 信号轴来抑制Ishikawa/DPP 细胞增殖、迁移与侵袭,促进凋亡,从而降低细胞对DDP的耐药性。     

ID3基因在逆转骨肉瘤顺铂耐药中的作用及其机制的研究

目的 探讨ID3基因在逆转骨肉瘤顺铂耐药中的表达及对骨肉瘤细胞耐药、凋亡及RhoE、P-gp、Cas-pase-3表达的影响.方法 MTT法检测顺铂处理对U-2 OS及U-2 OS/DDP细胞生长功能的影响,qRT-PCR及Western blot法检测U-2 OS及U-2 OS/DDP细胞中ID3的表达;用ID3过表达载体转染U-2 OS/DDP细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,各组细胞培养24 h后,用Western blot法检测细胞中RhoE、P-gp、Caspase-3蛋白表达变化;MTT检测耐药细胞耐药性的逆转作用;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 顺铂耐药株U-2 OS/DDP细胞耐药能力明显高于U-2 OS细胞;ID3在顺铂耐药株U-2 OS/DDP细胞表达水平低于U-2 OS细胞;ID3基因过表达对骨肉瘤细胞耐药性具有逆转作用;ID3基因过表达可促进U-2 OS/DDP细胞凋亡;ID3过表达后,P-gp的表达下调,RhoE和Caspase-3的表达上调,差异有统计学意义(P﹤0.05).结论 ID3基因在顺铂耐药株U-2 OS/DDP细胞中表达水平较低,过表达ID3基因能逆转U-2 OS/DDP细胞耐药情况,并通过调节RhoE、P-gp、Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡,其可能的机制与耐药蛋白的调控有关.     

下调Beclin1 抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的：探究敲减Beclin1 表达对卵巢癌细胞A2780 对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法：以Western blotting 及qPCR 检测卵巢癌细胞株A2780 及耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 的表达情况；A2780/DDP 细胞转染Beclin1 siRNA 后，用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化，克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况，流式细胞术检测各组细胞的凋亡，MDC荧光染色检测细胞的自噬情况，Western blotting 检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2 以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果：顺铂耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780 细胞株（均P<0.05），在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1 蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。敲减Beclin1 表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP 细胞的凋亡（P<0.05）、抑制细胞自噬的发生（P<0.05）、减少细胞克隆形成（P<0.05）和增加细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）；Western blotting结果显示，敲减Beclin1 可上调A2780/DDP 细胞中cleaved-caspase 3 和Cathepsin B的蛋白水平，下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平（均P<0.05）。结论：敲减Beclin1 表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能，从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。     

安罗替尼在宫颈癌HeLa/DDP细胞中的作用及逆转顺铂耐药性机制研究

目的:探究安罗替尼对HeLa/DDP(宫颈癌顺铂耐药细胞)细胞增殖和凋亡的影响及其逆转顺铂耐药的机制。方法:不同浓度顺铂及安罗替尼处理HeLa/DDP细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测P-gp的表达水平差异。结果:顺铂对HeLa/DDP细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量及时间依赖性。安罗替尼对HeLa/DDP细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性。安罗替尼、安罗替尼联合顺铂可以抑制HeLa/DDP细胞增殖(P<0.05)。流式细胞术结果发现安罗替尼组及安罗替尼联合顺铂组细胞凋亡率均升高(P<0.05)。安罗替尼联合顺铂显著抑制细胞增殖,诱导凋亡。Western Blot提示安罗替尼联合顺铂组与对照组和顺铂组及安罗替尼单药组相比,P-gp蛋白表达上调(P>0.05)。结论:安罗替尼可抑制宫颈癌HeLa/DDP细胞增殖,诱导凋亡;安罗替尼联合顺铂抑制细胞增殖、诱导凋亡作用更显著;安罗替尼可增加宫颈癌HeLa/DDP顺铂耐药株对顺铂的敏感性,逆转耐药性,但不能介导耐药相关蛋白P-gp表达下调。     

circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究

目的:探究circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究。方法:将SCC9/DDP细胞分为SCC9/DDP组、si-NC组、si-VAPA组、miR-125b组、miR-NC组、pcDNA-VAPA组、miR-HOXA7组。qRT-PCR检测细胞中circVAPA和miR-125b表达,MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测细胞耐药、增殖、侵袭和凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中HOXA7蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证VAPA、miR-125b和HOXA7的靶向关系。结果:和HOK相比,SCC9和SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显升高,miR-125b表达明显降低（P＜0.05）;且SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显高于SCC9细胞,miR-125b表达明显低于SCC9细胞（P＜0.05）。和SCC9/DDP组相比,si-VAPA组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P＜0.05）。和miR-NC组相比,miR-125b组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P＜0.05）。靶向关系结果显示,miR-125b组荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P＜0.05）;si-VAPA组细胞中miR-125b表达明显高于si-NC组（P＜0.05）,miR-125b组细胞中HOXA7表达明显低于miR-NC组（P＜0.05）。和miR-125b组相比,pcDNA-VAPA组和miR-HOXA7组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显升高,细胞凋亡能力明显降低（P＜0.05）。结论:低表达circVAPA可通过调控miR-125b/HOXA7轴来逆转口腔癌细胞化疗耐药,抑制口腔癌化疗耐药细胞增殖、侵袭并诱导凋亡。     

榄香烯乳剂对肺癌A549/DDP细胞株耐药逆转作用及其机制

目的:探讨榄香烯乳（elemene,ELE）逆转人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药性及其机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与顺铂（cisplatin,DDP）合用时耐药逆转作用;采用流式细胞术检测榄香烯乳对A549/DDP细胞内罗丹明-123（rhodamine-123,Rh123）蓄积的影响;采用Western blot检测榄香烯乳对耐药细胞A549/DDP细胞膜上P-gp蛋白表达的影响。结果:不同浓度榄香烯对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应。单用DDP的IC50为15.46μg/ml,合用20μg/ml榄香烯24h,IC50为4.15μg/ml,逆转耐药倍数为3.63。同时,榄香烯增加A549/DDP细胞内Rh123的蓄集,降低细胞膜上P-gp的表达,且呈剂量依赖性,表明榄香烯能减少A549/DDP细胞对药物的外排和抑制P-gp蛋白的表达。结论:榄香烯在体外逆转肿瘤细胞耐药性可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

康莱特注射液调控胆固醇代谢以抑制肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的：明确康莱特注射液（KLTi）通过调控胆固醇代谢对肺腺癌A549 细胞恶性生物学行为的抑制作用。方法：构建A549 细胞体外培养模型，设置空白对照组（CON组）、KLTi组、顺铂（DDP）组及KLTi+DDP 组，分别给予对应药物干预，采用CCK-8法检测不同分组的药物干预对A549 细胞增殖的影响，并确定IC50 值用于后续实验；使用细胞划痕实验、平板克隆形成实验、 Transwell 侵袭实验观察不同分组药物对A549 细胞恶性生物学行为的影响；流式细胞术检测不同分组药物对A549 细胞晚期凋亡水平的影响；WB法检测各组细胞上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达，ELISA 法检测促炎因子释放水平。采用比色法检测细胞胆固醇含量水平的组间差异，借助WB法检测胆固醇代谢相关膜通道蛋白ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）及功能蛋白ATP柠檬酸裂解酶（ACLY）、肽基脯氨酰异构酶B（PPIB）表达水平差异。结果：KLTi 及DDP对A549 细胞抑制作用具有时间及剂量依赖性（均P<0.05），最终选择2 mg/mL KLTi、3 μg/mL DDP作为干预剂量，按分组加药干预48 h后显示，KLTi 单用或联合DDP均可抑制A549 细胞克隆形成、迁移、侵袭能力且促进其晚期凋亡，KLTi+DDP 组的效果更加明显（P<0.05 或P<0.01）； KLTi 单用或联合DDP 可通过调控E-cadherin、vimentin、snail 蛋白表达从而影响A549 细胞EMT 进程（P<0.05 或P<0.01），同时下调IL-6 及IL-8的释放水平（P<0.05 或P<0.01）。KLTi 单用及联合DDP 均可以明显降低A549 细胞胆固醇含量（P<0.05 或P<0.01），并且对ABCA1、ACLY、PPIB 表达具有调控作用，联合组的效果更加明显（P<0.05 或P<0.01）。结论：KLTi 可能通过调控胆固醇代谢水平及相关通道蛋白抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为及EMT进程。     

miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂（cisplatin,DDP）耐药的影响,及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列（mimics-NC）、CXCR4过表达质粒（pcDNA3.1-CXCR4）、pcDNA3.1空载质粒（Vector）转染至A549/DDP细胞中,将细胞分为mimics-NC组（转染无义序列）、mimics组（转染miR-139-5p mimics）、mimics+Vector组（共转染miR-139-5p mimics和空载质粒）和mimics+CXCR4组（共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒）,另设置空白对照组（blank）。不同浓度DDP处理,MTT法检测细胞增殖活性,并计算IC50值和耐药指数（resistance index,RI）;qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后,耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC50值分别为（208.87±27.89）μmol/L和（31.66±6.30）μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较,耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低（P＜0.05）,而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与mimics-NC组比较,mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与mimics+Vector组比较,mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT等蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达,提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。     

IL-22/IL-22RA1通路在口腔鳞状细胞癌恶性进展中的作用及其机制

目的：探讨IL-22/IL-22受体A1（IL-22RA1）通路在口腔鳞状细胞癌（OSCC）恶性进展中的作用及其机制。方法：利用GEO数据库和免疫组化法分析IL-22RA1在OSCC组织及配对癌旁组织中的表达水平，采用组织芯片免疫组化法检测并分析IL-22RA1表达水平与OSCC患者临床病理特征的关系，通过EBI ArrayExpress数据库分析IL-22RA1表达水平与患者预后的关系。采用免疫荧光法检测IL-22和IL-22RA1在OSCC组织中表达水平并分析两者间的相关性。用RNA干扰技术敲减OSCC细胞WSU-HN4和CAL27的IL-22RA1表达，用qPCR法验证敲减效率。采用克隆形成实验、Transwell小室法分别检测IL-22对阴性对照（siNC）组和IL-22RA1敲减（siIL-22RA1）组OSCC 细胞克隆形成及迁移能力的影响，WB法检测IL-22 对OSCC细胞IL-22RA1表达水平及STAT1、STAT3和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果：OSCC组织中IL-22RA1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）。IL-22RA1表达水平与OSCC患者的肿瘤大小（P<0.05）、淋巴结转移（P<0.01）及预后不良（P<0.05）有关联。OSCC组织中的IL-22和IL-22RA1表达水平无明显关联，IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达无影响（均P>0.05）。IL-22可显著增强OSCC细胞的克隆形成和迁移能力（均P<0.01），并可激活OSCC细胞的STAT1、STAT3及ERK1/2 信号分子；敲减OSCC 细胞的IL-22RA1后，IL-22则无法发挥上述作用。结论：IL-22/IL-22RA1可通过调控细胞增殖和迁移促进OSCC的生长和转移，其下游机制可能是激活ERK1/2-STAT1/3信号通路。     

冬凌草甲素逆转黑色素瘤细胞顺铂耐药的作用及机制

目的：探讨冬凌草甲素（Ori）逆转人黑色素瘤细胞顺铂（DDP）耐药的作用及其机制。方法：分别将黑色素瘤DDP耐药细胞A375/DDP和M14/DDP分为对照组、2μmol/L Ori组、4 mg/L DDP组和2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组。CCK-8法、Transwell实验、Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞术分别检测各组细胞的增殖活力、侵袭和迁移能力及凋亡水平，透射电子显微镜观察自噬小体，免疫荧光染色法观察微管相关蛋白轻链3(LC3)点状结构，WB法检测A375/DDP细胞自噬相关蛋白Beclin-1、p62、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的表达。结果:与4 mg/L DDP组相比，2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著下降（均P<0.01），凋亡水平显著升高（P<0.01）。4 mg/L DDP组细胞中可见大量自噬小体以及LC3点状染色，但2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组仅可见少量。与对照组相比，4 mg/L DDP组细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达水平均显著升高（均P<...     

Tumstatin185～191逆转肺腺癌化疗耐药的机制探讨

目的 观察Tumstatin185～191单药及联合顺铂(DDP)对肺腺癌耐药细胞株A549-DDP增殖和凋亡的影响,并探讨其联合作用的机制.方法 以不同浓度的Tumstatin185～191单药、DDP单药及Tumstatin185～191联合DDP干预A549-DDP细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot法检测A549-DDP细胞内p-Akt和p-ERK蛋白的表达水平.结果 Tumstatin185～191对A549-DDP细胞的增殖具有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为80.25 μmol/L.DDP单药对A549-DDP的IC50为77.16 μmol/L,当DDP与20 μmol/L的Tumstatin185～191联合使用时,DDP对A549-DDP细胞的IC50为57.97 μmol/L,耐药逆转指数为1.33;当DDP与40 μmol/L的Tumstatin185～191联合使用时,DDP对A549-DDP细胞的IC50为26.40 μmol/L,耐药逆转指数为2.92.两药联合使用时,A549-DDP细胞的早期凋亡率为19.5%±1.1%,较DDP单药(13.3%±1.5%)和Tumstatin185～191单药使用时的早期凋亡率(10.2%±2.0%)显著增加(F=4.09,P<0.05).Tumatatin185～191能显著抑制A549-DDP细胞内p-Akt和P-ERK蛋白的表达,但如与DDP联合使用,并不能增加Tumstatin185～191对P-ERK和p-Akt蛋白表达的抑制效应.结论 Tumstatin185～191能抑制肺腺癌耐药细胞株A549-DDP的增殖、促进凋亡,并部分逆转A549-DDP细胞对DDP的化疗耐药;其作用机制可能与Tumstatin185～191能下调A549-DDP细胞内p-Akt和p-ERK蛋白的表达有关.     

银杏内酯B通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27 细胞的恶性生物学行为

目的：探讨银杏内酯B（GKB）是否通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法：将HGC-27细胞分为对照、GKB低剂量（100 mg/L）、GKB高剂量（200 mg/L）、GKB高剂量（200 mg/L）+740Y-P（PI3K激活剂）、Ly294002（PI3K抑制剂）组。采用MTT、Edu、FCM、Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,qPCR和WB法分别检测各组细胞中PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA和Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。构建胃癌HGC-27细胞裸鼠移植瘤模型,观察GKB对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。结果：体外实验结果表明,与对照组相比,GKB低剂量组、GKB高剂量组、Ly294002组HGC-27细胞的增殖活力及细胞增殖率、迁移和侵袭细胞数,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达,以及Ki-67、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均显著降低（均P<0.05）;细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均显著升高（均P<0.05）;740Y-P可部分逆转GKB对HGC-27细胞的抑制作用（均P<0.05）。荷瘤裸鼠实验结果显示,GKB可显著抑制HGC-27细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.05）,且可下调PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结论：GKB可通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路而抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭并促进其凋亡。     

siRNA干扰MT1H基因对A549/DDP细胞耐药性的逆转

目的：探讨siRNA干扰金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因逆转A549/DDP细胞耐药的可行性。方法：采用RT-PCR方法检测MT1H基因在A549和其顺铂耐药株A549/DDP细胞中的表达;将针对MT1H的siRNA导入A549/DDP细胞;用RT-PCR和斑点印迹方法分析MT1H基因表达情况;MTT法观察细胞顺铂耐药性;TUNEL、流式细胞术检测顺铂诱导细胞凋亡率;免疫细胞化学分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：MT1H在A549/DDP细胞中高表达但不在A549细胞中表达;A549/DDP细胞转染48 h后,与对照组比较,MT1HsiRNA转染组MT1H mRNA和蛋白表达均明显下调,细胞对DDP的药物敏感性明显提高,DDP诱导凋亡率明显增加,Bcl-2表达明显下降,Bax表达无变化。结论：MT1H基因沉默能降低Bcl-2表达,增强顺铂对A549/DDP细胞凋亡诱导作用,有效逆转A549/DDP细胞耐药。     

抗肿瘤新药乙烷硒啉对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨新型有机硒化合物乙烷硒啉（BBSKE）对人舌癌CAL27细胞株生长和增殖的影响。方法：分别采用体外细胞实验MTT、Hoechst 33258免疫荧光染色、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术、Transwell小室实验检测2、5、10、20 μmol/L（含1‰ DMSO）的BBSKE对CAL27细胞增殖、细胞周期及迁移的影响,并设置溶剂对照组和正常对照组。结果：5、10、20 μmol/L的BBSKE作用CAL27细胞后,其增殖抑制率较对照组明显增加（P < 0.01）,且随作用时间的延长而增加。Hoechst 33258免疫荧光染色结果显示5、10 μmol/L BBSKE组相比对照组细胞出现凋亡形态改变。Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术分析结果显示与对照组相比,2、5、10、20 μmol/L BBSKE组CAL27细胞G2/M期比率呈梯度增加（P < 0.01）,细胞周期被阻滞于G2/M期（P < 0.01）。Transwell小室实验结果显示,CAL27细胞的迁移数量在2、5、10、20 μmol/L BBSKE组相比对照组明显减少（P < 0.01）,且迁移细胞数与药物浓度呈反比。结论：BBSKE对CAL27细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是通过引起细胞周期阻滞于G2/M期而诱导细胞凋亡,并且抑制细胞迁移,提示BBSKE可作为舌鳞状细胞癌患者化疗治疗的备选药物。     

川芎嗪联合三氧化二砷逆转K562/ADM细胞多药耐药的实验研究

目的探讨川芎嗪与三氧化二砷联合逆转耐药人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药的效果。方法采用WST-8法测定细胞的药敏性及抗药性逆转,应用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞内ADM浓度、P-gp蛋白的表达,采用免疫细胞化学二步法检测细胞GST-π表达。结果非细胞毒性浓度的TMP（20μg/ml）及As2O3（0.5μmol/L）可降低ADM对K562/ADM细胞的IC50（P〈0.05）,2种药物联合应用对ADM的逆转倍数明显高于两者单独应用（P〈0.05）,而且也高于两者单独应用之和;两者以非细胞毒性浓度联合应用提高K562/ADM细胞内ADM浓度和细胞凋亡百分率,作用大于两药单独应用,并且明显下调细胞P-gp和GST-π表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论非细胞毒性剂量的TMP和As2O3,均可部分逆转有多药耐药表型的细胞株K562/ADM对阿霉素的耐药性,两者联合应用效果优于单独应用,具有协同作用,其机制可能与下调P-gp和GST-π表达有关。     

Amorphigenin联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞的协同抗肿瘤作用

背景与目的 Amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549/DDP细胞的增殖;克隆形成实验测定A549/DDP细胞的克隆形成;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞的增殖48 h[半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentra-tion, IC50）]为（2.19±0.92）μmol/L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外,Amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549/DDP细胞生长和促进凋亡;降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论 Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡;amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达,进而与顺铂对A549/DDP细胞产生协同抑制作用。     

顺铂耐药乳腺癌细胞株的建立及FANCF 基因在耐药中的作用

[摘要] 目的：探讨三阴性乳腺癌顺铂（cisplatin, DDP)耐药细胞和敏感细胞中FA/BRCA通路关键基因FANCF的表达和功能,以及与DDP耐药的相关性。方法：DDP浓度递增法诱导建立乳腺癌细胞MDA-MB-231的DDP耐药细胞株MDA-MB-231/DDP;通过RNAi技术敲减MDA-MB-231 敏感细胞和DDP耐药细胞中FANCF,并在mRNA和蛋白水平进行敲减效果验证。CCK-8 法检测DDP耐药细胞株增殖活性,Western blotting 法检测该细胞中FANCF蛋白表达,流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期和凋亡情况,实时定量PCR（RT-qPCR）法检测FANCF mRNA的表达。结果：MDA-MB-231细胞DDP诱导3个月建立的MDA-MB-231/DDP细胞株耐药指数为13.5,其G0/G1 期细胞增多、S期和G2/M期细胞减少。MDA-MB-231/DDP细胞中FANCF mRNA和蛋白表达水平显著升高（均P<0.01）。FANCF敲低后MDA-MB-231/DDP细胞凋亡增加,细胞对DDP的药物敏感性显著升高（均P<0.01）。结论：FANCF基因通过抗凋亡作用导致MDA-MB-231细胞对DDP的耐药性,FANCF是乳腺癌治疗的一个潜在靶点。     

柚皮苷逆转人卵巢癌耐药SKOV3／DDP细胞耐药性及逆转机制的研究

目的 研究柚皮苷对卵巢癌顺铂（DDP）耐药细胞SKOV3／DDP体外增殖的影响及耐药逆转作用,并初步探讨相关耐药机制。方法采用MTT法测定DDP对SKOV3和SKOV3／DDP细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）,柚皮苷对SKOV3／DDP细胞的增殖抑制作用及柚皮苷联合DDP对SKOV3／DDP细胞的增殖抑制作用。筛选出非细胞毒性的柚皮苷浓度,将实验细胞分为空白对照组、2.5 μg／ml DDP组、10 μmol/L柚皮苷组、10 μmol/L柚皮苷联合2.5 μg／ml DDP组,分别采用RT-PCR和Western blotting测定各组作用48 h后耐药基因MDR1 mRNA及MRP2 mRNA的表达及其相应的表达产物P-gp、MRP2蛋白的表达水平。结果1～32 μg／ml DDP处理SKOV3及SKOV3／DDP细胞48 h后,SKOV3细胞的IC₅₀为5.48 μg／ml,SKOV3／DDP细胞为14.93 μg／ml,耐药指数为2.72。柚皮苷对SKOV3／DDP细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。选取10 μmol／L柚皮苷作为逆转耐药实验浓度,10 μmol／L柚皮苷联合DDP作用48 h后,SKOV3／DDP细胞对DDP的耐药指数为1.62,逆转倍数为1.68。RT-PCR及Western blotting检测显示,柚皮苷联合DDP组与DDP单药组比较,MDR1 mRNA、MRP2 mRNA表达及P-gp、MRP2蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论柚皮苷对卵巢癌SKOV3／DDP细胞的体外增殖具有明显抑制作用,并能逆转SKOV3／DDP细胞的耐药性,其逆转耐药的机制可能与下调耐药基因MDR1 mRNA及MRP2 mRNA及相应的P-pg、MRP2蛋白的表达有关。     

β-榄香烯逆转K562/ADM细胞MDR机制的探讨

目的:探讨β-榄香烯(β-elemene)对多药耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转及作用机制。方法:MTT法检测抗药性逆转,免疫组化检测Bcl-2及P-gp蛋白的表达,流式细胞术对凋亡百分率及Bcl-2、P-gp蛋白的表达进行定量检测。结果:非细胞毒性浓度的β-elemene(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.01),逆转倍数为2.18倍;明显增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,凋亡率由(1.88±0.11)%上升至(3.93±0.06)%(P<0.01);降低耐药细胞Bcl-2及P-gp的表达,Bcl-2的表达率由(94.8±1.9)%降至(66.7±0.9)%,P-gp的表达率由(98.7±2.1)%降至(76.8±1.4)%。结论:β-榄香烯可部分逆转K562/ADM细胞的耐药性,其逆转机制具有异质性,主要以抑制Bcl-2的表达从而诱导细胞凋亡来逆转MDR,同时兼具降低P-gp表达的作用。