敲低膜联蛋白A7对人肝癌HepG2细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A7表达对人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 将HepG2细胞接种于6孔板,分为3组：siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,其中干扰组只转染靶向膜联蛋白A7的siRNA,阴性对照组只转染阴性对照siRNA,空白对照组只加转染试剂。通过Western blotting鉴定膜联蛋白A7在转染后48h可被最大程度的抑制,于是在转染后48h采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过免疫组织化学、Western blotting和RT PCR检测Bcl-2和Bax蛋白及mRNA的表达。 结果 与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增高（P<0.05）,Bcl-2蛋白和mRNA的表达均显著降低（P<0.05）,而Bax蛋白和mRNA均未发生显著变化（P>0.05）。结论 敲低膜联蛋白A7可促进HepG2细胞的凋亡,降低Bcl-2和Bax的比值。     

膜联蛋白A7低表达对胃癌MGC-803细胞生物学特性的影响

目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)低表达对人胃癌低分化细胞MGC-803的影响。方法 将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA以脂质体转染法分别转染胃癌细胞系MGC-803细胞, 空白对照组不予任何处理。转染48h后,采用Western blotting 和实时定量-PCR法进行抑制效果的鉴定。检测ANXA7低表达对MGC-803细胞黏附、伸展、剥脱和迁移等生物学行为的影响。 结果 靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;ANXA7表达受抑后,细胞黏附、伸展和剥脱能力降低,与阴性对照组和空白对照组相比,差异显著（P<0.05）。细胞迁移变化不显著。结论 ANXA7表达降低后MGC-803细胞行为学发生明显改变。     

膜联蛋白A5在人子宫颈鳞癌组织中的表达

目的 探讨人子宫颈鳞痛发生发展过程中,膜联蛋白A5(ANXA5)表达的变化. 方法 收集人子宫颈鳞癌组织25例和人正常子宫颈组织15例,细胞裂解液裂解组织细胞,蛋白定量试剂盒进行蛋白定量后,Westernblotting法检测ANXA5在人子宫颈鳞癌组织和人正常子宫颈组织中的表达;为进一步确定ANXA5的表达部位及其变化,我们收集人子宫颈鳞癌蜡块45例和人正常子宫颈组织蜡块20例,用免疫组织化学ABC法对两种组织ANXA5的表达进行检测,原位杂交法在RNA水平进行检测. 结果 Westen blotting显示人子宫颈鳞癌组织ANXA5比人正常子宫颈组织表达增强;免疫组织化学及原位杂交均显示人子宫颈癌组织中ANXA5的染色比人正常子宫颈组织染色重,阳性信号分布于细胞质和细胞膜. 结论 ANXA5在人子宫颈鳞癌组织中的表达比在人正常子宫颈组织中的表达增高;ANXA5与人子宫颈鳞癌的发生有密切联系.     

膜联蛋白A7低表达对人宫颈癌HeLa细胞系增殖与凋亡的影响

目的 探讨膜联蛋白A7表达减少是否对人宫颈癌HeLa细胞系的增殖和凋亡产生影响. 方法 采用Western blotting鉴定siRNA可否有效抑制膜联蛋白A7表达,然后用脂质体转染法将siRNA转染入HeLa细胞,将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,分别在转染后48h进行刃天青实验以观察细胞增殖状况的改变;流式细胞术检测3组细胞凋亡情况. 结果 在转染膜联蛋白A7的siRNA后48h的HeLa细胞, 刃天青实验可见siRNA干扰组细胞增殖较阴性对照组和空白对照组显著降低(P<0.05);流式细胞术实验可见siRNA干扰组细胞凋亡显著增多(P<0.05). 结论 膜联蛋白A7的低表达可能影响HeLa细胞的增殖和凋亡.     

膜联蛋白A7在胃癌组织中的表达和意义

目的 检测膜联蛋白A7（ANXA7）在胃癌组织中的表达改变,探讨胃癌的发生机制。 方法 收集人胃癌组织55例及正常胃组织25例,细胞裂解液裂解组织细胞,蛋白定量试剂盒进行蛋白定量后,Western blotting法和Real-time PCR法分别于蛋白水平和基因转录水平检测ANXA7在胃癌组织和正常胃组织中的表达改变,并用免疫组织化学法对ANXA7在细胞中的定位和表达进行检测。 结果 ANXA7在胃癌中蛋白水平和转录水平的表达均显著增高,与正常组相比差异有显著性（P<0.05）; ANXA7在胃癌细胞中定位于细胞质。 结论 膜联蛋白A7在胃癌中的表达增高有可能是胃癌发生的机制之一。     

膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌和正常组织中的表达

目的 探讨膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌和正常组织中的表达情况. 方法 应用免疫组织化学SP法,检测人宫颈鳞癌和正常宫颈组织蜡块各25例中膜联蛋白A7的表达差异;Western .blotting和半定量RT-PCR法检测人宫颈鳞癌和正常组织新鲜标本各25例中膜联蛋白A7的表达差异. 结果 膜联蛋白A7在组织中蛋白和mRNA水平表达一致,均为宫颈鳞癌组织表达高于正常宫颈组织,差异有统计学意义. 结论 膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌表达上调, 可能成为宫颈癌诊断的一个新的指示靶点.     

敲低膜联蛋白A5对人胃癌MGC-803和MKN-45细胞周期的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A5（ANXA5）对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响。 方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803、MKN-45细胞,空白对照组不加任何试剂。转染后48 h采用Real-time PCR和Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测ANXA5的表达,确定ANXA5被敲低之后,Real-time PCR和Western bloting检测各组p21^cip1 mRNA和P21^cip1的表达,Western bloting检测各组细胞周期蛋白D1（cyclinD1）蛋白的表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。 结果 敲低ANXA5后,与阴性对照组和空白对照组相比,两种细胞的p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白均显著降低（P<0.05）,cyclinD1（P<0.05）也显著降低。 结论 敲低ANXA5可下调MGC-803、MKN-45细胞中p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白以及cyclinD1的表达,推测ANXA5可能通过作用于细胞周期相关蛋白而引发细胞周期阻滞从而影响着胃癌的发展。     

敲低Aurora-A抑制HepG2人肝癌细胞增殖并促进其凋亡

目的 探讨敲低Aurora-A对HepG2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计Aurora-A短发夹RNA(shRNA)片段,构建和包装Aurora-A shRNA慢病毒载体,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测Aurora-A mRNA表达,Western blot法检测Aurora-A蛋白及磷酸化水平,噻唑蓝(...     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察宫颈癌细胞系HeLa细胞在膜联蛋白A5表达降低后,细胞增殖和凋亡的情况. 方法 采用BNA干扰的方法,通过免疫印迹法筛选出对HeLa细胞中膜联蛋白A5的表达抑制效率最高的siRNA,脂质体法将siRNA转染入细胞48h后,用MTT法检测细胞增殖的改变情况,用细胞凋亡光学检测试剂盒检测细胞的凋亡.结果 Helm细胞中膜联蛋白A5的表达被显著抑制,其增殖速度与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比,无显著性差异;细胞凋亡显著减少,与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比,有显著性差异. 结论 膜联蛋白A5低表达对宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖未见显著影响,但可能影响了细胞的凋亡.     

膜联蛋白A5在不同临床分期的宫颈鳞癌组织中的表达

目的 检测膜联蛋白A5(ANXA5)在临床不同分期的宫颈癌组织中的表达差异,探讨膜联蛋白A5作为宫颈鳞癌分期标志物的可行性.方法 采用国际妇产科协会(FIGO)的国际分期法,将病例分为Ⅰ期26例,Ⅱ期20例,Ⅲ期14例.用RT-PCR检测RNA水平ANXA5的表达情况;用Western blotting法和免疫组织化学...     

半乳糖凝集素3低表达对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的 探讨半乳糖凝集素3（galectin-3）表达抑制对人胃癌细胞系MGC-803细胞增殖产生的影响。 方法 将胃癌细胞系MGC-803细胞分为3组,siRNA干扰组（转染靶向galectin-3 的特异siRNA）,空白对照组（只加转染试剂）和阴性对照组（转染非特异性的siRNA）。用Western blotting法检测转染后细胞中galectin-3蛋白的抑制效率,应用MTT法、集落形成实验检测galectin-3基因低表达对MGC-803细胞增殖的影响;用Western blotting和免疫组织化学法检测细胞周期蛋白D1（cyclin D1）和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。 结果 siRNA干扰组细胞中galectin-3蛋白的表达与阴性对照组和空白对照组相比明显降低（P<0.05）;细胞集落形成实验和MTT显示,siRNA干扰组细胞的增殖能力与阴性对照和空白对照组细胞比较显著降低（P<0.05）;cyclin D1和PCNA蛋白表达均为siRNA 干扰组细胞表达显著低于两对照组（P<0.05）。 结论 Galectin-3低表达可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖能力,这可能与抑制cyclin D1和PCNA的表达有关。     

靛红衍生物IF203通过线粒体途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的 探讨靛红衍生物IF203诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及线粒体凋亡途径.方法 体外培养HepG2细胞,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术(FCM)和免疫印迹法(Western blotting),检测IF203对HepG2细胞生长、细胞凋亡率、线粒体膜电位、Caspase-9...     

Bak基因转染对乳腺癌MCF-7细胞增殖及对紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨Bak基因转染对乳腺癌MCF-7细胞增殖及对紫杉醇敏感性的影响。 方法 采用Western blotting法和Real-time PCR检测乳腺癌MCF-7细胞转染前后Bak蛋白表达。通过细胞计数试剂盒8（CCK-8）和流式细胞术检测Bak基因转染后,及紫杉醇作用24 h、48 h和72 h后对MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响。 结果 Western blotting和 Real-time PCR检测结果显示,转染质粒后,Bak蛋白表达量显著升高,MCF-7 Bak组mRNA表达量为2.15±0.07,明显高于MCF-7 NC组1.03±0.04（t=13.412,P<0.05）。转染48 h、72 h和96 h后,MCF-7 Bak细胞增殖速率为（0.31±0.03）%、（0.37±0.03）%、（0.47±0.04）%,低于MCF-7 NC组的（0.40±0.03）%、0.48±0.04）%、（0.61±0.06）%,差异有统计学意义（t ₄₈=2.145、t ₇₂=3.164、t ₉₆=5.487,P<0.05）。MCF-7 Bak组G2期细胞数是（26.84±2.69）%,显著高于MCF-7 NC组（16.02±1.61）%（t=12.887,P<0.05）。紫杉醇作用24 h、48 h和72 h后,MCF-7 Bak组细胞增殖抑制率为（35.98±4.00）%、（54.66±5.50）%、（80.11±8.00）%,高于MCF-7 NC组的（24.12±2.40）%、（40.12±4.00）%、（61.09±6.09）%,差异有统计学意义（t ₂₄=8.456、t ₄₈=10.547、t ₇₂=13.442,P<0.05）。紫杉醇作用24 h后,MCF-7 Bak组G0/G1期细胞数（73.01±7.02）%高于MCF-7 NC组（63.84±6.68）%（P<0.05）。 结论 上调Bak基因表达可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,上调G0/G1期比例,增强紫杉醇的敏感性。     

紫杉醇诱导HepG2肝癌细胞凋亡中miR-224沉默凋亡抑制因子5基因的作用

目的 探讨紫杉醇诱导肝癌HepG2 细胞凋亡时miRNA对基因的沉默的作用。 方法 用不同浓度紫杉醇处理肝癌HepG2细胞后,流式细胞术检测其细胞凋亡;通过实时定量PCR(Real-time PCR)测定miR-224和凋亡抑制因子5（api-5） mRNA的表达;用免疫组织化学二步法和免疫印迹法(Western blotting)检测API-5蛋白的表达。 结果 紫杉醇诱导HepG2细胞凋亡时,通过2^-ΔΔCT法分析发现,除了0.5mg/L、1mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h miR-224不升反降外,其他浓度和处理时间miR-224表达均显示上调;0.5mg/L、1mg/L紫杉醇培养HepG2肝癌细胞24h api-5 mRNA表达稍微降低,0.5mg/L紫杉醇处理48h无增长,其他浓度和处理时间api-5 mRNA表达均上调;应用IPP v 5.1图像分析软件处理,经 t 检验分析发现,紫杉醇处理后API-5蛋白表达均下调（P<0.05）。 结论 上调的miR-224可能作用其靶基因api-5的表达,通过与api-5 mRNA的3’UTR结合阻止翻译的完成,从而对肝癌细胞的凋亡途径产生影响。     

RNAi靶向沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞CD105和Ki67基因表达的影响

目的 探讨RNAi靶向沉默对人卵巢癌OVCAR3细胞CD105和Ki67基因的表达。 方法 采用脂质体介导的基因法将不同浓度的CD105-siRNA、 Ki67-siRNA转染至体外培养的人卵巢癌OVCAR3细胞中,检测干扰前后人卵巢癌细胞中CD105、Ki67基因表达的变化以确定沉默效果。构建CD105-siRNA、Ki67-siRNA及各自的阴性对照序列并高效地转染人卵巢癌OVCAR3细胞,采用Western blotting和Real-time PCR从蛋白和基因水平检测CD105和Ki67的表达变化。 结果 转染CD105-siRNA或Ki67-siRNA终浓度为50nmol/L和100nmol/L的人卵巢癌细胞中CD105mRNA或Ki67mRNA的相对表达水平及CD105和Ki67的表达均明显低于空白对照组和阴性对照组（NC1）,差异具有统计学意义（P＜0.001）。 结论 CD105-siRNA和Ki67-siRNA能特异性抑制人卵巢癌OVCAR3细胞中的CD105和Ki67基因表达,下调mRNA和蛋白的表达水平。     

miR-181b对肝癌HepG2细胞增殖以及Bcl-2和SP1蛋白表达的影响

目的: 研究miR-181b对人肝癌G2细胞(HepG2)中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和转录因子SP1蛋白及mRNA表达的调节作用,探讨miR-181b对HepG2细胞增殖的影响。方法: 用人工合成的miR-181b相应的双链互补DNA片段,插入miRNASelect^TM pEGP-miR载体中,经测序鉴定后克隆microRNA的高表达质粒;用脂质体将miR-181b高表达质粒转染进HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆。用RT-PCR技术和Western blotting方法分别检测该细胞系中Bcl-2和SP1的mRNA和蛋白表达情况。用MTT法检测HepG2细胞增殖的变化情况。结果: Western blotting结果显示miR-181b能够减少Bcl-2和SP1蛋白质的表达,RT-PCR分析显示Bcl-2和SP1 mRNA表达减少。MTT显示转染后细胞的生长速率比未转染的细胞明显减慢。 结论: miR-181b抑制HepG2肝癌细胞增殖, 提示可能与其下调Bcl-2和SP1 的表达有关。