负载腮腺腺样囊性癌抗原的树突状细胞诱导的抗肿瘤效应

目的：探讨腺样囊性癌肿瘤抗原负载的树突状细胞通过淋巴细胞介导的免疫反应,体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应。方法：外周血单核细胞在GM—CSF＋IL-4的诱导下体外培养,用肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化。MTT比色法检测同种异体的混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒淋巴细胞CTL杀伤肿瘤细胞。结果：凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83表达增加（P〈0．01）,而CD1a表达量下调（P〈0．05）。负荷肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞不良反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖。结论：GM—CSF＋IL-4诱导的单核细胞来源的树突状细胞,能在体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞。     

前列腺癌LNCaP-AI+F细胞外泌体促进基质细胞WPMY-1 功能活化

[摘要] 目的：探讨前列腺癌外泌体对基质细胞WPMY-1 迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法：超速离心法提取前列腺癌LNCaP-AI+F细胞上清中的外泌体,电镜观察外泌体的典型形态结构,Zetaview 检测外泌体的粒径分布,Wb鉴定外泌体标志蛋白及其他相关蛋白。将WPMY-1 细胞与前列腺癌外泌体（40 μg/ml）共孵育后,激光共聚焦显微镜观察WPMY-1 细胞对PKH67 标记的外泌体的摄取情况,Transwell 实验检测WPMY-1 细胞迁移和侵袭能力,qPCR检测IL-8、PDGFB和MMP9 等三种肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)分子表达水平,Wb检测EGFR和ERK1/2 蛋白磷酸化水平。结果：电镜下可观察到典型茶托状外泌体结构,外泌体粒径分布集中在100 nm左右,其标志蛋白CD63 和ALIX的表达证实了所提取颗粒为外泌体。此外,外泌体还表达EGFR、HER2 和SRC 等三种与前列腺癌进展相关的蛋白。WPMY-1 细胞与外泌体共孵育后,共聚焦显微镜下可看到该细胞摄取大量外泌体,明显促进WPMY-1 细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）;与对照组比较,外泌体（40 μg/ml）处理后WPMY-1 IL-8、PDGFB及MMP9 表达水平增高（P<0.05 或P<0.01）;且外泌体促进了WPMY-1 细胞EGFR和ERK1/2 的磷酸化（P<0.01）。结论：前列腺癌细胞可通过外泌体作用于基质细胞WPMY-1,使其高表达多种CAF 相关分子,促进EGFR 和ERK1/2 的磷酸化,增强其迁移和侵袭能力。     

hTERT启动子靶向性驱动Bax诱导腺样囊性癌细胞凋亡机制的探讨

目的:探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控Bax基因在端粒酶阳性的腺样囊性癌细胞-SACC-83中表达的特异性,以及Bax对SACC-83细胞增殖的影响.方法:脂质体介导pACTERT-Bax质粒载体转染SACC-83和端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞(HEL),通过RT-PCR检测Bax表达,MTT法检测Bax基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:hTERT启动子调控Bax基因在SACC-83细胞中明显表达,对该肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用(相对活性58.90%),且诱导细胞凋亡比例增加(11.62%);而在HEL细胞中hTERT启动子未能诱导Bax基因表达,对该细胞的增殖和凋亡无明显影响.结论:hTERT启动子可以诱导Bax基因在SACC-83中特异性表达及诱导细胞凋亡,同时还能消除Bax基因对正常细胞的潜在毒性.     

负载腮腺腺样囊性癌抗原的树突状细胞诱导的抗肿瘤效应

目的:探讨腺样囊性癌肿瘤抗原负载的树突状细胞通过淋巴细胞介导的免疫反应,体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应.方法:外周血单核细胞在GM-CSF + IL-4 的诱导下体外培养,用肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化.MTT比色法检测同种异体的混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒淋巴细胞CTL杀伤肿瘤细胞.结果:凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83 表达增加﹙P<0.01﹚,而CD1a表达量下调﹙P<0.05).负荷肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞不良反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖.结论:GM-CSF + IL-4 诱导的单核细胞来源的树突状细胞,能在体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞.     

CD54、CD44在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的：探讨CD54、CD44在腺样囊性癌中的表达意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测31例腺样囊性癌中CD54、CD44表达情况。结果：在腺样囊性癌腺样管状型。混合型、实体型中CD54、CD44表达率分别为88．24％、66．67％、25％与3539％、50％、87．5％在31例中、21例有复发或淋巴结转移,19例无复发转移,CD54在复发转移组中的表达显著低于无复发转转移组（P＜0．01）,而CD44的表达在复发转移组中却显著高于复发转移组（P＜0．01）。结论：涎腺腺样囊性癌CD54、CD44分子的表达与组织分化程度,肿瘤进展及复发,转移有关。CD44高表达者复发转移较低,而CD44高表达者复发、转移倾向明显。     

神经细胞黏附分子49例涎腺腺样囊性癌表达及临床意义

[目的]探讨神经细胞黏附分子（NCAM）在涎腺腺样囊性癌（SACC）中的表达及临床意义。[方法]应用免疫组织化学方法检测49例涎腺腺样囊性癌中NCAM的表达情况。[结果]NCAM阳性表达率为57.14%（28/49）。NCAM在涎腺腺样囊性癌的表达与患者性别、肿瘤部位、原发灶分期无相关性。NCAM阳性表达率在管状型与实性型有显著性差异（χ^2=4.07,P=0.04）。有无神经侵犯NCAM阳性表达存在显著性差异（χ^2=10.02,P〈0.05）。[结论]神经细胞黏附分子与涎腺腺样囊性癌的神经侵袭性显著相关,NCAM在SACC中起到了重要作用。     

c-kit蛋白和Ki-67表达在涎腺基底细胞腺瘤和腺样囊性癌诊断中的意义

 目的　探讨原癌基因c-kit和细胞核增殖抗原Ki-67的表达在涎腺基底细胞腺瘤和腺样囊性癌诊断中的意义。方法　应用免疫组织化学方法检测18例基底细胞腺瘤和42例腺样囊性癌标本中瘤细胞c-kit和Ki-67的表达。结果　18例基底细胞腺瘤和42例腺样囊性癌中c-kit的表达率分别为72.2 %（13／18）和83.3 %（35／42）,两者差异无统计学意义（χ2＝0.11,P＞0.05）;18例基底细胞腺瘤和42例腺样囊性癌中Ki-67的平均表达率分别为（3.72±1.41）%和（23.81±10.19）%,两者差异有统计学意义（t＝14.145,P＜0.01）。结论　原癌基因c-kit表达对涎腺基底细胞腺瘤和腺样囊性癌的鉴别诊断无意义, Ki-67 对两者鉴别诊断有意义。     

唾液腺腺样囊性癌来源的外泌体促进癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探索人唾液腺腺样囊性癌不同细胞系分泌的外泌体对其癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:使用ExoEasy Maxi Kit (Qiagen,Hilden,Germany)试剂盒提取外泌体,通过透射电镜、纳米粒子跟踪分析（NTA）、蛋白免疫印迹Western blotting技术鉴定提取的肿瘤外泌体。并在外泌体的干预下,采用CCK-8法、平板克隆形成实验、细胞划痕及Transwell实验检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果:透射电镜及纳米粒子跟踪分析（NTA）检测显示:提取的外泌体主要直径在30~150 nm之间,其形态呈典型的“茶托型”结构;Western blotting检测到外泌体特异性标志蛋白CD9、CD63及TSG101呈阳性表达。CCK-8法及平板克隆实验显示唾液腺腺样囊性癌来源的外泌体可增强其癌细胞增殖能力（P<0.05）。细胞划痕及Transwell实验表明其外泌体可增强癌细胞迁移及侵袭能力（P<0.05）。结论:唾液腺腺样囊性癌不同细胞系均分泌外泌体。唾液腺腺样囊性癌外泌体可增强其癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

缺氧诱导的结直肠癌外泌体通过激活PTEN/PI3Kγ信号通路介导巨噬细胞极化

目的:探究缺氧条件下,结直肠癌细胞外泌体对巨噬细胞极化的影响及机制。方法:差速离心法提取正常条件下和缺氧条件下结直肠癌细胞HT-29所分泌的外泌体（HT-29 N-exo和HT-29 H-exo）,透射电镜和Western blot鉴定外泌体,荧光显微镜下观察外泌体的摄取。将U937细胞与100 ng/mL的PMA共孵育的同时分别与1 μg/mL的HT-29 N-exo和HT-29 H-exo以及等体积的PBS共孵育,记为PBS组、HT-29 N-exo组、HT-29 H-exo组。qRT-PCR检测各组细胞CD163、IL-10、IL-1Rα、TGF-β1、CCL2、TNF-α mRNA的表达,Elisa检测各组细胞IL-10 和 TNF-α 分泌,流式细胞术鉴定各组细胞CD163和CD11b表达,Western blot检测各组细胞PTEN/PI3Kγ信号通路激活情况。结果:差速离心法所提取的外泌体符合其结构和生物学特征,并且可被U937细胞摄取;相比于HT-29 N-exo组, HT-29 H-exo组细胞CD163、IL-10、IL-1Rα、TGF-β1、CCL2表达显著增加（P＜0.05）,IL-10分泌显著增加,TNF-α 表达以及分泌显著减少（P＜0.01）,CD163+CD11b+巨噬细胞数显著增加（P＜0.001）,PTEN/PI3Kγ信号通路显著激活（P＜0.001）。结论:缺氧条件下结直肠癌细胞外泌体能够显著促进巨噬细胞M2型极化,其机制为激活PTEN/PI3Kγ信号通路。     

雪旺细胞标记物Leu-7与肌上皮细胞标记物α-SMA在涎腺腺样囊性癌中共表达

目的:检测雪旺细胞标记物Leu-7与肌上皮细胞标记物α-SMA在涎腺腺样囊性癌(ACC)中的表达情况,并探讨Leu-7、α-SMA与ACC嗜神经侵袭的关系.方法:利用免疫组织化学、免疫荧光双标记及激光共聚焦显微镜技术检测Leu-7蛋白与α-SMA蛋白在涎腺腺样囊性癌组织中的表达.结果:在涎腺腺样囊性癌组织中,Leu-7蛋白与α-SMA蛋白均有表达,二者在同一肿瘤性肌上皮样细胞胞质中共表达.结论:腺样囊性癌中肿瘤性肌上皮样细胞发生雪旺细胞分化进而侵袭神经可能是腺样囊性癌嗜神经侵袭的病理组织学基础.     

肿瘤细胞之间的交流

一个肿瘤细胞的产生并不意味着肿瘤发生.多个肿瘤细胞之间的对话使肿瘤成为一个异常的组织或器官.细胞接触、挤出、纠缠、迁移和变异维持着肿瘤细胞间的有序组织和肿瘤的持续生长.阻断肿瘤细胞之间的对话可能成为新的肿瘤治疗策略.     

Inhibition of Glioma Cell Proliferation by Neural Stem Cell Factor

Summary Neural stem cells (NSC) have unique differentiation-, proliferation-, and motility properties. To investigate whether they secrete factors that interfere with the proliferation of glioma cells, we grew glioma cells in conditioned medium (CM) obtained from cultures of neurospheres including neural stem / progenitor cells (NSPC) isolated from embryonic (E14)- or adult mouse brain or fetal human brain. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and BrdU-labeling assays showed that CM from NSPC (NSPC/CM) contained factor(s) that inhibited the proliferation of glioma cells by 28–87%. Filter-fractionation of NSPC/CM revealed that the 50,000–100,000 nominal molecular weight limit (NMWL) fraction contained the inhibitory activity. On the basis of these observations we transplanted 203G glioma cells and/or NSPC into the intrathecal space of the cisterna magna of mice to investigate whether NSPC interfere with the proliferation of glioma cells in vivo. Mice transplanted with both 203G and NSPC survived significantly longer than did mice transplanted only with 203G. We concluded that NSPC secrete factor(s) that may control glioma cell proliferation.     

APE1表达变化对人非小细胞肺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)对人非小细胞肺癌细胞A549增殖能力的影响,为肺癌的个性化靶向治疗提供理论依据。方法:使用脂质体转染法将重组表达质粒pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA和pOZN-HA-APE1导入A549细胞,免疫印迹检测APE1表达情况。MTT、平板克隆实验、免疫印迹检测APE1对非小细胞肺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:重组载体pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA转染细胞后,显著抑制A549细胞中APE1蛋白的表达,与对照组相比,增殖速率明显下降(P＜0.05),平板克隆形成显著减少(P＜0.05),并阻止细胞周期G0/G1期向S期转化,降低CDK2表达。而过表达APE1可增加A549细胞活力,促进细胞增殖,促进细胞周期G0/G1期向S期转化。结论:APE1表达下调对非小细胞肺癌细胞A549生长具有抑制作用,为临床抑制肿瘤生长提供了新的作用靶点。     

个体化肿瘤特异TCR的筛选策略

基因修饰T细胞疗法在肿瘤治疗领域取得突破性进展，主要包括嵌合抗原受体基因修饰T（chimeric antigen receptor engineered T，CAR-T）细胞和T细胞受体基因修饰T（T-cell receptor modified T，TCR-T）细胞。虽然CAR-T细胞疗法在血液系统 肿瘤治疗领域呈现良好的临床治疗效果，但CAR-T细胞仅能识别肿瘤细胞膜抗原（占细胞全部抗原的比例约10%），而TCR-T细 胞可以识别人白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）提呈的细胞内抗原，因此TCR-T细胞可以识别更多种类的肿瘤抗原，进 而实现对CAR-T细胞的合理补充。由于TCR-T细胞需要同时识别细胞内抗原和对应的HLA，而不同患者的HLA分型和表达的 肿瘤抗原都可能存在巨大差异，因此有必要为每个/每类肿瘤患者定制个体化的TCR-T细胞，其中的关键为筛选特异识别肿瘤抗 原的TCR。当前主要有筛选靶向“已知”肿瘤抗原TCR和筛选靶向“未知”肿瘤抗原TCR的两种策略，但其各有适用性，应针对每 个患者制定适合的筛选方法，以制备多种肿瘤特异性TCR-T细胞，从而实现个体化TCR-T细胞的肿瘤治疗。     

造血细胞与内皮细胞的相互关系及其研究现状

 造血细胞和内皮细胞的相互关系已越来越为人们所重视,成为目前研究十分活跃的领域。造血细胞与内皮细胞表达某些共同的表面标记和基因,且两者能相互促进发育,内皮细胞在诱导造血细胞归巢方面也有一定作用,研究两者关系有较高的科研及临床应用价值,文章介绍了造血细胞和内皮细胞相互关系的研究现状。     

白血病细胞吞噬血细胞现象的观察

对８例白血病细胞吞噬血细胞现象作了较详细的观察描述。被吞噬的主要为红细胞。吞噬后形成假性玫瑰花环样。吞噬红细胞可能是白血病患者贫血原因之一。认为多个白血病细胞围吞一个中性粒细胞的现象值得进一步研究。对吞噬的机理和临床意义作了初步探讨。     

A child case of CD34, CD33, HLA-DR, CD7, CD56 stem cell leukemia with thymic involvement

It has been reported that the CD56⁺/CD7⁺/CD3⁻ phenotype of natural killer (NK) cells develop from the CD34⁺/HLA-DR⁻ bone marrow (BM) mononuclear cell population in long-term BM culture (LTBMC). An HLA-DR⁻/CD33⁺/CD56⁺/CD16⁻ myeloid/natural killer cell acute leukemia has been described. We report here a 7-year-old boy who developed stem cell acute leukemia with superior vena cava syndrome secondary to thymic involvement. Surface marker analyses revealed that the leukemia cells showed CD34⁺/HLA-DR⁻/CD33⁻/CD7⁺/CD56⁺ phenotype. When stimulated with phorbol ester in vitro the leukemic cells morphologically differentiated to myeloid cells developing CD13, CD15 and CD56 antigens. Our results suggest that CD34⁺/HLA-DR⁻/CD7⁺/CD56⁺ stem cell leukemia may arise from transformation of a pluripotent precursor cell, which could differentiate to both myeloid and NK cell lineages.     

红色胶状肾透明细胞癌的临床及病理特点——附2例报告

目的探讨大体标本为红色胶状肾透明细胞癌的临床特点。方法报告2例临床发现的特殊肾透明细胞癌的诊治情况,并回顾肾癌相关文献。结果临床2例肾透明细胞癌大体标本表现为均一红色,质软,胶状的特殊特点,其影像学及病理表现为典型肾透明细胞癌。结论在肾透明细胞癌大体标本可以表现为特殊的均一红色特点,其影像学为典型肾癌,大体标本与病理分期关系不明显。     

The important role of radiotherapy in patients with non-melanoma skin cancer and other cutaneous entities

Non-melanoma skin cancer is the commonest malignancy worldwide and a significant public health issue. Although most non-melanoma skin cancers are small and easily excised or ablated, a recommendation of definitive radiotherapy is often made in patients where the outcome (cosmetic and/or functional) will probably be better with radiotherapy compared to surgery. The aim of adjuvant radiotherapy is to reduce the risk of loco-regional recurrence and the role of palliative radiotherapy is important in improving the quality of life in patients with advanced and/or incurable disease. The aim of this review article is to broadly discuss the various clinical settings in which a recommendation of radiotherapy may be made and also includes a discussion on less frequently encountered cutaneous entities (e.g. in situ squamous cell carcinoma, keratocanthoma, lentigo maligna, cutaneous lymphomas and malignant fibrous tumours).     

白血病细胞来源胞外体的生物学特性及其致敏DC的抗白血病效应

目的:探索白血病细胞来源的胞外体(leukemia cell-derived exosome,LEX)的生物学特性及其致敏DC的抗白血病免疫效应.方法:超速离心分离纯化BCR-ABL阳性的白血病K562细胞来源的胞外体(LEXK562),采用免疫电镜及Western blotting检测LEXK562中热激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)及BCR-ABL的表达,采用激光扫描共聚焦显微镜及流式细胞术检测LEXK562靶向结合DC的动力学,采用LDH释放法以及小鼠模型体内实验检测LEX及其致敏DC的抗白血病免疫效应.结果:与其他细胞来源的胞外体相似,K562细胞来源的胞外体LEXK562为直径50 ～ 100 nm的囊状结构,且表达K562细胞特异性的BCR-ABL和HSP70分子.LEXK562在体外可靶向结合DC,3～4h到达高峰,并能在DC中稳定存在72 h以上.LEXK562致敏DC(DC/LEXK562)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)可有效杀伤K562靶细胞,效靶比为50:1时,其杀伤活性显著高于LEXK562诱导的CTL[(68.6±5.7)％vs(22.5±2.9)％,P＜0.01];体内实验进一步证实,白血病L1210细胞来源的胞外体(LEXL1210)免疫后小鼠接种L1210细胞的成瘤率明显高于LEXL1210致敏DC(DC/LEXL1210)免疫小鼠的成瘤率[(54.17±8.33)％vs(16.67±4.18)％,P＜0.05].结论:LEX表达白血病细胞相关抗原,LEX体外可靶向结合DC,其致敏的DC能诱导更强的抗白血病免疫效应.