非小细胞肺癌细胞MRP1表达及其与耐顺铂关系的研究

目的:研究多药耐药相关蛋白1(MRP1)是否在耐顺铂(DDP)的非小细胞肺癌(NSCLC)A549/DDP中高表达,探讨MRP1与NSCLC耐DDP的关系。方法:培养来源于同一母系的2株细胞系A549细胞系和A549/DDP细胞系,采用MTT法绘制A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线,分别计算A549细胞和A549/DDP细胞的耐药指数;应用RT-PCR检测A549细胞和A549/DDP细胞中MRP1 mRNA的表达水平。结果:A549及A549/DDP的半数抑制浓度分别为0.65μg/mL和3.7μg/mL,得出A549/DDP对DDP的耐药性是A549的5.5倍。A549/DDP中MRP1的在转录水平的表达显著高于A549中MRP1的表达,P<0.05。结论:MRP1在耐DDP的NSCLC中高表达,而在不耐DDP的NSCLC中低表达,甚至不表达,说明MRP1的高表达与肺癌耐DDP有关,为以后研究通过抑制MRP1的表达从而逆转肺癌耐DDP提供理论依据。     

葛根素抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨葛根素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制.方法:不同浓度葛根素处理非小细胞肺癌A549细胞后,采用CCK-8法检测葛根素对非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制作用及半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50);显微镜下观察葛根素对非小细胞肺癌A549细...     

降低有氧糖酵解增强非小细胞肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性

目的:探究顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞糖代谢的特点及抑制有氧糖酵解对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药细胞的影响及其机制。方法:通过梯度倍增浓度法建立非小细胞肺癌顺铂耐药细胞模型(A549/DDP);酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, Elisa)检测A549/DDP与A549细胞两组葡萄糖消耗量、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)释放量、乳酸生成及丙酮酸生成量的差异;CCK-8法(cell counting kit-8)检测2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose, 2-DG)及顺铂处理后A549/DDP与A549细胞增殖能力的变化;Elisa检测2-DG处理A549/DDP细胞与A549细胞葡萄糖消耗量、ATP释放量、乳酸生成及丙酮酸生成量的差异;Elisa检测2-DG处理A549/DDP细胞与A549细胞后对非神经元性烯醇化酶(recombinant enolase 1,ENO1)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD)、缺氧诱导因子-α...     

CD147对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN,EMP,又称CD147)对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:将CD147过表达慢病毒、短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰CD147表达的慢病毒及阴性对照(negative control,NC)慢病毒分别感染肺癌A549细胞,获得CD147稳定过表达的A549EMP细胞、稳定干扰CD147表达的A549sh EMP细胞和阴性对照A549NC细胞。应用CCK-8(cell counting kit-8)法、细胞划痕实验和Transwell小室法分别检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞的增殖、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞中β-catenin的核表达情况。结果:A549EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于未进行慢病毒感染的空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显低于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。A549EMP细胞β-catenin的核表达水平明显高于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞β-catenin的核表达水平明显低于空白对照A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。结论:CD147可增强肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与β-catenin的激活有关。     

加热对肺癌A549细胞生长和细胞周期影响的实验研究

目的:研究加热对肺癌A549细胞生长和细胞周期的影响.方法:体外复苏与培养肺癌A549细胞;时照组37℃下培养,实验组按不同时间、不同温度分组水浴加热肺癌A549细胞后培养24 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞术观察热处理后的肺癌A549细胞周期分布的变化.结果:MTT实验提示38℃加热对A549细胞生长无明显抑制(P＞0.05),40℃、42℃加热对A549细胞生长有抑制作用(P＜0.05),并且该作用与加热的温度和时间成正相关;流式细胞术显示,加热能改变A549细胞周期分布,使S期细胞明显增多(P＜0.01),G0/G1期和G2/M期细胞明显减少,P＜0.05.结论:加热可抑制A549细胞生长,改变肿瘤细胞周期分布并可能因此增强化疗疗效.     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对肺癌A549细胞黏附、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人肺癌A549细胞黏附、侵袭和凋亡的影响。方法:设计并合成HPSE特异性ASODN(HPSE-ASODN),脂质体介导转染A549细胞。West-ern blotting检测A549细胞中HPSE蛋白的表达。黏附实验和侵袭实验检测HPSE-ASODN对A549细胞黏附和侵袭的影响,Hoecht 3222染色法检测HPSE-ASODN对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组和脂质体组相比,HPSE-ASODN转染下调A549细胞中HPSE蛋白的表达,且显著抑制A549细胞的黏附和侵袭(P<0.01);HPSE-ASODN转染可诱导A549细胞凋亡,凋亡率明显高于未转染组和脂质体组[(44.7±18.9)%vs(1.2±3.3)%、(5.8±20.1)%,P<0.01]。结论:HPSE-ASODN能下调肺癌A549细胞中HPSE蛋白的表达,抑制A549细胞的黏附和侵袭,诱导其凋亡。     

FUNDC1调控肺癌A549细胞及其干细胞的生长、自噬、凋亡和细胞干性的研究

目的:本实验旨在阐明线粒体自噬受体蛋白FUNDC1(FUN 14 domain containing 1)在肺癌病理进程中对肿瘤细胞生长死亡以及细胞干性的调控作用。方法:使用RT-qPCR分析FUNDC1在肺癌组织和细胞中的表达情况。siRNAs和过表达载体转染A549细胞以及诱导形成的A549干细胞团(A549/CSC)。采用CCK-8增殖试剂盒及集落形成实验分析不同处理对肺癌细胞增殖的影响。Western blotting检测FUNDC1、细胞自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase3)和细胞干性相关蛋白(CD133、Sox2、Oct4)的表达。细胞凋亡试剂盒(Elisa)用于测定细胞凋亡水平。流式细胞术分析CD133细胞阳性率。结果:FUNDC1在肺癌组织及细胞中表达上调,干扰FUNDC1抑制A549细胞增殖和保护性自噬,同时诱导细胞凋亡。此外,FUNDC1与CD133表达显著正相关,干扰FUNDC1可显著抑制细胞干性相关基因CD133、Sox2、Oct4的表达。A549/CSC细胞的FUNDC1表达高于正常A549细胞。干扰FUNDC1同样会抑制A549/CSC细胞增殖和保护性自噬,促进细胞凋亡。结论:FUNDC1调控肺癌细胞及CSC细胞的生长、自噬、凋亡及细胞干性。     

miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的：探究microRNA-101 (miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF2）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭的分子机制。方法：采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1,以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞,运用划痕愈合实验和Transwell小室实验,检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blotting（WB）法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果：miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞（均P<0.05）,而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.01）,且使细胞中E-cadherin的表达增多（P<0.05）而Vimentin（P<0.05）、N-cadherin（P<0.01）和p-ERK1/2（P<0.05）的表达水平降低。抑制miR-101表达后,可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.05）,引起细胞中E-cadherin表达明显降低而 Vimentin、N-cadherin 和 p-ERK1/2 表达水平增高（均 P<0.05）。采用 WB 法和双荧光素酶报告基因实验验证了 FGF2 是miR-101的直接靶基因,且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）,以及减少细胞中E-cadherin的表达（P<0.01）而增加Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2（P<0.05）表达水平。与单独过表达FGF2组相比,共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱（均P<0.01）,其E-cadherin的表达增多（P<0.01）而Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2表达水平下降（P<0.01）。结论：miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化（EMT）过程及ERK信号通路,进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

青蒿琥酯对人肺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对人肺癌细胞株A549增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法:采用CCK-8法检测不同质量浓度的ART对A549细胞作用24、48 h后细胞的增殖水平,Transwell小室试验检测30 μg/ml青蒿琥酯对A549细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测对A549细胞迁移能力的影响.Western blotting检测A549细胞经30 μg/ml的ART作用48 h后人抗原R(human antigen R,HuR)和MMP-9蛋白表达变化.结果:ART能够抑制人肺癌A549细胞的增殖,呈剂量依赖性(P＜0.05).与未处理组比较,ART(30 μg/ml)处理的A549细胞穿膜的细胞数目显著减少[(47.11±8.61)vs(131.00±14.58)个,P＜0.01];A549细胞迁移距离显著缩短[(1.08±0.13)vs(2.91±0.24)mm,P＜0.01];A549细胞内HuR和MMP-9蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:ART能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制HuR的表达有关.     

淫羊藿苷逆转耐甲氨蝶呤肺癌A549细胞转移表型

目的:研究中药淫羊藿苷(icariin,ICA)作用甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药肺癌A549细胞后对细胞转移表型的影响,初步探讨ICA逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用机制及对肺癌的治疗价值.方法:采用MTT法检测ICA对A549/MTX耐药细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC_(50)).采用双层软琼脂克隆形成实验检测A549/MTX 组和A549/MTX+ICA组细胞的克隆形成率,并观察其集落形态.细胞划痕实验检测A549/MTX组和A549/MTX+ICA组细胞的迁移能力.Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化.结果:MTT结果显示,无毒剂量的ICA与MTX联合应用后A549/MTX细胞的IC_(50)值为35.50±1.85 μmol/L,比单独应用MTX(同等剂量)后A549/MTX细胞的IC50值(52.17±2.25 μmol/L)有了一定程度的下降.软琼脂实验发现,A549/MTX+ICA组细胞克隆形成率为0.94±0.09,小于A549/MTX组细胞的1.56±1.07(P<0.05).划痕实验显示,72 h后A549/MTX组细胞的迁移能力大于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05).Transwell实验显示,A549/MTX组细胞的穿膜细胞数明显多于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05),说明A549/MTX+ICA组细胞的侵袭浸润能力小于A549/MTX组细胞.结论:中药ICA具有逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用.     

RG108 调控 TFPI-2 甲基化/TMPRSS4 表达对 NSCLC 细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨RG108对人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）A549和H1299细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养A549和H1299细胞,经不同浓度RG108处理后,采用MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖率、细胞周期和凋亡水平;qPCR和Western blotting（WB）法检测细胞内TFPI-2 mRNA和蛋白的表达及TMPRSS4的表达量,以甲基化特异性PCR和比色法检测细胞中TFPI-2启动子区域甲基化的状态和程度;分别采用siRNA-TFPI-2和pcDNA3.0-TMPRSS4质粒敲减TFPI-2或过表达TMPRSS4,然后检测细胞增殖率及凋亡率的变化。结果：RG108处理后,A549和H1299细胞的增殖率显著降低（均P<0.05）、细胞周期阻滞于G1/S期（均P<0.05）而凋亡率显著增加（均P<0.01）,细胞中TFPI-2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P<0.01和P<0.05）,同时细胞中TFPI-2启动子区域甲基化程度显著降低（均P<0.05）、TMPRSS4的表达也明显减少（P<0.05）。沉默TFPI-2表达后,A549和H1299细胞的增殖水平显著增加（均P<0.05）,而转染pcDNA3.0-TMPRSS4质粒则显著降低细胞的凋亡率（均P<0.05）。结论：RG108能够通过抑制TFPI-2甲基化负向调控TMPRSS4表达进而抑制A549和H1299细胞的增殖,并促进其凋亡。     

lncRNA HOTTIP通过miR⁃637/KLK4轴促进肺癌SPC⁃A⁃1细胞的恶性 生物学行为

目的：探讨 lncRNA HOTTIP 对肺癌细胞增殖、凋亡及 EMT 的影响及其作用机制。方法：利用 qPCR 检测 lncRNAHOTTIP、miR-637和KLK4在肺癌SPC-A-1、正常肺上皮BEAS-2B细胞中的表达量;siRNA干扰SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP的表达后,分别通过CCK-8、Transwell、流式细胞术和WB法检测SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT能力的变化。miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析 lncRNA HOTTIP 和 miR-637 之间的靶向关系,RNA pull-down 实验检测 lncRNA HOTTIP 和miR-637的吸附作用,检测lncRNA HOTTIP通过miR-637对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。利用TargetScan软件分析 miR-637 与 KLK4 的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-637 与 KLK4 mRNA 之间的相互作用;检测 miR-637 通过KLK4 mRNA对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。下调lncRNA HOTTIP和miR-637表达后,利用qPCR和WB检测KLK4 mRNA 和蛋白表达水平的变化。结果：与 BEAS-2B 细胞比,在 SPC-A-1 细胞中 lncRNA HOTTIP 呈高表达（P<0.01）,miR-637呈低表达（P<0.01）,KLK4呈高表达（P<0.01）。下调lncRNA HOTTIP后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著减弱,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）;lncRNA HOTTIP与miR-637具有靶向关系;下调miR-637表达后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上升,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。miR-637与 KLK4 3''UTR特异性结合。miR-637通过 KLK4显著促进了 SPC-A-1细胞增殖、侵袭与 EMT,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。下调 lncRNA HOTTIP 使 KLK4 表达显著降低,而下调 miR-637 可促进KLK4表达（P<0.05）。结论：上调lncRNA HOTTIP可通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的增殖、侵袭与EMT而抑制癌细胞凋亡。     

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的：探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法：通过癌症基因组图谱（TCGA）和高通量基因表达（GEO）数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果：MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达（均P<0.01）,选取表达水平较高的A...     

光甘草定对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的：探讨光甘草定对肺腺癌细胞A549 恶性生物学行的影响及其分子机制。方法：常规方法培养A549 细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用不同浓度的光甘草定和或顺铂对其进行处理,通过结晶紫染色、CCK-8 法检测光甘草定、顺铂对A549、BEAS-2B细胞增殖活力的影响,Transwell 小室实验、细胞划痕实验检测光甘草定对A549 细胞侵袭、迁移能力的影响,流式细胞术检测光甘草定对A549 细胞凋亡的影响,3D超低黏附板培养法培养A549 细胞后采用CCK-8法检测光甘草定对A549 细胞增殖的影响,WB法检测光甘草定对A549 细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;构建A549 细胞移植瘤模型后检测光甘草定、顺铂对移植瘤的生长以及移植瘤组织中EMT相关蛋白表达的影响。结果：光甘草定、顺铂呈剂量依赖性地显著抑制A549 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）、细胞迁移（P<0.05 或P<0.01）和侵袭能力（P<0.05 或P<0.01）,光甘草定能诱导A549 细胞凋亡（P<0.01）,抑制A549 细胞中N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达,促进E-cadherin 蛋白表达;光甘草定、顺铂均能抑制A549移植瘤的生长,抑制移植瘤组织中Ki67、N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达、促进E-cadherin 蛋白的表达。结论：光甘草定可通过抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其抑制细胞的EMT进程而产生抑癌作用有关。     

甘草酸通过调控miR-142/ZEB1 分子轴影响非小细胞肺癌HCC827 和A549 细胞的恶性生物学行为

目的：探讨甘草酸（GA）通过调控miR-142/锌指E 盒结合的同源盒蛋白1（ZEB1）分子轴对非小细胞肺癌（NSCLC）HCC827 和A549 细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：HCC827 和A549 细胞培养和转染完成后,分成4 组：NC组（未经转染+3mmol/L GA）、miR-142 inhibitor 组（敲降miR-142+3 mmol/L GA）、pcDNA3.1-ZEB1 组（过表达ZEB1+3 mmol/L GA）和pcDNA3.1-ZEB1+miR-142 mimic 组（过表达ZEB1 及miR-142+3 mmol/L GA）。采用qPCR检测不同浓度GA处理后HCC827 和A549 细胞中miR-142 的表达水平,WB实验检测HCC827 和A549 细胞中ZEB1 蛋白的表达水平,采用MTT和Transwell 检测HCC827 和A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,采用双荧光素酶报告基因检测miR-142 与ZEB1 的靶向关系。结果：GA显著抑制HCC827 和A549 细胞的增殖、侵袭和迁移,且显著上调miR-142 的表达水平（P<0.05 或P<0.01）;miR-142 通过靶向结合ZEB1 的3''-UTR 区域下调ZEB1 的表达水平（P<0.05 或P<0.01）;进一步实验证实,GA通过上调miR-142 抑制ZEB1 的表达水平,进而抑制HCC827 和A549 细胞增殖、侵袭和迁移（P<0.05 或P<0.01）。结论：GA能够抑制NSCLC HCC827 和A549 细胞增殖、侵袭和迁移,其机制为GA通过上调miR-142对ZEB1 的抑制作用,从而抑制HCC827和A549 细胞的恶性生物学行为。     

硫氧还蛋白相互作用蛋白通过抑制自噬途径促进结肠腺癌细胞的凋亡

目的:探究过表达硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）对结肠腺癌细胞凋亡的影响及其机制。方法:收集我院30例结肠腺癌患者的结肠腺癌组织及癌旁组织,实时荧光定量PCR检测组织中TXNIP mRNA表达,免疫组织化学染色检测组织中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ与凋亡标志蛋白Cleaved Caspase-3表达;将人结肠腺癌 LoVo细胞随机分为对照组、阴性空载体组（LV-GFP）和 TXNIP 过表达组（LV-GFP-TXNIP）,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率,收集转染72 h后的LoVo细胞,通过流式细胞术检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察细胞自噬情况,免疫荧光染色检测细胞中LC3表达,Western blot 检测细胞中自噬相关蛋白与凋亡相关蛋白表达变化。结果:与癌旁组织比较,结肠腺癌组织中TXNIP mRNA相对表达量显著降低（P＜0.01）,LC3-Ⅱ阳性表达率显著升高（P＜0.05）,Cleaved Caspase-3阳性表达率显著降低（P＜0.05）;慢病毒转染72 h后转染效率较高（P＜0.05）;与对照组比较,LV-GFP-TXNIP组LoVo细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）,细胞质较为致密,自噬体数目明显减少,LC3荧光染色减弱,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达显著下降（P＜0.05）,而LC3-I、p62蛋白表达显著增加（P＜0.05）,同时,Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加（P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达显著下降（P＜0.05）。结论:在结肠腺癌细胞中过表达TXNIP可通过抑制自噬来促进细胞凋亡。     

Testin在非小细胞肺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨Testin基因(TES)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞株中的表达及其对人肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法:收集2015年1月至2015年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院手术切除的27例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织标本,用Western blotting法检测癌组织和癌旁组织,以及正常人胚肺成纤维细胞株MRC5和肺癌细胞株A427、A549、H1299、LK2、PC9和SW900中TES蛋白的表达水平.应用短发卡RNA(shRNA)瞬时转染肺癌细胞株A549干扰TES基因的表达,并进一步检测TES低表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡的影响,同时检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cas-pase-3的表达.结果:在NSCLC组织和细胞株中TES蛋白的表达明显下降(均P＜0.05).shTES干扰A549细胞后,TES mRNA和蛋白表达水平均显著下降(均P＜0.05).抑制TES表达显著增强A549细胞的增殖[(2.75±0.04) vs (1.79±0.06),P＜0.05]、迁移[(52.3±2.6)％s(19.7±1.4)%,P＜0.05]和侵袭能力[(31.2±3.9)％vs(14.5±4.1)％,P＜0.05],同时降低了细胞凋亡率[(8.2±1.1)％s(23.1±1.7)％,P＜0.05].TES低表达使A549细胞Bax和Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05)、Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论:TES在NSCLC组织中呈低表达,TES表达下调具有促进肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并抑制凋亡等生物学效应,其有可能成为肺癌治疗一个新靶点.     

PDCD4促进吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4,PDCD4）在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡中的作用。方法:用吉西他滨处理胰腺癌细胞PANC-1,荧光定量PCR和Western blot分别检测胰腺癌细胞中PDCD4的表达变化。PANC-1细胞感染PDCD4-pGC-Fu-GFP重组慢病毒和对照pGC-Fu-GFP重组慢病毒,荧光定量PCR和Western blot检测过表达效果。用吉西他滨处理过表达PDCD4的PANC-1细胞,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot检测细胞中剪切的Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、剪切的Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平和胞浆、线粒体中细胞色素C（Cytochrome C）蛋白水平。结果:吉西他滨处理后的PANC-1细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平均明显升高。吉西他滨处理和过表达PDCD4的PANC-1细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高,胞浆中Cytochrome C蛋白水平也升高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低。吉西他滨处理过表达PDCD4的PANC-1细胞增殖能力、克隆形成能力降低更多,细胞凋亡率更高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平也更高,胞浆中Cytochrome C蛋白水平更高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平更低。结论:吉西他滨通过上调PDCD4表达水平激活线粒体途径诱导胰腺癌细胞凋亡。     

亚砷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对MAPK／ERK信号通路的影响

目的探讨亚砷酸对肺腺癌A549细胞凋亡、MAPK／ERK信号通路的影响及其作用机制。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验组采用不同浓度(1、3、6 μmol／L)亚砷酸处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体,Western blotting检测Bcl 2、Bax、p53、Caspase 3及MAPK／ERK信号通路相关蛋白表达水平,RT PCR检测PCNA、CDK2、CyclinA1表达量。结果实验组肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡率、凋亡小体数量随着亚砷酸处理时间延长而降低,且存在剂量反应效应(P<005);Western blotting结果显示,实验组肺腺癌A549细胞中Bax、p53、Caspase 3、p JNK／JNK及p38蛋白水平高于对照组,而Bcl 2、p ERK／ERK蛋白含量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<005);RT PCR结果显示实验组肺腺癌A549细胞PCNA、CDK2、CyclinA1表达量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<005)。结论亚砷酸可以通过下调细胞周期基因水平、上调细胞凋亡相关因子含量、降低MAPK／ERK信号传导,来诱导肺腺癌A549细胞凋亡。     

下调fascin抑制卵巢癌细胞从G0/G1期向S期转变的实验研究

目的:研究下调聚束蛋白（fascin）对卵巢癌细胞周期、增殖和凋亡的影响。方法:卵巢癌细胞SKOV3感染阴性对照慢病毒载体、shRNA fascin 1慢病毒载体、shRNA fascin 2慢病毒载体,用Real-time PCR和Western blot检测干扰效果。MTT检测增殖活性,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,Cdk4)、活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）和p21蛋白水平。结果:shRNA fascin 1慢病毒载体、shRNA fascin 2慢病毒载体感染后的SKOV3细胞中fascin mRNA和蛋白表达水平均降低,并且shRNA fascin 1慢病毒载体感染后细胞中fascin mRNA和蛋白表达水平下降更多。下调fascin后的卵巢癌细胞增殖能力降低,细胞克隆形成能力也降低,细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3、活化型Caspase-9蛋白水平升高,p21蛋白水平也升高,Cdk4蛋白水平降低,与感染阴性对照慢病毒载体和未经感染的细胞比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:下调fascin可降低卵巢癌细胞增殖能力、抑制卵巢癌细胞从G0/G1期向S期转变并诱导卵巢癌细胞凋亡。