沉默GOLM1对宫颈癌Siha细胞放射敏感性影响和机制研究

目的:研究GOLM1对人宫颈癌Siha细胞放射敏感性影响和可能机制。方法:构建慢病毒载体敲低宫颈癌细胞Siha中GOLM1的表达，qPCR检测干扰效率。采用4 Gy X线照射细胞后利用MTT实验检测细胞活性。将经射线照射后的宫颈癌细胞分为GOLM1-SiRNA组、NC-SiRNA组、GOLM1-SiRNA联合IGF1组，观察细胞形态，细胞侵袭和迁移实验观察侵袭和迁移能力，克隆形成实验检测细胞增殖能力。Western blot检测上皮间充质转化相关蛋白及PI3K/Akt通路蛋白。结果:经射线照射后，敲低Siha细胞中GOLM1表达组细胞活性下降最明显，细胞侵袭能力、迁移能力降低，克隆形成能力下降。GOLM1-SiRNA联合PI3K/Akt信号转导通路激活剂IGF1组细胞侵袭、迁移能力增加，克隆形成能力增强。降低GOLM1的表达增强了上皮标记蛋白E-cadherin的表达，同时降低了间质标记蛋白N-cadherin和p-Akt的表达，加入IGF1后E-cadherin蛋白的表达降低，N-cadherin和p-Akt蛋白的表达增强。结论:GOLM1表达降低增加了射线照射后宫颈癌细胞对放射线的...     

SALL4对白血病HL-60细胞放射敏感性影响研究

目的 探讨下调SALL4对白血病细胞放射敏感性影响,为提高白血病患者放射敏感性提供新思路。方法 人急性髓系白血病细胞株HL-60感染shRNA SALL4和shRNA control慢病毒记为Lv-shSALL4组和Lv-shNC组,用RT-PCR和蛋白印迹法检测细胞中SALL4水平,同时取感染后的细胞给予8Gy剂量照射处理记为Lv-shSALL4＋放射组、Lv-shNC＋放射组,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平。取Lv-shSALL4组和Lv-shNC组细胞,给予0、2、4、6、8Gy照射,细胞克隆形成实验测定放射增敏比。结果 Lv-shSALL4组细胞中SALL4水平低于Lv-shNC组(P<0.05)。细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高,与Lv-shNC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Lv-shSALL4＋放射组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高(P<0.05)。Lv-shSALL4组细胞放射增敏比为1.323。结论 下调SALL4增加白血病细胞放射敏感性,抑制白血病细胞增殖并诱导凋亡。     

siRNA沉默Annexin A2基因表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨siRNA沉默Annexin A2基因表达对鼻咽癌CNE-2(R743)细胞放射敏感性的影响。方法 化学合成Annexin A2基因的siRNA经HiPerFect转染入R743细胞。RT-PCR和蛋白印迹法检测转染前后Annexin A2的mRNA和蛋白表达,克隆形成实验分析转染前后对细胞放射敏感性的影响,流式细胞仪和TUNEL实验分别检测转染前后经X线照射后细胞周期、细胞凋亡情况。结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果显示转染组细胞Annexin A2基因及蛋白表达下调。克隆形成实验分析结果表明转染组D₀、D_q、SF₂值均低于单纯照射组和转染对照组,其相应放射增敏比(D₀值比)分别为1.30和1.27。X线照射后转染组细胞G₂+M期比例增加并高于单纯照射组和转染对照组(32.46%、9.42%、9.17%,P=0.000、0.000),转染组凋亡率也高于单纯照射组和转染对照组(35.20%、10.87%、11.33%,P=0.000、0.000)。结论 siRNA沉默Annexin A2基因表达可增强R743细胞放射敏感性,可能与DNA损伤修复、细胞周期时相分布变化有关。     

沉默Ku86基因对Hela细胞放射敏感性影响

目的 探讨siRNA沉默Ku86基因表达对宫颈癌Hela细胞放射敏感性的影响。方法 X射线照射后采用qRT-PCR、蛋白印迹法检测Ku86基因在Hela细胞中的表达水平,利用siRNA沉默Ku86基因表达。将si-NC、si-KU86转染到宫颈癌Hela细胞中,0、2、4、6、8、10 GyX射线照射。CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,克隆形成实验分析转染前后细胞放射敏感性变化,检测p53、Caspase-8表达分析沉默Ku86基因表达对放射诱导的细胞凋亡影响。结果 X线照射后Ku86 mRNA和蛋白表达水平上调,沉默Ku86表达降低了Hela细胞的增殖能力和克隆形成能力,放射增敏比为1.57。沉默Ku86表达上调了p53和Caspase-8表达,细胞凋亡增加。结论 siRNA沉默Ku86表达提高了宫颈癌Hela细胞的放射敏感性。     

干扰GTPBP4基因对食管癌EC9706细胞放射敏感性影响

目的:探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。方法:通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系,使细胞中GTPBP4基因沉默,观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通...     

shRNA沉默Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法 设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3（H1/GFP&Puro）载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果 两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低（P<0.01）,Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比（SER）分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G₂/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论 shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G₂/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。     

宫颈癌组织IER5与放射敏感性及临床意义研究

目的 探讨宫颈癌患者放疗前后早期快速反应基因5(IER5)蛋白表达特点及其与放射敏感性及临床疗效的相关性。方法 对2014—2015年接受同步放化疗的39例Ⅱ_b —Ⅲ_b期宫颈癌患者为研究对象,采集放疗前和接受累积 2~6、10、20、30 Gy照射的宫颈癌组织,应用蛋白印迹法技术检测IER5蛋白相对表达水平。IER5蛋白表达与放射剂量相关性采用Pearson相关分析;不同放射剂量间IER5蛋白表达差异采用配对样本t检验;放射敏感组与抵抗组同一指标表达差异采用独立样本t检验;不同放射剂量IER5蛋白表达变化与各临床指标间相关性采用重复测量方差分析。结果宫颈癌组织10、20、30 Gy照射后IER5蛋白表达显著高于放疗前(t=3.06、4.01、6.99,P<0.01)。IER5蛋白表达与不同放射剂量间存在相关关系(r=0.51,P<0.01)。IER5在不同放射剂量下的蛋白表达与疗前肿瘤直径间存在交互作用(F=3.21,P<0.05),且疗前肿瘤直径<4、4~5 cm的IER5表达量随放射剂量显著变化(F=10.49、9.98,P<0.01)。结论 宫颈癌患者放疗前和放疗中IER5表达有显著差异,且IER5表达随放射剂量升高而增多,提示IER5与宫颈癌放射敏感性有关。肿瘤越小IER5受放射后的表达变化越显著。     

shRNA沉默Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响北大核心CSCD

目的探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3(H1/GFP&Puro)载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低(P<0.01),Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比(SER)分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G2/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G2/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。     

survivin基因RNA干涉对宫颈癌细胞凋亡和放射敏感性的影响

目的：观察survivin基因siRNA干涉对宫颈癌细胞HeLa凋亡和放射敏感性的影响。方法：通过脂质体介导将含人survivin基因siRNA的重组真核表达质粒pSilencer2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,激酶活性检测法测定半胱氨蛋白水解酶-3(caspase-3)活性变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,平板克隆形成实验、多靶单击模型拟合细胞存活曲线观察细胞放射敏感性变化。结果：G418筛选形成稳定转染阳性克隆,建立了3组稳定转染细胞系：HeLa-s2(转染重组质粒pSileneer2.1-s2)、HeLa-NC(转染阴性对照质粒pSi- lencer2.1-NC)和HeLa-U6 neo(转染空载质粒pSileneer2.1-U6 neo)。经与HeLa-NC、HeLa-U6 neo和未转染HeLa细胞比较,HeLa-s2 survivin mRNA和蛋白表达明显下降,与HeLa细胞相比,表达抑制率分别为：62.8%和60.1%；caspase-3激酶活性增强,D_(405)达1.26±0.04(P＜0.05)；细胞凋亡率为：(29.2±1.4)%,明显升高(P＜0.05)；同一剂量X线照射下,平板克隆形成率显著降低(P＜0.05)；细胞存活曲线显示：D_0、D_q值显著下降,分别为：3.15、1.21(P＜0.05),放射增敏比分别为：2.01 (D_0值比)、1.77(D_q值比)。结论：survivin基因siRNA干涉可通过阻抑HeLa细胞中survivin表达,增强caspase-3激酶活性,诱导细胞凋亡,并显著提高细胞的放射敏感性。     

p53基因在宫颈癌发病中的意义及对放射敏感性的影响

放疗在宫颈癌治疗中具有重要地位,但放疗抵抗导致局部未控仍常见,因此预测放射敏感性对制定个体化治疗策略是非常有益的。影响放射敏感性的因素有很多,p53状态是重要因素之一,p53基因上下游信号分子的调控亦能影响宫颈癌放射敏感性。本文分析了p53基因在不同宫颈癌中的差异,并探讨p53调控放射敏感性的可能方式。     

人肺癌组织中OCT-4表达的临床意义

目的：研究干细胞标志物OCT-4在肺癌组织中的表达以及临床意义。方法：收集我院2003-2006年40例肺癌手术患者石蜡组织标本,免疫组化检测组织中OCT-4的表达,取癌旁组织和10例正常肺组织作为对照,回顾40例患者的临床病理指标,并分析各项指标与OCT-4的关系。对40例患者进行随访,分析OCT-4表达与肿瘤复发率之间的关系,Westernblot分析鳞癌与腺癌中OCT-4蛋白的表达。结果：OCT-4在肺癌组织中阳性表达为37.5%,显著高于正常肺组织中OCT-4的表达（P〈0.05）。OCT-4的阳性表达强度随肺癌临床分期增高而增高（P〈0.05）;对40例患者进行3年随访,OCT-4阳性表达病例的肿瘤复发率为53.3%,较OCT-4阴性表达病例的复发率（20.0%）高,两者有显著性差异（P〈0.05）。应用Western-blot法检测癌组织与正常组织,腺癌中OCT-4蛋白的表达较鳞癌中OCT-4蛋白表达增高,经过Bandscan软件灰度扫描,两者之间有显著性差异（P=0.04）。结论：OCT-4阳性表达强度与肺癌临床分期与肿瘤复发率有关,可以为判断患者预后提供参考。     

763例Ⅲ期宫颈癌不同放疗方法的疗效分析

目的 分析不同放疗方法对Ⅲ宫颈癌疗效和副反应的影响.方法 回顾性分析763例接受全程放疗的Ⅲ期宫颈癌患者(鳞癌722例,腺癌41例)的生存率,对资料完整的350例进行近期疗效及放疗副反应的比较.763例中全盆2个野常规分割+腔内放疗113例(cF组),盆腔盒式4个野加速超分割+腔内放疗44例(AHF组),盆腔4个小野非常规分割同期腔内放疗606例(FRT组),61例加用了化疗.350例中cF组112例,AHF组44例,FRT组194例,6l例加用了化疗.结果 全部病例CF、AHF、FRT组3年生存率分别为65.7%、66.8%、44.3%(P=0.000),5年生存率分别为65.7%、66.8%、36.3%(P=O.000);CF、FRT组10年生存率分别为43.3%、31.9%(P=0.200);鳞癌加化疗组生存率高于无化疗组.350例中CF、AHF、FRT组局部控制率分别为83.O%、93.2%、86.1%(x2=2.70,P=0.259),急性放射性肠道、膀胱损伤发生率相似(P>0.05),FRT组骨髓抑制率最低(56.2%;x2=25.95,P=0.000);AHF组皮肤反应发生率最低(9.1%;X2=20.25,P=0.002);鳞癌加化疗组生存率高于无化疗组,仉骨髓抑制及肠道反应均高于无化疗组.结论 CF组及AHF组5年生存率均较好,AHF组的并发症较轻、疗程短并有提高局部控制率的趋势,值得推广应用.同步放化疗可改善鳞癌患者的生存率及近期疗效,但并发症显著增加,治疗要考虑患者体质、对化疗的耐受程度等.     

人肺癌组织中OCT-4表达的临床意义

目的 研究干细胞标志物OCT-4在肺癌组织中的表达以及临床意义.方法 收集我院2003-2006年40例肺癌手术患者石蜡组织标本,免疫组化检测组织中OCT-4的表达,取癌旁组织和10例正常肺组织作为对照,回顾40例患者的临床病理指标,并分析各项指标与OCT-4的关系.对40例患者进行随访,分析OCT-4表达与肿瘤复发率之间的关系,Westernblot分析鳞癌与腺癌中OCT-4蛋白的表达.结果 OCT-4在肺癌组织中阳性表达为37.5%,显著高于正常肺组织中OCT-4的表达(P<0.05).OCT-4的阳性表达强度随肺癌临床分期增高而增高(P<0.05);对40例患者进行3年随访,OCT-4阳性表达病例的肿瘤复发率为53.3%,较OCT-4阴性表达病例的复发率(20.0%)高,两者有显著性差异(P<0.05).应用Westernblot法检测癌组织与正常组织,腺癌中OCT-4蛋白的表达较鳞癌中OCT-4蛋白表达增高,经过Bandscan软件灰度扫描,两者之间有显著性差异(P=0.04).结论 OCT-4阳性表达强度与肺癌临床分期与肿瘤复发率有关,可以为判断患者预后提供参考.     

HPV分型及p53表达对宫颈癌放疗敏感性影响

目的 探讨宫颈癌患者中HPV分型及p53表达与放疗敏感性的相关性。方法 收集2014—2016年间宫颈癌患者80例,其中Ⅰ_B+Ⅱ_A期40例、Ⅱ_B+Ⅲ_A期40例。检测患者HPV的DNA的感染类型及p53的表达,采用单纯放疗方法对入选患者进行盆腔外和腔内照射,分析近期疗效与HPV分型及p53表达的相关性。χ²检验或Fisher's精确概率法检验,Spearman等级相关分析。结果Ⅰ_B+Ⅱ_A、Ⅱ_B+Ⅲ_A期放疗不敏感组(SD+PD)者p53阳性率分别为100%、100%,高于放疗敏感组(CR+PR)的80.0%、90.0(P=0.044、0.013)。p53的表达强度与放疗敏感性呈负相关(r=-0.427,P=0.000)。Ⅰ_B+Ⅱ_A、Ⅱ_B+Ⅲ_A期放疗不敏感组患者中HPV的DNA多重感染率多于单一亚型感染率,分别为65.0%、95.0%和35.0%、5.0%(P=0.004、0.003),放疗敏感性患者中HPV的DNA单一亚型感染率多于多重感染率,分别为85.0%、60.0%和15.0%、40.0%(P=0.004、0.003)。所有患者中HPV₁₆的检出率最高为66.3%,放疗不敏感组患者中HPV₁₈的检出率最高为60.0%。结论 p53高表达与宫颈癌放射抗拒有关,HPV的DNA多重感染的宫颈癌患者对放疗敏感性较差,HPV₁₆是双重感染中最常见亚型,放疗后未缓解患者中以HPV₁₈为主的多重感染检出率最高。     

长链非编码RNA TUG1通过吸附miR-145对XB1702细胞放射敏感性影响

目的 研究长链非编码RNA TUG1对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞XB1702及正常子宫内膜基质细胞ESC中TUG1和miR-145表达。实验分为转染si-NC组、转染si-TUG1、转染si-NC并照射、转染si-TUG1并照射、共转染si-TUG1和anti-miR-NC和共转染si-TUG1和anti-miR-145组。用脂质体法转染至XB1702细胞。克隆形成实验检测各组细胞存活分数,流式细胞术检测各组细胞凋亡。双荧光素酶报告基因检测各组细胞荧光活性。结果 与ESC细胞相比,XB1702细胞中TUG1表达升高,miR-145表达降低;沉默TUG1可显著提高XB1702细胞存活分数、促进凋亡,增强放射敏感性。TUG1可靶向调控miR-145表达,抑制miR-145可逆转沉默TUG1对XB1702细胞的增殖抑制、凋亡促进及增敏作用。结论 沉默长链非编码RNA TUG1可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-145有关,将可为宫颈癌放疗提供靶点。     

长链非编码RNA TUG1通过吸附miR-145对XB1702细胞放射敏感性影响

目的 研究长链非编码RNA TUG1对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞XB1702及正常子宫内膜基质细胞ESC中TUG1和miR-145表达。实验分为转染si-NC组、转染si-TUG1、转染si-NC并照射、转染si-TUG1并照射、共转染si-TUG1和anti-miR-NC和共转染si-TUG1和anti-miR-145组。用脂质体法转染至XB1702细胞。克隆形成实验检测各组细胞存活分数,流式细胞术检测各组细胞凋亡。双荧光素酶报告基因检测各组细胞荧光活性。结果 与ESC细胞相比,XB1702细胞中TUG1表达升高,miR-145表达降低;沉默TUG1可显著提高XB1702细胞存活分数、促进凋亡,增强放射敏感性。TUG1可靶向调控miR-145表达,抑制miR-145可逆转沉默TUG1对XB1702细胞的增殖抑制、凋亡促进及增敏作用。结论 沉默长链非编码RNA TUG1可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-145有关,将可为宫颈癌放疗提供靶点。     

影响宫颈癌放疗敏感性的临床病理因素分析

目的:探讨影响宫颈癌放疗敏感性的临床病理因素。方法:回顾性分析经病理确诊的247例首次接受单纯放疗或同步放化疗宫颈癌患者的临床资料,分析肿瘤局部控制情况,判断宫颈癌放疗敏感性的影响因素。结果:患者的CR率与放疗前平均血红蛋白(Hb)含量(χ2=40.864,P=0.000)、病理类型(χ2=15.077,P=0.001)、分化程度(χ2=4.791,P=0.029)、肿瘤体积(χ2=20.556,P=0.000)、肿瘤外形(χ2=14.451,P=0.001)及治疗方式(χ2=10.957,P=0.001)有关,而与年龄(χ2=3.605,P=0.058)及FIGO分期(χ2=4.814,P=0.186)无关。多因素分析显示,治疗前的Hb含量(P=0.008)、肿瘤大小(P=0.042)以及化疗增敏的次数(P=0.029)是判断宫颈癌放疗敏感性的独立影响因素。结论:治疗前患者的Hb含量、病理类型、分化程度、肿瘤大小、大体形态以及以铂类为基础的化疗增敏和其次数均是影响宫颈癌放疗敏感性的重要因素。