重组葡激酶N端缺失突变体对纤溶酶原的激活作用

目的　比较重组葡激酶（ＳＡＫ）及其Ｎ端缺失突变体（ΔＮＳＡＫ）对纤溶酶原（ＰＬＧ）激活作用的酶动力学常数,探讨ＳＡＫＮ端结构与功能的关系,以进一步改造ＳＡＫ分子。方法　采用酶反应动力学方法结合生物传感器测定ＳＡＫ、ΔＮＳＡＫ与ＰＬＧ、纤溶酶（ＰＬＭ）作用的动力学常数。结果　两者与ＰＬＭ形成的复合物催化ＰＬＧ的Ｋｍ值分别为６．２９、４．６μｍｏｌ／Ｌ,Ｋｃａｔ值分别为０．７２５ｓ－１、０．３１２ｓ－１;两者与ＰＬＧ的亲和系数分别为２．６４×１０８、１．０７×１０９;与ＰＬＭ的亲和系数分别为１．３２×１０９、３．６７×１０８。结论　ＳＡＫＮ端１８个氨基酸对ＳＡＫ·ＰＬＧ复合物及ＳＡＫ·ＰＬＭ酶催化活性中心的形成无明显影响。     

P型Ca^2＋通道在高K^＋引起的大鼠小脑一氧化氮合酶激活中作用

目的：用大鼠小脑脑片研究Ｐ型Ｃａ＾２＋通道在高Ｋ＾＋引起的一氧化氮合酶激活中的作用。方法：通过测定Ｌ－「＾３Ｈ」精氨酸转变成Ｌ－「＾３Ｈ」瓜氨酸来判定一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性。结果：表明５０ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１Ｋ＾＋可明显提高ＮＯＳ活性,特异性Ｐ型钙通道阻断剂蜂蛛毒素ＡＧＡ０．１ｎｍｍｏｌ．Ｌ＾－１和蜂蛛毒素ＦＴＸ１００ｎｍｍｏｌ．Ｌ＾－１可以明显阻断５０ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１Ｋ＾＋引起ＮＯＳ活性增强作用,ＮＭＤＡ受体通道阻断剂ＭＫ－８０１１０ｎｍｍｏｌ．Ｌ＾－１不能阻断５０ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１Ｋ＾＋引起ＮＯＳ活性增强作用。结论：说明高Ｋ＾＋引起ＮＯＳ活性增强主要是由于Ｃａ＾２＋通过Ｐ型钙通道进入细胞内引起的,谷氨酸受体不参与高Ｋ＾＋引起ＮＯＳ激活。     

非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞膜ATPase活性改变及其影响因素

目的探讨非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ及Ｃａ２＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ活性改变的影响因素。方法测定７７例ＮＩＤＤＭ患者和５０例正常人血糖、总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、糖化血红蛋白（ＨｂＡｌｃ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性。ｔ检验、直线相关分析和多元逐步回归分析。结果ＮＩＤＤＭ组血糖、ＨｂＡｌｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＬＰＯ显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＳＯＤ、ＧＳＨＰＸ、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性低于对照组（除ＧＳＨ的Ｐ＜０．０５外，其他Ｐ＜０．０１）；不同ＨｂＡｌｃ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＬＰＯ、ＴＣ组的红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性有显著性差别。红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１２．８０＋０．２７（ＧＳＨ）－０．１２（ＬＰＯ）－０．０９（ＴＣ／ＨＤＬＣ），红细胞胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１０８．２０＋１．     

溶栓药APSAC的制备和鉴定

重组链激酶（ｒ－ＳＫ）由工程菌提取液经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱纯化，比活性达１０５ＩＵ／ｍｇ，十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ的一条带。人新鲜血浆经Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤制备纤溶酶原（ｐｌｇ），比活性达２３．７ＩＵ／ｍｇ，活性回收率为１３．６％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ的一条带。对－茴香酸－对－脒基ｒ－ＳＫ和ｐｌｇ的混合物经苯酯盐酸盐（ＡＰＡＮ）修饰后制备茴香酰纤溶酶原链激酶激活剂复合物（ＡＰＳＡＣ），产物经Ｌ－ｌｙｓｉｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ和１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ两条带，其拟一级水解速率常数为１．２６×１０－４ｓｅｃ－１。体外溶栓实验证明其有溶栓活性。     

分泌型磷脂酶A2 cDNA与载体pRc／CMV定向克隆及表达

为了构建分泌型磷脂酶Ａ２（ｓｅｃｒｅｔａｒｙ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２,ｓＰＬＡ２）ｃＤＮＡ的有效表达系统,该文从无效表达的重组体ｓＰＬ０Ａ２－ｐＧＥＭ７中制备ｓＰＬＡ２片段,将其插入中间载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＢＳＳＫＲ的ＥｃｏＲ１位点,利用ｓＰＬＡ２－ＢＳＳＫ重组体转化ＤＨ１感染态细胞,筛选ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｓＰＬＡ２－ＢＳＳＫ重组体,应用Ｘｂａｌ、Ｈｉｎｇｄ３双酶消化该重组体并回收     

天冬氨酸激酶的部分提纯和特性研究

研究了Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ菌的天冬氨酸激酶（下简称为Ａｓｐ激酶）的部分纯化和某些特性。由于使用了添加硫酸铵和天冬氨酸的磷酸缓冲液，成功地获得了纯度较高、比活力提高１０～１５倍的Ａｓｐ激酶。当硫酸铵以０．１～０．８Ｍ浓度添加时，对酶活性的促进作用最强。对照研究了一些氨基酸对脱盐酶液和Ｇ－２００酶液的不同影响，在５２４菌株种子培养时，以２０小时种龄，２５０ｍｌ／Ｌ装量，激酶的比活力最高；发酵培养时，２３小时后酶活力开始明显下降，但可随尿素的添加而回升。Ａｓｐ激酶的动力学常数是：ＫＡＳＰ为２０１．４ｍＭ；ＫＡＴＰ为３６．４ｍＭ；最适ｐＨ为９．０－９．５；Ｌ－苏氨酸Ｌ－苏氨酸＋Ｌ－赖氨酸对该酶的抑制，与ＡＳＰ是竞争性的，而与ＡＴＰ则是混合性的。     

2型糖尿病胰岛素抵抗与血压的关系

目的 探讨２型糖尿病（ＤＭ）在胰岛素抵抗（ＩＲ）在高血压发生机制中的作用。方法 检测了６０例２型ＤＭ患者及４０例正常对照者的空腹血糠（ＦＢＧ）、空腹胰岛素（ＦＩＮＳ）、ＨｂＡＩＣ、血脂、红细胞膜Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶与Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性及血压等,并将ＤＭ组分为Ａ组（ＩＳ〉０．６）及Ｂ组（ＩＳ≤０．６）。结果 ２型ＤＭ患者ＦＢＧ、ＨｂＡＩＣ、ＦＩＮＳ、ＴＧ、ＴＣ及Ｂ组血压均高显著增高,胰岛     

非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞膜ATPase活性改变及其影 …

目的 搪塞非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅ及Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活性改变的影响因素。方法 测定７７例ＮＩＤＤＭ患者和５０例正常人血糖、总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）脂质过氧化物（ＬＰＯ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、糖化血红蛋白、超氧化物歧化酶ＳＯＤ、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）、红细胞膜Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ＾２＋－ＡＴ     

溶栓药APSAC的制备和鉴定

重组链激酶（ｒ－ＳＫ）由工程菌提取液经Ｓｅｐｈａｃｒｙｌｓ－２００柱纯化，比活性达１０＾５ＴＵ／ｍｇ，十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示分子量为７８．０２４７×１０＾－＾２＾４ｋｇ的一条带。人新鲜血浆经Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤制备纤溶酶原（ｐｌｇ），比活性达２３．７ＴＵ／ｍｇ，活性加收率为１３．６％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示     

白血病患者抗凝和纤溶系统变化的研究

目的 研究白血病患者抗凝和纤溶系统的变化。方法 采用单向免疫扩散法测定患者血清α１－抗胰蛋白酶（α１－ＡＴ），α２－巨球蛋白（α２－Ｍ）血浆纤溶酶原（ＰＬＧ）火箭免疫电泳法测血浆抗凝血酶Ⅲ抗原含量（ＡＴ－Ⅲ，Ａｇ）；刚果红显色法测纤溶酶（ＰＬ）活性，血凝法测纤维蛋白（原）降解产物（ＦＤＰ）；全自动生化分析仪测纤维蛋白原（ＦＧ）。结果 α１－ＡＴ，α２－Ｍ，ＡＴ－Ⅲ；Ａｇ，ＰＬ活性，ＦＤＰ高于正常，     

移植沉默ＴＳＧ－６基因的骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

摘要：【目的】在大鼠肝脏缺血再灌注模型中,观察移植沉默ＴＳＧ－６基因的骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣ）对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（ＨＩＲＩ）的影响。【方法】全骨髓培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞学鉴定,慢病毒载体（ＬＶ３－ｓｈＴＳＧ－６）感染下调ＴＳＧ－６基因的表达;６０只ＳＤ雌性大鼠７０％肝脏缺血再灌注损伤模型的建立,随机分４组,ＰＢＳ组、ＢＭＳＣ组,ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组、ＴＳＧ－６－ｓｈＲＮＡ－ＢＭＳＣ组;各组大鼠分别于恢复灌注后３、６、２４ｈ取血检测血清中ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６含量,恢复灌注后６ｈ取中叶肝脏组织,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测ＴＳＧ－６蛋白表达,切片ＨＥ染色后光镜观察肝组织显微结构。【结果】体外分离培养的ＢＭＳＣ状态稳定,增殖能力强,表达ＣＤ２９及ＣＤ４４,不表达ＣＤ３４及ＣＤ４５,慢病毒感染下调ＢＭＳＣ的ＴＳＧ－６基因表达效率达７３．９９％;大鼠肝脏７０％缺血再灌注损伤模型稳定,各时间点ＴＳＧ－６－ｓｈＲＮＡ－ＢＭＳＣ组的ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６含量均高于ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组（Ｐ＜０．０５）;ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组的ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６含量均低于ＰＢＳ组（Ｐ＜０．０５）;ＴＳＧ－６－ｓｈＲＮＡ－ＢＭＳＣ组的肝脏ＴＳＧ－６蛋白表达低于ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组（Ｐ＜０．０５）,ＰＢＳ组未见ＴＳＧ－６蛋白表达;ＴＳＧ－６－ｓｈＲＮＡ－ＢＭＳＣ组的肝组织损伤较ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组重,与ＰＢＳ组无明显区别,ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组的肝组织损伤较ＰＢＳ组明显减轻。【结论】移植ＢＭＳＣ能改善肝缺血再灌注损伤,移植沉默ＴＳＧ－６基因的骨髓间充质干细胞削弱了其对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。     

sPLA2cDNA表达载体的选择和亚克隆

目的：选择适当的载体，启动Ｃａ＾２＋依赖分泌型磷脂酶Ａ２（ｓＰＬＡ２）ｃＤＮＡ的表达，为进一步研究各种因素对该酶活性的影响奠定基础。方法：首先从ｓＰＬＡ２－ｐＧＥＭ７重组体（这一重组体不能在转染的真核细胞中表达）获得人ｓＰＬＡ２ｃＤＮＡ，克隆该片断进入中间载体ＢＳＳＫ（使ｓＰＬＡ２ｃＤＮＡ两端出现ＸｂａＩ、Ｈｉｎｄ３酶切位点），选择ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｓＰＬＡ２－ＢＳＳＫ重组体进行扩增，双酶消化上     

消化系肿瘤细胞EGF受体放射分析与EGF的生长调节研究

为研究表皮生长因子（ＥＧＦ）受体功能性表达在消化系肿瘤细胞生长调节上的意义，建立了ＥＧＦ受体放射法，Ｌｉｎｄｍｏ生物活性分数分析显示自标记＾１２５Ｉ－ＥＧＦ具有高的生物活性，温度、时间效应分析确立４℃，３ｈ为最佳受体分析条件，一组消化系肿瘤细胞ＳＧＣ７９０１，ＫＡＴＯⅢ，ＭＫＮ４５，ＳＭＭＣ７７２１，ＨＴ２９的ＥＧＦ受体数目分别为（１．２３±０．４６）×１０＾５，（２．１３±０．６１）×１０＾５，     

蝎毒多肽对大鼠纤溶系统的作用

从蝎毒中获取具有多种药理活性的肽类混合物（简称ＳＶＰ），用下肢血管灌流和整体给药的动物模型，观察对血管灌流液内纤溶酶原激活物（ＰＡ）活性、血浆优球蛋白纤溶活性（ＥＦＡ）、纤溶酶（ＰＬ）活性的影响。结果：１～２０μｇ／ｍｌ灌流３ｍｉｎ和０．８，１．６ｍｇ·ｋｇ－１ｉｐＳＶＰ１ｈ血浆中ＰＡ活性与对照组相比明显升高（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），这可能与血管内皮细胞释放ＰＡ活性增加有关。     

反义N-ras-1基因对成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因阻断成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的促增殖作用，为防治以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要特征的血管损伤后再狭窄等心血管疾病提供进一步探索的途径。方法利用构建的含反义Ｎ－ｒａｓ１基因的逆转录病毒质粒（ｆｐＧｖ１－ＭＴ－ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＮ－ｒａｓ１）转染于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），ｆｐＧｖ１－ＭＴ逆转录病毒空载质粒及未转染质粒的细胞为对照，观察其对ｂＦＧＦ诱导的ＶＳＭＣ的影响。结果反义Ｎ－ｒａｓ１细胞数为（１６．８±１．３）×１０４（细胞／ｍｌ），空载质粒对照细胞为（３０．１±１．２）×１０４，两者差异有显著意义（Ｐ＜０．００１）；反义Ｎ－ｒａｓ１细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率为７６４３±６７２（ｃｐｍ），空载质粒对照细胞为１５１３１±１３８（ｃｐｍ），两者差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００１），同时应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因的细胞ＲａｓｍＲＮＡ表达水平明显降低，其表达蛋白ｐ２１也明显降低。结论反义Ｎ－ｒａｓ１基因对ＶＳＭＣ及ｂＦＧＦ诱导ＶＳＭＣ增殖有抑制作用。     

安替可胶囊抗肿瘤作用的机理

目的：探讨安替可（Ａｎｔｉｋｅ）胶囊抗肿瘤的作用机理．方法：采用移植瘤模型、常规体液和细胞免疫测定、细胞毒结晶紫染色、比色及同位素参入等方法，观察Ａｎｔｉｋｅ及其组分蟾皮（ＳＴ）和当归（ＡＳＤ）的抗肿瘤作用、诱导ＴＮＦ、ＮＫＣ、ＩＬ－２活性、血中过氧化氢酶（ＣＡＴ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）和组织中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）含量及脾和瘤细胞中３Ｈ－ＵＲ参入ｃｐｍ等指标．结果：①Ａｎｔｉｋｅ，ＳＴ和ＡＳＤ及５－Ｆｕ对Ｈ２２移植瘤的瘤重抑制率分别为４５．０５％，４３．９５％，２７．７９％，５５．７９％（Ｐ＜０．０１）；②Ａｎｔｉｋｅ和ＡＳＤ诱导ＭΦ释放ＴＮＦ分别为２５９．０±４０．８和２１４．８±４３．５Ｕ·μｌ－１（Ｐ＜０．０１），ＮＫＣ杀伤率为７３．３９％，６７．４７％（Ｐ＜０．０１），显著增强ＩＬ－２活性（Ｐ＜０．０１），提高ＣＡＴ，ＧＳＨ－Ｐｘ和移植瘤中ＳＯＤ含量（Ｐ＜０．０１），显著降低瘤细胞ｃｐｍ（Ｐ＜０．０１）；③ＳＴ诱导ＭΦ释放ＴＮＦ为１７７．１±４２．９Ｕ·μｌ－１（Ｐ＜０．０１），ＮＫＣ杀伤率６７．７４％（Ｐ＜０．０１），增强ＩＬ－２活性；但对荷瘤小鼠血中ＣＡＴ，ＧＳＨ－Ｐｘ，ＳＯＤ     

蛇毒抗栓酶Ⅲ号对肺心病急性发作期患者血浆组织型纤溶酶原激活物及其抑制物的影响

对肺心病急性发作期患者联合使用蛇毒抗栓酶Ⅲ号和常规疗法进行治疗，并与单纯常规疗法作对照。结果表明蛇毒组的部分缓解所需天数明显少于对照组（Ｐ＜０．０１），组织型纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）和６－酮－前列环素（６－Ｋ－ＰＧＦ１α）含量明显高于对照组（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１）。提示蛇毒抗栓酶可能通过提高ｔＰＡ及６－Ｋ－ＰＧＦ１α含量纠正高凝状态和纤溶功能低下，使基础治疗更能发挥作用。     

脑缺血后ET—1和SPM,Mit Na^＋—K^＋—ATP酶的变化

应用兔大脑中动脉阻断模型，分离出突触膜（ＳＰＭ），线粒体（Ｍｉｔ）并测其Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性，同时以放免法测定脑组织内皮素－１（ＥＴ－１）含量。结果发现脑缺血后脑组织ＥＴ－１含量显著增加，ＳＰＭ、Ｍｉｔ Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性下降，两者呈显著负相关（ｒ１＝－０．９７７６，Ｐ〈０．０５；ｒ２＝－０．９９８０，Ｐ〈０．０２）。提示ＥＴ－１在脑缺血脑水肿中的作用可能与其抑制Ｎａ＾２＋Ｋ     

自发性高血压大鼠血中内皮素,一氧化氮,丙二醛水平及 …

为探讨内皮素（ＥＴ）、一氧化氮（ＮＯ）在高血压发病中的作用及相互关系。选用自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和对照ＷＫＹ大鼠各１０只,分别测定血浆中ＮＯ２＾－／ＮＯ３＾－,ＭＤＡ及ＥＴ水平,分析血压与ＥＴ、ＮＯ及ＭＤＡ与ＮＯ的关系。结果ＳＨＲ血浆中的ＮＯ２＾－／ＮＯ３＾－、ＥＴ、ＭＤＡ水平明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）,同时ＳＨＲ血压与ＥＴ水平独立相关,偏相关系数为０．８８５５（Ｐ〈０．０１）,ＭＤＡ与Ｎ     

茶多酚对脑缺血再灌注损伤大鼠ATP酶活性和MDA含量的影响

采用大鼠脑缺血再灌注模型，观察茶多酚对大鼠脑组织Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量的影响。结果表明：（１）茶多酚组Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性高于模型组（Ｐ〈０．０１或Ｐ〈０．０５）。（２）茶多酚组ＭＤＡ含量低于模型组（Ｐ〈０．０５）。（３）模型组Ｎａ＾＋、Ｋ＾－ＡＴＰ酶活性和ＭＤＡ含量呈负