miR-377-5p 通过下调HIF-1α 及其相关VEGF 信号通路抑制肝细胞癌HepG2 细胞的增殖和侵袭

目的：探讨miR-377-5p 与缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1,HIF-1α）的靶向关系以及通过控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）信号通路对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、侵袭和EMT的调控作用。方法：qPCR检测35 例人HCC组织及癌旁组织标本中miR-377-5p 的表达水平。将HepG2 细胞分为对照组、mimic NC组、miR-377-5p mimic 组,qPCR 检测转染效率;EdU染色、Transwell 和Western blotting（WB）检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞增殖、侵袭及其增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）及上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）标志蛋白E-cadherin、N-cadherin 表达的影响;qPCR、WB检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞中,缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）表达的影响。荧光素酶报告基因实验验证miR-377-5p 与HIF-1α 基因的靶向关系。结果：HCC 组织中miR-377-5p 表达水平较癌旁组织降低（P<0.01）。与对照组相比,miR-377-5p mimic 组HepG2细胞中miR-377-5p 水平明显升高,细胞的增殖、侵袭能力降低（均P<0.01）,EMT、N-cadherin 表达水平降低（均P<0.01）而E-cadherin 表达水平显著升高（P<0.01）;miR-377-5p mimic 组中HIF-1α mRNA 和蛋白表达水平均降低（P<0.01 或P<0.05）。miR-377-5p 靶向抑制HIF-1α 基因表达,并抑制VEGF通路的激活（均P<0.05）。结论：miR-377-5p 通过靶向抑制HIF-1α 基因表达和下调VEGF信号通路从而抑制HepG2 细胞的增殖、侵袭和EMT。     

miR-369-5p抑制肝细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-369-5p在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况、临床意义,观察miR-369-5p对HCC细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:实时定量PCR检测miR-369-5p在HCC组织与相应癌旁组织、正常肝细胞（L02）与HCC细胞系中的表达情况;CCK-8实验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞增殖能力;Transwell实验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞迁移及侵袭能力;Targetscan数据库预测p21活化激酶4（p21 activated kinase 4,PAK4）为miR-369-5p下游靶基因;用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性;蛋白免疫印迹试验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞中PAK4的蛋白表达水平。结果:miR-369-5p在HCC组织及细胞系中均明显低表达,低表达miR-369-5p与肿瘤大小、TNM分期、微血管浸润相关;在MHCC-97H及HCCLM3细胞中过表达miR-369-5p抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力;通过生物信息学工具预测PAK4是miR-369-5p的下游靶基因;在MHCC-97H及HCCLM3细胞中过表达miR-369-5p下调PAK4蛋白的表达。结论:在HCC中miR-369-5p表达下调且其低表达与HCC恶性病理特征有关,在HCC中过表达miR-369-5p可通过下调PAK4表达抑制细胞增殖、迁移及侵袭。     

Thy-1 通过调控Notch1 通路促进肝癌细胞EMT进程

目的: 探索细胞表面抗原Thy-1 通过调控Notch1 通路促进肝癌HepG2 和MHCC-97 细胞上皮间质转化（EMT）。方法：选用具有高转移特性的MHCC-97 细胞和低转移特性的HepG2 细胞作为研究对象,WB检测细胞内Thy-1、Notch1 蛋白表达水平。用重组慢病毒转染MHCC-97 和HepG2 细胞,构建高表达与低表达Thy-1 蛋白的细胞,再分别用Notch1 激动剂rhNF-κB（1gsu/ml）和Notch1 抑制剂MW167（100 μmol/L）处理细胞24 h。Transwell 实验检测Thy-1 表达变化、rhNF-κB和MW167 处理对细胞侵袭能力的影响,qPCR检测对Notch1 mRNA表达的影响,WB实验检测细胞内EMT相关蛋白表达的影响。结果：MHCC-97细胞中Thy-1、Notch1 蛋白表达量均高于HepG2 细胞（P<0.05）。成功构建Thy-1 过表达的HepG2 细胞和Thy-1 低表达的MHCC-97 细胞。与亲本HepG2 细胞相比,Thy-1 过表达HepG2 细胞侵袭能力显著增强[ （475.78±80.37）vs（183.23±55.34）个,P<0.05）]、波形蛋白表达显著升高（P<0.05）、上皮钙黏素蛋白表达显著降低（P<0.05）、Notch1 mRNA表达水平显著升高（P<0.05）;与亲本MHCC-97 细胞相比,Thy-1 沉默的MHCC-97 细胞侵袭能力显著降低[ （237.44±62.18）vs（543.56±77.94）个,P<0.05）]、波形蛋白表达显著降低（P<0.05）、上皮钙黏素蛋白表达显著升高（P<0.05）、Notch1 mRNA表达水平显著降低（P<0.05）。而Notch1 激活剂或抑制剂处理上述肝癌细胞可逆转由于Thy-1 沉默或过表达所造成的改变。结论：Thy-1 可通过调控Notch1 表达影响肝癌HepG2和MHCC-97 细胞的EMT。     

miR-886-5p抑制肝细胞癌细胞侵袭与迁移

目的:探讨miR-886-5p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平及其与临床病理特征的关系,并分析miR-886-5p对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.方法:应用Real-time PCR技术检测HCC组织和细胞系中miR-886-5p的表达水平;分析miR-886-5p的表达水平与HCC临床病理特征的关系;应用Transwell实验探究miR-886-5p对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.结果:miR-886-5p在HCC组织中的表达水平较癌旁组织明显降低(P＜0.05),miR-886-5p在HCC细胞系中(Hep3B、MHCC-97L、HepG2、SMMC-7721)的表达水平较正常肝细胞LO2显著下调(P＜0.05);miR-886-5p的表达水平与肿瘤数目、静脉侵犯、Edmondson病理分级及TNM分期显著相关(P＜0.05);Transwell小室实验表明miR-886-5p能够显著抑制HCC细胞的侵袭与迁移能力.结论:miR-886-5p在HCC中表达下调,其能够抑制HCC细胞的侵袭与迁移.     

小核核糖核蛋白多肽A对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制

目的：探究小核核糖核蛋白多肽A（SNRPA）在肝细胞癌（HCC）组织和细胞中的表达及其调控HCC 细胞HepG2 和Hep3B恶性生物学行为的作用及其机制。方法: 数据库分析SNRPA在泛癌组织中的表达及其与病理分期、HCC 患者预后的相关性。常规培养HepG2 和Hep3B 细胞，将si-NC ，si-SNRPA#1、si-SNRPA#2转染HepG2 和Hep3B 细胞，实验分为si-NC 组、 si-SNRPA#1 组和si-SNRPA#2 组；将SNRPA-vector 和SNRPA-oe 载体转染LO2 细胞，分为SNRPA-vector 组和SNRPA-oe 组。 qPCR法检测正常肝细胞和肝癌细胞以及转染各组HepG2和Hep3B细胞中SNRPA mRNA的表达，MTT法、Transwell 法和WB法分别检测转染后各组HepG2 和Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT相关蛋白表达的变化。结果: 数据库分析显示，SNRPA mRNA在多数肿瘤组织中均呈高表达（均P<0.001）且与病理分期有关联（P<0.05或P<0.01）。SNRPA在HCC组织和细胞中均呈高表达（P<0.05 或P<0.01），且与HCC患者的预后有关联（P<0.01）。敲减SNRPA表达明显抑制HepG2 和Hep3B细胞增殖（P<0.05或P<0.01）而过表达SNRPA则能促进LO2细胞增殖（P<0.01），敲减SNRPA表达明显抑制HepG2和Hep3B细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01），明显促进E-cadherin 的表达上调（P<0.01），而抑制N-cadherin、vimentin 的表达（P<0.01）。结论: SNRPA在HCC组织及细胞中呈明显高表达，其可能通过调控上皮间质转化（EMT）进程进而促进HepG2和Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭。     

HIF-1α／IL-8／NF-κB轴介导缺氧诱导肝癌细胞迁移、侵袭的实验研究

目的 探讨HIF-1α在缺氧条件下诱导肝癌细胞迁移和侵袭作用及可能的分子机制。方法 缺氧和正常培养条件下培养人正常肝细胞系WRL68、人肝癌细胞系HepG2和SMMC7721,实时荧光定量PCR（QPCR）和Western blotting检测HIF-1α mRNA和蛋白的表达;HepG2细胞分别转染NC无义核酸序列（NC组）、siHIF-1α（HIF-1α组）和siIL-8（IL-8组）,Western blotting检测HIF-1α、IL-8和NF-κB蛋白表达;缺氧条件下干扰HIF-1α和IL-8并检测HepG2的迁移和侵袭能力的改变。结果 缺氧条件下,HepG2和SMMC7721细胞系中的HIF-1α mRNA和蛋白水平显著高于人正常肝细胞系。与空白对照组的0.98±0.104和NC组的0.92±0.032比较,HIF-1α组HIF-1α蛋白表达量显著下降为0.39±0.077,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺氧条件下HIF-1α组IL-8蛋白表达量为0.31±0.043,显著低于空白对照组的0.96±0.114和NC组的0.90±0.081,差异有统计学意义（P＜0.05）。缺氧条件下NC组HepG2迁移、侵袭细胞数分别为91.2±8.2和121.1±6.7,显著高于HIF-1α组的36.3±5.9和47.7±3.3,差异有统计学意义（P＜0.05）;亦显著高于IL-8组的49.4±5.6和39.6±5.1,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 HIF-1α通过调控IL-8表达促进缺氧诱导的肝癌细胞迁移和侵袭。     

肝癌缺氧诱导因子-lα异常表达与靶向干预的临床价值研究

分析肝癌组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达特征及沉默HIF-1α对癌细胞增殖的影响。方法:以免疫组化法分析自身配对的肝癌及癌周组织中HIF-1α表达。HepG2细胞转染靶向HIF-1α的miRNA干扰质粒,RT-PCR、Western blot检测HIF-1α基因及蛋白水平变化;酶联免疫吸附法检测培养液血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素（ANG）-2表达;阿霉素预处理后,以Annexin V-FLUOS/PI双染法分析HepG2细胞凋亡率,并检测细胞周期改变。结果:肝癌及周围组织HIF-1α呈棕黄色颗粒状表达,定位于胞浆和胞核,其特征是癌旁组织全数表达高于癌灶组织（80.0%,χ2=22.35,P<0.001）,癌灶组织HIF-1α表达与肿瘤大小相关。HepG2细胞转染靶向HIF-1α miRNA干扰质粒后72 h,HIF-1α在转录水平下降87%,蛋白水平下降56%;培养液中VEGF和ANG-2表达水平分别减少54%和36%;HepG2细胞凋亡率为（22.46±0.61）%,G1期和S期比率分别为（61.49±1.12）%和（22.40±0.58）%;联合阿霉素后HepG2细胞凋亡率为（36.99±0.88）%,G1期和S期比率分别为（65.68±0.91）%和（19.47±1.34）%。结论:肝癌组织HIF-1α过表达与肝癌发展相关,沉默HIF-1α可有效调控下游血管生成相关基因表达,抑制癌细胞增殖,改善化疗药物敏感性。      

缺氧微环境下HIF-1α对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响

目的:探讨缺氧微环境下缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对胰腺癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及侵袭迁移的影响。方法:首先比较缺氧和常氧培养的胰腺癌细胞形态和体外侵袭迁移能力,以及HIF-1α和EMT相关因子的表达水平。然后通过HIF-1α抑制剂YC-1和siRNA基因沉默分别从蛋白和mRNA水平抑制HIF-1α的表达,检测缺氧培养的胰腺癌细胞体外侵袭迁移能力,以及EMT相关基因的表达水平。结果:形态学和分子水平证实缺氧诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1、Capan-2、Panc-1的EMT改变,增强其体外侵袭和迁移能力。缺氧上调HIF-1α、Snail、N-cadherin的表达,下调E-cadherin的表达。抑制HIF-1α的表达后,Snail和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调,并且体外侵袭迁移能力降低。结论:HIF-1α介导EMT在缺氧促进胰腺癌细胞侵袭迁移中发挥重要作用。     

LncRNA SNHG6调控miR-186表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究SNHG6通过调控miR-186表达对人肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测57名肝癌患者癌组织和肝癌细胞系中SNHG6和miR-186的表达;双荧光素酶报告实验验证SNHG6和miR-186的靶向调控关系;将SNHG6的小干扰RNA（si-SNHG6组）、阴性无意义对照序列（si-con组）、si-SNHG6与anti-miR-186抑制剂（si-SNHG6+anti-miR-186组）、si-SNHG6与miR-186抑制物阴性对照（si-SNHG6+anti-miR-con组）,均以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖;Transwell检测肝癌细胞迁移和侵袭;Western blot实验检测肝癌细胞CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及EMT的标志物（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达。结果:与癌旁正常组织或正常肝细胞相比,SNHG6在肝癌患者和肝癌细胞系中的表达升高,而miR-186表达降低,两者存在负相关性。与si-con组比较,si-SNHG6组HepG2细胞活力明显下降,迁移和侵袭细胞数明显减少,CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达增加。SNHG6靶向负调控miR-186表达,抑制miR-186表达可部分逆转下调SNHG6对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:下调SNHG6可能通过负调控miR-186表达和调控细胞EMT过程抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA SNHG11通过吸附miR-193a-5p促进NSCLC细胞A549的恶性生物学行为

目的：探讨lncRNA SNHG11对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能机制。方法:qPCR检测人胚肺细胞HEL-1和NSCLC细胞A549、H1299、HCC827中lncRNA SNHG11和miR-193a-5p的表达水平,向A549细胞中转染SNHG11小干扰RNA(si-SNHG11)、miR-193a模拟物（miR-193a mimic）或miR-193a抑制剂（miR-193a inhibitor）后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室和细胞划痕实验检测对细胞侵袭和迁移的影响,WB法检测对细胞增殖抗原Ki67、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的影响,双荧光素酶报告实验验证lncRNA SNHG11与miR-193a-5p的靶向关系。结果：与人胚肺细胞HEL-1相比,NSCLC细胞A549、H1299、HCC827中lncRNA SNHG11均呈高表达、miR-193a-5p呈低表达（均P<0.05）;沉默lncRNA SNHG11可抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移,降低细胞中Ki67和Cyclin...     

基因沉默HIF-1α在结直肠癌SW480细胞的缺氧与上皮-间质转化中的作用

目的通过基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),研究其对结直肠癌SW480细胞的生长增殖、侵袭迁移能力,及对锌指转录因子(Snail)与上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响和作用。方法利用氯化钴(CoCl2)化学诱导建立结直肠癌SW480细胞的缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA(HIF-1α-siRNA)并将其转染入细胞内。通过四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测细胞的体外生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell法)检测细胞的体外侵袭迁移力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherinmRNA与蛋白的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,缺氧条件下,基因干扰组的OD值及细胞存活率均降低(P<0.05);体外侵袭实验结果显示,基因干扰组侵袭迁移率降低(P<0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,基因干扰组中HIF-1α和Snail mRNA和蛋白的表达明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达明显增强(P<0.05),对3种因子进行相关性分析,结果显示HIF-1α和Snail的表达呈正相关,HIF-1α和Snail均与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因可抑制结直肠癌SW480细胞的体外生长增殖和体外侵袭迁移能力,其机制可能是由于基因沉默HIF-1α导致细胞中Snail低表达,E-cadherin高表达,抑制了EMT发生、发展所致。     

miR-873抑制肝细胞癌的侵袭与迁移

目的:检测miR-873在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探究其与HCC临床病理特征及HCC病人预后的相关性,进一步探究其对HCC细胞侵袭与迁移的影响.方法:应用Real-time PCR法检测90例HCC组织和对应癌旁组织中miR-873的表达水平;应用统计学方法分析miR-873的表达水平与HCC临床病理特征的相关性及对HCC病人预后的影响;应用Real-time PCR法检测HCC细胞系中miR-873的表达水平,并应用Transwell小室实验探究miR-873对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.结果:miR-873在90例HCC组织中的表达水平较癌旁组织显著下调(P<0.05);miR-873的表达水平与肿瘤数目、静脉侵犯、Edmondson病理分级及TNM分期显著相关(P<0.05);Kaplan-Meier曲线分析发现,miR-873低表达的患者生存率较差(P<0.05),且miR-873可作为肝癌病人术后生存的独立预测指标;miR-873在HCC细胞系中(Hep3B、MHCC-97H、HepG2、SMMC-7721)的表达较正常肝细胞LO2显著下调(P<0.05);Transwell小室实验显示miR-873能显著抑制HCC细胞的侵袭与迁移能力.结论:miR-873在HCC中表达下调,与HCC的临床病理及HCC病人的预后相关,并且能够抑制HCC细胞的侵袭与迁移能力.     

Pokemon在缺氧微环境中对肝细胞癌血管形成的作用

目的 探讨在缺氧微环境下Pokemon对肝细胞癌血管形成的影响。方法 选取肝细胞癌细胞株HepG2和Huh7,采用短发夹RNA稳定转染并筛选稳定沉默Pokemon基因表达的肝细胞癌细胞株。通过RT-PCR验证沉默Pokemon之后血管形成相关基因的表达。在缺氧条件下通过Western blot法验证Pokemon基因沉默后缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。结果 成功构建Pokemon干扰质粒。HepG2和Huh7细胞在Pokemon基因沉默后,血管形成相关基因促血管生成素2(angiopoietin-2,ANG2)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)以及血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)的mRNA表达均受到抑制（均P<0.05）。在缺氧条件下,HepG2和Huh7细胞在Pokemon基因沉默后HIF-1α蛋白表达均下调（均P<0.05）。将...     

lncRNA SUMO1P3诱导肝癌HepG2细胞对索拉菲尼耐药的分子机制

目的：探讨长链非编码RNA小泛素样修饰蛋白1假基因3（lncRNA SUMO1P3）促进肝细胞癌（HCC）HepG2细胞对索拉菲尼（SR）耐药的分子机制。方法：体外培养HCC细胞HepG2,采用持续接触浓度递增诱导法建立SR耐药细胞HepG2/SR,以HepG2细胞作为对照,qPCR 法检测 HepG2/SR 细胞中 SUMO1P3 的表达。利用脂质体转染技术,在 HepG2/SR细胞中分别转染si-SUMO1P3和si-NC;在HepG2细胞中分别转染pc-SUMO1P3和pc-DNA,后经5 μmol/L的SR处理24 h,qPCR法检测转染细胞中SUMO1P3表达水平,CCK-8法、Transwell实验和FCM分别检测转染细胞的增殖、迁移和侵袭能力和凋亡水平,WB法检测细胞中cyclin D1、Bcl2、BAX、MMP-2和MMP-9的表达。结果：成功构建SR耐药细胞HepG2/SR,HepG2/SR细胞中SUMO1P3表达水平显著高于 HepG2 细胞（P<0.01）。在 HepG2/SR 细胞敲减 SUMO1P3 后 ,与 si-NC 组比较 ,si-SUMO1P3 组细胞中SUMO1P3的表达与细胞增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9表达均显著降低,细胞凋亡率和BAX的表达均显著升高（P<0.05或P<0.01）。HepG2细胞过表达SUMO1P3后,与pc-DNA组比较,pc-SUMO1P3组细胞的增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率和BAX的表达均降低（P<0.05 或 P<0.01）;与pc-DNA+SR组比较,pc-SUMO1P3+SR组HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率和BAX的表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论：lncRNA SUMO1P3可通过调控HCC细胞的周期、凋亡等多种信号通路分子诱导细胞对SR的耐药,从而影响HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡与诱导细胞对SR的耐药。     

人参皂苷Rb1 通过KEAP1/PGAM5/AIFM1 通路促进肝细胞癌HepG2细胞发生氧死亡

目的：探讨人参皂苷Rb1（Gn-Rb1）对肝细胞癌（HCC）HepG2细胞氧死亡的影响及其可能的分子机制。方法：采用生物信息学方法分析氧死亡的关键基因PGAM5表达对HCC患者生存期的影响。选取辽宁省肿瘤医院收治的8例HCC患者的HCC 组织与癌旁组织,通过WB法及qPCR 检测氧死亡相关基因蛋白与mRNA的表达情况。将HepG2 细胞随机分为对照组与Gn-Rb1组（予以200 μmol/L Gn-Rb1干预）,采用细胞克隆形成实验、划痕愈合实验分别检测Gn-Rb1对HepG2细胞的集落形成能力、迁移能力的影响,ELISA 检测对细胞ROS 生成水平的影响,微板法检测对细胞LDH 释放水平的影响;WB法、qPCR 法检测Gn-Rb1对HepG2氧死亡关键基因蛋白质与mRNA水平表达的影响。结果：生物信息学分析发现,PGAM5高表达肝癌患者总生存时间较低表达患者更长（P<0.05）。在临床HCC组织与癌旁组织样本中发现,相较于癌旁组织,在蛋白质与mRNA水平上,肿瘤组织KEAP1与PGAM5表达显著降低,NRF2表达显著升高（均P<0.01）,p-AIFM1蛋白水平显著升高（P<0.05）。对HepG2细胞予以200 μmol/L Gn-Rb1干预后,相较于对照组,Gn-Rb1组HepG2细胞的迁移能力与集落形成能力显著降低（均P<0.01）,而LDH水平显著升高（P<0.05）;相比于对照组,在mRNA和蛋白质水平上,Gn-Rb1 组细胞中KEAP1、PGAM5 表达均显著升高而NRF2表达均显著降低（均P<0.05）,p-AIFM1蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论：HCC组织中氧死亡被抑制,而Gn-Rb1能够通过调控KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进HepG2细胞氧死亡的发生,抑制细胞增殖和迁移能力。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:生信分析SNHG17、E2F1和CENPE在肾透明细胞癌肿瘤组织中的表达,生信分析三者的调控关系。qRT-PCR检测SNHG17、E2F1和CENPE的mRNA水平。Western blot检测E2F1和CENPE的蛋白表达。CCK-8、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。RIP实验验证SNHG17与E2F1的结合关系;ChIP实验检测E2F1与CENPE的结合关系。构建异种瘤模型验证SNHG17对肾透明细胞癌生长的影响。结果:SNHG17和CENPE在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达水平均显著上调。沉默SNHG17转染肾透明细胞后,癌细胞的增殖、迁移和侵袭受到明显抑制。体内实验也验证了沉默SNHG17抑制肾透明细胞癌的生长。此外,RIP实验显示SNHG17能够与转录因子E2F1结合。ChIP实验检测转录因子E2F1与CENPE启动子区的结合,结果表明E2F1能够显著富集在CENPE的启动子区。体外功能实验表明SNHG17通过招募E2F1激活CENPE表达从...     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

lncRNASNHG1在子宫内膜癌组织中的表达水平及其临床意义

目的：探讨长链非编码RNASNHG1（long non-coding RNASNHG1，lncRNASNHG1）在子宫内膜癌组织中的表达水 平，分析其在子宫内膜癌中的作用机制及其临床意义。方法：采用NCBI-GEO和TCGA数据库分析SNHG1在子宫内膜癌中的 表达水平。收集2016年1月至2019年3月天津医科大学中新生态城医院手术切除的53例子宫内膜癌组织和41例正常子宫内膜 组织标本，以及子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A、正常子宫内膜细胞ESC， 用qPCR检测组织和细胞中SNHG1的表达水平， 并分析SNHG1表达水平与患者的临床病理特征的相关性。用MTT、Annexin V/PI染色法流式细胞术检测SNHG1对HEC-1A细 胞增殖能力和凋亡水平的影响， 用Transwell小室法检测HEC-1A细胞的迁移及侵袭能力。用StarBase预测并用qPCR和Western blotting验证SNHG1与RELA的调控关系，用双荧光报告基因实验、qPCR验证SNHG1影响NF-κB信号通路。结果：SNHG1在 子宫内膜癌组织中的表达水平显著高于正常子宫内膜组织（P<0.01），其表达水平与肿瘤大小、TNM分期、组织学分级和淋巴结转 移相关联（均P<0.05）；Ishikawa和HEC-1A细胞中SNHG1的表达水平显著高于ESC细胞（均P<0.01）。过表达SNHG1可明显促 进HEC-1A细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并抑制HEC-1A细胞的凋亡（均P<0.01）。SNHG1通过促进RELA的表达激活了NF-κB 信号通路，并促进下游靶基因IL-6和CCL19的表达（均P<0.01）。结论：子宫内膜癌中高表达的SNHG1通过上调RELA激活 NF-κB信号通路发挥其促癌的作用。