曲安奈德玻璃体腔注射对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用及机制

目的 观察曲安奈德(TA)玻璃体腔注射对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用,探讨其作用机制.方法 7日龄C57BL/6新生小鼠48只,随机分为正常对照组、单纯高氧组、TA正常组及TA高氧组,分别为6、6、18、18只.单纯高氧组及TA高氧组建立氧诱导视网膜新生血管模型.选取TA正常组及TA高氧组小鼠1只眼,玻璃体腔注射20μg/μl的TA 2 μl;对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液(BSS)作为BBS正常组和BBS高氧组.小鼠17日龄时,各组作石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色,观察并统计每张切片突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数.TA正常组、BSS正常组、TA高氧组及BSS高氧组作石蜡切片免疫组织化学染色,检测血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)及CD14的平均吸光度[A,旧称光密度(OD)]值.并行荧光实时定量聚合酶链反应(PCR),检测VEGF及SDF-1的mRNA表达.结果 正常对照组、单纯高氧组、TA正常组、BSS对照组、TA高氧组及BSS高氧组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数分别为0、675、0、0、110及688个.正常对照组较单纯高氧组明显减少,差异有统计学意义(t=30.62,P＜0.05).TA高氧组较BSS高氧组显著减少,差异有统计学意义(t=19.532,P＜0.05).TA正常组与BSS正常组VEGF、SDF-1及CD14平均A值比较,差异无统计学意义(t=0.161,0.284,0.223;P＞0.05).TA高氧组VEGF、SDF-1及CD14平均A值较BSS高氧组减少,差异有统计学意义(t=-2.264,-2.358,-4.897;P＜0.05).TA正常组与BSS正常组VEGF及SDF-1 mRNA表达比较,差异无统计学意义(t=-0.497,-0.709;P＜0.05).TA高氧组与BSS高氧组VEGF及SDF-1 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(Z=-5.137,-4.411;P＜0.05).结论 玻璃体腔注射TA能有效抑制氧诱导视网膜新生血管形成,其抑制作用可能是通过降低VEGF及SDF-1的表达而实现.     

高压氧抑制外伤性角膜血管新生的实验研究

目的 探讨高压氧对化学烧伤所致角膜血管新生（corneal neovascularization,CNV）的影响。方法 实验组与对照组各26只鼠（52眼），用硝酸银灼伤双眼角膜，实验组行高压氧治疗。伤后不同时期定量检测角膜中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth,VEGF）的积分光密度（integration optic density,IOD），计数血管内皮细胞标记指数（labeling index,LI）；伤后第7天用血管灌注、计算机图象分析测定CNV面积百分比。结果 第7天实验组CNV显著少于对照组（P＜0．01）；伤后两组角膜VEGF的IOD与血管皮细胞LI呈明显的平行关系，实验组各值均低于对照组对应值（P＜0．01或P＜0．05）。结论 高压氧治疗能降低角膜VEGF蛋白水平和血管细胞增殖水平，抑制CNV形成。     

VEGF在鼠角膜化学烧伤后新生血管生成中的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)在鼠角膜化学烧伤后新生血管生成中的作用。方法：制作角膜化学烧伤动物模型，伤后7天内每天用免疫组化及图象分析检测鼠角膜中VEGF的积分光密度，有放射自显影检测角膜血管内皮细胞标记指数（labeling index)，结果：化学烧伤后鼠角膜内VEGF积分光密度与血管内皮细胞标记指数呈明显的平行关系，均在伤后第1天即明显升高，第2天峰值，第3天开始回落，第7天接近基线水平。结论：化学烧伤后鼠角膜内VEGF蛋白水平与血管内皮细胞增生呈平行关系，VEGF与角膜新生血管生成有时间上的相关性，并在其中发挥重要作用。     

雷帕霉素脂质体滴眼液对大鼠角膜新生血管抑制作用的研究

目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对大鼠角膜新生血管(CNV)的抑制作用及其机制.方法 采用成组设计法,将102只健康Wistar大鼠按随机数字法分为正常对照组(A组,6只)、碱烧伤空白对照组(B组,24只)、碱烧伤空白脂质体对照组(C组,24只)、碱烧伤RAPA脂质体治疗组(D组,24只),碱烧伤RAPA豆油治疗组(E组,24只),除正常对照组外,均选用右眼制作碱烧伤模型.利用薄膜分散法制备RAPA脂质体滴眼液,以正交设计法研究制备工艺中影响脂质体制备质量的主要影响因素,筛选出较理想的处方.碱烧伤后每日裂隙灯显微镜观察眼局部情况,并详细记录碱烧伤后大鼠角膜反应情况与新生血管生长情况,采用免疫组织化学方法 与半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测角膜组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达.实验结果 采用方差分析与组间q检验进行统计学分析.结果 (1)制得的RAPA脂质体为完整的类球形,平均粒径为145.2 nm,包封率为90.02%;RAPA脂质体滴眼液中RAPA含量高,粒径合适.(2)B、C、D、E组碱烧伤后14 d,CNV面积为(28.289±0.703)、(28.005±0.801)、(20.002±1.005)、(22.300±0.853)mm2(F=159.62,P<0.05);D、E组分别与B、C组相比,CNV生长迟缓、稀疏,退化较早,相应组间CNV面积分别比较差异有统计学意义(q=47.80、46.20、34.60、32.90,均P=0.00);D组与E组间比较,CNV退化更早,面积更小,差异有统计学意义(q=13.20,P=0.00).碱烧伤后,HIF-1αmRNA、VEGF mRNA、HIF-1α蛋白、VEGF蛋白表达显著增强;其中,D、E组的HIF-1α、VEGF表达被显著抑制,D组变化更明显.结论 脂质体是RAPA良好的药物载体.RAPA能通过HIF-1与VEGF途径显著抑制CNV的生长,有望成为防治CNV的一种有效方法 .(中华眼科杂志,2009,45:146-152)     

曲安奈德和血管内皮生长因子在幼鼠增生性视网膜病变中的作用

目的:研究曲安奈德在增生性视网膜病变中不同时期给药的治疗效果及其与血管内皮生长因子的相互作用机制。方法:建立氧诱导的血管增生性视网膜病变幼鼠模型。预先治疗组于进氧箱前(出生7d),晚治疗组于出氧箱后(出生12d)幼鼠玻璃体腔内分别注射曲安奈德1μL(0.04mg),对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液(balancedsaltsolution,BSS)作为对照。应用荧光素灌注荧光血管造影法,了解视网膜血管改变;取幼鼠眼球作普通病理切片及免疫组化检测,分别检测视网膜新生血管芽内皮细胞数目及VEGF的表达。结果:预先治疗组视网膜新生血管芽内皮细胞数目及VEGF的表达(8.00±1.21)显著少于给氧对照组(24.89±1.53)和晚治疗组(19.57±1.16);预先治疗组和晚治疗组分别与它们的对照眼及给氧对照组相比均有显著意义;预先治疗组和晚治疗组相比有显著意义(P<0.01)。结论:病变早期应用曲安奈德治疗效果明显优于病变晚期治疗。在氧诱导的血管增生性视网膜病变模型中,曲安奈德可以抑制视网膜新生血管形成和VEGF的表达。     

生物信息学筛选的合成小肽抑制小鼠角膜新生血管的实验研究

目的初步探讨人载脂蛋白a[apo（a）]kringleV（KV）抗新生血管活性区域的氨基酸序列,并评价其对血管内皮生长因子（VEGF）诱导小鼠角膜新生血管的抑制作用。方法应用生物信息学方法,从序列比对、抗原性、表面接触性及亲水性预测方面分析apo（a）KV氨基酸序列的结构和生物学特性,筛选出其中的可能活性肽段固相合成此小肽。应用小鼠角膜微囊袋模型,检测小肽对VEGF诱导新生血管的作用。按照随机数字表法,将40只C57BL／6小鼠（40只眼）分为对照组、A组、B组和C组4个组,每组10只眼,在各组角膜基质层内植入160ngVEGF的同时依次植入0．0、0．5、1．0和1．5峭小肽缓释颗粒。术后7d摄片观察角膜新生血管长人情况,并行组织病理学检查。结果生物信息学分析显示筛选出的小肽含有较多保守氨基酸残基,且较apo（a）KV中其他肽段有良好的抗原性、表面接触活性和亲水性等反应特性。B、C组角膜新生血管的最长血管长度、钟点数和面积与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）,C组与B组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,上述3个指标A组与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论筛选出的小肽在一定剂量时对VEGF诱导的小鼠角膜新生血管有明显的抑制作用,其氨基酸序列可能位于apo（a）KV抗新生血管的活性位点内。     

血管内皮生长因子抑制剂在角膜新生血管治疗中的研究进展

正常角膜是无血管、完全透明的组织,是眼部重要的屈光介质,但许多眼部疾病均可破坏抗血管生成因子与促血管生成因子之间的平衡,导致病理性角膜新生血管(CNV)的形成.大量研究表明,CNV的形成与血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的激活密切相关.通过多靶点多途径阻断该信号通路可以有效抑制新生血管的形成,为CNV的治疗带来了希望.目前,针对新生血管性眼病的新型靶向治疗策略主要包括VEGF抑制剂和以微小RNA(miRNA)为核心的基因治疗,前者主要包括抗VEGF单克隆抗体、核酸适体、VEGFtrap、VEGF受体(VEGFR)酪氨酸激酶抑制剂等.本文将对具有代表性的抗VEGF药物和基因治疗的作用机制、用药疗效、药物安全性及研究现状进行综述.     

血管内皮生长因子反义核苷酸抑制大鼠角膜新生血管的实验研究

目的探讨重组腺相关病毒介导的血管内皮生长因子反义核苷酸(rAAV aVEGF165)抑制大鼠角膜新生血管(CNV)发生与发展的作用。方法三质粒共转染法构建rAAV aVEGF165和重组腺相关病毒介导的β半乳糖苷酶的结构基因(rAAV Lacz)。48只SD大鼠用抽签法随机分成实验组和对照组,每组24只,碱烧伤方法诱导CNV生成。实验组结膜囊注射rAAV aVEGF165(1010pfu/ml),对照组结膜囊注射rAAV Lacz(1010pfu/ml);5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷(X gal)组织化学染色,检测Lacz基因在结膜囊中的表达情况;碱烧伤后1、2、4、7、14及30d,形态学分析评价角膜新生血管的生长情况,免疫组织化学检测角膜组织中VEGF的表达。结果对照组rAAV Lacz结膜囊注射2d后,检测Lacz基因在结膜组织中的表达效率为21.36%±1.07%;30d后Lacz基因在结膜下组织中的表达效率为28.02%±1.16%。碱烧伤后结膜囊注射rAAV aVEGF165,实验组CNV面积明显减少,新生血管密度降低,VEGF在角膜组织中的表达明显降低,差异有统计学意义(F=1639.22,F=2187.16,F=719.17,P<0.01)。结论rAAV aVEGF165能显著抑制碱烧伤后CNV的形成,其机制与降低角膜组织中VEGF的表达有关,重组腺相关病毒是眼反义基因治疗的有效载体。     

苦参碱对大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的观察苦参碱对大鼠角膜烧伤后新生血管生成的抑制作用。方法选取Wistar大鼠32只,建立碱烧伤角膜新生血管模型,随机分成对照组和3个不同剂量的苦参碱实验组,每组8只(16眼)。模型建立后,实验组大鼠在结膜下注射不同剂量的苦参碱(0.2mg、0.4mg、0.8mg),对照组注射生理盐水,在裂隙灯下动态观察大鼠角膜新生血管生长情况并计算角膜新生血管的面积,观察周期为21d。于造模后4d、7d、14d、21d取不同剂量的苦参碱实验组大鼠角膜进行组织病理学检测,采集各组大鼠的角膜标本,用免疫组化法检测角膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,计算其平均光密度值;采用RT-PCR方法检测各组大鼠角膜组织中VEGF mRNA的表达。结果碱烧伤后4d、7d、14d、21d,与对照组相比,各实验组大鼠新生血管面积明显减少,差异均有显著统计学意义(P<0.01);造模后14d时,不同剂量的苦参碱实验组新生血管密度计数(17.83±2.32、11.00±2.37、10.87±2.41)明显低于对照组(21.11±2.14)(P<0.05);各实验组角膜VEGF的平均光密度值均小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);各实验组VEGF mRNA水平与对照组相比也显著下降(P<0.05)。结论结膜下注射苦参碱对大鼠角膜碱烧伤后的新生血管生长有抑制作用。     

改良内皮抑素基因对大鼠角膜新生血管中血管内皮生长因子及其受体表达的抑制作用

背景 内皮抑素(ES)是目前已知最强的内源性血管形成抑制因子,能抑制新生血管的发生,而精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的聚合能增强ES基因的功能. 目的 探讨改良ES基因对大鼠角膜新生血管(CNV)中血管内皮生长因子(VEGF)及VEGF受体2(Flk-1)表达的影响及作用机制. 方法 102只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为模型组、pCI空载体组、pCI-ES转染组、pCI-RGDRGD-ES转染组,每组24只;正常组6只.用浸有1 mol/L NaOH溶液的直径3 mm圆形滤纸片快速贴于大鼠角膜中央40 s建立角膜碱烧伤CNV模型,以pCI质粒作为改良前后ES基因的表达载体,每周2次结膜下注射3μg含质粒的转染液进行基因治疗.每日裂隙灯显微镜下观察角膜水肿及CNV生长情况,计算CNV面积.于碱烧伤后1、4、7、14 d用过量麻醉法处死模型鼠并获取角膜组织,用免疫组织化学法检测CNV内皮细胞中CD34的表达以计算CNV密度,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法分别检测角膜VEGF mRNA及Flk-1在角膜中的表达. 结果 角膜碱烧伤后7～14d,pCI-ES转染组、pCI-RGDRGD-ES转染组CNV面积均明显小于pCI空载体组和模型组,CNV密度均明显小于pCI空载体组和模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);pCI-RGDRGD-ES转染组CNV面积均明显小于pCI-ES转染组,CNV密度均明显少于pCI-ES转染组,差异均有统计学意义( P＜0.05,P＜0.01).碱烧伤后4d,pCI-ES转染组、pCI-RGDRGD-ES转染组大鼠角膜Flk-1蛋白表达水平明显低于正常对照组大鼠,差异有统计学意义(P＜0.05);碱烧伤后4d,pCI-ES转染组、pCI-RGDRGD-ES转染组大鼠角膜VEGF mRNA的表达水平明显低于正常对照组大鼠,差异有统计学意义(P＜0.05);pCI-RGDRGD-ES转染组大鼠角膜VEGF mRNA表达水平明显低于pCI-ES转染组大鼠,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 结膜下注射ES基因或RGDRGD-ES基因均能抑制碱烧伤诱导的CNV,但RGDRGD-ES基因对CNV的抑制作用更强,其作用机制为抑制VEGF及其受体Flk-1的表达.     

分泌粒蛋白Ⅲ(Scg3)抗体对角膜新生血管的抑制作用

目的 分析分泌粒蛋白III (Scg3)抗体对兔角膜新生血管(CNV)的干预作用。方法 选取健康新西兰白兔45只,未做碱烧伤的5只作为对照组,剩余40只白兔用碱烧伤法构建CNV模型,随机分为模型组(20只)和干预组(20只),自碱烧伤之日起每隔2 d结膜下分别注射0.1 mL 1×PBS溶液或0.5 mg·L^-1的Scg3抗体工作液。碱烧伤后14 d, Western blot检测对照组与模型组兔角膜组织中Scg3的蛋白表达。分别在碱烧伤后1 d、7 d、14 d应用眼前段分析仪测量CNV的面积和长度,应用角膜共聚焦显微镜观察眼表变化,利用蛋白芯片法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等炎症相关细胞因子的表达。结果 角膜碱烧伤后14 d,模型组兔烧伤区域出现大量CNV,而干预组兔角膜无明显CNV生长。Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组兔角膜中Scg3蛋白表达显著升高(P<0.05)。角膜共聚焦显微镜下观察可见,模型组兔的角膜缘内出现大量活动性CNV。角膜碱烧伤后7 ...     

医用几丁糖对角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用

目的观察医用几丁糖对角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用。方法NaOH烧伤兔角膜制作角膜碱烧伤模型,随机分为碱烧伤组（碱烧伤）和几丁糖组（碱烧伤＋2％医用几丁糖滴眼）。分别于1、4．7、14d观察两组兔角膜新生血管生长情况,HE染色计算多形核粒细胞（PMN）数量,兔疫组化染色测定血管内皮生长因子（VEGF）的活性。结果几丁糖组新生血管较碱烧伤组生长缓慢,PMN计数及VEGF表达较碱烧伤组均明显减少。结论医用几丁糖可抑制碱烧伤后角膜新生血管的形成。     

Inhibitory effects of bevacizumab on angiogenesis and corneal neovascularization

Background

To evaluate the inhibitory effects of bevacizumab (Avastin®) on angiogenesis using cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro and on corneal neovascularization by subconjunctival injection of bevacizumab in vivo.

Methods

After the HUVECs were exposed to different concentrations of bevacizumab stimulated with VEGF (10 ng/ml) for 2, 6, and 24 hours, cellular-activity-like proliferation, migration and tube formation were assessed. Subconjunctival injection of bevacizumab (2.5 mg/0.1 ml) was performed after corneal chemical burn injury. Then the cornea was evaluated by biomicroscopy, fluorescein angiography, and light microscopy.

Results

The inhibitory effects of bevacizumab on VEGF-induced HUVECs proliferation showed a dose-dependent response for 2 and 6 hours, but all groups were effectively inhibited regardless of the concentration of bevacizumab for 24 hours. The inhibitory effects of bevacizumab on the migration of VEGF-induced HUVECs showed a time- and dose-dependent response. The inhibitory effects of bevacizumab on VEGF-induced HUVECs tube formation showed a dose-dependent response only for 24 hours. On days 3 and 8 after the subconjunctival injection, bevacizumab-treated eyes showed less neovascular growth than BSS-treated eyes in biomicroscopic, fluorescein angiographic, and light microscopic findings in vivo.

Conclusions

Bevacizumab effectively inhibits angiogenesis and corneal neovascularization, and could be used as a inhibitor of corneal neovascularization in the future.

     

苏拉明对角膜碱烧伤新生血管抑制作用的研究

目的研究苏拉明对碱烧伤角膜新生血管（CNV）及血管内皮生长因子（VEGF）、胰岛素样生长因子-I（IGF—I）的影响。方法新西兰大白兔48只,分为空白组、对照组、苏拉明组3组,每组16只（32只眼）。对照组与治疗组制备角膜碱烧伤模型,术后分别给予氯霉素、8g／L苏拉明滴眼液点眼。分别于术后第1、4、7、14d观察新生血管情况,免疫组织化学法检测VEGF、IGF—I的表达。结果术后第1d各组无新生血管生长。第4、7、14d,空白组未出现新生血管,对照组与治疗组可见CNV,且治疗组比对照组新生血管面积小（P〈0．01）。第1、4、7d,对照组与治疗组VEGF、IGF—I的表达均比空白组升高,差异有统计学意义（P〈0．01）,治疗组与对照组相比,差异亦有统计学意义（P〈0．01）。第14d,3个组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论VEGF、IGF—I参与CNV形成,苏拉明通过降低角膜上皮中二者的表达,抑制角膜碱烧伤新生血管形成。     

Indocyanine green-mediated photothrombosis with intravitreal triamcinolone acetonide for subfoveal choroidal neovascularization in age-related macular degeneration

Background There is a need for alternative treatments for the management of exudative age-related macular degeneration (AMD). The purpose of this paper is to determine the feasibility, safety, and clinical effect of indocyanine green (ICG)-mediated photothrombosis (IMP) combined with intravitreal triamcinolone acetonide (TA) in patients with subfoveal choroidal neovascularization (CNV) in AMD. Methods Thirty-one eyes of 26 patients who were treated with IMP immediately followed by an intravitreal injection of 4 mg of TA were investigated in the study. The patients had a mean follow-up of 9 months (range 3 months to 26 months). Patients underwent one to four sessions of IMP combined with intravitreal TA. Results Visual acuity showed stability in 19 eyes (61.3%), improvement of visual acuity (VA) in seven eyes (22.6%), and worsening of VA in five eyes (16.1%). A significant regression of the CNV, and diminishing of subretinal fluid, was demonstrated with fluorescein angiography and optical coherence tomography. We found no complications associated with the intravitreal injection procedure or IMP. Five (16.1%) eyes developed an increase in intraocular pressure related to the presence of TA in the vitreous cavity. However, it was medically controlled with topical anti-glaucoma medications. Nineteen of 31 eyes (61.2%) required at least one re-treatment (mean 1.7; range 1–4) during the study period. Conclusions Combined IMP and intravitreal TA may provide stability or improvement in visual acuity and fundus findings in choroidal neovascularization. Further evaluation in a multicenter, randomized, placebo-controlled clinical trial with longer follow-up is needed to accurately assess the safety and efficacy of this new treatment modality. The authors have no proprietary or financial interest in any products or techniques described in this article. Presented in part at the Club Jules Gonin Annual Meeting, Athens, Greece, September 2004.     

碱烧伤诱导小鼠角膜新生血管中miR-21与VEGF表达相关性

目的观察microRNA-21（miR-21）在碱烧伤诱导小鼠角膜新生血管（CorNV）模型中的变化规律及其与血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的关系。方法实验研究。68只BALB/c小鼠,右眼制备碱烧伤诱导CorNV模型作为实验组,左眼作为正常对照组不予任何处理。碱烧伤后第4、7、14、21、28天行眼前节照相测量CorNV面积。分别在碱烧伤后第4、7、14、28天分别随机处死3只小鼠取眼球制石蜡切片,通过苏木素-伊红（HE）染色观察角膜的组织病理学改变,免疫组织化学（IHC）染色检测角膜VEGF-A表达;各时间点随机处死14只小鼠行实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测角膜miR-21及VEGF-A mRNA的表达。数据分析采用单因素方差分析、配对样本t检验、直线相关分析。结果小鼠CorNV于碱烧伤后第4天开始出现,14天时生长达高峰,21天后逐渐消退。HE染色显示实验组角膜第14天呈现较多粗大CorNV,28天时明显减少。同期IHC染色显示实验组角膜在第4、7、14天时VEGF-A阳性表达均高于对照组（t=19.47、61.86、44.18,P<0.05）,28天时差异无统计学意义（t=2.52,P>0.05）。实验组第7天时角膜VEGF-A阳性表达明显,14天后表达相对减弱,差异具有统计学意义（F=649.4,P<0.05）。实验组角膜在第4、7、14、28天时miR-21表达均高于对照组（t=4.60、14.74、9.78、5.69,P<0.01）;VEGF-A mRNA实验组角膜在第4、7、14天时高于对照组（t=5.82、14.11、3.41,P<0.05）,28天时差异无统计学意义（t=0.76,P>0.05）;且两者表达均于第7天时达高峰,差异均具有统计学意义（F=62.1、64.5,P<0.05）。miR-21与VEGF-A mRNA及其蛋白表达均呈正相关（r=0.62、0.66,P<0.05）。结论碱烧伤诱导小鼠角膜CorNV形成中miR-21、VEGF-A表达均升高,且miR-21、VEGF-A mRNA和蛋白表达高峰较CorNV形成高峰早,提示miR-21可能通过VEGF信号通路参与CorNV形成。     

血管内皮生长因子shRNA表达质粒抑制鼠角膜新生血管与血管内皮细胞中血管内皮生长因子的表达

目的 探讨RNA干扰对大鼠碱烧伤后角膜新生血管(CNV)与血管内皮细胞(EC)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及作用机制.方法 实验研究.采用DNA重组技术设计合成针对VEGF mRNA的3条shRNA寡核苷酸片段,构建真核表达质粒VEGF shRNA1、2、3,然后将质粒通过脂质体介导分别转染EC,逆转录聚合酶链反应和Western blot免疫印迹法分别检测EC中VEGF mRNA和蛋白的表达及干扰效率,并筛选出干扰效率最高的质粒(VEGF shRNA3质粒)进行体内实验.将20只SD大鼠按完全随机设计方法分为两组,分别为实验组10只和对照组10只,建立大鼠碱烧伤后CNV模型.实验组于结膜下注射VEGF shRNA3质粒后,显微镜下观察CNV生长情况,7 d后利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot法分别检测实验组和对照组角膜组织VEGF mRNA和蛋白的表达.多组间差异显著性检验用单因素方差分析,两组CNV面积比较采用重复测量的方差分析.结果 经酶切及测序证实重组质粒构建成功.VEGF shRNA1、2、3质粒均可下调VEGF mRNA和蛋白的表达,其中VEGF shRNA3质粒的抑制作用较强,VEGF mRNA和蛋白的抑制率分别为68.92%和66.22%.体内实验中碱烧伤后3、5、7 d,实验组CNV长度较对照组明显降低,差异有统计学意义(F=355.744,P=0.000);实验组CNV面积较对照组明显降低,差异有统计学意义(F=402.700,P=0.000);实验组VEGF mRNA和蛋白在角膜组织中的表达较对照组明显降低,抑制率分别为41.84%和41.86%.结论 构建的VEGF shRNA质粒能右效抑制EC中VEGF mRNA和蛋白的表达.结膜下注射VEGF shRNA3质粒能显著抑制碱烧伤后CNV的形成与VEGF的表达.     

外源性肿瘤坏死因子α对碱烧伤诱导角膜新生血管的影响及机制

目的 探讨外源性肿瘤坏死因子α(TNF-α)局部干预对碱烧伤诱导角膜新生血管(CNV)形成的影响及内在机制.方法 BALB/c小鼠45只,利用碱烧伤法制作左眼CNV模型.根据实验设计,分3组实验进行研究.①CNV模型小鼠15只,随机分为3组,每组5只.自伤后分别给予100、500 μg/ml TNF-α(实验组)或0.2%透明质酸钠(HA,对照组)点眼1周.于碱烧伤后第14天处死小鼠取眼球,免疫组织化学法检测各组角膜组织中CD31的表达,计数微血管密度(MVD),分析TNF-α对碱烧伤CNV形成的作用.②CNV模型小鼠20只,随机分为2组,每组10只.实验组给予100μg/ml TNF-α点眼,对照组给予0.2%HA点眼.分别于伤后第2天和第4天随机取5只小鼠处死取角膜.RT-PCR法检测角膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达情况,分析TNF-α对碱烧伤角膜中VEGF表达的影响.③利用二氯亚甲二磷酸脂质体(Cl2MDP-lip)腹腔注射制作小鼠巨噬细胞特异剔除模型.10只BALB/c小鼠随机分为Cl2MDP-lip实验组及PBS-lip对照组,每组5只.所有小鼠自碱烧伤后均给予100 μg/ml TNF-α滴眼1周.于伤后第14天拍照记录CNV形成情况,图像分析软件测算CNV长度及面积,分析巨噬细胞在TNF-α调控碱烧伤后CNV形成巾的作用.结果 ①碱烧伤后第14天,100μg/ml TNF-α组CNV形成较对照组明显增多,而50μg/ml TNF-α组CNV形成与对照组差异不明显.整张切片和热点区域MVD值,100 μg/ml TNF-α组为63.25±9.75和114.94±12.93.500 μg/ml TNF-α组为39.53±10.41和108.04±23.55,0.2%HA对照组为30.99±7.08和73.81±13.80.100μg/ml TNF-α组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而500μg/ml TNF-α组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).②碱烧伤后第2天和第4天VEGF mRNA与β-actin的比值,100 μg/ml TNF-α组为0.40±0.12和1.51±0.21,0.2%HA对照组为0.3l±0.10和0.58±0.30,两组差异均有统计学意义(P<0.05).③碱烧伤后第14天,Cl2MDP-lip组CNV形成较对照组明显减少,Cl2MDP-lip组的CNV长度和面积分别为(0.84±0.10)mm和(6.64±1.19)mm2,PBS-lip对照组为(1.37±0.24)mm和(12.25±1.33)mm2.两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 外源性TNF-α可通过上调碱烧伤角膜组织中VEGF表达来促进CNV的形成,其促进碱烧伤CNV形成机制主要是通过巨噬细胞起作用.     

曲安奈德在前段玻璃体切割术中的应用

目的 观察应用曲安奈德在前段玻璃体切割术中的临床效果.方法 在43例47只眼行前段玻璃体切割手术中,利用曲安奈德附着于玻璃体的性质,单次或多次向前房内注射曲安奈德,实施了准确的前段玻璃体切割术,术后观察视力、角膜情况、前房内炎症反应、眼压变化、黄斑水肿情况等.结果 曲安奈德能清晰显示透明的玻璃体,安全准确地切除目标玻璃体,同时术后炎症反应明显减轻.术后最终随访视力稳定提高,无其他严重并发症发生.结论 在前段玻璃体切割术中使用曲安奈德,可以提高手术的安全性和时效,抑制术后炎症反应,减少近期并发症,视力预后较好.