体外碱性成纤维细胞生长因子聚乳酸纳米缓释微球对人脂肪干细胞增殖和成脂分化的影响

目的 体外观察碱性成纤维细胞生长因子(basie fibroblast growth factor,bFGF)聚乳酸纳米缓释微球对人脂肪干细胞增殖和成脂分化的影响,为bFGF缓释微球应用于脂肪组织工程的研究提供理论依据.方法 体外分离培养脂肪干细胞,并行多向诱导分化鉴定.配制含有0、1、2、3、4、5 mg/ml bFGF聚乳酸缓释微球的脂肪干细胞培养液及成脂分化诱导液.将脂肪干细胞接种至96孔板,第2天更换含不同浓度hFGF缓释微球的培养液和成脂诱导液,分别用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)和油红O定量检测法定期检测细胞增殖和成脂分化的情况.所得数据均用SPSS13.0软件进行统计学处理.结果 bFGF聚乳酸缓释微球有明显促进脂肪干细胞增殖和成脂分化的作用.增殖实验和成脂诱导实验合适的作用浓度分别为3 mg/ml和4 mg/ml.结论 bFGF聚乳酸纳米缓释微球体外可以明显促进脂肪下细胞的增殖和成脂分化,可作为一种较理想的细胞因子缓释系统应用于脂肪组织工程的研究.     

Choukroun’SPRF对体外培养人脂肪干细胞增殖及成骨分化的影响

目的：观察自体富血小板纤维蛋白Choukroun＇s PRF（Choukroun＇s platelct-rich fibrin）对体外培养人脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）增殖及成骨分化能力的影响。方法：取吸脂术者自愿捐献的脂肪组织分离培养ADSCs,采用Choukroun法制备自体PRF备用,观察细胞生长情况。取第3代ADSCs分别向骨细胞、脂肪细胞、神经球细胞定向诱导分化鉴定,并行细胞表面抗原CD29、CD45、CD90流式检测鉴定。将第3代ADSCs分别采用含PRF的普通培养基（PRF组Ⅰ）和不含PRF的普通培养基（对照组Ⅰ）进行培养,观察细胞生长情况,培养1天、3天、5天、7天后采用CCK-8试剂检测细胞增殖活性。另外分别采用含PRF的成骨诱导培养基（PRF组Ⅱ）、不含PRF的成骨诱导培养基（对照组Ⅱ）及不合PRF的普通培养基（空白组）进行培养,第7天、14天、21天、28天行碱性磷酸酶活性（ALP活性）检测;诱导细胞培养后第7天、14天天各组分别行von Kossa染色观察钙结节形成情况。结果：第3代ADSCs倒置显微镜下观察大多呈梭形,向骨细胞、脂肪细胞、神经干细胞定向诱导鉴定均为阳性,流式检测鉴定CD29、CD90为阳性,CD45为阴性。CCK-8法示PRF组Ⅰ的0D值均大于对照组Ⅰ,两组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。ALP活性检测示PRF组Ⅱ第7天、14天、21天、28天细胞活性较对照组Ⅱ均大,两组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。PRF组Ⅱ成骨诱导7天后vonKossa染色阳性;14天后阳性细胞增多,对照组Ⅱ诱导7天未见钙结节,14天见少量阳性钙结节,空白组培养14天未见黑色钙结节。结论：Choukroun’sPRF明显促进脂肪干细胞增殖及成骨分化,为骨组织工程提供了新的技术。PRF与干细胞共同培养可能还有许多潜在的临床及生物工程应用价值,值得进一步研究。     

自体PRP促进人脂肪来源干细胞成骨分化的体外实验研究

目的 探讨自体PRP对体外培养人脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖及成骨分化的影响.方法 取自愿捐献吸脂术获取的脂肪组织进行分离培养ADSCs,倒置显微镜下观察细胞生长情况.将第3代ADSCs分别行成脂、成软骨定向诱导培养鉴定,并行CD29及CD44免疫荧光染色观察.取第3代ADSCs分别采用含10 mL/L PRP的成骨诱导培养基(PRP组)和不含PRP的成骨诱导培养基(对照组)进行培养,倒置显微镜观察细胞生长情况,培养后1、2、3、4、5 d采用MTT法检测细胞增殖活性;7、14、21、28 d行ALP活性检测,另取培养7、14 d的PRP组细胞行ALP染色观察;14 d时行PRP组茜素红染色检测钙结节形成情况.结果 倒置显微镜下第3代ADSCs多为梭形,倍增时间约35 h.成脂及成软骨诱导鉴定均为阳性,免疫荧光染色CD29和CD44呈阳性.MTT法示PRP组1、2、3、4、5 d的吸光度值分别为0.137±0.015、0.219±0.023、0.367±0.031、0.586±0.039、0.948±0.046,对照组分别为0.081±0.009、0.115±0.012、0.162±0.017、0.242±0.025、0.356±0.032,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).成骨诱导7 d后,PRP组ALP染色阳性,细胞胞浆呈灰黑色,可见黑色沉淀:14 d后阳性细胞增多.ALP活性检测示PRP组7、14、21、28 d细胞活性值分别为23.96±2.05、41.26±3.38、38.12±3.03、35.89±2.24,对照组分别为17.83±1.62、26.64±2.37、23.85±1.99、20.78±1.81,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).成骨诱导14 d后,茜索红染色示PRP组钙结节形成.结论 体外培养时,自体PRP可促进人ADSCs的增殖并诱导成骨分化,为骨组织工程提供一种新的种子细胞来源.     

去分化脂肪细胞与脂肪来源干细胞成脂分化能力的比较研究

目的种子细胞是组织工程研究热点,研究具有高成脂分化能力、可应用于脂肪组织工程的种子细胞,以提高组织工程脂肪的构建效率。方法取自愿捐赠的吸脂术脂肪组织采用胶原酶消化后,提取成熟脂肪细胞(mature adipocytes,MA)及脂肪来源干细胞(adipose-derived stromal cells,ADSCs);天花板贴壁培养法诱导MA去分化,获得去分化脂肪细胞(dedifferentiated adipocytes,DA)。取第4代DA和ADSCs行成脂诱导培养,采用倒置相差显微镜观察、油红O染色分光光度计法及细胞计数法比较DA、ADSCs成脂分化能力。结果 MA在体外培养环境下能去分化为成纤维细胞状DA。成脂诱导培养14d内,倒置相差显微镜下观察显示DA脂滴聚集能力显著大于ADSCs。油红O染色分光光度计法显示DA在诱导培养4d后出现显著性脂滴聚集,ADSCs 10d时才出现显著性脂滴聚集;诱导12d后DA的吸光度值大于ADSCs,差异有统计学意义(P0.05)。油红O染色细胞计数法显示,DA的成脂分化率为65%±6%,ADSCs为35%±5%,差异有统计学意义(P0.05)。结论 DA成脂分化能力高于ADSCs,有望成为脂肪组织工程种子细胞。     

氯化钴预处理对大鼠脂肪干细胞成脂及增殖的影响

目的观察脂肪来源问充质干细胞（ADSCs）在经氯化钴（CoCl2）预处理的条件下,其增殖、细胞状态变化以及成脂肪化倾向。方法通过有限稀释法分离、培养SD大鼠ADSCs,取第3代ADSCs,分别向骨细胞、脂肪细胞定向诱导分化鉴定,利用流式细胞仪检测大鼠ADSCs细胞表面标志物CD29,CD34,CIM4,CIM5的表达。将ADSCs经不同浓度CoCl2干预,利用Westernblot检测缺氧诱导因子1d（HIF-101）的表达情况。同时,利用MT＇F实验来检测大鼠ADSCs在不同浓度的CoCl2下细胞增殖的改变;并且通过油红O定量检测大鼠ADSCs在经历缺氧后的成脂情况。结果第3代ADSCs在倒置显微镜下观察,大多呈梭形,经流式鉴定,大鼠ADSCs细胞表面标志物CD29、CD44表达率高,而CD34、CD45表达率低,体外诱导培养的大鼠ADSCs能够向成骨细胞和成脂细胞分化,具有较高的自我更新能力。在MTr实验中,400、200ixmol／LCoCl2组,ADSCs增值减弱;而100、50Ixmol／LCoCl2的实验组,缺氧造成的对细胞增殖和细胞毒性与空白对照组相比,没有变化（P〉0．05）。HIF-1d的表达随着培养基中的CoCl2的浓度而增加。在光镜下观察发现,随着CoCl2浓度的升高以及时间的延长,大鼠ADSCs的成脂倾向越发明显（P〈0．001）。结论ADSCs在处于体外适量的CoCl2干预情况时,其增殖并不会受到影响,并且呈显著的增强其成脂倾向。     

不同浓度地塞米松诱导脂肪干细胞成骨分化的实验研究

目的地塞米松是MSCs成骨诱导分化的基础试剂,探讨诱导脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)成骨分化过程中地塞米松的优选浓度,为进一步骨组织工程研究提供理论依据。方法 3月龄清洁级健康新西兰大白兔5只,雌雄不限,体重2～3 kg。取腹股沟区皮下脂肪4～6 mL,采用胶原酶消化离心贴壁法分离培养ADSCs,取第3代细胞进行实验。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;联合CD44、CD106免疫荧光染色和成脂诱导分化鉴定ADSCs。调整细胞密度为1×105个/mL,分别用普通培养液(A组)及含0(B组)、1×10-9(C组)、1×10-8(D组)、1×10-7(E组)、1×10-6(F组)、1×10-5 mol/L(G组)地塞米松的成骨诱导培养液对ADSCs进行培养。MTT法检测细胞增殖情况;RT-PCR检测诱导细胞骨钙素(osteocalcin,OC)和核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)的表达;测定ALP活性及矿化面积百分率;对矿化结节行茜素红染色。结果 ADSCs形态多为梭形、多角形,呈"漩涡状"排列;表面抗原分子CD44呈阳性,CD106呈阴性,成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成,油红O染色呈阳性。MTT检测显示随地塞米松浓度升高,吸光度(A)值呈下降趋势;其中成骨诱导5、7 d时,D、E组A值比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测示,成骨诱导7 d OC和Cbfα1 mRNA的表达分别在E组和D组达高峰;成骨诱导14 d ALP活性和矿化面积百分率均在D组达高峰,随后逐渐下降。D、E组间OC和Cbfα1 mRNA的表达量、ALP活性及矿化面积百分率比较差异均无统计学意义(P>0.05),与其余各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。成骨诱导14 d,G组细胞均死亡;茜素红染色除A、G组外均呈阳性。结论成骨培养液中地塞米松浓度为1×10-8 mol/L时,能在减少对细胞增殖抑制的同时,更有效地诱导ADSCs成骨分化。     

核心结合因子α1过表达促进脂肪组织来源干细胞向成骨细胞分化

目的 检测核心结合因子α1(Cbfα1)的特异性成骨作用以及脂肪组织来源干细胞的成骨分化潜能.方法 采用Cbfα1重组的腺病毒载体感染脂肪来源干细胞,通过间接免疫荧光的方法检测脂肪来源干细胞中Cbfα1的表达.Cbfα1转染脂肪组织来源干细胞后1、3、7 d利用RT-PCR检测成骨特异性基因和成脂特异性基因的表达变化.同时通过检测Cbfα1转染后7、10 d脂肪来源干细胞碱性磷酸酶活性的变化,观察Cbfα1过表达后诱导脂肪组织来源干细胞向成骨细胞分化.结果 转染后脂肪组织来源干细胞细胞数目增长一倍.在特定诱导条件下,可向成脂细胞、成骨细胞分化.Cbfα1重组的腺病毒载体对脂肪组织来源干细胞的转染效率为82.4%.转染后第1、3、7天脂肪组织来源干细胞中骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原的表达增强;脂蛋白脂酶的表达逐渐下降.转染Cbfα1后,脂肪组织来源干细胞中碱性磷酸酶活性显著增加.结论 核心结合因子过表达促进脂肪组织来源干细胞向成骨细胞分化、抑制成脂分化.     

人脂肪组织来源干细胞植入裸鼠的成脂效应

目的 探讨脂肪抽吸术液态部分获取的人脂肪组织来源干细胞(adipose tissue-derivedstem cells,ADSC)植入裸鼠的成脂效应.方法 自人体脂肪抽吸术中液体部分分离、培养和鉴定ADSC,行成脂、骨和软骨分化.植入物分三组:空支架(第1组),人ADSC接种胶原海绵(第2组),经成脂诱导的ADSC接种胶原海绵架(第3组),植入裸鼠皮下.在2和8周时,通过组织观察、HE染色和油红O染色来分析新生组织.结果 抽脂术液态部分能获取大量的ADSC,能分化成脂肪、成骨和软骨细胞.8周时,第1组植入物已降解,第2组和第3组均有脂肪组织形成,但第2组比第3组在形成体积上小、成脂效应差.结论 从脂肪抽吸术液态部分分离和培养的ADSC和胶原支架混合培养能在体内形成脂肪组织,此方法 获得的ADSC多能干细胞可作为脂肪组织工程的种子细胞.     

胰岛素样生长因子-1基因转染脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化的研究

目的 观察胰岛素样生长因子(IGF)-1基因转染的脂肪间充质干细胞(ADSCs)向软骨细胞分化的效果.方法 原代培养兔ADSCs,免疫荧光法检测细胞表面抗原CD44、CIM9;脂质体介导人IGF-1基因转染兔ADSCs联合低浓度血清培养基向软骨细胞分化诱导,RT-PCR及Western blot方法检测IGF-1的表达,MMT法绘制细胞增殖曲线、甲苯胺蓝染色软骨结节、免疫组织化学检测Ⅱ型胶原的表达.结果 脂肪间充质干细胞CD44、CD109表达阳性,基因转染后细胞IGF-1表达阳性,细胞增殖速度增快,出现软骨结节,Ⅱ型胶原表达增高.结论 从脂肪组织中能够分离出增殖旺盛的ADSCs,IGF-1在ADSCs内获得稳定表达,细胞增殖能力增强,促进其向软骨细胞分化.     

负载人骨形态发生蛋白-7基因的兔脂肪干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的 探讨人骨形态发生蛋白-7(hBMP-7)基因修饰对兔脂肪干细胞(ADSCs)成骨能力的影响. 方法 原代培养兔脂肪干细胞,免疫组织化学方法检测细胞表面抗原CD44、CD49d、CD106的表达,对细胞进行鉴定;阳离子脂质体介导hBMP-7基因转染ADSCs,绿色荧光蛋白表达观察转染效率、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测目的基因hBMP-7的表达;ALP定量测定,Western blot检测Ⅰ型胶原、骨钙素的表达,以评价转基因ADSCs向成骨细胞分化的情况. 结果 从兔脂肪组织中分离出来的ADSCs CD44、CD49d表达呈阳性,CD106表达呈阴性.RT-PCR检测筛选后的ADSCs稳定表达hBMP-7.转染后7、10、14 d ALP定量测定转染组明显高于未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);成骨标志物Ⅰ型胶原、骨钙素的表达转染组明显高于未转染组.结论 从脂肪组织中分离出的ADSCs是一种较好的组织工程种子细胞.hBMP-7重组质粒转染ADSCs后表达目的蛋白,并诱导ADSCs向成骨细胞分化.     

硝普钠阴茎海绵体内注射治疗阳萎的临床研究

本研究选择４２例阳萎患者，采用硝普钠进行阴茎海绵体注射（ＩＣＩ），并选择罂粟碱／酚妥拉明进行对照，结果表明，硝普钠ＩＣＩ后：（１）阴茎外形性状（长度、周径等）明显改变。（２）Ｖｉｒａｇ硬度计点表明硝普钠与罂粟碱／酚妥拉明效果之间无明显差别。（３）所有测试患者无一例出现低血压或局部不适等副反应，与罂粟碱／酚妥拉明相比各有优劣，但总体差异不大，这充分表明，硝普钠作为一种ＮＯ供体可导致阴茎平滑肌松弛，血窦充盈阴茎勃起，其副反应较小，有其临床应用之价值。     

糖皮质激素对肿瘤坏死因子引起的大鼠中性粒细胞粘附的影响

采用中性粒细胞（ＰＭＮ）与玻璃珠粘附和ＰＭＮ与血管内皮细胞（ＥＣ）粘附两种模型，以肿瘤坏死因子（ＴＮＦ），作为ＰＭＮ的刺激因子，研究糖皮质激素（ＧＣ）对ＴＮＦ引起的大鼠ＰＭＮ粘附的影响，同时给予糖皮质激素受体（ＧＲ）阻断剂ＲＵ３８４８６观察ＧＲ在粘附中的作用。结果发现，ＴＮＦ能明显增强大鼠ＰＭＮ的粘附（Ｐ＜０．０１）；Ｄｅｘ不能抑制经ＴＮＦ预处理的ＰＭＮ的粘附（Ｐ＞０．０５），但有一定的预防作用；经ＴＮＦ预处理再同时给予Ｄｅｘ和ＲＵ３８４８６的ＰＭＮ粘附同样明显增强（Ｐ＜０．０１）。     

中医骨伤科学的现代化是可持续发展的必由之路

21世纪，现代科学和现代医学高速发展，中医面临着机遇与挑战。随着人类对健康需求的不断增强和深化，中医已成为世界范围内医学发展关注的热点。而在国内，随着经济体制和社会保障改革的深化，中医产业化也被纳入到国家经济发展规划当中，可以说，新世纪中医飞速发展的大气候已经形成。当前乃至今后，中医的发展必将是国际化的。中医骨伤科学是中医学中一个颇具特色和优势的分支，其发展也必将是国际化的。     

Braun吻合对胰十二指肠切除术后并发症影响的Meta分析

目的系统评价Braun吻合(BEE)对胰十二指肠切除术(PD)术后并发症的影响,重点分析对术后胃排空障碍(DGE)的影响,以探讨BEE的价值和意义,为临床应用提供循证医学方面的客观依据。方法计算机检索Cochrane Library、Pub Med、Embase、Web of Science、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国期刊全文数据库(CNKI)、维普和万方数据库关于BEE的相关文献,检索时间均从建库至2016年3月。按Cochrane系统评价的方法评价纳入研究的质量,使用Rev Man 5.3软件对研究资料进行统计分析。结果共纳入10篇文献,总计1544例患者。Meta分析结果显示:所有纳入文献中BEE组术后总并发症发生率(OR=0.61,95%CI=0.47~0.81,P=0.0006)和术后总DGE发生率(OR=0.36,95%CI=0.19~0.67,P=0.001)要低于非BEE组。同样,采用国际胰腺外科研究学组(ISGPS)标准的8篇文献中,BEE组总DGE发生率(OR=0.36,95%CI=0.18~0.72,P=0.004),B级DGE发生率(OR=0.36,95%CI=0.11~1.17,P=0.09)和C级DGE发生率(OR=0.28,95%CI=0.16~0.48,P0.01)均要低于非BEE组。结论 Meta分析显示,BEE可以降低PD术后总并发症的发生率和DGE的发生率,尤其是可以降低C级DGE的发生率。     

Kelfiprim,a new sulpha-trimethoprim combination,versus cotrimoxazole,in the treatment of urinary tract infections: A multicentre,double-blind trial

Summary A new combination of trimethoprim with a sulphonamide, named Kelfiprim, differs from cotrimoxazole in that: a) the sulpha drug is sulphamethopyrazine instead of sulphamethoxazole; b) the trimethoprim to sulpha ratio is 5:4 instead of 1:5;c) the presence of a long-acting sulphonamide allows the administration of a daily dose of one capsule, following an initial loading dose of two capsules; d) a reduced amount of trimethoprim is given, as compared to cotrimoxazole, without any decrease of efficacy. Kelfiprim [KP] was compared to contrimoxazole [Co] in a multicentre double blind trial. Sixty four patients suffering from acute and chronic infections of the upper and lower urinary tract entered the study. Urine sterilisation and clinical improvement without relapses showed no differences from the two treatment groups. Tolerance was excellent except in two patients, one treated with KP and the other treated with Co, who showed a transient exanthema.     

An updated review on the principles of intraoperative neurophysiological monitoring and the anaesthetic considerations

It is known that any surgery to the nervous system poses risks to neural structures and their surrounding structures. These mechanisms of injury are the result of mechanical manipulations, haemodynamic alterations, chemical or thermal injuries. Intraoperative neurophysiological monitoring (IONM), using various modalities, is employed to facilitate the assessment of the functional integrity of neural structures, and it is used to provide a real-time alerting system when changes caused by surgically induced insults are detected. The primary goal of IONM is reducing the risk of postoperative neurological deficits during these surgical procedures. It is used to provide information that allows the surgeon to correct any surgical interventions that may have compromised these systems and this also in turn provides guidance on what neurological deficits to anticipate postoperatively. Apart from being utilized as an alerting system to avoid catastrophic outcomes, IONM also assists as a guidance system using stimulation techniques to map out eloquent areas within the cortex, allowing identification of specific neuronal structures, particularly when landmarks cannot be easily recognized due to infiltration by pathological lesions.In this article, we focus on updating our previous paper published in 2019 and again, to provide attention to the various neurophysiological modalities that are employed in IONM. We will look at the basic underlying physiological principles and their individual indications for use clinically. We will explain the information that each modality provides. Importantly, and the primary reason for this article, we look at the various anaesthetic agents, their effects on each neurophysiological modality and other anaesthetic considerations such as haemodynamic and temperature effects. We will also recommend the use of an alert checklist for the multidisciplinary team should an intraoperative alert be issued during surgical procedures.     

羟基脂肪酸聚酯产生菌选育

以特定方法筛得羟基脂肪酸聚酯（ＰＨＡＳ）产生株ＡＭＢ－００１，初步鉴定为产碱菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属。经紫外线与亚硝基胍诱变，变异株ＡＵＮ－３９产聚羟丁酸（ＰＨＢ）和聚羟丁戊酸共聚物（ＰＨＢＶ）的产率分别为细胞干重的３５％和４７．５％．透射电镜观察表明ＡＵＮ－３９胞内积累的ＰＨＢ粒子可充满胞内空间。