发现乙型肝炎病毒受体——肝细胞的钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白

乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)属于嗜肝DNA病毒科正肝病毒属.HBV基因组为不完整的双链DNA,约3.2 kb;其包膜蛋白包括S、M及L蛋白,均为多次跨膜蛋白.S、M、L蛋白具有相同的C端,即为相同氨基酸序列的S区,但N端不同[1].丁型肝炎病毒(HDV)是HBV的卫星RNA病毒,具有HBV 的3种包膜蛋白,只有在与HBV共存时才能够包装为感染性颗粒及增殖.在研究HBV侵入细胞机制研究方面,HDV可以作为HBV的替代[2].全球目前有近3亿人感染HBV,并有约1500万人同时感染了HDV.     

丁型肝炎病毒感染树肝组织中Fas和ICE表达的初步研究

我们采用免疫组化技术检测感染丁型肝炎病毒(HDV)树肝组织中HDAg、Fas和ICE表达，并应用免疫组化双重染色分析病毒抗原、Fas和ICE表达之间的关系。 1 材料和方法 1.1 标本来源 30份感染HDV     

丁型肝炎病毒基因组和抗原研究进展

丁型肝炎病毒(HDV)属于缺陷性RNA病毒。HDV RNA是由单链基因组RNA和互补的反基因组RNA组成的闭合环状分子,具有酶活性,能自身催化断裂,进行滚环式复制。反基因组上的可读框编码大小两种抗原。HDV的装配需要乙型肝炎病毒(HBV)的帮助,其包膜是HBV表面抗原。HDV感染者可同时有HBV感染,这种双重感染可加重肝脏损害和病情。     

乙型肝炎病毒感染者血清中丁型肝炎病毒标志物检测分析

目的 了解丁型肝炎病毒(hepatitis delta virus,HDV)感染标志物在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者中的分布状况并分析其临床意义.方法 收集HBV感染者的临床资料和血清样本,通过酶联免疫分析法检测其血清HBV感染五项指标、HDVAg和Anti-HDV,结合临床诊断和生化指标进行分析.结果 收集HBV感染者样本462例,其中无症状携带者210例,慢性肝炎175例,急性乙肝35例,肝纤维化42例,检出HDV感染率为4.8％,男性显著高于女性,肝纤维化组的HDV感染率最高,为9.5％,其次为慢性肝炎的6.9％,45～60岁人群的HDV感染率为7.8％,显著高于其他年龄段.结论 慢性乙肝和肝纤维化病例的HDV感染显著增高,提示HDV感染与肝病的严重程度相关,建议对肝病患者开展血清HDV感染标志物检查,鉴别是否存在HDV重叠感染.     

慢性HDV血清抗HDVIgM与HDV RNA的关系

判定慢性丁型肝炎病毒(HDV)的感染有赖于血清抗HDV 抗体及肝活检组织中HDAg 的检出。除了高滴度抗HDVIgG 外,据报道所有活动性丁型肝炎尚可出现高滴度抗HDVIgM,而认为仅有抗HDVIgG 的存     

丁型肝炎病毒的分子生物学

人类的丁型肝炎病毒(HDV)总是与HBV感染同时存在,而且是使患者容易发生暴发性肝炎、慢性活动性肝炎和肝硬化的重要因素之一。近年来HDV分子生物学的研究已取得了很大进展。本文对HDV的基因结构、蛋白质的特性和功能、复制和致病机理以及HDV分子生物学在临床上的应用作一介绍。     

抗乙型肝炎病毒HDV核酶的研究新进展

乙型肝炎病毒(HBV)是严重威胁人类健康的一种病毒,特别是在我国约有1.2亿人为HBV携事业者,占世界的1/3.对已感染HBV者,常用的化学及免疫疗法通常无效.今年来,研究者试图利用反义技术,通过在基轩表达水平上抑制HBV的复制,来达到治疗HBV感染的目的.核酶是具有RNA裂解活性的RNA分子,能特异地结合并切割靶RNA分子.HDV核酶唯一在人体细胞天然具有裂解活性的核酶类型,研究将HDV核酶作为HBV的反义抑制剂可能有着其独特的优势.本文就HDV核酶靶位点的筛选、病毒载体导入系统、靶向性分子的构建等热点问题的研究新进展予以综述.     

HDV感染肝脏病理及免疫病理研究

对167例HDV感染的肝脏病理变化及免疫病理表现进行了观察和分析。结果发现:HDV感染者肝在组织学上无特异性改变。HDV感染的慢性肝病者肝细胞的嗜酸性变和脂肪变较常见,免疫病理研究表明,肝细胞的坏死与HDV在肝细胞中表达形式有关,胞浆型与肝细胞坏死的关系较胞核型密切(P<0.01),而HDAg阳性细胞数与坏死无明显关系。HDAg阳性肝细胞多有不同程度的变性,但其周围未见炎性细胞浸润,间接支持HDV具有直接致细胞毒作用的推测。     

HDV/HBV感染树鼠句肝组织中的肝细胞凋亡

目的探讨HDV/HBV感染树鼠句肝组织中Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达与HDV感染之间的关系,以及Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用.方法采用免疫组化技术对HDV/HBV感染树鼠句肝组织中Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE的表达进行检测;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行检测.结果HDAg表达与Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达之间关系密切(P＜0.05),HDAg表达越强,Fas、FasL、Bax和ICE表达也越强,而Bcl2表达则越弱.Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达与肝细胞凋亡之间关系密切(P＜0.05),Fas、FasL、Bax和ICE表达越强,凋亡细胞越多;相反,Bcl2表达越强,凋亡细胞越少.结论肝细胞内HDAg表达可诱导Fas、FasL、Bax和ICE表达,但对Bcl2表达无明显诱导作用;Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE在肝细胞凋亡中起重要作用.     

HDV/HBV感染树鼩肝组织中的肝细胞凋亡

目的探讨 HDV/ HBV感染树鼠句肝组织中 Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE表达与 HDV感染之间的关系 ,以及Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用。方法采用免疫组化技术对 HDV/ HBV感染树鼠句肝组织中 Fas/Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE的表达进行检测 ;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行检测。结果 HDAg表达与 Fas/ Fas L、Bcl2 /Bax和 ICE表达之间关系密切 ( P<0 .0 5 ) ,HDAg表达越强 ,Fas、Fas L、Bax和 ICE表达也越强 ,而 Bcl2 表达则越弱。 Fas/Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE表达与肝细胞凋亡之间关系密切 ( P<0 .0 5 ) ,Fas、Fas L、Bax和 ICE表达越强 ,凋亡细胞越多 ;相反 ,Bcl2 表达越强 ,凋亡细胞越少。结论肝细胞内 HDAg表达可诱导 Fas、Fas L、Bax和 ICE表达 ,但对 Bcl2 表达无明显诱导作用 ;Fas/ Fas L、Bcl2 / Bax和 ICE在肝细胞凋亡中起重要作用。     

血清抗—HD—IgM方法的建立及初步应用

本文采用国产试剂建立抗-HD-IgM的EIA检测方法,开采用不同血清稀释度进行研究。结果表明最适宜血清稀释度为10~(-2),按10~(-2)作血清稀释,对45份HDV/HBV感染的患者血清进行抗-HD-IgM检测,阳性23例(51.11％),17份单纯HBV感染者及9份正常人标本均为阴性,表明本方法具有较好的特异性和敏感性。45例HDV/HBV感染者中,血清HDAg(+)32例(71.11％),抗-HD(+)18例(40％)。     

抗乙型肝炎病毒HDV核酶的研究新进展

乙型肝炎病毒(HBV)是严重威胁人类健康的一种病毒，特别是在我国约有1．2亿人为HBV携带者，占世界的1／3。对已感染HBV者，常用的化学及免疫疗法通常无效。今年来，研究者试图利用反义技术，通过在基因表达水平上抑制HBV的复制，来达到治疗HBV感染的目的。核酶是具有RNA裂解活性的RNA分子，能特异地结合并切割靶RNA分子。HDV核酶是唯一在人体细胞天然具有裂解活性的核酶类型，研究将HDV核酶作为HBV的反义抑制剂可能有着其独特的优势。本文就HDV核酶靶位点的筛选、病毒载体导入系统、靶向性分子的构建等热点问题的研究新进展予以综述。     

HDV（δ因子）并发重症乙型肝炎形态学及免疫组化观察

应用直接酶标法,在75例重症乙型肝炎患者肝组织中发现14例HDAg阳性(18.67%),进一步提示HDV感染是促成肝细胞大块坏死的一个重要因素,也证实了重叠感染HDV是造成重症乙型肝炎的原因之一。本实验还发现HDAg阳性细胞数之多少与肝组织坏死面积成正比,坏死灶及HDAg阳性细胞周围无明显淋巴细胞浸润和细胞毒征象,以及含HDAg阳性物质之胞浆型肝细胞呈明显变性甚至萎缩。从而间接提示HDV有直接致病作用。此外也证实HDV感染的组织形态学变化并未反映明显特异性。     

丁型肝炎病毒抗原的原核表达及抗原性分析

目的 利用含T7启动子和His纯化标签pRSET B质粒构建丁型肝炎病毒抗原（HDAg）重组表达质粒（pRSETB-HDAg）,转化宿主菌,表达并纯化,获得生物活性高抗原性强的基因工程重组抗原.方法 将中国河南株HDAg基因片段插入pRSET B表达质粒,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导表达.表达产物经Chelating亲和层析纯化后,采用EIA方法分析HDAg的抗原性.结果 重组HDAg稀释1000倍（10 ng/ml）仍与抗体有较强的反应.经与美国HDAg和华美公司生产的HDV诊断试剂同时检测26份HDV阳性参比血清,三者结果比较,除美国抗原漏检1份,检出率为96.15%（25/26份）外,病毒CDC和华美试剂均无漏检,检出率为100%,三者检测结果具有很高的符合率.结论 成功构建了丁型肝炎病毒抗原重组表达质粒（pRSETB-HDAg）,在原核细胞获得稳定高效表达,EIA 检测证明HDAg抗原性好,可用于组装HDV诊断试剂,用于临床丁型肝炎患者的诊断和我国丁型肝炎病毒感染流行病学的调查.     

乙型肝炎病毒感染慢性化研究进展

近年来,关于乙型肝炎病毒（HBV）感染慢性化机理的研究取得不少新的进展。除外合并其它肝炎病毒（如HCV,HDV）感染,宿主内在的免疫功能异常、HBV所致机体免疫状态的不适当改变、HBV基因组和抗原变异等均有可能导致HBV感染持续存在与发展。1”激活诱导性细胞死亡”在病毒感染中的作用T细胞在抗原呈递细胞（antigen-presentingcells,APC）和IL－1、IL－2等细胞因子的作用下被抗原（包括超抗原）或其它因素激活后,刺激T细胞受体／CD3复合物（TCR／CD3complex）,可诱导自身Fas及其配体（FasligandFasL）、肿瘤坏死因了及…     

隐匿性乙型肝炎病毒感染的检测探讨

目前临床隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染的筛查主要依靠分子生物学手段~[1],尚无简便、经济、适合大批量常规筛查的方法,如ELJSA.本实验旨在了解HBV表面抗原(HBsAg)阴性个体的HBVDNA检出情况,探讨HBV表面大蛋白(HBLP)用于常规筛查隐匿性HBV感染的可行性,积极寻找临床筛查隐匿性HBV感染的检测策略.     

隐匿性乙型肝炎病毒感染的检测探讨

目前临床隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染的筛查主要依靠分子生物学手段[1],尚无简便、经济、适合大批量常规筛查的方法,如ELJSA.本实验旨在了解HBV表面抗原(HBsAg)阴性个体的HBVDNA检出情况,探讨HBV表面大蛋白(HBLP)用于常规筛查隐匿性HBV感染的可行性,积极寻找临床筛查隐匿性HBV感染的检测策略.     

HBV基因转染对肾小管上皮细胞凋亡及表型转化的影响

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染人体后不仅引起肝脏功能和结构的改变,还可引起肝外多种脏器损伤,其中乙型肝炎病毒相关性肾炎(hepatitis Bvirus associated glomerulonephritis,HBV-GN)最受人们关注.但其发病机制尚不清楚.研究发现肾小管间质纤维化在肾脏病变中有重要意义[1].我们前期研究发现慢性乙型肝炎患者TGF-β1水平升高,HBV-DNA阳性血清可导致肾小管HK-2上皮细胞凋亡及表型转化[2-3].因此用含3.2 kb HBV全基因组的AM12质粒转染HK-2,进一步探讨HBV在HBV-GN肾损伤中的作用及机制.     

乙肝病毒表面抗原大蛋白检测结果分析

乙型肝炎病毒(HBV)在我国感染率高,易慢性化,引起肝硬化和原发性肝癌.如何简单快捷地评估HBV在体内是否复制已成为基层医院诊治的首要问题.近年来逐渐认识到乙型肝炎表面抗原大蛋白(LHBs)在HBV感染中具有越来越重要的临床意义,为此我们研究分析了乙肝病毒表面抗原大蛋白检测结果,旨在探讨LHBs反映乙肝患者HBV复制程度的可靠性.     

丁型肝炎病毒核酶反式切割HBV mRNA片段的实验研究

目的　探讨反式作用丁型肝炎病毒 (HDV)核酶体外切割乙型肝炎病毒 (HBV)mRNA片段的可行性。方法　将化学合成的核酶cDNA克隆到含有T7启动子的载体PGEM 4Z中。利用体外转录技术转录出核酶及底物 ,研究其体外切割活性。利用E H作图法进行核酶的酶促动力学研究。结果　在体外实验中显示两酶均能成功的将底物切割 ,37℃温浴 90min的切割百分率为 5 0 %和5 1%。利用E H作图法进行的酶促动力学研究中求得Rc1、Rc2的Km值分别为 0 6 1μmol L、0 5 8μmol L,Kcat值分别为 :0 6 4·min 1 、0 6 0·min 1 。结论　反式作用HDV核酶对非HDV底物 HBVmRNA片段的成功切割为寻找新的HBV的反义抑制手段开辟了途径。