尼莫地平增强HyTK/ACV自杀基因对脑胶质瘤细胞的杀伤作用

目的 :探讨尼莫地平增强阿昔洛韦 (ACV)介导的转HyTK基因治疗诱导脑胶质瘤细胞的死亡方式及旁观者效应机制。方法 :构建含HyTK基因的逆转录病毒载体LNSHyTK ,并转染人脑胶质瘤BT32 5和SCW细胞。单用ACV和联合尼莫地平应用体外试验观察对BT32 5 tk和SCW tk的杀伤效果。同时应用转基因前和转基因后瘤细胞共培养观察其旁观者效应。结果 :低浓度尼莫地平联合ACV作用下转tk基因细胞的凋亡率明显高于单独使用ACV ,并明显提高旁观者效应。结论 :尼莫地平能增强HyTK ACV自杀基因对脑胶质瘤细胞的杀伤作用 ,为钙拮抗剂应用于转tk基因治疗提供了实验依据。     

全反式维甲酸与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对胶质瘤的协同杀伤作用

背景与目的：细胞间缝隙连接通讯（gap junctional intercellular communication,GJIC)是介导单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplx virus thymidine kinase,HSV-tk)基因治疗中旁观者效应的重要机制。全反式维甲酸(all-trans-retinotic acid,ATRA)或能通过上调胶质细胞GJIC和抑制肿瘤细胞生长的双重作用,促进HSV-tk基因治疗的疗效。本研究的目的在于证实HSV-tk和ATRA联合应用对胶质瘤细胞的协同杀伤作用。方法：分别以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L3种浓度的ARTA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,并研究ATRA对C6胶质瘤细胞分化、增殖、GJIC及connexin43(Cx43)基因转录等方面的影响。将C6细胞与稳定表达HSV-tk基因的C6tk细胞按不同比例混合,分别在含GCV和不同浓度ATRA或仅含GCV的培养基中培养,并于药物作用7天后用MTT法检测旁观者效应。结果：经3种浓度的ARTA作用后,C6胶质瘤细胞均显示出细胞分化的形态学特征。C6细胞的增殖也明显受到ATRA的抑制,绝大多数的活细胞都静止于G1期,100μmol/L ATRA对C6细胞增殖的抑制尤其明显,并诱导细胞凋亡。经3种浓度的ATRA分别作用后,C6细胞的GJIC也明显提高,而Cx43基因的转录未受明显影响。旁观者效应实验的结果显示,3种浓度的ATRA均可明显增强旁观者效应。结论：联合应用ATRA与HSV-TK基因治疗可以产生显著的杀伤胶质瘤细胞的作用。     

CD基因联合 5-Fc治疗人胃癌的实验研究

目的：通过 转基因方法观察自杀基因CD对人胃癌细胞株7901的体内外 杀伤作用,并观察组织病理变化。方法：应用逆转录病毒方法转导自杀基因CD,通过体外实验观察CD 基因对人胃癌7901细胞的杀伤性和旁观者效应;体内实验中首先在BALB／cnu/nu裸鼠建立胃癌模型,然后将病毒上清注入瘤体内,并结合应用前药,观察肿上瘤体积变化,通过病理切片观察组织病理变化。结果：CD基因在外外即显出明显的杀伤作用（含旁观者效应）,20％的转基因细胞可以杀伤70％－80％的肿瘤细胞。在实验动物体内,CD基因结合前药5－Fc可显著杀伤肿瘤,而单纯转导CD基因和只用5－Fc并不能起到杀伤作用。结论：自杀基因CD联合前药5－Fc对胃癌产生显著杀伤作用,不仅转基因细胞被杀死,而且通过旁观者效应杀伤大量周围细胞。CD／5－Fe在体内试验对胃癌有显著杀伤作用。     

逆转录病毒介导的双自杀基因对K562细胞杀伤作用的实验研究

目的：观察逆转录病毒介导的双自杀基因对K562细胞的杀伤作用，探讨慢性粒细胞白血病的基因治疗方法。方法：通过脂质体将含有双自杀基因的逆转录病毒载体PWZLneoCDglytk导入包装细胞PA317，经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317／CD tk细胞株，收集病毒上清，浓缩后转染K562细胞，再次经G418筛选，获得稳定表达双自杀基因的K562／(：D tk细胞株。用RTl_PCR检测双自杀基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-flourocytosine，5-FC)和／或无环乌苷(Ganciciovir，GCv)后MTT法测定转基因组及未转基因组K562细胞的存活率。结果：双自杀基因在K562细胞中可稳定表达，联合使用5-FC和GCv对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应高于单独使用5-FC或GCv。结论：逆转录病毒介导自杀基因可有效杀死K562细胞，双自杀基因较单一自杀基因具有更强的抗肿瘤作用。     

细菌内同源重组法制备CD腺病毒及其体外杀瘤作用的初步研究

目的观察应用重组IFN-α2a能否增强单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（HSV-tk）/丙氧鸟苷（GCV）系统对卵巢癌细胞系SKOV3的杀伤效应。方法利用逆转录病毒载体将潮霉素磷酸转移酶和HSV-tk的融合基因（hytk）导入SKOV3细胞,测定GCV对SKOV3/hytk细胞的杀伤作用和旁观者效应。观察IFN-α2a与HSV-tk/GCV协同作用对旁观者效应的影响,并且在联合应用GCV和IFN-α2a后,进行细胞周期分析。结果GCV对SKOV3/hytk细胞有明显的杀伤作用,并且可以同时杀伤周围未转基因的细胞,联合应用IFN-α2a与HSV-tk/GCV可以明显增强旁观者效应（P<0.05）,使处于S期的SKOV3/hytk细胞较对照组和使用单药组明显增多（P<0.01）。结论IFN-α2a与HSV-tk/GCV联合应用可以产生协同作用,增强HSV-tk/GCV系统在体外对卵巢癌细胞系SKOV3的杀伤效应,具有良好的应用前景。     

转染HSV-tk骨髓基质干细胞旁观者效应机制的研究

目的：研究转染单纯疱疹病毒_胸苷激酶（HSV-tk）基因的骨髓基质干细胞（BMSCs）旁观者效应的机制。方法：培养BMSCs，扩增Ad-CMV-tk后转染骨髓基质干细胞（BMSCs／tk）；应用Transwell培养板使BMSCs／tk与C6细胞不相互接触，观察旁观者效应；观察0．22μm滤膜过滤后的奈件培养液对C6细胞的作用。建立大鼠脑荷瘤模型，移植BMSCs／tk后，测定其血清中IFN-γ的变化；免疫组化观察荷瘤大鼠肿瘤内部淋巴细胞浸润及微血管密度。结果：在混合培养实验中，BMSCs／HSV-tk诱导BMSCs的凋亡率明显高于对C6的凋亡率，两者差异有统计学意义，q=8．214，P=0．032。应用Transwell培养板培养后，BMSCs／Hsv-tk诱导卧，ISCS凋亡率明显降低。BMSCs／HSv-tk／GCV培养上清液可明显诱导c6细胞凋亡，但将其用0．22μm的滤膜过滤后，诱导凋亡的作用消失。脑荷瘤大鼠移植BMSCs／HSv-tk后血清IFN-γ浓度明显增高，肿瘤组织内CD4^＋细胞数、CD8^＋细胞数明显增加，微血管密度降低。结论：BMSB／HSv-tk通过诱导BMSb细胞凋亡后释放的凋亡小体介导旁观者效应，并发挥免疫学调节机制，对C6细胞可产生明显的抑制作用。     

逆转录病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞的杀伤作用研究

目的 观察逆转录病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞的杀伤作用，探讨淋巴瘤的基因治疗方法。方法 在脂质体的介导下将含有双自杀基因的逆转录病毒载体pWZLneoCDglytk导入包装细胞PA317，经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317／CD tk细胞株，收集病毒上清，浓缩后转染Raji淋巴瘤细胞，再次经G418筛选，获得稳定表达双自杀基因的Raji/CD tk细胞株。采用RT-PCR法检测双自杀基因的表达。MTT法测定转基因组及末转基因组Raji细胞的存活率。结果 双自杀基因在Raji细胞中可稳定表达，联合使用5-氟胞咳暖(5-FC)和无环鸟苷(QCV)对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应高于单独使用5-FC或GCV。结论 逆转录病毒介导双自杀基因较单一自杀基因具有更强的杀伤作用。     

XIAP反义寡核苷酸抑制胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的体外实验研究

目的观察X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系BT325的增殖及凋亡的影响。方法将XIAP全硫代反义寡核苷酸，通过脂质体途径转染BT325脑胶质瘤细胞。用CCK-8实验检测细胞杀伤率，RT-PCR和Western blot技术检测XIAP的mRNA和蛋白表达，JC—1检测细胞线粒体膜电位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测Caspase-3活性。结果XIAP反义寡核苷酸能够抑制BT325脑胶质瘤细胞的增殖；XIAP反义寡核苷酸使XIAP的mRNA和蛋白表达均明显下调，mRNA较对照组减少了67．8％，蛋白较对照组减少了63．3％；反义寡核苷酸使线粒体膜电位下降，诱导BT325细胞凋亡，反义寡核苷酸组的凋亡率为54．7％，错义链组为14．O％，两组比较，差异具有显著性（P〈0．05）；反义寡核苷酸使BT325细胞Caspase-3活性明显增高，与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论XIAP可能参与了脑胶质瘤细胞BT325的增殖和凋亡，下调XIAP可抑制BT325细胞增殖及促进其凋亡。     

CD／5—FU联合亚叶酸钙对直肠癌细胞杀伤作用的研究

目的：探讨亚叶酸钙（CF）联合5－氟胞嘧啶（5－FU）对转染胞嘧啶脱氨酶（CD）基因的直肠癌细胞的杀伤作用。方法：构建含CD基因的真核表达载体pCDA。应用四唑盐（MTT）比色试验检测瘤细胞的存活率,观察CF联合5－氟尿嘧啶（5－FU）对CD阴性细胞及CF联合5－FU对CD阳性细胞的杀伤作用,同时观察CF对CD／5－FU旁观者效应的影响。结果:CF强5－FU对8384细胞的杀伤作用,单独CD／5－FU和CD／5－FU联合CF对8348细胞的IC50分钟为0．8mmol/L,0.3mmol/L,CF明显降低5－FU的IC50（P＜0．01）,CF对CD／5－FU系统的旁观者效应也有增强作用。结论：CF明显增强CD／5－FU系统对直肠癌细胞的杀伤效能,可作为一种增效剂应用于CD自杀基因治疗直肠癌。     

旁观者效应与免疫

基因治疗恶性肿瘤面临的一个主要难题是基因转导效率低 ,很难将目的基因转导入每一个肿瘤细胞。自杀基因 /前体药物体系是众多基因治疗方案中较有前途的一种治疗方法 ,主要特点是存在旁观者效应 ( bystander effect) ,即在转导了自杀基因的肿瘤细胞死亡以后 ,还可引起周围邻近的肿瘤细胞的死亡 ,这种现象又称之为“代谢协同”或“相邻细胞杀伤效应”。Moolten[1]首先观察到了这种现象 ,当转导了自杀基因的细胞仅占肿瘤细胞总数的 1 0 %时 ,便可观察到明显的旁观者效应。这种旁观者效应明显地增强了自杀基因对肿瘤的杀伤作用 ,在相当程度上…     

Tet-On调节的自杀基因对人乳腺癌细胞的体外杀伤和旁观者效应研究

目的探讨Tet调控下的自杀基因HSVtk对人乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法构建重组逆转录病毒载体pRevTRE／HSVtk，通过磷酸钙共沉淀法，分别将pRevTRE／HSVtk和pRevTet-On导入乳腺癌细胞株MCF-7。以RT—PCR法检测不同Dox浓度下转染乳腺癌细胞中HSVtk基因的表达，MTT法检测细胞生长抑制率，通过检测混合细胞生长克隆来评价Tet调控下的自杀基因的旁观者效应和对乳腺癌细胞的杀伤作用。结果建立了一株稳定的受多西环素（Doxcycline，Dox）诱导、表达HSVtk基因的乳腺癌细胞株MCF／TRE／tk／Tet—On。当Ganciclovir（GCV）及Dox浓度增加时，细胞存活率下降。MCF／TRE／tk／Tet—On在总细胞中的比例〉10％时，有明显的旁观者效应。结论在Tet—On调控下，导入乳腺癌细胞中的HSVtk基因产物能将药物前体GCV转变为毒性代谢物质，并诱发旁观者效应进一步杀灭乳腺癌细胞。     

胞嘧啶脱氨酶基因联合放射对食管癌细胞株的杀伤作用

目的：观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶／5-氟胞嘧啶（CD／5-FC）自杀基因系统对食管癌细胞株（EC109细胞）的杀伤效应以及与放射联合应用时对食管癌肿瘤细胞协同杀伤效应。方法：采用PCR方法,从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因;构建重组真核载体pcDNA3．1-CD;用脂质体转染法转染食管癌ECl09细胞,观察CD／5-FC体系对EC109细胞的杀伤效应和杀伤时的旁观者效应以及对放射的增敏效应。结果：RTP—CR分析结果表明CD基因已转入ECl09细胞并开始转录。体外实验证实,5-FC对转CD基因后的食管癌细胞株有明显的细胞毒作用,CD／5-FC体系对肿瘤细胞对放射增敏效果明显,加5-FC及放射治疗组细胞存活曲线低于单纯加前药5-FC对照组或单纯放射对照组。结论：CD／5-FC体系对肿瘤细胞的自杀效应具有旁观者效应和放射增敏效果。     

单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因转染骨髓基质干细胞治疗大鼠脑胶质瘤

目的研究转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)基因的骨髓基质干细胞(BMSCs)对大鼠脑胶质瘤的治疗作用。方法原代培养BMSCs,AdCMV-tk转染BMSCs。逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测BMSCs/tk对tk基因的转录。以BrdU标记BMSCs/tk,观察其趋瘤性。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对C6细胞的旁观者效应。将BMSCs/tk注入脑胶质瘤大鼠肿瘤对侧脑组织,原位末端标记(TUNEL)法检测脑内肿瘤细胞凋亡,动态MRI监测肿瘤体积的变化,观察荷瘤鼠生存期。结果全骨髓细胞培养法可获得纯化的BMSCs。感染AdCMV-tk 21 d后,BMSCs仍有明显的tk基因表达。转染tk基因后的BMSCs仍具有明显的趋瘤性。BMSCs/tk不仅在体外可产生明显的旁观者效应,在荷瘤鼠脑内也显示了明显的诱导肿瘤细胞凋亡的旁观者效应,凋亡阳性率为20.38%±2.57%,与BMSCs组(2.56%±0.52%)和对照组(2.74%±0.38%)相比,差异均有统计学意义(P值分别为0.023和0.025)。BMSCs/tk移植3周时,BMSCs/tk组、BMSCs组和对照组肿瘤体积分别为(8.28±2.64)、(134.51±16.37)和(147.22±31.05)mm3,BMSCs/tk组远小于BMSCs组(P=0.001)和对照组(P<0.01),并且部分大鼠脑内肿瘤消失。BMSCs/tk组大鼠生存期为(52.60±13.11)d,与对照组相比明显延长(P=0.01)。结论HSV-tk转染的BMSCs可能成为脑胶质瘤治疗的有效手段。     

tk基因治疗脑胶质瘤时的免疫反应与旁观者效应的关系

 目的　探讨tk基因 (thymidinekinasegene)治疗脑胶质瘤时的免疫反应与旁观者效应的关系。方法　将C6 tk+与C6 tk 按 0 %tk+,10 %tk+,30 %tk+,5 0 %tk+,10 0 %tk+5种比例混合 ,接种于SD鼠右侧顶叶 ,7d后腹腔注射GCV(更昔洛韦 ) ,剂量为 30mg/kg/d ,共 10d。细胞接种 3周后 ,处死动物 ,计算成瘤率 ,作病理检查 ,并作CD4 +、CD8+的免疫组化染色。结果　 5 0 %及 10 0 %C6 tk+组的成瘤率明显小于其余3组 (P <0 .0 5 ) ,病理检查发现 5 0 %及 10 0 %tk+组有淋巴细胞及浆细胞浸润。免疫组化显示每一组之间均有差异 ,提示有免疫反应存在。结论　tk基因治疗脑胶质瘤时 ,可激起机体内的免疫反应 ,增强抗肿瘤作用 ,它是旁观者效应的作用机制之一     

三氧化二砷诱导胶质母细胞瘤细胞分化作用的研究

背景与目的：胶质母细胞瘤的预后较差，本文旨在观察三氧化二砷（As2O3）诱导胶质母细胞瘤细胞分化作用，为胶质瘤的诱导分化治疗提供实验依据。方法：低剂量不同浓度的As2O3诱导BT325细胞系3周后．常规HE染色及电镜观察细胞形态学改变，免疫细胞化学染色观察肿瘤分化标记物GFAP，S-100，Vimentin表达的改变，流式细胞仪分析细胞周期时相分布的变化。结果：BT325细胞在As2O3作用3周后，细胞形态类似正常星形细胞，肿瘤分化标志物GFAP，S-100表达均增高，并且呈剂量依赖效应，细胞周期时相分布G0／G1期比例升高，符合诱导分化现象。结论：三氧化二砷以剂量依赖形式诱导BT325细胞分化，是治疗脑胶质瘤的潜在诱导分化剂。     

VP22的细胞间传递作用对HSV-tk/GCV的肿瘤细胞杀伤促进效应

目的：探讨VP22的细胞间传递作用对HSV－tk/GCV杀伤肿瘤的促进作用。方法：将VP22与报告基因－绿色荧光蛋白基因（GFP）或前药酶基因－单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV－tk）构建在同一载体上,进行DNA序列分析鉴定;将此融合工体转染293T或COS7细胞,免疫荧光分析确定转染情况和细胞传递作用;在前药GCV不同浓度、转染与未转染细胞比例不同时,MTT法检测细胞增殖情况;利用转染细胞增养液上清培养未转染细胞,确定旁观者效应是否由培养液转移。结果：PCR及序列分析显示融合基因插入载体正确;对293T或COS7细胞转染率可达25％－305,且证明融合蛋白已被表达并在细胞传递;HSV－tk与VP22融合后在前药GCV浓度低至0．1μg/ml时就可显示出细胞杀伤效应增强,并随着表达VP22－HSV－tk细胞比例的增加,细胞杀伤作用增强。结论：VP22介导的自杀基因产物的细胞间传递作用可解决自自杀基因的低效细胞毒作用,明显增强细胞杀伤效应。     

CD-TK和HSV-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞的杀伤作用

背景与目的：自杀基因治疗是一种有前景的基因治疗方法,本实验通过观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV—TK)和CD-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞PC-3m的杀伤效果,探讨该基因治疗在前列腺癌治疗中的应用价值。方法：应用逆转录病毒载体将HSV—TK基因和CD—TK融合基因分别转染：PC-3m细胞,经RT—PCR鉴定后,MTT法检测丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)、5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC)前体药物单一或联合应用对转染后：PC-3m细胞的杀伤作用,以未转染的PC-3m细胞作对照。结果：GCV对转染后PC-3m细胞有较强的细胞毒作用,半数抑制浓度为8．34μg／ml,但旁观者效应不明显;5-Fc则有显著旁观者效应,当混育细胞中转染细胞比例是5％时即可出现;联合用药具有协同作用,两药相互作用指数小于1．0。结论：CD—TK自杀基因体系对前列腺癌细胞具有显著杀伤作用,明显优于单用HSV—TK基因体系,深入研究意义较大。     

HSV-tk/GCV协同放射治疗黑色素瘤的实验研究 *

目的：了解ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ系统协同放射治疗对小鼠黑色素瘤的联合杀伤作用。方法：通过逆转录病毒介导,将潮霉素磷酸转移酶和ＨＳＶ－ｔｋ的融合基因（ｈｙｔｋ）导入黑色素瘤细胞中并获得表达,通过体外和Ｃ５７ＢＬ／６小鼠动物实验,检测 ＧＣＶ对转基因细胞的体内外杀伤作用及联合应用放射治疗对黑色素瘤的治疗作用。结果：ＰＣＲ、ＲＮＡ Ｄｏｔ ｂｌｏｔｔｉｎｇ、免疫组化检测证实ＨｙＴＫ在转基因细胞的表达,体内外实验示ＧＣＶ对Ｂ１６／ＨｙＴＫ细胞有明显的杀伤作用,而对野生型Ｂ１６细胞无明显杀伤作用（Ｐ＜０．０５）;联合应用低剂量ＧＣＶ可使转入ｈｙｔｋ基因的黑色素瘤细胞对放疗的敏感性明显增高（ＳＥＲ＝１．６２）,体内实验也证实协同疗法可延缓荷瘤小鼠的肿瘤生长。结论：ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ系统协同放射治疗有望成为黑色素瘤基因治疗的一种有效方法。     

自杀基因联合放射对食管癌细胞株的实验研究

目的自杀基因具有能将无细胞毒性的前体药物转化为有细胞毒性作用的药物而使细胞死亡,通过观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶/氟胞嘧啶(CD/5-FC)自杀基因系统对食管癌EC109细胞杀伤效应及与放射联合应用对食管癌肿瘤细胞协同杀伤效应。方法采用PCR方法从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因;构建重组真核载体pcDNA3.1-CD;用脂质体转染法转染EC109细胞;观察CD/5-FC体系对EC109细胞的杀伤效应和旁观者效应及对放射的增敏效应。结果RT-PCR分析结果表明CD基因已转入EC109细胞并表达。离体实验证实5-FC对转CD基因后的食管癌细胞株有明显的细胞毒作用,含5%的转基因食管癌细胞加入5-FC后的细胞存活比率为41.8%±14.2%,低于对照组的94.6%±4.3%结果(t=3.14,P<0.05);加入10%的转基因细胞的存活比率为37.8%±4.4%,低于对照组的95.6%±5.4%结果(t=9.75,P<0.01)。CD/5-FC体系对肿瘤细胞放射增敏效果明显,加前药5-FC及放射组细胞存活曲线低于单纯加前药5-FC对照组或单纯放射对照组,重复测量数据方差分析结果显示F=11.50,P<0.01;治疗组分别与5-FC对照组及单纯放射对照组相比F值分别为4.11、10.53,P值分别<0.05、0.01。结论CD/5-FC体系的旁观者效应和放射增敏效果明显。     

hTERT基因启动子调控HSV-tk/GCV系统对HepG2细胞杀伤作用的实验研究

目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-tk/GCV)系统对肝癌细胞体外杀伤作用.方法:以pGL3-hT-ERT/tk为基础,构建pGL3-hTERT/lue、pGL3-basie/tk、pGL3-control/tk等真核表达载体,分别将其用脂质体法转染HepG2肝癌细胞和正常肝细胞L02,荧光显微镜观察转染效果,给予前药GCV,用原位末端标记(TUNEL)法、流式细胞仪检测hTERT调控的HSV-tk/GCV系统对两种细胞的杀伤作用,Western blot检测细胞周期素Cyclin D1、CDK2、p21蛋白表达.结果:hTERT启动子调控的HSV-tk/GCV系统对肝癌细胞有明显的杀伤作用,使41.85%的细胞凋亡;而对正常细胞作用不明显,Western也显示Cyclin D1、CDK2蛋白表达下降而p21升高.结论:hTERT启动子调控的tk基因治疗是一种具有肿瘤特异性的治疗方法,有望解决肿瘤基因治疗中的特异性杀伤及降低毒副反应等问题.