酸性罗氏培养基加大豆汁快速培养结核分枝杆菌的研究

结核分枝杆菌生长缓慢，营养要求比较高。为了能较快地分离出结核分枝杆菌，国内外科研机构和临床试验室都在不断探索，改良、研制、合成组分不同的结核分枝杆菌分离培养基。我们发现用大豆汁取代蒸馏水制备的酸性罗氏培养基培养结核分枝杆菌生长较快，菌落典型，时间大为缩短，具有一定的实用价值，现报告如下。     

永磁场对结核分枝杆菌生长影响的初步观察

近年来，不少学者致力于结核分枝杆菌快速培养的研究，但大多着眼于培养基本身的改变，即需加入若干种特殊的成份。我们在常规的改良罗氏培养基的基础上，将一定强度的永磁场作用于结核分枝杆菌，收到了明显的培养效果，现报告如下。     

结核分枝杆菌快速培养基研究

本文介绍一种新型的结核分枝杆菌快速培养基,以琼脂为基础,加入适量促进生长因子,快速培养基平均初生长天数由7.8天缩短为2.8天(菌量为10~2mg/ml)。41例痰标本培养,平均初生长天数由20.82天缩短至6.8天,卫生部结核病控制中心和沈阳市结核病防治所,采用改良罗氏培养基和进口BACTEC·460快速培养基作100例标本对照培养,结果本文介绍的快速培养基生长最快,BACTEC·460培养基次之,改良罗氏法最慢,平均生长时间为8.1天,8.9天,23.2天(北京);和5.93天、7.9天、42.2天。(沈阳)。对比差异非常显著(P<0.01);。     

耐药结核分枝杆菌快速检测方法的研究进展

传统的耐药结核分枝杆菌的诊断依赖药物敏感试验.近年来,随着技术的进步,出现了大量的先进检测手段,在敏感性、特异性、检测周期方面皆优于传统方法.基于核酸扩增的分子生物学技术为临床耐药结核分枝杆菌的快速检测打开了一个广阔的前景.在自动测序分析的帮助下,耐药结核的确诊越来越简便、准确,对结核菌基因中耐药突变位点的快速检测还能够为临床诊疗提供早期的帮助信息,甚至能识别潜在的感染.本文对目前已有的快速检测方法的研究进展进行综述.     

耐药结核分枝杆菌快速检测方法的研究进展

传统的耐药结核分枝杆菌的诊断依赖药物敏感试验.近年来,随着技术的进步,出现了大量的先进检测手段,在敏感性、特异性、检测周期方面皆优于传统方法.基于核酸扩增的分子生物学技术为临床耐药结核分枝杆菌的快速检测打开了一个广阔的前景.在自动测序分析的帮助下,耐药结核的确诊越来越简便、准确,对结核菌基因中耐药突变位点的快速检测还能够为临床诊疗提供早期的帮助信息,甚至能识别潜在的感染.本文对目前已有的快速检测方法的研究进展进行综述.     

耐药结核分枝杆菌快速检测方法的研究进展

传统的耐药结核分枝杆菌的诊断依赖药物敏感试验.近年来,随着技术的进步,出现了大量的先进检测手段,在敏感性、特异性、检测周期方面皆优于传统方法.基于核酸扩增的分子生物学技术为临床耐药结核分枝杆菌的快速检测打开了一个广阔的前景.在自动测序分析的帮助下,耐药结核的确诊越来越简便、准确,对结核菌基因中耐药突变位点的快速检测还能够为临床诊疗提供早期的帮助信息,甚至能识别潜在的感染.本文对目前已有的快速检测方法的研究进展进行综述.     

抗酸性分枝杆菌快速培养仪960的应用与研究

在世纪之交 ,结核病仍是全球严重性的公共卫生问题 ,其死亡率居传染性疾病首位。由于耐药及耐多药结核病的增多及流行 ,使抗酸性分枝杆菌的快速分离培养成为实验室急需解决的问题。我院应用美国 BD公司 ( Becton Dickinson andCompany)的抗酸性分枝杆菌快速培养仪 ,现将结果分析并加以讨论。1　材料和方法1.1　标本来源 :本院住院和门诊病人 (包括已确诊结核病和鉴别诊断的患者 )标本 3 80份 (痰 3 60份 ,心包液 2份 ,胸水 13份 ,脑脊液 3份 ,支气管灌洗液 2份 )。其中 10 0份 (痰 93份 ,胸水 6份 ,心包液 1份 )同时采有 L- J培基分离培…     

结核分枝杆菌药物敏感性快速检测方法及评价

结核分枝杆菌（MTB）耐药性问题日趋严重,已成为结核病治疗、控制的难题之一。目前,常规MTB药物敏感性检测仍采用绝对浓度法和比例法,以观察细菌在培养基上是否生长为终点判断结果,需时长,通常在获得临床分离培养物后,仍需4周方可获得结果,难以满足临床治疗的需求。急需建立准确、快速的药物敏感性检测方法。近年来,研究者们除研究从基因水平检测耐药基因突变位点判断耐药的分子生物学方法^[1]外,     

结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值

目的 评价结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法的临床应用价值。 方法 应用实时荧光PCR技术对420例标本进行临床试验研究,并与抗酸杆菌涂片和分枝杆菌培养方法对照比较。 结果 结核分枝杆菌核酸检测灵敏度为48.5%（其中菌阳标本灵敏度为95.8%,菌阴标本灵敏度为14.5%）,特异度99.3%,阳性预测值为99.1%,阴性预测值为55.5%;临床试验388例痰标本中检测出1例非结核分枝杆菌核酸阳性,经测序确认,准确率100%;同时对32例非结核分枝杆菌临床分离株进行核酸检测,并经测序确认,准确率100%。 结论 应用实时荧光PCR技术,能实现在1支管内同时进行结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌的核酸检测。该方法具有简单快速、特异性好污染性少的特点。可作为实验室辅助检测结核/非结核分枝杆菌核酸方法之一。     

微量MIC快速检测结核分枝杆菌研究进展

世界卫生组织估计约2/3的结核病患者处于发生耐多药的危险之中,快速准确地进行结核分枝杆菌(MTB)药敏检测、及时调整抗结核化学治疗方案是有效控制疫情的重要方法之一。利用微量MIC法检测MTB的耐药性是近年来出现的一种较新的药敏检测方法,该技术采用的是液体培养基。1986年Richard等将其首次应用于检测较缓慢生长的分     

一种新型结核杆菌快速培养促生长剂的研制

目的以改良罗氏培养基为基础成分,研制一种快速培养结核杆菌的新型快速促生长剂。方法将结核杆菌H37Rv株和20株结核杆菌临床分离株,分别接种于含促生长剂的改良罗氏培养基和改良罗氏培养基上,观察两者的生长效果。结果结核杆菌H37Rv株在含促生长剂的罗氏培养基上5~7d可形成肉眼可见的米粒状菌落,而在改良罗氏培养基上14d才形成肉眼可见的米粒状菌落;采用结核杆菌临床分离株分别进行20组实验,在含促生长剂的罗氏培养基上的平均生长时间为7d,而在不含促生长剂的培养基上的平均生长时间为14.7d(P<0.01)。结论新型结核杆菌促生长剂能使结核杆菌标准株和临床分离株在7d内快速培养出,此快速促生长剂的研制为结核杆菌的快速培养及结核病的诊断、化疗效果观察、流行病学调查、抗结核药物作用研究等有效的手段。     

手工MGIT系统在基层结核病实验室中检测分枝杆菌的效果评价

目的对手工MGIT液体培养系统（manual mycobacteria growth indicator tube system, M-MGIT）检测分枝杆菌的效果进行评价。方法收集2012年1月至2013年2月北京市朝阳区疾病预防控制中心结核病门诊初诊患者526例,收集首次痰标本526份,分别对同份标本进行罗氏（Lowenstein-Jensen,L-J）固体培养、全自动BACTEC MGIT 960 系统培养（A-MGIT）和M-MGIT系统培养,统计学分析采用χ²检验和t检验,以P<0.05 为差异有统计学意义。结果526份标本中,3种分离培养方法共分离出261株分枝杆菌菌株,检出率为49.6%;M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法阳性检出率分别为48.7%（256/526）、49.0%（258/526）和41.3%（217/526）。M-MGIT和A-MGIT培养法检出率均高于L-J培养法,差异有统计学意义（χ²值分别为5.84、6.45,P值均<0.05),但M-MGIT和A-MGIT培养法检出率差异无统计学意义（χ²=0.02,P>0.05）。M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法阳性菌株平均报告时间分别为13d［（13±6）d］、12d［（12±6）d］和24d［（24±9）d］,M-MGIT和A-MGIT法阳性报告时间明显短于L-J法,差异有统计学意义（t值分别为15.84、18.32,P值均<0.05）,M-MGIT和A-MGIT之间的差异无统计学意义（t=1.89,P>0.05）。M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法污染率分别为4.6%（24/526）、4.9%（26/526）和4.1%（43/1052）,差异无统计学意义（χ²=0.64,P>0.05）。结论M-MGIT液体培养系统能快速检测分枝杆菌,检出率高,阳性报告时间短,成本低廉,适合基层结核病实验室应用。     

Evaluation of the Kudoh swab method for the culturing of Mycobacterium tuberculosis in rural areas

Objective  To compare the simple, swab 'Kudoh method' for culturing Myobacterium tuberculosis from sputum samples, to the standard Petroff digestion-decontamination procedure. The Kudoh method, which requires no centrifugation and takes only 4–5 min per sample, was also evaluated for its performance in a rural setting.
Methods  Two hospital laboratories in Caracas, Venezuela processed 314 sputum samples, in parallel, with both methods. Separately, sputum specimens were cultured with the Kudoh swab method in a field environment with minimal laboratory facilities.
Results  In the hospital laboratories, the sensitivity of the Kudoh swab method was comparable to that of the standard Petroff culture procedure. The swab method also performed satisfactorily in the field, improving the diagnostic sensitivity by 21% over microscopic examination alone.
Conclusion  The Kudoh swab method is an acceptable alternative for culturing mycobacteria that is particularly suitable for rural laboratories lacking adequate infrastructure for the Petroff method.     

TB-SA基因检测在结核病诊断的临床应用研究

目的　研究结核分枝杆菌特异性基因(Tuberculosis-Specific AntigenTB-SA)在结核病诊断中的应用价值。方法 选择2004年4—9月期间在成都市结核病防治院的住院结核病患者371例。其中肺结核307例;肺外结核64例(结核性胸膜炎47例、结核性腹膜炎7例、结核性脑膜炎10例);非结核病的呼吸系统疾病患者61例(肺炎4例、肺癌9例,急性支气管炎7例、慢性支气管炎14例、哮喘10例,COPD12例、肺间质纤维化1例、支气管扩张3例、矽肺1例);同时选择无结核疾患健康志愿者40例,全部选例均知情同意。入选肺结核病例和健康选择痰液、肺外结核病例选择胸腔积液、腹腔积液、脑脊液等标本进行抗酸杆菌浓缩集菌,结核杆菌培养和TB-SA基因扩增(PCR)。结果 307例肺结核患者中PCR检测TB-SA阳性259例,敏感性为84.4%(259/307);细菌学培养阳性193例,敏感性62.9%(193/307);痰浓缩集菌镜检阳性95例,敏感性30.9%(95/307)。64例肺外结核患者中,TB-SA阳性35例;敏感性54.7%(35/64);核杆菌培养阳性5例,敏感性7.8%(5/64)。61例非结核呼吸系统病患者中,TB-SA阳性2例,特异性96.7%(59/61)痰涂片无阳性病例。40例健康志愿者,TB-SA及痰涂片均无阳性出现,特异性达100%(40/40)。结论 TB-SA基因检测的特异性及敏感性都取得了满意的效果。操作也较为简单。     

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌TaqMan荧光PCR检测的建立

目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应，牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应，对其它分枝杆菌菌株以及常见微生物样品为阴性反应。两种荧光PCR对对应阳性重组质粒模板的检测灵敏度可达单个基因拷贝，对结核分枝杆菌或BCG标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞。对临床样品的检测结果显示，荧光PCR对模拟感染奶样、血样的检测灵敏度可达单个菌细胞。所建立的方法，全过程包括血样、奶样、痰液等临床样品的前处理、核酸提取和荧光PCR检测，可在5～6h内完成。采用上述荧光PCR方法从临床采集的疑似病人痰液中检出多份结核分枝杆菌阳性样品。     

结核分枝杆菌利福平依赖性的初步研究

目的 从耐利福平（RFP）结核分枝杆菌临床分离株中筛选RFP依赖的菌株,并在小鼠模型中验证RFP依赖现象,同时分析RFP依赖菌株的特征。 方法 采用7H11培养基绝对浓度法对46例临床分离菌株进行RFP依赖菌株筛选。以筛选得到的体外具有典型的RFP依赖现象的05116菌株建立气溶胶感染的小鼠模型,小鼠按照给药的种类和给药单位剂量分成对照组0.5%羧甲基纤维素钠（carboxymethyl cellulose sodium,CMC）、10 mg/kg Rfb（Rfb₁₀）组、10 mg/kg RFP（RFP₁₀）组、20 mg/kgRFP（RFP₂₀）组,每组各10只,观察给药4、8周的体质量、肺荷菌量及组织病理学改变在各组之间差异,以验证小鼠体内是否存在RFP依赖现象。比较RFP耐药株和依赖株的rpoB基因突变位点,以鉴定RFP依赖株的特征。数据以(x±s)表示,采用SPSS 11.0软件,组间比较采用单因素方差分析,以 P<0.01为差异有统计学意义。 结果 从46例RFP耐药的结核分枝杆菌临床分离株中筛选到18例RFP耐药伴依赖的菌株和28例RFP耐药非依赖的菌株。感染小鼠模型给药8周,各组小鼠的活菌计数从高到低依次为：RFP₂₀组（lgCFU为6.60±0.82）、RFP₁₀组（lgCFU为6.44±0.36）、Rfb₁₀组（lgCFU为6.32±0.55）、对照组(lgCFU为6.20±0.28),接近于最初感染的菌量（lgCFU为5.93±0.14）,但与对照组相比差异无统计学意义（F值分别为0.68、2.21、2.45,各组P值均大于0.05）。RFP耐药株8例和依赖株11例,分别有3/8和4/11的菌株在rpoB基因526位发生突变,2/8和6/11的菌株在rpoB基因531位发生突变。 结论 RFP临床耐药株中RFP依赖菌的检出率高,其RFP依赖现象在小鼠体内得到初步验证。RFP耐药株和依赖株的rpoB基因突变位点基本相同,因此RFP依赖的原因是表型变异还是其他因素尚有待进一步的实验证实。     

TaqMan聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌DNA及其临？…

目的 探讨ＴａｑＭａｎ聚合酶链反应（ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ）技术在肺结构诊断中的价值。方法 对１６８例活动性肺结核、５７例肺癌患者的痰和外周血及３４－例健康对照外周血,同时应用ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ、ＰＣＲ检测,并与痰涂片法、ＢＡＣＴＥＣ法及改良罗氏培养法结果进行比较。结果 ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ检测痰和外周血总的阳性率分别为５３．０％和６１．３％,显著高于ＰＣＲ、痰涂片法、ＢＡＴＣＴＥＣ法及改良罗氏培     

结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变微通道电泳检测方法的建立

目的 建立一种用微通道电泳芯片分析系统检测结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变的方法。方法 以丙烯酰胺及其衍生物的聚合物溶液作为筛分介质，溶液中掺入微量的吖啶橙作为荧光标记物，对结核分支杆菌的异烟肼耐药相关的katG和inhA基因进行单链构象多态性(SSCP)分析，检测其与耐药性相关的突变。对于突变部位附近没有二级结构的inhA基因，设计了特别的引物使扩增产物增加一个能与突变部位配对的区域，从而使野生型片段呈现独特的构象。结果 此方法可实现对katG基因野生型片段与315位密码子突变型片段的区分，以及对inhA基因调节序列野生型与突变型片段的区分。30个临床分离株中的23个耐药株有22个被检出，效率达95％。结论 微通道电泳方法用于结核杆菌耐药基因突变检测，具有快速、灵敏的优点，可望将之应用于临床耐药性检测。     

结核分枝杆菌低剂量感染小鼠模型的建立与分析

目的 建立结核分枝杆菌低剂量感染的小鼠模型,分析感染小鼠组织荷菌量、组织病理随感染时间的动态变化。 方法 以100 菌落形成单位(CFU)的结核分枝杆菌标准株H37Rv经尾静脉途径感染雌性C57BL/6J小鼠40只,于感染后1、3、5、8、12、16、20、24周取材,每个时间点5只小鼠,脾、肺组织匀浆培养检测脾脏组织的荷菌量,脾脏、肺脏及肝脏组织经HE染色分析病理变化。 结果 小鼠感染后3周脾脏荷菌量达到（4.97±0.19）lg CFU,在感染后5周下降至（3.64±0.22）lg CFU,至感染后8周降到最低的（2.75±0.23）lg CFU;感染后3周肝、脾、肺等脏器出现病理改变,感染5周时病变加重,感染8周时病变自然减轻。 结论 成功建立了结核分枝杆菌低剂量感染小鼠模型,为结核分枝杆菌慢性持续感染或潜伏感染的研究可提供有用的工具。     

结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断中的应用

目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素(Heparin-binding haemagglutinin adhesin,HBHA)在结核病免疫诊断方面的应用价值.方法 将在苏通培养基中培养至稳定期的卡介苗菌株(BCG)菌体超声裂解,离心后取上清并通过CL-6B层析柱,利用含0～500 mmol/L氯化钠的磷酸盐缓冲溶液(PBS)进行梯度洗脱后获得天然HBHA.以BCG基因组为模板PCR扩增结核分枝杆菌hbha基因片段,质粒pET-32a为载体,大肠杆菌作为宿主菌制备原核表达的HBHA重组蛋白.以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原,分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组各47例血清通过ELISA方法检测抗HBHA的抗体水平.应用SPSS 11.5统计软件对各研究组数据进行方差齐性检验,然后进行t检验,并计算各研究组的敏感度和特异度.结果 含有375 mmol/L氯化钠的PBS洗脱液可以洗脱获得较纯的天然HBHA蛋白.利用重组HBHA所带的组氨酸标签进行特异分离、纯化.ELISA检测结果表明天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间血清抗体水平差异不明显.肺结核组与肺外结核组的血清抗体ELISA检测的吸光度值在散点图中分布有明显差异,肺结核组吸光度值集中分布在0.30～0.40之间,肺外结核组吸光度值分布在0.35～0.45之间,经统计学检验结果差异具有统计学意义(t=12.224,P＜0.05).结核组(肺结核和肺外结核)与对照组(PPD阴性,PPD阳性)吸光度值分布具有显著不同,对照组全部小于0.30,结核组吸光度值则集中分布于0.30～0.45之间.经统计学检验(t=25.909,P＜0.05)血清抗体水平具有显著性差异.结论 结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断的应用中具有较好的特异度和敏感度,有望用于结核病、尤其是肺外结核病的实验室辅助诊断.