斑驳病的一种新的KIT基因突变

目的 研究1个斑驳病家系先证者及其母亲的基因突变情况。方法 经组织病理、电镜检查结合典型的临床特征确立斑驳病的诊断。采用聚合酶链反应及DNA直接测序的方法对1个斑驳病家系进行基因突变检测。结果 家系中先证者存在KIT基因第1833位G〉A，导致V6041。100名健康对照者及其它家庭成员不存在此突变。结论 V6041是引起该家系临床表型的原因。     

中国南方斑驳病一家系的一种新的KIT基因突变

目的研究1个斑驳病家系的基因突变情况。方法经组织病理、电镜检查结合典型的临床特征确立斑驳病的诊断。采用聚合酶链反应及DNA直接测序的方法对此家系进行基因突变检测。结果家系中先证者存在K／T基因第2528位G→A（或C→T），使密码子AGT〉AAT，导致A850N。100名健康对照组不存在此突变。结论S850N可能是引起该家系临床表型的原因。     

斑驳病1家系临床及致病基因检测研究

目的 研究中国汉族1斑驳病家系临床表现及其致病基因突变。方法 收集1斑驳病家系2代3个体的临床信息和外周血,提取样本外周血基因组DNA。对家系其中1个患者的基因组DNA进行全外显子组捕获并进行高通量测序,对候选变异位点在家系样本DNA中进行Sanger测序验证。结果 先证者自出生起额头出现一白斑,横跨发际线,白斑处头发为白发。左小腿少量白斑,右小腿多处白斑。全外显子组测序和Sanger测序验证发现IV2患者KIT c.2424T>G (p.Ile808Met)突变。此为一新突变位点,目前文献及数据库未见报道。结论 1个KIT基因新突变位点导致斑驳病家系。     

人类斑驳病分子机制

人类斑驳病是一种黑色素细胞发育障碍的常染色体显性遗传病 ,其特征是皮肤、毛发的先天性色素减少性斑块 ,主要发生于发部、前额、胸腹和四肢 ,斑块内黑素细胞缺失。斑驳病是由原癌 c- kit基因的突变引起 ,此基因编码一种胚胎时期生长因子 (steel factor)的细胞表面跨膜受体 ,这种受体具有酪氨酸激酶的作用。已经识别出引起斑驳病的 c- kit基因的多种突变 ,这些突变和临床表型之间具有阶梯状的联系 ,对这些联系的研究反过来又加深了对斑驳病发病机制的了解     

三个Fabry病家系GLA基因突变与临床表型

目的 分析3个Fabry病家系GLA基因突变及其与临床表型的关系.方法 应用PCR结合DNA测序技术,检测先证者及相关成员GLA基因编码序列与剪切位点DNA序列变异,分析致病性突变与临床表型关系.结果 在家系1先证者GLA基因第5外显子中发现1个未经报道的错义突变c.797A＞C(D266A),家系2先证者GLA基因第5外显子中发现1个错义突变c.644A＞G(N215S),家系3先证者GLA基因第2外显子中发现1个无义突变c.355C＞T(Ql19X).家系1与家系3先证者主要表现为皮肤损害和慢性肾功能不全,家系2先证者临床则以肥厚性心肌病为特点.结论 首次发现的GLA基因c.797A＞C(D266A)突变是第266位密码子第6个被证实的错义突变,已报道的另5种突变均有致病性,在正常非相关对照中未发现该突变,提示GLA基因c.797A＞C突变很可能是该家系的致病原因.N215S和Q119X系首次发现于中国Fabry病家系的突变.GLA基因不同位点的突变具有较为显著的表型差异.     

两例Menkes病家系的临床表型及基因突变分析

目的 探讨2例Menkes病(Menkes disease,MD)患儿家系的临床表型及致病基因突变,明确病因.方法 收集患者临床资料,提取2例家系中患儿及其父母的基因组DNA,并对两家系中先证者进行全外显子组测序(whole exome sequencing,WES),对候选致病突变进行生物信息学分析,并利用Sange...     

一个家族性腺瘤性息肉病家系同时出现的和基因突变CSCD

目的探讨一个家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis, FAP)家系APC和MLH1基因的突变情况。方法通过临床表现、家族史及组织病理学等诊断1例FAP女性患者。患者两年后出现子宫内膜上皮内瘤变(endometrial intraepithelial neoplasia, EIN),而后者是Ⅱ型Lynch综合征的病变之一。提取患者及其家系成员的外周血DNA,采用Sanger测序的方法筛查APC和MLH1基因突变。结果该家系同时存在APC基因第7外显子的杂合性突变c.637C>T(p.R213X)和MLH1基因第12外显子的杂合性突变c.1153C>T(p.R385C)。两种突变同时出现的情况既往未见报道。前者突变造成终止密码子提前出现,后者突变了造成氨基酸的改变。结论同时出现的APC基因c.637C>T(p.R213X)和MLH1基因c.1153C>T(p.R385C)突变是该家系的致病性突变,其出现临床表现的年龄较晚,且严重程度存在差异。对于FAP患者,应询问其家族史并对APC基因进行突变筛查,同时关注其是否存在肠外病变。对于出现子宫内膜病变的患者,可进行MMR基因的筛查,以确定是否同时存在Lynch综合征。     

一个Charcot-Marie-Tooth病家系的分子遗传学分析

目的 鉴定一个Charcot-Marie-Tooth病(CMT)家系的致病突变.方法 根据家族史、临床表现和肌电图检查结果判断家系CMT分型.采集16名家系成员外周血,提取基因组DNA.针对CMT1的6个亚型,选择微卫星标记进行连锁分析.针对PMP22基因重复突变,采用实时定量PCR检测家系成员.结果 本家系疾病呈常染色体显性遗传.患者均有青少年发病、缓慢进展的下肢无力症状.部分患者经查体发现下肢腱反射减弱、痛触觉减弱,下肢神经传导速度均小于30 m/s,提示为CMT1型.通过连锁分析排除了CMT1A、CMT1E以外的其他4个亚型,证实患者基因组内PMP22基因存在重复突变.结论 此家系患者表型为CMT1A,其致病突变为染色体17p11.2区域内PMP22基因的重复.     

Kennedy病家系的临床及分子遗传学研究

目的 对Kennedy病家系进行临床表型和雄激素受体(androgen receptor,AR)基因突变分析.方法 收集Kennedy病家系2例患者和6例家系成员,对先证者进行神经系统查体,常规检测神经电生理、肌电图、血清肌酸激酶(creatine kinase,CK).抽取8例样本的外周静脉血,提取基因组DNA,PCR扩增AR基因第1号外显子中的CAG重复片段,PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳,男性样本进行DNA直接测序.通过毛细胞电泳片段分析技术明确患者及家系成员AR基因第1外显子CAG序列的重复数.结果 2例患者肌电图均显示感觉、运动神经受累及,血清CK均增高,经AR基因CAG重复序列分析,2例患者(Ⅲ1和Ⅲ3)CAG的重复数分别为58次和54次,并检出了4例女性携带者(Ⅱ1、Ⅱ3、Ⅲ5和Ⅳ1),Ⅱ1携带者CAG的重复数为22/58次,Ⅱ3携带者CAG的重复数为22/54次,Ⅲ5携带者CAG的重复数为24/54次,Ⅳ5携带者CAG的重复数为20/61次,2例表型正常男性成员的CAG的重复数均为24次.结论 CAG重复在本家系中存在不稳定遗传.基因诊断可作为Kennedy病诊断的可靠依据.Kennedy病患者进行AR基因突变检测可帮助家系成员进行遗传咨询,对该病的治疗和预防有重要意义.     

一个表皮松解性掌跖角化病家系的KRT9基因突变分析

目的明确一个伴随有类似关节指垫样病损和指甲病变的表皮松解性掌跖角化病的中国家系中角蛋白9(keratin9,KRT9)基因突变情况。方法用聚合酶链反应技术扩增家系成员及家系外50名正常人KRT9基因的编码区及外显子与内含子交界处,DNA序列分析寻找突变位点,然后经限制性内切酶Dde分析验证。结果患者KRT9基因第1外显子第160位密码子发生AAT→AGT的突变(N160S),而家系正常成员及家系外50个正常人中均不存在此突变。结论KRT9基因的第1外显子第160位密码子发生AAT→AGT突变(N160S)导致该家系患者发生表皮松解性掌跖角化病。     

两个新RUNX2基因突变引起家族性锁骨颅骨发育不全

目的 探讨RUNX2基因突变在锁骨颅骨发育不全病因研究中的意义及两个中国家族性锁骨颅骨发育不全家系发病的分子机制.方法 提取收集到的2个锁骨颅骨发育不全家系中4例患者和4名家系健康成员、102名无关正常对照外周血基因组DNA,应用PCR扩增产物双向直接测序方法 检测RUNX2基因第1～7外显子及相邻侧翼区的DNA序列,测序结果 与RUNX2基因正常序列对比分析.对发现的突变位点用酶切方法 证实.结果 测序结果 发现一家系中两例父子患者的RUNX2基因第1外显子发生错义突变c.346T＞A(W116R),该错义突变通过Bsr Ⅰ限制性内切酶对PCR扩增产物行酶切分析得到进一步确认.另一家系中两例患者的RUNX2基因第3外显子发生无义突变c.610A＞T(K204X).在两个家系中的正常家系成员和无关正常对照RUNX2基因DNA序列中没有发现上述突变.结论 通过RUNX2基因,检测在中国人群中发现两个RUNX2基因新致病突变,扩展了遗传性锁骨颅骨发育不全的基因突变谱,对阐明该病发病机制及其基因诊断和遗传咨询有重要意义.     

KIT amplification and gene mutations in acral/mucosal melanoma in Korea

Mucosal and acral melanomas have demonstrated different genetic alterations and biological behavior compared with more common cutaneous melanomas. It was recently reported that gain-of-function KIT mutations and/or copy number increases are more common in mucosal and acral melanomas. Thus, we studied the frequency and pattern of KIT aberrations in mucosal and acral melanomas in Korea. We analyzed 97 patients who were pathologically confirmed with mucosal or acral melanoma between 1997 and 2010 at Samsung Medical Center. Of the 97 melanoma patients, 92 were screened for mutations in KIT exons 11, 13, 17, and 18, BRAF and NRAS genes. KIT copy number was assessed by quantitative, real-time PCR. Of the 97 patients, 55 (56.7%) were mucosal, 40 (41.2%) were acral melanoma, and two were of unknown primary origin. Among seven cases with KIT mutation, five (60.0%) occurred in exon 11, one (20.0%) in exon 17, and one (20.0%) in exon 13. Point mutations were the most common, resulting in substitutions in exon 11 (K558R, T574A, L576P, and V559A), exon 13 (N655K), and exon 17 (N822K). A novel Thr574Ala (c.1720A>G) KIT mutation, which has not been reported in melanoma or other tumor types, was identified in one genital melanoma case. Of the 97 mucosal or acral melanoma specimens, 49 were tested for KIT gene copy number changes using quantitative PCR. Increased KIT copy number was identified in 15 patients: seven (40%) of 20 acral melanomas and eight (31%) of 26 mucosal melanomas. Our study implicates that a significant proportion of acral and mucosal melanomas have KIT mutations in Asian population.     

Identification of two novel mutations in the OCRLI gene in Japanese families with Lowe syndrome

Kubota T, Sakurai A, Arakawa K, Shimazu M, Wakui K, Furihata K, Fukushima Y. Identification of two novel mutations in the OCRL1 gene in Japanese families with Lowe syndrome. Clin Genet 1998: 54: 199–202. 0 Munksgaard, 1998
The oculocerebrorenal syndrome of Lowe (OCRL) is a rare X-linked disorder with features of congenital cataracts. Fanconi syndrome of the renal tubule, and mental retardation. The OCRLI gene has been positionally cloned and shown to encode a phosphatidylinositol 4.5–biphos-phate-5–phosphatase. OCRL is thus thought to be an inborn error of inositol polyphosphate metabolism. We analyzed the gene in two Japanese OCRL patients and their families by DNA sequencing and mismatch polymerase chain reaction (PCR) followed by restriction digestion. A novel nonsense mutation (C1399T) replacing the glutamine of codon 391 (Gln 391 Stop) was identified in exon 12 in 1 patient and also in his mother. A novel missense mutation (C1743G) was identified in exon 15 in the second patient, his mother and maternal grandmother. The missense mutation predicts a substitution of serine for arginine (Ser 505 Arg) in a domain highly conserved among the inosi-tol-5–phosphatase family. Our observations expand the range of OCRLI mutations that cause Lowe syndrome. and will be useful for genetic counseling in these two Fdmilies.     

Deletion of the KIT and PDGFRA genes in a patient with piebaldism

We have previously shown that human piebaldism results from mutations of the KIT gene, which encodes the receptor for the mast/stem cell growth factor and is located in chromosome segment 4q12. Using DNA of a patient with piebaldism, mental retardation, and multiple congenital anomalies associated with a 46,XY,del(4) (q12q21.1) karyotype, we carried out quantitative Southern blot hybridization analyses of the KIT gene and the adjacent PDGFRA (platelet-derived growth factor receptor α subunit) genes. The patient was hemizygous for both the KIT and PDGFRA genes, indicating that both of these genes are included within the deleted region. Therefore, deletion of the KIT and PDGFRA genes may account for the piebald phenotype in this patient.© Wiley-Liss, Inc.     

GLA基因的新突变出现在两个典型Fabry家系

目的 报告2个Fabry家系的GLA基因突变特点。方法 2个经临床和病理检查证实的Fabry家系，家系1中连续3代有12人发病，均表现为发作性肢体疼痛；家系2中连续5代有8人发病，多数患者在经末期出现显著的多器官损害表现。对2个家系中的先证者和部分亲属进行PCR扩增其GLA基因的所有7个外显子包括侧翼序列，对PCR产物直接测序。结果 先证者1的GLA基因第1外显子G132T（TGG→TGT）突变，造成W44C替换；先证者2的第6外显子G874C（GCT→CCT），造成A292P替换。两个先证者的母亲都有同其儿子一样的突变，且均为杂合性。结论 经文献检索，两个Fabry家系各存在一个新的GLA基因点突变。同一基因的不同位点的突变导致的临床表现存在很大的差异。由于女性患者和男性一样出现症状，推测这可能是等位基因随机失活导致的显性遗传表现。     

100例视网膜色素变性患者中视紫红质基因突变的筛选与检测

目的 研究视紫红质（rhodopsin,RHO）基因在中国人视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP）患者中的突变频率，特征及其在RP发病机理中的作用。方法 运用构象敏感凝胶电泳和DNA直接测序方法对100例香港地区中国RP中层得RHO基因全编码区进行突变的筛选与检测。结果 共发现种碱基变异，其中3种为沉默型突变，两种为错义突变，1种为缺失突变。P347L在1例55岁女性患者及其同样患RP的3名子女 中检出。327（1－bp del）首次在1例53岁的晚发型RP患者中发现。其26岁的女儿同样携带该突变，但目前除眼底色素上皮出现斑点外，还没有RP的任何症状。上述两种突变均未在对照组中发现。结论 100例RP患者中检出两例携带RHO基因突变，由此可预测香港地区约为2．0％（95％的可信区间为0．2％－7．0％）的RP是由RHO基因突变所致。P347L突变改变了RHO基因C末端一段高度保守的氨基酸序列，致使视紫红质蛋白在细胞P内的运输发生障碍。P327（1 bp del）使突变蛋白的羧基末端失去了原有的磷酸化位点及一段高度保守的功能区，其可能的致病机理有待在今后的研究中通过建立相应的转基因模型或细胞培养系统来阐明。     

中国人WD基因第14和18号外显子的错义突变

目的了解中国人肝豆状核变性（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）基因第１４和１８号外显子的突变情况,与国外报道的这两个外显子的高突变频率进行比较。方法应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合ＤＮＡ测序技术,对４４例无亲缘关系的ＷＤ患者及６０例正常对照进行突变检测。结果一例患者在１４号外显子发生了Ａｒｇ１０４１Ｐｒｏ（３１２１Ｇ→Ｃ）纯合错义突变,另一例患者在１８号外显子发生了Ａｓｎ１２７０Ｓｅｒ（３８０９Ａ→Ｇ）杂合错义突变。结论Ａｒｇ１０４１Ｐｒｏ为未报道过的新型错义突变,Ａｓｎ１２７０Ｓｅｒ突变与国外报道一致。但均未呈热区分布。