以lipid A为靶点应用生物传感器技术筛选抗炎中药

目的应用生物传感器跟踪检测技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗内毒素作用的中药，并对其进行活性物质含量排序。方法将lipid A包被于生物传感器的非衍生板，建立靶点，测定22种去鞣质后的中药水煎液与lipid A的亲和力；选择具有较高亲和力的药物与定量脂多糖（5ng／mL）于37℃混合孵育30min，再测定其与lipidA的亲和力，以评价药物水提液中活性物质的含量。结果22种中药均具有与lipidA较高的亲和力（大于100RU）；侧柏叶、地骨皮、石榴皮等16种中药中与lipidA特异性结合的活性物质含量较高。结论应用生物传感器技术建立的筛选平台快速而客观，筛选出的16种中药均含有能与lipidA发生特异性结合作用的非鞣质类活性物质。     

以Lipid A为靶点拮抗内毒素中药的筛选

目的利用生物传感器跟踪技术从抗炎中药中筛选出具有拮抗内毒素的中药,为进一步对中药拮抗内毒素活性成分的分离纯化提供实验依据。方法将革兰阴性细菌的脂质A(Lipid A)包被于生物传感器的非衍生板建立靶点,跟踪测定赤芍、大黄、黄芩等78种中药的水提物和醇提物与Lipid A的结合活性,再将筛选出的中药去鞣质后与定量的内毒素(LPS,20、50ng·ml-1)37℃孵育30min后,测定孵育后的样品与Lipid A的结合情况,以评价样品内的活性物质含量。结果在所筛选的78种中药中有12种中药的水提物与Lipid A具有较高的亲和活性,在这12种中药中有6种中药的醇提物与Lipid A也具有较高的亲和活性;通过对所筛选出的12种中药的水提物去除鞣质后与LPS的消耗实验,发现所筛选出的12种中药均含有除鞣质以外的与lipid A具有特异性结合的物质,并且12种中药中能与Lipid A发生特异性结合作用的活性物质含量存在较大的差异。结论生物传感器跟踪技术是一种快速、准确、有效的筛选平台,筛选出的12种中药均含有非鞣质类能与lipid A发生特异性结合作用的物质,为进一步对12种中药抗内毒素有效部位或单体的分离提供了重要的实验依据。     

以CpG ODN为靶点应用生物传感器技术筛选抗炎中药

目的:筛选具有拮抗CpGODN作用的抗炎中药。方法:将CpGODN包被于生物传感器的生物素化样品池上,测定78种中药水煎液与CpGODN的亲和力;选择具有较高亲和力的中药水煎液,与CpGODN(33μg·ml-1)37℃孵育30min后,再次测定与CpGODN的亲和力。结果:78种中药中,地榆、大黄、藏青果等14种中药含有结合CpGODN的活性成分;鸦胆子、赤芍、地榆等9种中药活性成分含量较高。结论:筛选得到9种活性含量较高的中药,为下一步分离提纯有效成分单体提供了实验依据。     

大黄拮抗CpG DNA有效成分的分离制备及活性研究

目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,至今无有效的治疗手段。细菌Cp6DNA是引起脓毒症的主要病原分子。CpGDNA通过与TLR9结合,介导单核／巨噬细胞的活化,是介导脓毒症发生的重要途径。本研究以CpGDNA为靶点,从中药中定向分离具有拮抗CpGDNA和治疗脓毒症作用的活性物质。方法：（1）应用生物传感器技术、建立以CpGDNA为靶点的筛选抗炎中药的技术平台并对78种中药进行筛选;（2）利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析技术,从大黄中定向分离与CDGDNA具有较高结合活性的组分,并对得到的组分进行初步的活性评价,确定活性组分;（3）在体外实验中,测定活性组分与CpGDNA、lipidA的结合能力,观察活性组分对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264．7细胞分泌炎症介质的抑制作用,在体内实验中,观察活性组分对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用。（4）利用反相HPLC技术对活性组分进行制备分离,获得活性单体化合物;（5）在体外实验中,检测单体化合物与CpGDNA和lipidA的结合能力．观察化合物对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264．7细胞分泌炎症介质的抑制作用。结果：（1）建立了以CpGDNA为靶点应用生物传感器筛选抗炎中药的技术平台;从78种中药中筛选出大黄等14种中药与CpGDNA具有较高结合能力;（2）利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析等技术从大黄水提物中定向分离得到与CpGDNA有较高结合活性大黄D组分;（3）在体外,大黄D组分与CpGDNA、LipidA均具有较高的结合活性,对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF-α有显著的抑制活性,并呈现良好的量一效关系。在体内,大黄D组分对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用,并呈现良好的量-效关系;（4）通过反相HPLC从D组分中分离得到单体化合物大黄酸和大黄素;（5）在体外,大黄酸和大黄素与CpGDNA均具有较高结合能力,均能单独或协同对CpGDNA及LPS刺激RAW264．7细胞分泌TNF—Q产生显著抑制作用。结论：（1）应用生物传感器、以病原分子CpG DNA为靶点,成功地建立了筛选抗炎中药的技术平台;（2）从大黄中分离得到与CpGDNA有较高结合活性的大黄D组分,体内、外生物学活性评价结果显示：大黄D组分对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF—α具有显著的抑制活性,并对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用;（3）从大黄D组分中分离得到单体化合物大黄酸和大黄素,生物学活性评价结果显示,大黄酸和大黄素对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF—α具有显著的抑制活性,提示大黄酸和大黄素可能是D组分以及大黄提取物拮抗cpGDNA和脓毒症的主要物质基础。     

中药活性成分筛选新技术研究进展

近年来中药活性物质筛选的新技术发展迅速,利用"受体-配体"之间的特异性结合,快速筛选出中药材里含有的与特定靶点结合的活性小分子物质,再进一步鉴定出活性成分结构.这些技术对阐明中药药效的物质基础和中药新药的开发具有重要意义,是对传统药物发现方法的有利补充.综述了常用的分子对接技术、高通量筛选技术、细胞膜色谱技术的原理、特...     

恶性肿瘤患者多重耐药菌感染危险因素的研究进展

近年来中药活性物质筛选的新技术发展迅速,利用“受体-配体”之间的特异性结合,快速筛选出中药材里含有的与特定靶点结合的活性小分子物质,再进一步鉴定出活性成分结构。这些技术对阐明中药药效的物质基础和中药新药的开发具有重要意义,是对传统药物发现方法的有利补充。综述了常用的分子对接技术、高通量筛选技术、细胞膜色谱技术的原理、特点及应用进展,以期为中药活性成分的筛选以及新药研发提供参考。     

侧柏中槲皮甙的HPLC法测定

中医临床以侧柏叶作止血药使用。徐振文等认为侧柏叶中的止血成分可能是槲皮甙和鞣质;小岛卓夫等以Tajimas止血方法为指标,经过系统的分离和筛选,确证了侧柏叶的止血活性成分是槲皮甙。我们从侧柏叶中分离到槲皮甙,用HPLC法测定了侧柏叶中槲皮甙的含量,为侧柏叶的质量评定建立了分析方法。     

赤芍拮抗内毒素活性物质的分离及生物学活性研究

目的 通过生物传感器技术，应用常规分离技术寻找赤芍中的非鞣质类的抗LPS活性成分。方法 以生物传感器技术和薄层色谱技术为指导，建立赤芍抗LPS成分的有效提取方法。再利用高效液相色谱技术（HPLC）从赤芍中定向分离出具有拮抗LPS作用的活性组分。最后对其进行拮抗LPS活性的药理学评价。结果 利用生物传感器技术完成了对不同产地和不同煎煮方法的赤芍拮抗LPS活性的筛选，确定出醇提法的四川的赤芍中拈抗LPS活性成分的含量最高。并从中定向分离出6个具有与Lipid A结合活性的组分。     

青果抗人免疫缺陷病毒活性部位的筛选研究

目的:筛选青果中作用于人免疫缺陷病毒(HIV)gp41抑制HIV-1与靶细胞融合的活性部位。方法:分别用水蒸气蒸馏法、溶剂梯度萃取法获得青果挥发油、青果10%水提液的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测以上各部位抑制HIV-1与靶细胞融合的活性;测定活性部位中鞣质的含量,以确定青果中非鞣质成分与活性的关系。结果:青果10%水提液的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取部位均有较强的抑制HIV-1与靶细胞融合的活性,其半数抑制浓度分别为(3.97±0.38)、(26.78±0.47)、(6.80±0.10)μg.mL-1;各部位中鞣质的含量分别为8.0%、9.6%、32%。结论:青果抑制HIV与靶细胞融合的活性部位为水提液的石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取部位,其中石油醚萃取部位活性最强,且很可能含有非鞣质类的活性物质。     

放射性配体受体结合实验在中草药中寻找中枢活性成分的应用

有些植物成分可与受体非特异性结合,故对短序鹅掌柴、海通、瓜木、钩藤4种植物,用不同的溶剂分成不同部位,用于受体结合实验。对活性部位,通过受体筛选进一步分出单体。化学成分为三萜、三萜皂甙、黄酮、生物碱和寡糖。有些鞣质常被认为与蛋白质非特异性结合,也对其进行分离。为了解鞣质在受体结合实验中所起的作用,对分离出的20个鞣质进行受体结合实验。这些鞣质可分为缩合鞣质和水解鞣质。实验发现近20个鞣质没有一个能同时与两个受体结合,而且有4个鞣质对所用的受体均无活性。因此可以说受体结合实验筛选是特异性的。从短序鹅掌柴和穗序…     

Dual targets guided screening and isolation of Kukoamine B as a novel natural anti-sepsis agent from traditional Chinese herb Cortex lycii

Treating sepsis remains challenging at present. Bacterial lipopolysaccharide (LPS) and bacterial DNA/CpG DNA are important pathogenic molecules and drug targets for sepsis. It is thus a promising strategy to treat sepsis by discovering agents that neutralize LPS and CpG DNA simultaneously. In this study, we present evidences of the biosensor based screening and isolation of active anti-sepsis fractions and monomers from traditional Chinese herbs using dual targets (LPS and CpG DNA) guided drug discovery strategy. Firstly, LPS or CpG DNA was immobilized on surfaces of cuvettes in the biosensor to establish a screening platform. Then, Cortex lycii with both highest affinities was selected out from one hundred and fourteen traditional Chinese herbs. In subsequent experiments, chromatography was utilized and coupled with the biosensor to purify fractions with a higher affinity for LPS and CpG DNA. In line with affinity assay, these fractions were shown to neutralize LPS and CpG DNA and inhibit their activity in vitro and in vivo. Lastly, the contributing monomer Kukoamine B (KB) was purified. KB neutralized LPS and CpG DNA in vitro. It inhibited TLR4, TLR9 and MyD88 mRNA expressions up-regulated by LPS and CpG DNA, and also attenuated the LPS and CpG DNA elicited nuclear translocation of NF-κB p65 protein in RAW264.7 cells. It also protected mice from lethal challenge of heat-killed E. coli, a mixture of LPS and CpG DNA. In conclusion, we presented a dual target guided discovery of a novel anti-sepsis agent KB from traditional Chinese herbs via combination of biosensor technology and chromatography methods.     

Targeting CpG DNA to screen and isolate anti-sepsis fraction and monomers from traditional Chinese herbs using affinity biosensor technology

Bacterial DNA/CpG DNA is recognized as a key molecule during the pathogenesis of sepsis. Therefore, preventing CpG DNA from binding to its receptor is considered as the most promising strategy. In the present experiments, Radix et Rhizoma Rhei had the highest CpG DNA-binding ability among the seventy-eight traditional Chinese herbs. After the isolation of silica gel chromatography and high performance liquid chromatography (HPLC) and evaluation with affinity biosensor, the active fraction was confirmed and named Fraction D. It was found that in vitro, Fraction D bound to both CpG DNA and lipid A with high affinity, and strongly inhibited LPS- and CpG DNA-induced TNF-α release from RAW264.7 cells in a dose-dependent manner. Furthermore, Fraction D reduced the expression of TLR9 mRNA up-regulated by CpG DNA. In vivo, Fraction D protected mice challenged with lethal heat-killed E. coli. Using HPLC method, two monomers with high affinity for CpG DNA were isolated and identified as rhein and emodin. Rhein could significantly reduce CpG DNA- and LPS-induced TNF-α release, but emodin only reduced CpG DNA-induced TNF-α release. Rhein in combination with emodin could play synergistic inhibitory effect on both CpG DNA and LPS-induced TNF-α release, which contributed to the bioactivity of Fraction D. In conclusion, we successfully established the platform to screen anti-CpG DNA components of traditional Chinese herbs using affinity biosensor technology, got active Fraction D from Radix et Rhizoma Rhei and determined rhein and emodin as the main bioactive ingredients in Fraction D.     

我院中医门诊患者中药与西药联用情况调查

目的:减少并预防不合理用药导致的药源性疾病的发生,为中、西药的临床安全有效联用提供参考。方法:2009年1月1日～2009年12月31日期间,在中医门诊部每月抽100例患者并记录其处方,收集、记录所使用的药物基本信息,并加以分析。结果:1200例患者中有909例(75.75%)患者使用了联合用药。其中,136例(11.33%)患者同时使用了中成药、中草药与西药。联合用药中有655例(72.06%)患者为合理用药,254例(27.94%)患者用药不合理。结论:我院中医门诊患者普遍联合用药,以中成药与西药联用为主,联用中存在一些不合理的现象。建立药学监护非常必要,联合用药也是药学监护的关键所在。     

欧盟植物药的技术性贸易壁垒对中药出口的影响

目的:研究欧盟植物药在2004/24/EC指令指导下的技术性贸易壁垒,为我国中药成功出口欧盟提供一些思路。方法:从简化注册申请条件的限制、技术标准与认证制度、欧盟注册申报资料等角度探讨中药申请欧盟注册所面临的技术性贸易壁垒,并提出一些相应的对策。结果与结论:首先,加强政府间的沟通合作;其次,建立与国际接轨的中药标准;再次,加强跨国经营,寻找合作伙伴;最后,健全信息咨询机构,充分掌握技术性壁垒信息。     

中药保留灌肠治疗溃疡性结肠炎效果观察

目的:探讨中药保留灌肠治疗溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)的疗效.方法:将74例UA患者随机分为两组,对照组36例采用柳氮磺吡啶(SASP)口服加思密达保留灌肠治疗;治疗组38例采用SASP口服加中药保留灌肠治疗.观察两组患者临床疗效及治疗前后结肠镜病理学改变,用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组UC患者血清TNF-α、IL-β含量.结果:治疗组总有效率为94.7%,对照组总有效率为77.8%(P＜0.05),治疗组治疗前后结肠镜病理学改变优于对照组.对照组治疗后血清TNF-α及IL-1水平分别(32.5±3.6)、(43.6±5.1)ng/L,治疗组治疗后血清TNF-α及IL-β水平分别为(22.3±3.1)、(33.4±3.8)ng/L(P＜0.05).结论:中药保留灌肠治疗UA疗效显著.     

中成药治疗妊娠期急性上呼吸道感染观察

目的：观察和探讨中成药治疗妊娠期上呼吸道感染的疗效和安全性.方法：将102例妊娠期上呼吸道感染病例随机分为观察组（n=52）和对照组（n=50）;观察组在采用对照组相同治疗方法的基础上,给予大卫颗粒口服,并随证加用其它中成药联合治疗.结果：观察组疗效明显好于对照组（P＜0.05）,2组均未发生不良反应.结论：中成药为主治疗妊娠期上呼吸道感染疗效明显,安全方便,孕妇易于接受.     

论草药药品的基本特征及其注册类型

目的与世界草药发展相适应,认识中药的基本特征和上市注册的类型。方法比较世界卫生组织关于草药药品的含义特点,以及欧盟、美国和日本关于草药、植物药和汉方药的注册模式,发现中国官方目前关于中药的定义和注册分类与世界主流的规定存在一定差异。结果与结论中药属于世界卫生组织定义的草药药品;中药与化学药品注册应一体化;根据草药药品的基本特征建立指导原则;进一步考虑经典的传统中药的简化注册。     

临床中药师在合理用药中的作用

目的:探讨临床中药师在中药合理用药中的作用。方法:通过对中药合理用药和临床中药师的职责的介绍,分析临床中药师在合理用药中的作用。结果:临床中药师在合理用药中有重要的作用,可促进中药的临床合理应用。结论:临床中药师必须努力提高自身素质才能在中药合理用药中发挥作用。     

我院2008年第3季度门诊中成药处方分析

目的：规范处方书写,促进合理使用中成药。方法：对我院2008年7～9月的门诊中成药7 478张处方,根据卫生部、国家中医药管理局2007年颁布的《处方管理办法》中的规定进行分析。结果：合格处方7 245张,不合格处方233张,处方合格率为96.88%,符合三甲医院综合管理处方统计指标（处方合格率≥95%）的要求。结论：应使医师对中成药应用有较为深入的认识,掌握中药的辨证论治,提高处方书写质量,合理使用中成药,药学人员也应切实负责,严把处方质量关。