miR-139-5p靶向GPR56抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:研究miR-139-5p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测软骨肉瘤细胞中miR-139-5p、GPR56的mRNA表达;Western blot检测细胞中GPR56的蛋白表达;将miR-139-5p组（转染miR-139-5p mimics）、miR-NC组（转染miR-NC）、si-NC组（转染si-NC）、si-GPR56组（转染si-GPR56）、miR-139-5p+pcDNA3.1组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1共转染）、miR-139-5p+pcDNA3.1-GPR56组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1-GPR56共转染）,均以脂质体法转染至U-2OS细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭。结果:与人正常成骨细胞hFOB1.19相比,人骨肉瘤细胞U-2OS中miR-139-5p表达显著降低,GPR56表达显著升高（P＜0.05）。过表达miR-139-5p、敲减GPR56均可明显抑制U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭;GPR56是miR-139-5p的靶点。过表达GPR56可逆转miR-139-5p对U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-139-5p可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向GPR56有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

miR-127-3p通过靶向KIF3B抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的:探讨miR-127-3p对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其与KIF3B的关系。方法:选取SKOV3、HOSEpiC细胞。SKOV3细胞根据转染不同物质分为NC组、miR-NC组（miR-NC）、miR-127-3p组（miR-127-3p-mimics）、si-NC组（si-NC）和si-KIF3B组（si-KIF3B）。MTT评估增殖;Transwell分析迁移、侵袭;实时荧光定量PCR分析miR-127-3p、KIF3B mRNA含量;Western blot分析KIF3B蛋白表达。生物学、荧光素酶报告评估miR-127-3p与KIF3B的作用。结果:SKOV3细胞miR-127-3p水平低于HOSEpiC细胞（P＜0.01）,SKOV3细胞KIF3B蛋白、基因mRNA含量高于HOSEpiC细胞（P＜0.01）。与NC组、miR-NC组相比,48和72 h时miR-127-3p组细胞增殖、迁移和侵袭能力下降（P＜0.05）,与NC组、si-NC组相比,48和72 h时si-KIF3B组细胞增殖、迁移和侵袭能力下降（P＜0.05）。与NC、miR-NC组比较,miR-127-3p组KIF3B蛋白表达水平下降（P＜0.01）。与WT-KIF3B组相比,miR-127-3p+WT-KIF3B组细胞荧光素酶活性下降（P＜0.01）。结论:卵巢癌细胞低表达miR-127-3p,高表达KIF3B,miR-127-3p上调可能通过KIF3B抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-32-5p通过调节Twist1抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-32-5p在甲状腺癌组织中的表达及其对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中miR-32-5p的表达水平,筛选miR-32-5p高表达的甲状腺癌细胞系TPC-1细胞和低表达的甲状腺癌细胞系KTC-1细胞。采用miR-32-5p inhibitor转染TPC-1细胞(inhibitor-miR-32-5p)和miR-32-5p mimics转染KTC-1细胞(mimics-miR-32-5p),另分别转染无关系列作为阴性对照(inhibitor-NC和mimics-NC)。使用平板克隆形成、CCK-8法检测各组细胞增殖能力,划痕实验、Transwell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平。采用荧光素酶报告基因测定Twist1与miR-32-5p的关系;利用转染法分别上调mimics-miR-32-5p-KTC-1细胞及沉默inhibitor-miR-32-5p-TPC-1细胞中Twist1的表达...     

miR-885-5p通过靶向CTNNB1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-885-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明miR-885-5p和CTNNB1基因在胰腺癌细胞中的作用机制。方法:MTT、细胞划痕和Transwell实验测定各组细胞增殖、迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验分析CTNNB1是否为miR-885-5p的靶基因。使用胰腺癌TCGA数据进行预后分析,并进行miR-885-5p与CTNNB1表达的相关性分析。结果:下调miR-885-5p明显促进胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭,而过表达miR-885-5p则相反。miR-885-5p可靶向CTNNB1 3' UTR并抑制其转录后表达。在下调miR-885-5p的细胞中进行回复性实验,结果表明,miR-885-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用部分依赖于CTNNB1。TCGA数据库结果显示,miR-885-5p高表达的胰腺癌患者有较好的预后,且与CTNNB1表达呈负相关。结论:miR-885-5p通过靶向CTNNB1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭,miR-885-5p有望成为胰腺癌治疗的新靶点。     

miR-455-3p 通过靶向调控转脂蛋白4 抑制卵巢癌细胞SKOV-3 的增殖、迁移及上皮间质转化

[摘要] 目的：探讨miR-455-3p 对卵巢癌细胞SKOV-3 增殖、迁移能力及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并研究其作用机制。方法：人卵巢上皮细胞株IOSE80、卵巢细胞系SKOV-3 和A2780 细胞培养完成后,将miR-455-3p mimic 及其阴性对照分别瞬时转染至细胞中。qPCR 实验检测IOSE80、SKOV-3 和A2780 细胞miR-455-3p 和转脂蛋白4（fatty acid-binding protein 4,FABP4）mRNA表达水平,Wb检测FABP4 和EMT相关蛋白的表达水平,CCK-8 法检测细胞增殖活性,Transwell 实验用于评估细胞迁移能力,生物信息学预测miR-455-3p 的靶基因,应用双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p 与FABP4 的靶向关系。结果：与正常卵巢上皮细胞IOSE80 相比,卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780 中miR-455-3p 低表达（均P<0.05）,而FABP4 高表达（均P<0.05）。此外,过表达miR-455-3p 明显抑制SKOV-3 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.05）。过表达miR-455-3p 通过上调E-cadherin 表达、下调N-cadherin 和Vimentin 表达而抑制EMT进程（均P<0.05）。FABP4 是miR-455-3p 的靶基因,且miR-455-3p 能特异性结合FABP4 3’-UTR,并负调控其表达水平（P<0.05）。过表达FABP4 能够明显逆转miR-455-3p 对SKOV-3细胞增殖和迁移的抑制作用（均P<0.05）。结论：miR-455-3p 在卵巢癌中作为一个抑癌蛋白,通过靶向调控FABP4 从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及EMT,有望成为卵巢癌新的潜在治疗靶点。     

miR-139-5p通过调节Notch信号通路对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-139-5p通过靶向抑制Notch信号通路调控乳腺癌细胞的增殖和凋亡。方法:通过实时定量PCR法检测miR-139-5p以及Notch1在乳腺癌和乳腺上皮细胞中的表达;采用双荧光素酶报告基因法验证miR-139-5p对Notch1的调控作用;通过CCK8和流式细胞术分别检测miR-139-5p与Notch1对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响,并通过Western blot法检测miR-139-5p对Notch1及相关凋亡蛋白表达的影响。结果:miR-139-5p在人乳腺癌细胞中表达显著下调（P<0.05）,尤其在乳腺癌MDA-MB-231细胞中下调更为显著（P<0.01）;双荧光素酶报告基因实验证实miR-139-5p能与Notch1 3’ UTR结合;同时miR-139-5p过表达能够显著抑制细胞活力,促进细胞凋亡（P<0.01）,显著抑制Notch1蛋白表达（P<0.01）,进而降低相关凋亡蛋白Bcl-2的表达,增强Bax的表达。 结论:miR-139-5p能够通过抑制靶基因Notch1的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

miR-886-5p抑制肝细胞癌细胞侵袭与迁移

目的:探讨miR-886-5p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平及其与临床病理特征的关系,并分析miR-886-5p对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.方法:应用Real-time PCR技术检测HCC组织和细胞系中miR-886-5p的表达水平;分析miR-886-5p的表达水平与HCC临床病理特征的关系;应用Transwell实验探究miR-886-5p对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.结果:miR-886-5p在HCC组织中的表达水平较癌旁组织明显降低(P＜0.05),miR-886-5p在HCC细胞系中(Hep3B、MHCC-97L、HepG2、SMMC-7721)的表达水平较正常肝细胞LO2显著下调(P＜0.05);miR-886-5p的表达水平与肿瘤数目、静脉侵犯、Edmondson病理分级及TNM分期显著相关(P＜0.05);Transwell小室实验表明miR-886-5p能够显著抑制HCC细胞的侵袭与迁移能力.结论:miR-886-5p在HCC中表达下调,其能够抑制HCC细胞的侵袭与迁移.     

circ＿0000615通过靶向miR-432-5p调控胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨circ＿0000615在胆管癌细胞中的表达及其对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响和可能的调控机制。方法:通过qPCR检测circ＿0000615在正常胆管上皮HIBEC细胞和胆管癌CCLP-1、QBC939、TFK-1和RBE细胞中的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ＿0000615与miR-432-5p的靶向关系。将si-NC、si-circ＿0000615(si-circ-1、si-circ-2)、inhibitor-NC和inhibitor-miR-432-5p转染至CCLP-1和QBC939细胞,转染细胞分为si-NC组、si-circ-1组、si-circ-2组、si-NC+inh-NC组、si-NC+inh-miR-432-5p组和si-circ-1+inh-miR-432-5p组,通过CCK-8、EdU和Transwell实验检测各转染组胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果:在胆管癌细胞中circ＿0000615呈高表达而miR-432-5p呈低表达(P<0.05或P<0.01);双荧光素酶报告基因实验证实circ＿0000615与...     

miR-542-5p对卵巢癌细胞SKOV3恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-542-5p对卵巢癌细胞系SKOV3的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为的影响。方法:应用miR-542-5p mimics和mimics阴性对照 (mimics NC)分别转染卵巢癌细胞SKOV3。采用MTT实验、划痕试验、Transwell实验和流式细胞术检测过表达miR-542-5p对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。结果:过表达miR-542-5p后,SKOV3细胞的增殖能力较阴性对照和正常SKOV3细胞明显降低（P<0.05）;Transwell实验和划痕实验显示,过表达miR-542-5p后,细胞的迁移和侵袭能力较阴性对照组明显下降（P<0.05）;流式细胞术结果显示,过表达miR-542-5p后,SKOV3细胞的凋亡率较阴性对照组升高,而对细胞周期无影响。结论:过表达miR-542-5p可以抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡。提示miR-542-5p在卵巢癌恶性生物学进程中可能发挥重要作用。     

miR-1180-5p通过激活CDKN1A基因表达抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-1180-5p（miR-1180-5p）对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法：合成dsControl （dsControl 组）和miR-1180-5p（miR-1180-5p 组）,分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR 和Western blotting 分析转染后各组细胞CDKN1A、Cyclin D1 和CDK6 mRNA及蛋白的表达变化,采用流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和Transwell 实验分别检测细胞周期分布、增殖活力、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力。结果：qPCR结果显示,相比dsControl,转染miR-1180-5p 后VCAP 和LNCaP 细胞中CDKN1A mRNA 表达明显上调(P<0.01);Cyclin D1 和CDK6 mRNA表达明显下调(P<0.05 或P<0.01)。Western blotting 与qPCR 结果相符。转染miR-1180-5p 后VCAP和LNCaP 位于G0/G1 期的细胞比例增加(P<0.01),而位于S 期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05),细胞周期被阻滞在G0/G1 期。转染miR-1180-5p 后,两种前列腺癌细胞增殖活力较dsControl 组明显降低(P<0.05),miR-1180-5p 组两种细胞的克隆数量明显较少（P<0.01）,同时miR-1180-5p 组两组细胞迁移和侵袭能力均下降（P<0.01）。结论：miR-1180-5p 能显著激活前列腺癌细胞中CDKN1A基因的表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物行为。     

lncRNAHOXA-AS2靶向miR-520a-3p调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探究长链非编码RNA HOXA-AS2（lncRNA HOXA-AS2）与微小RNA-520a-3p（miR-520a-3p）之间的靶向关系及其对卵巢癌SKOV3 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：qPCR检测lncRNA HOXA-AS2 与miR-520a-3p 在多种卵巢癌细胞（SKOV3、HO8910、OVCAR3 细胞）及正常卵巢上皮细胞HOSE中的表达水平。生物信息学手段预测HOXA-AS2 与miR-520a-3p之间的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。将si-HOXA-AS2、miR-520a-3p mimic、anti-miR-520a-3p 和相应对照片段分别或共转染SKOV3 细胞,MTT、Transwell 和Western blotting 法分别检测各组SKOV3 细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白（CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14）表达情况。结果：与HOSE细胞相比,多种卵巢癌细胞中HOXA-AS2 均呈高表达（均P<0.05）、miR-520a-3p 均呈低表达（均P<0.05）;HOXA-AS2 可靶向下调miR-520a-3p 的表达。si-HOXA-AS2 和miR-520a-3p mimics 组SKOV3 细胞的增殖、迁移及侵袭能力均较对照组均显著降低（ 均P<0.01）,且p21、p27 蛋白表达显著升高,而CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14 蛋白表达显著减少（均P<0.01）;si-HOXA-AS2+anti-miR-520a-3p 组SKOV3 细胞增殖、迁移及侵袭能力较si-HOXA-AS2 和si-HOXA-AS2+anti-miR-NC 组显著增强（均P<0.05）。结论：lncRNA HOXA-AS2 通过靶向抑制miR-520a-3p表达进而增强卵巢癌SKOV3 细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

miR-875-5p通过靶向USF2抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-875-5p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用qPCR法检测胃癌细胞BGC-823、HGC-27、MGC-803、SGC-7901、AGS、MKN-45和胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-875-5p的表达水平。利用脂质体转染技术,分别将miR-875-5p模拟物/抑制剂(mimic/inhibitor)及其阴性对照质粒(miR-NC/Anti-miR-NC)转染至AGS细胞/MKN-45细胞,构建过表达/抑制miR-875-5p的细胞模型,空白对照组(Control组)不转染。通过CCK-8、克隆形成、Transwell等实验分别检测miR-875-5p表达变化对细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-875-5p与上游刺激因子2(USF2)的靶向关系,WB实验验证miR-875-5p对USF2的调控作用并检测USF2蛋白的表达。构建MKN-45细胞裸鼠移植瘤模型,验证miR-875-5p过表达对MKN-45细胞成瘤能力的影响。结果:miR-875-5p在6种胃癌细胞中表达水平显著低于胃黏膜上皮细胞GES-1(均P<0.01)。与Control组和miR-NC组相比,miR-875-5p mimic组AGS细胞的增殖、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数,以及USF2蛋白的表达均显著降低(P<0.05或P<0.01);miR-875-5p inhibitor组MKN-45细胞的增殖、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数,以及USF2蛋白的表达均显著提高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证明,miR-875-5p能够直接靶向USF2基因。体内成瘤实验结果表明,过表达miR-875-5p显著抑制MKN-45细胞移植瘤的生长(均P<0.01)。结论:miR-875-5p通过靶向USF2抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA SNHG3 acts as oncogene in ovarian cancer through miR-139-5p and Notch1

Ovarian cancer (OC) is a common malignant tumor of the female reproductive system. Long non-coding RNAs (lncRNAs) play an important role in OC occurrence and development. Thus, the function and potential mechanism of lncRNA small nucleolar RNA host gene 3 (SNHG3) was explored in the development of OC. The expression of SNHG3, microRNA (miR)-139-5p and Notch homolog 1, translocation-associated (Drosophila) (Notch1) in OC were detected by RT-qPCR or western blot assay. In addition, CCK-8 and wound-healing assays were used to detect OVCAR3 proliferation and migration ability. The targeting relationship of miR-139-5p with SNHG3 or Notch1 was verified through luciferase reporter assay. Rescue experiments were performed to confirm whether SNHG3 could mediate OVCAR3 proliferation and migration through miR-139-5p and Notch1. In OC tissues and cell lines, the expression of SNHG3 and Notch1 were significantly increased, and the expression of miR-139-5p was significantly decreased. SNHG3 inhibition suppressed the proliferation and migration of OVCAR3 cells. Luciferase reporter experiment confirmed that miR-139-5p could target SNHG3 and Notch1. Transfection of miR-139-5p inhibitor significantly reversed the inhibitory effect of SNHG3 knockdown on OVCAR3 proliferation and migration. Moreover, SNHG3 inhibition or miR-139-5p mimic abolished the promotion of Notch1 overexpression on OVCAR3 proliferation and migration. In conclusion, SNHG3 could accelerate the proliferation and migration of OC cells by regulating miR-139-5p and Notch1.     

miR-106b-5p靶向调控细胞周期蛋白D1抑制结直肠癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-106b-5p对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制.方法:实时荧光定量PCR检测miR-106b-5p在CRC组织与相应的癌旁组织、永生化的肠上皮细胞以及肠癌细胞中的表达量;CCK8实验检测DLD1细胞增殖能力;细胞划痕实验检测DLD1细胞的...     

LINC01503通过miR-342-3p/IGF2R轴促进上皮性卵巢癌的进展

目的：探讨LINC01503 在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达水平和生物学功能及其可能的作用机制。方法：收集2015年5月至2016 年5月间在河北医科大学第四医院妇瘤科手术切除并经病理学确诊的85 例EOC患者的肿瘤组织和输卵管组织。常规培养人EOC 细胞A2780、SKOV3、OVCAR3 和OV90 及正常人卵巢上皮细胞IOSE80,将si-LINC01503、si-NC 及miR-342-3p mimic、miR mimic NC分别转染至SKOV3和A2780 细胞,分别作为si-LINC01503 组、si-NC 组、miR-342-3p mimic 组和miR mimic NC组。qPCR 法检测EOC组织和细胞中LINC01503 的表达水平,Kaplan-Meier 法分析LINC01503 表达水平与患者生存的关系。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01503/miR-342-3p/IGF2R轴相关分子间的靶向关系。平板克隆、划痕愈合和Transwell 实验分别检测敲低LINC01503 及转染miR-342-3p mimic 对A2780 和SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。WB法检测EOC细胞中LINC01503/miR-342-3p 通路对IGF2R蛋白表达的影响。构建A2780 细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低LINC01503 对移植瘤生长的影响。结果：EOC组织和细胞中LINC01503 表达水平分别显著高于输卵管组织和IOSE80 细胞（均P<0.01）,LINC01503高表达组患者术后PFS 和OS 均显著短于LINC01503 低表达组患者（均P<0.01）。敲低LINC01503、转染miR-342-3p mimic 均可抑制EOC 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）。敲低LINC01503 可下调IGF2R的表达（P<0.01）,这一现象可通过转染miR-342-3p inhibitor 挽救。敲低LINC01503 可抑制A2780 细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.01）。结论：在EOC 组织和细胞中呈高表达的LINC01503,与患者的不良预后密切相关,LINC01503可能通过吸附miR-342-3p影响IGF2R表达进而促进EOC的进展。