黄芩素对缝隙连接蛋白Cx32组成的GJIC功能的影响

目的:在转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞上,观察黄芩素对Cx32组成的GJIC及Cx32蛋白表达水平的影响。方法:细胞接种荧光示踪法观察不同浓度黄芩素对GJIC的影响;细胞免疫荧光法观察黄芩素在影响GJIC功能浓度范围内对Cx32蛋白表达的影响。结果:黄芩素(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)增强Cx32组成的GJIC功能的荧光渗透率为10.04%,22.5%和35.33%;黄芩素(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)增强组成GJIC的Cx32蛋白表达的荧光强度为(27.12±0.30)%,(56.31±1.02)%和(83.47±1.85)%。结论:黄芩素可增强缝隙连接蛋白Cx32组成的GJIC功能,其机制可能与增加Cx32蛋白表达水平有关。     

不稳定逼尿肌Cx43基因表达及其与逼尿肌细胞间缝隙连接通讯功能的关系研究

目的研究连接蛋白Cx43基因在体外培养不稳定逼尿肌细胞中的表达及不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯(gap junction intercelluar communication,GJIC)功能的变化,初步探讨二者与逼尿肌不稳定(destrusor instability,DI)的关系.方法健康雌性Wistar大鼠40只,分为DI组和正常组.RT-PCR及Western blot法检测各组逼尿肌细胞中Cx43 mRNA及蛋白表达变化,划痕标记荧光染料示踪技术(SLDT)检测各组逼尿肌细胞间GJIC功能变化.结果RT-PCR及Western blot检测结果显示DI组逼尿肌细胞中Cx43 mRNA及蛋白含量明显高于正常组(P＜0.01),SLDT结果表明DI组逼尿肌细胞间GJIC明显强于正常组(P＜0.01).结论体外培养不稳定逼尿肌细胞中Cx43基因表达增加,细胞间GJIC增强,二者可能与DI的发生有密切关系.     

鞣花酸对转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞缝隙连接功能的影响

目的:观察鞣花酸(EA)对转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞中缝隙连接(GJ)通讯功能的影响。方法:细胞接种荧光示踪法观察EA对GJ功能的影响;细胞免疫荧光法检测EA对细胞膜上Cx32表达的影响。结果:EA4、8、16μmol/L分别使细胞荧光渗透率显著增强6.04%、12.50%和20.33%(P0.01),使细胞膜Cx32的荧光强度显著增强23.66%、46.09%和92.18%(P0.01)。结论:EA可通过增强胞膜Cx32的表达,增强细胞GJ通讯功能。     

黄芩素增强Cx32组成的细胞缝隙连接提高顺铂的细胞毒性

摘 要:【目的】 黄芩素在转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞上,对顺铂细胞毒性的影响及其与GJ的关系?【方法】 SRB检测黄芩素对HeLa32细胞增殖性的影响,Parachute assay检测黄芩素对Cx32组成的GJ功能的影响?细胞集落实验用于检测黄芩素对顺铂细胞毒性的影响及其与Cx32组成的GJ的关系?Western blotting检测对Cx32蛋白的影响?【结果】 黄芩素24 h,100 μmol/L浓度以下不影响Hela32细胞增殖?黄芩素(0.0125 ~ 0.1 μmol/L)能浓度依赖性地增强Hela32细胞间的荧光传递?黄芩素(0.1 μmol/L)分别作用4 h,12 h,和24 h,细胞间荧光传递最强的作用时间是4 h?在生长融合细胞组(有GJ形成),黄芩素可以提高顺铂对HeLa32细胞的细胞毒性?在生长未融合细胞(无GJ形成),或用GJ抑制剂oleamide阻断GJ功能,黄芩素不改变顺铂对细胞的杀伤作用?多西环素调控HeLa32细胞Cx32的表达与GJ的形成?在生长融合细胞,不表达Cx32(无GJ形成),可以降低黄芩素增强顺铂细胞毒性的作用?在生长未融合细胞(无论Cx表达与否,均无GJ形成),改变Cx表达无此效应?黄芩素0.0125 ~ 0.1 μmol/L 作用细胞4 h,对Cx32蛋白表达没有影响?黄芩素0.1 μmol/L,作用细胞4 h,12 h,和24 h,对Cx32蛋白表达没有影响?【结论】黄芩素可增强HeLa32细胞GJ功能,提高顺铂的细胞毒性?黄芩素影响Cx32组成的GJ功能不伴有Cx32蛋白表达的增加?     

缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响

目的观察宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响。方法采用荧光示踪实验检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物(油酸酰胺,维甲酸)对其功能的影响;采用标准细胞集落形成分析法检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞生长抑制作用的影响;采用Hoechst33258荧光染色检测缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞诱导凋亡作用的影响。结果荧光示踪实验结果显示油酸酰胺可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强该功能;标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷的细胞生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色结果显示,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞的诱导凋亡作用,而维甲酸则增强依托泊苷的诱导凋亡作用。结论宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能降低,依托泊苷的抗肿瘤作用下降;而当通讯功能增强时,其抗肿瘤作用则增加。     

缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响

摘要：目的观察宫颈癌Hela 细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32 对依托泊苷抗肿瘤作用的影响。方法采用荧光示踪实验检测
Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物（油酸酰胺,维甲酸）对其功能的影响;采用标准细胞集落形成分析
法检测Hela 细胞中由Cx26/Cx32 形成的缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela 细胞生长抑制作用的影响;采用Hoechst
33258荧光染色检测缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞诱导凋亡作用的影响。结果荧光示踪实验结果显示油酸
酰胺可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强该功能;标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的Hela细胞
中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷的细胞生长抑制作用;Hoechst 33258荧
光染色结果显示,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞的诱导凋亡作用,而维甲酸则增强依
托泊苷的诱导凋亡作用。结论宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能降低,依托泊苷的抗肿瘤
作用下降;而当通讯功能增强时,其抗肿瘤作用则增加。
     

木犀草素对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究木犀草素对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响.方法木犀草素按0.04、0.02和0.01g/(mL·d)给小鼠连续灌胃7d后,进行碳粒廓清试验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验并测定和计算血清溶菌酶活力及胸腺指数、脾脏指数.结果木犀草素对小鼠的胸腺指数及脾脏指数无明显影响.与对照组相比,木犀草素高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数、碳粒廓清速率和廓清指数及体内溶菌酶活力明显降低,而低剂量和中剂量木犀草素组则无显著差别.结论木犀草素可降低小鼠巨噬细胞的吞噬功能及体内溶菌酶活力,具有一定的免疫调节作用.     

木犀草素治疗慢性气管炎患者细胞免疫功能的变化

以植物血凝素(PHA)皮试及体外淋巴细胞转化两种方法观察木犀草素治疗64例慢性支气管炎前后,患者细胞免疫功能的变化。患者治疗前PHA皮试平均红斑直径,淋巴细胞转化3H—TdR掺入量cpm值及RI值均较健康对照(50例)者低(P<0.01及P<0.05)。男女病人性别之间差异无显著性。治疗后大部分病人细胞免疫功能有所提高。     

木犀草素对肿瘤作用的研究进展

木犀草素(luteolin)是由木犀草中分离出而得名,是一种天然黄酮类化合物,存在于锦葵科、菊科、唇形科、马鞭草科、伞形科、天南星科、十字花科、萝藦科等。木犀草素具有抗炎,抗细菌,抗氧化,抗癌等药     

左旋炔诺孕酮对人子宫内膜细胞体外增殖及细胞间通讯的影响

 【目的】探讨左旋炔诺孕酮对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞增殖、间隙连接细胞间通讯（gap iunction intercellular communication，GJIC）及连接蛋白（connexin，Cx）43、32表达的影响。【方法】采用MTT法观察LNG对人子宫内膜细胞的增殖调节作用，采用划痕染料标记示踪技术，观察左旋炔诺酮（1evonorgestrel，LNG）对原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞及问质细胞GJIC的影响，采用激光共聚焦显微镜扫描技术，观察LNG对Cx43、Cx32表达的影响。【结果】LNG浓度为5×10^-5 mol／L时，对子宫内膜间质和上皮细胞均有抑制生长作用（P〈0．05），体外培养的人子宫内膜问质细胞的GJIC功能较腺上皮细胞强（P〈0．05），LNG可显著提高人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间荧光黄染料的扩散（P〈0．05）；同种Cx腺上皮细胞表达较间质细胞强（P〈0．05），LNG对两种细胞Cx的表达没有影响（P〉0．05）。【结论】LNG可抑制人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞体外增殖，显著促进细胞GJIC功能，提示其在逆转子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色；LNG未影响子宫内膜细胞Cx43、Cx32的表达，提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能。     

雌二醇及雌酮对人子宫内膜细胞GJIC及连接蛋白的影响

【目的】 探讨雌二醇(E2)及雌酮(E1)对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)及连接蛋白(Cx)43?32表达的影响?【方法】 采用划痕染料标记示踪技术及激光共聚焦显微镜扫描技术(LSCM),观察E2及E1对原代培养的20例人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察E2及E1对Cx 43?Cx 32表达的影响?【结果】 5 × 10-5 mol/L雌二醇作用48 h后间质细胞及腺上皮细胞GJIC功能没有明显变化(P > 0.05),2.5 × 10-5 mol/L雌酮作用间质及腺上皮细胞48 h后,细胞GJIC功能有所下降(P 0.05)?【结论】 E1抑制细胞GJIC功能,提示其在子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;E1及E2均未影响子宫内膜细胞Cx43?Cx32的表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能?     

三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖肝脏CX/GJIC的影响

目的研究三七总皂甙（Panax notoginoside，PNS）对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏缝隙连接蛋白（connexin，CX）表达及其介导的缝隙连接细胞间通讯（gap junction intercellular communication，GJIC）的影响。方法选择体重150g左右的雄性Wistar大鼠，随机分为对照组、模型组和PNS组。采用2-AAF／PH方法（2-acetylamin-ofluorene＋two thirds partial hepatectomy）建立肝卵圆细胞增殖模型，切开标记／染料示踪技术（incision loading／dye transfer，IL／DT）检测肝脏GJIC，免疫组织化学法检测CX32、43的表达和计数肝卵圆细胞，并观察PNS腹内注射后的表达变化。结果（1）对照组未见肝卵圆细胞，PNS组、模型组肝卵圆细胞增殖明显；PNS组与模型组相比，卵圆细胞增殖高峰低、持续时间长。（2）各组CX32和GJIC的表达：模型组与PNS组均低于对照组，表达峰呈先下调后逐渐恢复趋势，PNS组高于模型组。（3）各组CX43的表达：模型组与PNS组均高于对照组，表达峰呈先升高后逐渐恢复与肝卵圆细胞的增殖趋势一致，PNS组与模型组相比表达高峰滞后。结论2-AAF／PH是理想的肝卵圆细胞增殖模型；CX32和GJIC的下调可动员肝卵圆细胞，CX43可促进其增殖，CX／GJIC对肝卵圆细胞增殖有重要的调控作用；PNS可通过影响CX／GJIC的表达，调节肝卵圆细胞的增殖过程。     

高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯的影响

[目的]研究高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞通讯活性(GJIC)的影响.[方法]将人晶状体上皮细胞(SRA01/04)培养于正常葡萄糖浓度(5.5 mmol/L),传代时将其接种于16个35 mm的培养皿中,实验分为4组(每组4个培养皿):正常糖浓度组(培养基葡萄糖含量是5.5 mmol/L)、高糖组(培养基葡萄糖含量是30 mmol/L)、佛波酯(TPA)组(阳性对照)及二甲基亚砜(DMSO)组(阴性对照).当细胞生长至90%融合时,用划痕荧光染料示踪技术(SL/DT)检测其缝隙连接细胞间通讯活性.[结果]在高糖培养的人晶状体上皮细胞划痕荧光黄向两侧传递的细胞列数为2.23±0.33,明显少于正常糖浓度培养的人晶状体上皮细胞(3.75±0.57,P＜0.01).TPA显著抑制晶状体上皮细胞的GJIC,与正常糖浓度组比较差异具有显著性(1.65±0.26vs3.75±0.57,P＜0.01).[结论]人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯活性在高糖中受到抑制,可能在糖尿病晶状体渗透水肿和离子代谢紊乱中发挥作用.     

bFGF影响大鼠成骨样细胞ROS17/2.8连接蛋白43的表达

目的　研究大鼠成骨样细胞 ROS17/ 2 .8上连接蛋白 Cx43的表达及定量检测 b FGF对 Cx43表达的影响 .方法　应用特应性 m Ab、免疫组织化学染色法在光镜水平观察RSO17/ 2 .8细胞上的 Cx43表达 ,用激光共聚焦显微镜进行荧光标记观察和定量检测 b FGF以 10 ,2 0和 40 μg· L- 1不同浓度分别处理 ROS17/ 2 .8细胞 ,激光共聚焦显微镜检测在1,2 ,6 ,12和 2 4h时的 Cx43荧光强度 ,得出强度与时间、剂量依赖曲线图 .结果　光镜下和激光共聚焦显微镜下均见Cx43在细胞膜表面有阳性表达 ,经 b FGF处理后 ,细胞 Cx43的表达有所增强 ,以 2 0 μg·L- 1浓度时 Cx43强度最高 ;从时间看 ,6 h时 Cx43强度最大 .结论　 Cx43是成骨样细胞ROS17/ 2 .8的主要表达的连接蛋白 ,其主要表达在细胞膜区域 .b FGF对 Cx43表达有时间、剂量依赖性影响     

全反式维甲酸对胶质瘤细胞细胞间缝隙连接通讯的作用

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对胶质瘤细胞细胞间缝隙连接通讯（GJIC）的调节作用。方法：分别用1,10,100umol/L三种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,24,48及72h后,通过细胞间染料传输实验检测缝隙连接功能,以半定量RT－PCR检测ATRA作用下C6胶质瘤细胞Cx43基因的转录。结果：对照组C6胶质瘤细胞GJIC功能很低,经1,10,100umol/L三种浓度的ATRA作用后,增强了GJIC。这种增强作用在ATRA作用24h后即十分明显,在1,10umol/L两种浓度下,ATRA对GJIC的增强作用可以持续到ATRA作用72h后,而经100umol/L的ATRA作用48h后,GJIC功能的增强则不如低浓度ATRA作用下明显,结论：对于C6胶质瘤细胞,ATRA是有效的GJIC功能增强剂,此种增强作用可能是通过转录后途径实现的。