放疗对食管癌患者免疫功能及预后的影响

目的：观察食管癌患者放疗前后免疫功能的动态变化,探讨与其相关的临床预后因素。方法选取2010年1月至2013年12月在南通大学第二附属医院放疗科就诊的食管癌放疗患者90例,分别于放疗前、放疗结束及放疗后3个月使用流式细胞仪检测患者外周血 T 淋巴细胞亚群及 NK 细胞比例,以30例本院健康体检者外周血人群为对照观察其变化。分析患者放疗前后免疫功能变化与临床特征及预后的关系。结果食管癌患者放疗前外周血 CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋比值、NK 细胞百分比分别为28．23％±8．22％、31．79％±7．61％、0．93±0．34、11．37％±4．57％,与对照组（36．03％±9．71％、27．26％±7．70％、1．34±0．27、15．31％±5．13％）相比,差异均有统计学意义（t ＝4．292,P ＝0．000;t ＝2．811,P ＝0．006;t ＝5．894,P ＝0．000;t ＝3．965,P ＝0．000）;放疗前外周血 CD3＋细胞百分比为58．13％±9．46％,与对照组（60．06％±8．67％）相比,差异无统计学意义（t ＝0．998,P ＝0．325）。放疗后3个月免疫指标 CD3＋（59．27％±9．92％）、CD4＋（30．51％±9．04％）、CD8＋（29．79％±6．98％）、NK 细胞（10．62％±4．43％）逐渐恢复到放疗前水平（t ＝0．789,P ＝0．431;t ＝1．769,P ＝0．079;t ＝1．837,P ＝0．068;t ＝1．113,P ＝0．267）。放疗后免疫功能改变（CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋、NK 细胞）与是否存在骨髓抑制（t ＝4．050,P ＝0．001;t ＝2．180,P ＝0．015;t ＝2．130,P ＝0．020;t ＝3．520,P ＝0．003）及照射体积大小（t ＝5．170,P ＝0．000;t ＝3．350,P ＝0．026;t ＝8．750,P ＝0．000;t ＝2．490,P ＝0．043）有关。生存分析显示：放疗后3个月免疫功能恢复良好的患者其中位生存时间优于恢复不良者（23个月∶17个月,χ2＝6．820,P ＝0．009）。结论食管癌患者放疗前处于免疫功能抑制状态,放疗实施会进一步加重免疫抑制,其加重程度与骨髓抑制及照射体积相关;放疗后3个月患者免疫功能有所恢复,恢复良好者预后较好。     

血清 DKK1和 P53自身抗体联合检测对食管鳞状细胞癌的诊断价值

目的：探讨血清 DKK1（Dickkopf-1）和 P53自身抗体联合检测在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的诊断意义。方法应用酶联免疫吸附试验检测126例 ESCC 患者和60例正常对照血清 DKK1和P53自身抗体的表达水平,采用受试者工作特征曲线（ROC）评价诊断效能。结果血清 DKK1水平和P53自身抗体在 ESCC 患者中的表达均明显高于正常对照[（673．09±343．82）pg／ml ∶（362．05±148．07）pg／ml,Z ＝6．158,P ＜0．0001;（0．398±0．546）∶（0．069±0．050）,Z ＝3．832,P ＜0．0001]。ROC 曲线显示,当血清 DKK1为最佳诊断临界值588．77 pg／ml 时,其在诊断 ESCC 的曲线下面积（AUC）为0．780（95％CI 为0．715～0．844,敏感性为61．9％,特异性为95．0％）。P53自身抗体诊断 ESCC 的AUC 为0．674（95％CI 为0．598～0．750,敏感性为45．3％,特异性为95．0％）。DKK1和 P53自身抗体联合检测诊断食管癌的 AUC 为0．843（95％CI 为0．788～0．897,敏感性为73．8％,特异性为95．0％）。在早期 ESCC,DKK1和 P53自身抗体联合检测具有更好的诊断效能,AUC 为0．903（95％CI 为0．845～0．961,敏感性为81．0％,特异性为95．0％）。结论血清 DKK1和 P53自身抗体可作为 ESCC 的血清诊断标志物,联合检测有助于 ESCC 的早期诊断。     

DC-CIK联合化疗对乳腺癌患者Treg细胞表达及预后的影响

目的：探讨树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）联合化疗对乳腺癌患者Treg 细胞表达和预后的影响。方法试验组42例患者术后接受 DC-CIK 细胞联合化疗,对照组38例患者仅接受单纯化疗,比较两组患者治疗后外周血中 Treg 细胞表达量,比较两组近期疗效、无进展生存期（PFS）、总生存期（OS）以及治疗后的生命质量。结果治疗后1周试验组患者外周血中 Treg 细胞表达量明显低于对照组[（11．37±1．10）％∶（14．25±0．95）％],治疗后2周试验组患者外周血中 Treg 细胞表达量明显低于对照组[（7．94±1．12）％∶（9．14±1．21）％],差异均有统计学意义（t ＝12．470,P ＝0．000;t ＝4．606,P ＝0．000）。试验组临床有效率与对照组比较（47．62％∶44．74％）,差异无统计学意义（χ2＝0．07,P ＝0．80）;试验组疾病控制率明显高于对照组（80．95％∶60．53％）,差异有统计学意义（χ2＝4．06,P ＝0．04）。试验组患者的 PFS[（7．50±1．45）个月∶（5．50±1．52）个月]和 OS[（13．50±3．20）个月∶（11．50±3．25）个月]均明显长于对照组,差异均有统计学意义（t ＝6．021,P ＝0．000;t ＝2．771,P ＝0．007）。治疗后试验组患者在躯体功能（72．85±12．01∶57．42±13．07）、情绪功能（68．45±9．97∶44．79±9．15）、认知功能（67．54±9．95∶62．37±10．34）、社会功能（65．72±12．17∶49．37±8．45）和总体生命质量（71．43±11．50∶59．48±12．45）方面的评分均明显高于对照组,差异均有统计学意义（t ＝5．503,P ＝0．000;t ＝11．020,P ＝0．000;t ＝2．278,P ＝0．025;t ＝7．032,P ＝0．000;t ＝4．463,P ＝0．000）。结论DC-CIK 联合化疗能够显著降低乳腺癌患者外周血中 Treg 细胞的表达,改善免疫抑制情况,同时提高疗效,延长 PFS,提高患者的生命质量。     

HOXB1与 miR-3175在人胶质瘤中的表达及临床意义

目的：探讨同源异型盒基因 B1（HOXB1）与微小 RNA-3175（miR-3175）在人胶质瘤中表达的关系及临床意义。方法通过实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测60例人胶质瘤组织和15例正常脑组织中 HOXB1与 miR-3175的表达,采用 Spearman 相关分析法分析人胶质瘤组织中 HOXB1、miR-3175表达的相关性,分析 HOXB1、miR-3175表达与临床病理特征的关系,采用 Kaplan-Meier 评估HOXB1、miR-3175与患者生存期的关系,采用 COX 回归模型分析患者预后因素。结果较正常脑组织, HOXB1在人胶质瘤组织中低表达（1．498±0．323∶0．946±0．588,t ＝－5．680,P ＝0．000）,miR-3175在人胶质瘤组织中高表达（1．008±0．355∶2．076±0．841,t ＝4．274,P ＝0．000）,并且在人胶质瘤组织中HOXB1与 miR-3175表达呈负相关（r ＝－0．601,P ＝0．000）。HOXB1表达与肿瘤分级相关（χ2＝4．848, P ＝0．028）,miR-3175表达与肿瘤分级（χ2＝5．640,P ＝0．018）、Karnofsky 功能状态评分（χ2＝4．785,P ＝0．029）相关。Kaplan-Meier 分析结果显示 HOXB1、miR-3175高表达组与低表达组中位生存期[HOXB1：（21．0±4．0）个月∶（7．0±0．8）个月;miR-3175：（6．0±0．6）个月∶（16．0±5．8）个月]差异有统计学意义（χ2＝7．495,P ＝0．006;χ2＝9．591,P ＝0．002）。COX 回归模型分析结果显示肿瘤分级（RR ＝6．556,95％CI 为1．196～35．952,P ＝0．002）、HOXB1（RR ＝0．018,95％CI 为0．001～0．312,P ＝0．006）和miR-3175（RR ＝2．098,95％CI 为1．663～7．513,P ＝0．037）是影响胶质瘤患者预后的独立因素。结论HOXB1与 miR-3175在人胶质瘤中的表达呈负相关,并与胶质瘤组织的恶性程度、胶质瘤患者的生存期及预后密切相关。     

BMI-1和 PADI4在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的：检测食管鳞状细胞癌组织及对应癌旁组织中肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADI4）和B 细胞特异莫洛尼鼠白血病病毒整合位点-1（BMI-1）的表达,探讨其在食管鳞状细胞癌发生中的作用及临床意义,并探索两者的相关性。方法采用免疫组织化学、Western blotting 及实时定量 PCR 法检测86例食管鳞状细胞癌及配对癌旁组织标本中 PADI4和 BMI-1的表达,并分析其在食管鳞状细胞癌中的表达情况与各临床病理因素的关系。结果免疫组织化学结果显示食管鳞状细胞癌中 PADI4、BMI-1的阳性表达率分别为68．6％和73．3％,明显高于癌旁组织中的37．2％和30．2％（χ2＝17．011,P ＝0．000;χ2＝31．876,P ＝0．000）;Western blotting 显示食管鳞状细胞癌中 PADI4、BMI-1的表达量显著高于癌旁组织（0．919±0．098∶0．718±0．103,t ＝2．462,P ＝0．021;0．975±0．074∶0．717±0．071,t ＝2．640,P ＝0．014）;实时定量 PCR 显示食管鳞状细胞癌中 BMI-1、PADI4 mRNA 相对表达量比对应癌旁组织增高,但差异无统计学意义（0．091±0．005∶0．038±0．002,t ＝1．701,P ＝0．101;0．114±0．075∶0．048±0．003,t ＝1．499,P ＝0．146）。食管鳞状细胞癌中 PADI4表达与肿瘤的淋巴结转移（χ2＝5．771,P ＝0．016）、浸润深度（χ2＝6．672,P ＝0．010）、临床分期（χ2＝5．771,P ＝0．016）密切相关;BMI-1表达与淋巴结转移（χ2＝7．176,P ＝0．007）、分化程度（χ2＝13．787,P ＝0．001）、临床分期（χ2＝7．176,P ＝0．007）密切相关。另外,通过免疫组织化学及实时定量 PCR 检测发现 PADI4和 BMI-1在食管鳞状细胞癌中的表达呈正相关（r ＝0．214,P ＝0．047;r ＝0．534,P ＝0．005）。结论 PADI4和 BMI-1在食管鳞状细胞癌中表达较癌旁组织均明显升高且呈正相关,其有望成为食管鳞状细胞癌诊断及判断预后的新指标。     

非小细胞肺癌带瘤生存患者预防抗凝治疗疗效分析

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）带瘤生存患者预防抗凝治疗疗效。方法将159例未合并静脉血栓栓塞（VTE）带瘤状态 NSCLC 患者应用随机数表法分为抗凝治疗组（81例）和对照组（78列）。治疗组81例在常规抗肿瘤治疗同时给予抗凝治疗,低分子肝素钙5000单位每12小时1次,干预时间为10～30 d。对照组78例仅给予常规抗肿瘤治疗。结果NSCLC 患者抗凝治疗后凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）较对照组延长,分别为（15．16±2．12）s ∶（13．56±4．30）s;t ＝3．195,P ＝0．001、（30．26±3．28）s ∶（28．24±5．28）s;t ＝2．712,P ＝0．007。纤维蛋白原（FIB）数值较对照组显著降低,分别为（3．85±0．75）g／L ∶（4．25±2．65）g／L;t ＝2．971,P ＝0．003。抗凝治疗组和对照组患者血栓发生率分别为2．47％、16．67％,差异有统计学意义（χ2＝9．901,P ＝0．002）。治疗组1、2年总生存率均高于对照组,差异均有统计学意义（χ2＝5．496,P ＝0．026;χ2＝4．540,P ＝0．046）;两组1、2年无进展生存率差异均无统计学意义（χ2＝2．034,P ＝0．182;χ2＝0．091,P ＝0．395）。治疗组和对照组患者出血（4．94％∶6．41％）、血小板减少（9．88％∶8．98％）、皮肤坏死（3．70％∶1．28％）发生率差异均无统计学意义（χ2＝0．516,P ＝0．685,χ2＝0．008,P ＝1．000,χ2＝0．847,P ＝0．632）。结论NSCLC 患者预防性抗凝治疗可改善凝血状态,减少血栓发生,延长 OS,并且无明显不良反应发生。     

血清DKK1和EB病毒VCA-IgA联合检测对鼻咽癌的诊断价值

目的：探讨血清Dickkopf-1（DKK1）和EB病毒壳抗体（VCA-IgA）联合检测在鼻咽癌中的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验检测80例鼻咽癌患者和65例正常对照者血清DKK1和VCA-IgA的水平,采用受试者工作特征（ROC）曲线评价诊断效能。结果鼻咽癌患者血清DKK1的表达水平明显高于正常对照组[580．773（429．146）pg／ml ∶316．174（252．965）pg／ml],差异有统计学意义（Z＝4．846,P＜0．0001）。ROC曲线显示血清DKK1对鼻咽癌的最佳诊断临界值为611．981 pg／ml,其诊断曲线下面积（AUC）为0．734（95％CI为0．654～0．815）,敏感性为50．0％,特异性为96．9％。VCA-IgA对鼻咽癌的诊断AUC为0．714（95％CI为0．631～0．798）,敏感性为47．5％,特异性为95．4％。DKK1和VCA-IgA联合检测的诊断AUC为0．849（95％CI为0．783～0．914）,敏感性为76．3％,特异性为95．4％。早期鼻咽癌患者DKK1和VCA-IgA联合检测效果优于正常对照组,差异有统计学意义（χ2＝23．784,P＜0．001）。结论血清DKK1对鼻咽癌具有潜在的诊断价值,联合检测VCA-IgA有助于鼻咽癌的早期诊断。     

上段食管癌前大野后小野加速超分割放射治疗临床研究

目的：评价大野套小野加速超分割与常规分割放射治疗上段食管癌的疗效及预防照射双锁骨上淋巴结的意义。方法：将76例上段食管癌分为2个组。常规（CF）组37例前大野后2个野等中心同时照射，2．0Gy/次，1次／d，5次／周；照射至40－45Gy后缩野照射，总剂量达DT60－66Gy，锁骨上预防照射D1－45Gy ，总疗程6－7周。超分割（AF）组39例，1．0－1．5Gy／次，2次／d，间隔6h ,10次／周；前大野总剂量D140－45Gy，2个后小野等中心照射总剂量DT20－25Gy。结果：完全缓解（CR）率和总有效（CR＋PR）率AF组分别为71．8％和97．4％；CF组分别为54．1％和91．9％。2个组生存率曲线比较差异有显著性意义（x^2＝5．670，P＝0．025）。AF组1、2、3年生存率分别为82．0％、61．5％、48．7％，CF组分别为64．8％、48．6％、 37．8％。AF组1、2、3年局部控制率分别为 79．4％、53．8％、46．1％，CF组分别为56．7％、45．9％、37．8％。2个组1年局部控制率比较差异有显著意义（x^2＝4．540，P＝0．033）。结论：大野套小野超分割放射 治疗上段食管癌疗效优于常规分割法。     

早期乳腺癌保乳术后简化逆向调强放疗的剂量学研究

目的：比较早期乳腺癌保乳术后三维适形放疗（3DCRT）及简化逆向动态调强放疗（IMRT）剂量学特点。方法随机选择14例早期乳腺癌保乳术后患者（4例左侧乳腺癌）,每例患者选用6 MV-X线分别设计3DCRT、IMRT计划,全乳腺50 Gy/25次。3DCRT组：采用切线野照射,瘤床区不加量;IMRT组：采用逆向动态调强技术,以2对类切线野为调强主野的入射方向,瘤床区同步加量10 Gy/25次。根据剂量体积直方图（DVH）进行适形度指数（CI）及不均匀度指数（HI）、危及器官受照射剂量及体积的评价。结果与3 DCRT计划比较,IMRT计划降低了患侧肺、左侧乳腺癌患者心脏的高剂量受照体积,提高了其低剂量受照体积,DVH叉点剂量分别为（25．16±9．11）Gy、（28．63±10．41）Gy;IMRT组和3DCRT组计划健侧乳腺的V10差异无统计学意义[（4．13±5．17）％∶（1．99±2．43）％,t＝2．11,P＞0．05],IMRT计划D30、平均剂量均较3DCRT增高[（2．23±1．77）Gy ∶（1．20±0．46）Gy,t＝2．58,P＜0．05;（2．35±1．59）Gy ∶（1．54±0．88）Gy,t＝3．15,P＜0．01）];2组计划的HI差异无统计学意义[（1．25±0．10）∶（1．23±0．11）,t＝1．25,P＞0．05],IMRT计划CI 高于3DCRT[（0．75±0．07）∶（0．62±0．09）,t＝5．68,P＜0．0001]。结论早期乳腺癌保乳术后四野简化逆向动态 IMRT技术较3 DCRT技术的主要优势在于瘤床同步加量,同时可以降低患侧肺的高剂量受照射体积,明显改善计划靶区CI,但HI无显著改善。早期乳腺癌保乳术后四野简化逆向动态IMRT技术是一种简便、合理、可行的计划设计方法。     

鼻咽癌常规放射治疗颅底推量剂量学研究

目的应用三维技术模拟鼻咽癌常规放疗颅底推量治疗计划,对比有和无颅底推量之间受侵颅底骨质和周围危及器官接受剂量的差异。方法选择19例采用CT—Sim行放疗计划设计、有颅底推量的初治鼻咽癌患者,鼻咽处方剂量70Gy,颅底推量剂量8Gy。勾画靶区、危及器官,按原放疗计划参数进行射野设置,作出有和无颅底野推量2个治疗计划,比较靶区剂量和危及器官受量的差异。结果无颅底推量时,原发肿瘤靶区（GTV）、颅底受侵靶区（GTVsb）、鼻咽部靶区（GTVnp）的V95和D95平均值分别为（90．0％±7．3％）和（66．0±1．2）Gy、（66．O％±2．4％）和（65．2±1．2）Gy、（99．3％±1．3％）和（68．1±0．8）Gy;给予颅底推量8Gy后,GTV、GTVsb和GTVnp的V95均达到了99．0％,D95的平均值均达到70Gy以上。有无颅底推量的左、右侧颞叶的D5平均值分别为（76．3±6．3）Gy和（68．0±4．8）Gy（P〈0．001）、（75．1±6．2）Gy和（67．0±5．0）Gy（P〈0．001）。2个计划脑干（Dmean、D5、V60）、垂体（Dmean）、视交叉和视神经（Dmax、Dmean）的受量比较均无显著差异。结论有颅底受侵鼻咽癌患者采用常规放射治疗颅底骨质存在低剂量区,颅底推量可改善颅底骨质的低剂量区,使大部分患者的颞叶受量超过70Gy,获益有待临床证实。     

食管癌组织中肿瘤浸润性树突状细胞表型改变及功能分析

目的:探讨食管癌患者肿瘤组织中肿瘤浸润性树突状细胞表型改变及功能。方法:收集2017年01月至2018年09月我院收治的食管癌患者92例作为观察组,选择同时期我院收治的92例食管良性肿物患者作为对照组。术中分别取食管癌标本和良性肿物标本。检测相应组织中肿瘤浸润性树突状细胞表达水平及表型,同时检测T细胞亚群表达情况,分析肿瘤浸润性树突状细胞表达情况和食管癌患者临床特征的相关性。结果:与对照组比较,观察组肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性树突状细胞和CD54阳性树突状细胞百分比均显著降低(P＜0.05);观察组CD4+T细胞增高［(24.81±3.72）% vs （20.77±3.63）%,P=0.000］;CD8+T细胞降低［(20.90±4.12）% vs （23.08±4.42）%,P=0.001］。食管癌组织中肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性树突状细胞和CD54阳性树突状细胞百分比与肿瘤直径、TNM分期和淋巴结转移有关(P＜0.05)。食管癌组织中肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性树突状细胞和CD54阳性树突状细胞与CD4+T细胞显著负相关,与CD8+T细胞显著正相关(P＜0.05)。结论:肿瘤浸润性树突状细胞在食管癌组织中低表达,功能低下,与T细胞亚群失衡和预后不良有关。     

沙利度胺联合累及野放疗治疗高龄(≥75岁)食管癌患者的临床观察

目的:观察累及野调强放疗加或不加沙利度胺对75岁以上食管癌患者的近期疗效、相关副反应及远期疗效影响.方法:回顾性分析于2017年1月至2018年12月在我院接受累及野照射(involved-field irradiation,IFI)且符合条件的高龄(≥75岁)食管癌患者,按是否加用沙利度胺分为单纯放疗组和联合治疗组....     

食管鳞癌组织ADAMTS-5表达临床意义研究

目的 探讨含Ⅰ型血小板反应蛋白的解聚素金属蛋白酶5(a disintegrin and metalloprotease with thrombospondinmotifs 5,ADAMTS-5)蛋白在食管癌组织中的表达,对食管癌细胞增殖及迁移能力的影响,并分析其对患者预后影响的临床意义.方法 选取正常食管上皮细胞株(HEEC)和4株食管鳞状细胞癌细胞株(TE1、TE10、TE11以及Eca109),采用蛋白质印迹法检测ADAMTS-5蛋白在细胞内的表达.通过RNA干扰技术在食管鳞状细胞癌细胞株TE10中转染ADAMTS-5-shRNA和Neg-shRNA后采用蛋白质印迹法检测ADAMTS-5蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、划痕实验检测干扰ADAMTS-5表达对TE10细胞增殖以及迁移的影响.采用免疫组化法检测2009-04-15-2012-11-20南通大学附属医院97例食管鳞癌组织中ADAMTS-5蛋白的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系.结果 在食管鳞癌细胞株TE1、TE10、TE11和Eca109中ADAMTS-5蛋白相对表达量分别为2.10±0.06、5.70±0.21、4.50±0.32和4.60±0.39,明显高于食管正常上皮细胞株HEEC蛋白相对表达量(1.10±0.07),其中在TE10中的表达强度最高.使用小干扰技术转染TE10细胞株48 h后,蛋白质印迹法检测结果显示,以GAPDH为内参照,未处理组、阴性对照组和干扰组的ADAMTS-5蛋白相对表达量分别为1.00±0.05、1.10±0.09和0.50±0.07,干扰组蛋白表达相比阴性对照组(P<0.001)和未处理组(P<0.001)明显下降;MTT法检测结果显示,转染72 h后,未处理组、阴性对照组和干扰组的增殖率分别为(100.00±10.02)%、(98.04±9.80)%和(72.19±12.24)%,干扰组相比阴性对照组(P<0.001)和未处理组(P<0.001)细胞增殖明显抑制;在划痕24 h后,干扰组迁移率为(46.34±1.27)%,而阴性对照组为(73.17±1.54)%,干扰组迁移能力明显抑制,t=40.33,P<0.001;ADAMTS-5蛋白表达在97例食管鳞癌组织中的阳性率为59.79%(58/97),明显高于癌旁组织的28.87%(28/97),与分化程度、淋巴结转移、临床分期和浸润深度相关(P<0.05),而与性别、年龄无关(P>0.05).58例阳性患者的中位生存时间为32.45个月,39例阴性患者的中位生存时间为42.3个月,差异有统计学意义,χ2=8.399,P=0.004.Cox回归多因素分析显示,ADAMTS-5表达是判断食管鳞癌预后的重要因素,χ2=5.429,P=0.020.结论 ADAMTS-5蛋白在食管鳞癌细胞和组织中高表达,能促进肿瘤细胞的增殖和迁移能力,并影响食管鳞癌患者的预后.ADAMTS-5有望成为食管鳞癌的生物标志物、评价预后的指标和治疗的新靶点.     

放射耐受食管鳞癌细胞系基因表达谱研究

目的 构建放射耐受食管鳞癌细胞系,筛选放射耐受相关基因及探索耐受机制。方法 利用放射线反复照射食管癌细胞系KYSE410,构建放射耐受细胞系KYSE410-res。检测照射前后食管癌细胞增殖与凋亡情况,通过基因芯片技术检测放射线处理前后食管癌细胞基因表达差异情况,并对差异明显的基因进行验证。采用成组t检验。结果 KYSE410-res细胞较KYSE410细胞抗凋亡能力和增殖能力显著提高(P值均<0.05)。基因芯片结果显示KYSE410-res细胞中表达上调≥4倍基因有463个,下调≥4倍基因有251个。差异表达基因的功能主要集中在细胞增殖、粘附、信号转导、血管生成、活性氧代谢、细胞损伤修复及MAPK/ERK信号通路,OAS2和UBD是重要节点蛋白。荧光定量PCR法检测HLA-DQB1、MMP1、NCAM₁、ZNF521、GPC6、SELENBP1、LCN15、TFPI-2基因在KYSE410-res细胞中表达情况与基因芯片结果一致。结论 MAPK/ERK信号通路的异常激活、OAS2和UBD基因的表达上调、TFPI-2基因的表达下调伴随MMPs的表达上调,可能是食管癌细胞放射耐受的机制之一。     

EZH2基因对人食管癌细胞增殖的影响

目的:探讨过表达或沉默果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因对食管癌细胞增殖的影响.方法:选用人食管癌细胞株ECA 109、TE1、KYSE30、KYSE 170作为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blotting法分别检测食管癌细胞EZH2mRNA和蛋白的表达水平,然后采用qPCR检测过表达和沉默EZH2基因后对4株食管癌细胞EZH2mRNA的表达变化;CCK-8增殖实验、克隆形成实验检测过表达和沉默EZH2基因及EZH2抑制剂DZNep(3-deazaneplanocin A)处理对食管癌细胞增殖能力和克隆形成率的影响.结果:食管癌ECA 109、TE1细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平明显高于KYSE30、KYSE 170细胞(P＜0.05).食管癌TE1、ECA 109细胞转染EZH2-ShRNA后EZH2表达水平下调(均P＜ 0.05)、细胞增殖能力降低(1.07±±0.08 vs 1.59±±0.09,P＜0.05;0.88±0.08 vs 1.05±0.11,P＜0.05)、克隆形成数下调[(200.00±11.43) vs (480.00±±13.10)个,P＜0.05;(88.00±±8.16) vs (220.00±±±14.69)个,P＜0.05].KYSE30、KYSE 170细胞转染EZH2过表达质粒后EZH2表达水平升高(均P＜0.05)、细胞增殖能力显著增强(1.06±0.07 vs 0.76±0.06,P＜0.05;3.36±±0.30 vs 1.50±0.08,P＜0.05)、克隆形成数显著升高[(45.00±3.27) vs (18.00±±1.63)个,P＜0.05;(65.00±4.08) vs (23.00±±2.45)个,P＜0.05];DZNep处理后,ECA109和TE1细胞增殖能力降低(均P＜0.05)、克隆形成数下降(均P＜0.05).结论:EZH2基因能有效促进食管癌细胞的增殖和克隆形成能力,为深入研究EZH2作为食管癌治疗的新靶点提供了实验研究基础.     

人胆囊癌SP细胞的分离及其干细胞标记物的表达*

目的:探索在人胆囊癌GBC-SD 细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞（side population cells）,以及SP细胞、非SP细胞和GBC-SD 细胞系表达常见干细胞标记物ABCG2、Oct- 4、CD34的情况。方法:采用荧光激活细胞分选技术（FACS）分选出人胆囊癌SP细胞和非SP细胞,通过RT-PCR、Western blot、流式细胞术以及免疫荧光化学技术检测SP细胞、非SP细胞以及GBC-SD 细胞系表达ABCG2、Oct- 4 和CD34的情况。结果:人胆囊癌GBC-SD 细胞系中存在着少量的具有干细胞潜能的SP细胞,其所占的比例为（0.64± 0.08）% ,SP细胞相对于非SP细胞和GBC-SD 细胞,具有更强的体外侵袭力（P<0.05）;并且ABCG2 在胆囊癌SP细胞中呈现出高表达的状态（89.56±3.86）% ,在非SP细胞中几乎不表达（1.32± 0.49）% ,在未分选胆囊癌细胞系中ABCG2 呈弱表达（12.37± 1.61）% ,P=0.001;Oct- 4 在三种细胞中的表达分别为:（94.87± 1.40）% 、（88.16± 2.34）% 、（90.17± 1.61）% ,P>0.05;CD34在mRNA水平高表达于非SP细胞和GBC-SD 细胞,不表达于SP细胞;在蛋白水平几乎均不表达于这三种细胞,其含量依次为:（1.78± 0.51）% 、（0.63± 0.21）% 、（0.96± 0.38）% ,P>0.05。结论:人胆囊癌GBC-SD 细胞系中存在具有干细胞特性的SP细胞,并且具有ABCG2+Oct- 4+CD34-的表型特征。      

RNAi技术沉默DKK1基因对食管癌ECA109及EC1细胞系增殖的影响

目的:通过构建DKK1的靶向小干扰RNA(small interfering RNA),探讨干扰DKK1基因的表达和对食管癌ECA109及EC1细胞系增殖的影响.方法:转染DKK1 siRNA于食管癌细胞系ECA109、EC1,应用蛋白免疫印迹方法检测转染前后细胞中DKK1的蛋白表达变化.食管癌细胞系ECA109及EC1成功干扰DKK1表达后,应用CCK-8法检测癌细胞增殖变化,平板克隆法检测癌细胞的克隆形成能力变化.结果:食管癌细胞系转染DKK1 siRNA后,ECA109中DKK1蛋白表达降低48.62％ (P ＜0.01),EC1中DKK1蛋白表达降低50％(P＜0.01).在CCK-8法检测癌细胞增殖变化实验中,DKK1 siRNA转染后24 h、48 h及72 h,相比阴性对照组,细胞增殖能力显著降低.平板克隆实验中,DKK1 siRNA转染后,ECA109细胞克隆均数(77.53±4.948)低于空白对照组(44.2±7.704),克隆率下降42.98％,而EC1细胞克隆均数(71.67±5.239)低于空白对照组(36±2.646),克隆率下降49.76％.结论:干扰DKK1的表达能够抑制食管癌细胞的增殖,DKK1可能成为抑制食管癌增殖的分子靶点.     

p53基因对食管癌细胞的作用

目的 观察野生型p53基因对不同放射敏感性食管癌细胞的作用，探索p53基因治疗与放射治疗联合应用的价值。方法 以人食管癌细胞株TE－13及经反复照射后改变了放射敏感性的细胞TE－13R50为实验对象，将载有人野生型p53cDNA并含巨细胞病毒（CMV)启动子的重组腺病毒（Ad5CMV-p53）感染上述两种细胞及肿瘤组织并加用放射，在体、离体实验比较观察Ad5CMV-p53对不同放射敏感性食管癌细胞的影响。结果 TE－13细胞及TE－13R50细胞的放射敏感性明显不同（D0值分别为1.38、2.48Gy）；当联合应用Ad5CMV-p53时明显增加了它们的放射敏感性，TE－13R50细胞的提高幅度较大，接近了亲代细胞的水平（D0值分别为0.97、1.14Gy）。放射合并瘤内注射Ad5CMV-p53与单纯放射相比，荷瘤裸鼠的肿瘤生长速度明显受到抑制，对TE－13R50细胞的作用更大。结论 Ad5CMV-p53可提高食管癌细胞的放射敏感性，在一定程度上消除了食管癌细胞的放射抗拒性。     

食管癌患者CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞的检测及意义

目的：探讨CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞在食管癌局部及全身免疫中的作用。方法：流式细胞仪检测97例食管癌患者外周血和20例肿瘤组织的CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞比例,比较不同病理类型、不同分期等食管癌患者外周血及肿瘤局部组织的CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞的分布变化。结果：食管癌患者肿瘤组织CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞比例为（18.97±2.38）%,高于患者外周血比例〔（17.57±3.99）%〕,差异无统计学意义,t=1.511,P〉0.05;食管癌患者肿瘤组织及外周血中CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞占CD4＋ T淋巴细胞的比例,均高于同期健康对照组患者外周血的比例（9.35±1.41）%,差异有统计学意义,t值分别为12.111和8.332,P值均〈0.01。CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞水平与临床分期（F=9.384）、有无淋巴结转移（t=2.326）有关,P值均〈0.05。结论：食管癌患者全身及肿瘤局部均存在免疫异常,推测CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞可能参与了食管癌的发生与发展。